ICS65.020.20

CCSB15

21

遼寧省地方標準

DB21/T2219.7—XXXX

玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范

第7部分：玉米青霉穗腐病

Rulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetodiseases

Part7：Penicilliumearrotofmaize

（報批稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

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玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范

第7部分：玉米青霉穗腐病

1范圍

本文件規(guī)定了玉米青霉（Penicilliumsp.）穗腐病抗病性鑒定技術(shù)的準備、接種和評價等要求。

本文件適用于栽培玉米（ZeamaysL.）種質(zhì)資源和雜交種對玉米青霉穗腐病抗性的人工接種鑒定

及評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T1248.8玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第8部分：鐮孢穗腐病

3術(shù)語和定義

NY/T1248.8界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

籽粒傷口接種kernelinoculation

利用可定量的連續(xù)注射器于果穗中部進行創(chuàng)傷注射的接種技術(shù)。

4準備

4.1接種物準備

4.1.1接種物的分離、鑒定

以常規(guī)組織分離法和單孢分離法（見附錄A）從田間采集的具有典型玉米青霉穗腐病癥狀的果穗分

離獲得純培養(yǎng)物，利用形態(tài)學和分子生物學鑒定為青霉屬真菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.1.2接種物的制備

挑取4.1.1保存的青霉菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PotatoDextroseAgar，簡稱PDA）培養(yǎng)基25℃

培養(yǎng)5d后，用無菌打孔器打取菌落邊緣直徑5mm的菌餅，將其接種于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（Potato

Dextrose，簡稱PD）中120r/min培養(yǎng)5d。培養(yǎng)物經(jīng)滅菌的雙層紗布過濾，獲得分生孢子懸浮液，用無菌

水將孢子濃度調(diào)至2×106個/mL，即可用于接種。PDA和PD培養(yǎng)基配方見附錄B。

4.2鑒定圃準備

4.2.1鑒定圃設置

鑒定圃應具備良好的自然發(fā)病環(huán)境。

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4.2.2試驗設計

鑒定材料隨機排列或順序排列。在進行選育品種抗病性鑒定時，每30行鑒定材料設1組已知抗病和

感病對照材料（見附錄C）。在進行種質(zhì)資源抗病性鑒定時，每50行鑒定材料設1組已知抗病和感病對照

材料，鑒定圃周邊應設置保護行。鑒定圃應具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和排灌設施。

4.2.3種植要求

鑒定材料播種時間與生產(chǎn)播種時間相同。

鑒定小區(qū)行長5m，行距0.6m，條播或穴播，每行保苗21株，低于13株時視為該品種/材料鑒定無效。

鑒定種質(zhì)資源時，每份鑒定材料種植1行；鑒定選育品種時，每份材料種植2行。土壤肥力水平和耕作管

理與大田生產(chǎn)相同。

5接種

5.1接種時期

接種時期為果穗吐絲后14d～21d，接種可全天進行。

5.2接種方法

宜采用籽粒傷口接種法。用側(cè)孔空心金屬針連接有注射接種液的器具在雌穗中上部苞葉外進行穿刺，

當金屬針刺入籽粒時，注射2mL接種液，每株僅接種第1個雌穗。

5.3接種前后的田間管理

接種后對鑒定圃進行常規(guī)田間管理。

6調(diào)查

6.1調(diào)查時間

在玉米生理成熟后進行調(diào)查，同批次接種材料應在同一天完成。

6.2調(diào)查方法

采收接種的雌穗，去除苞葉后逐穗調(diào)查并對雌穗籽粒被病菌侵染的面積進行分級記載，見表1。

表1玉米青霉穗腐病田間調(diào)查結(jié)果表

編號1級3級5級7級9級

1

2

3

4

……

6.3病情分級

依據(jù)表2中的描述，逐個記載調(diào)查雌穗的發(fā)病級別。

2

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表2玉米對穗腐病抗性鑒定的病情級別劃分

病情分級描述(發(fā)病面積占雌穗總面積比例)

1A≤1%

31%＜A≤10%

510%＜A≤25%

725%＜A≤50%

9A＞50%

注：發(fā)病面積占雌穗總面積比例以A表示。

7評價

7.1鑒定有效性判別

當設置的感病對照材料平均病情級別≥5.6時，該批次鑒定視為有效。

7.2抗性評價指標

計算每份鑒定材料雌穗的平均病情級別，并依據(jù)平均級別確定該鑒定材料對穗腐病的抗性，抗性的

劃分標準見表3。

表3玉米對青霉穗腐病抗性評價標準

平均病情級別抗性

D≤1.5高度抗病Highlyresistant（高抗HR）

1.5＜D≤3.5抗病Resistant（抗R）

3.5＜D≤5.5中度抗病Moderatelyresistant（中抗MR）

5.5＜D≤7.5感病Susceptible（感S）

7.5＜D≤9.0高度感病Highlysusceptible（高感HS）

注：平均病情級別以D表示。

7.3重復鑒定

若鑒定材料初次鑒定時表現(xiàn)為高抗、抗、中抗，應在次年進行重復鑒定。

7.4抗性評價

對初次鑒定結(jié)果和重復鑒定結(jié)果進行比較，以記載的最高病情級別為最終鑒定結(jié)果，并依此結(jié)果對

鑒定材料進行抗性評價。

8鑒定結(jié)果匯總

玉米抗青霉穗腐病鑒定結(jié)果整理后填入鑒定結(jié)果表格，見圖1。

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圖1玉米抗青霉穗腐病鑒定結(jié)果匯總表樣式圖

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附錄A

（資料性）

玉米青霉穗腐病病原菌

A.1青霉菌的形態(tài)學鑒定

引起玉米青霉穗腐病的主要致病菌為青霉屬真菌。

無性態(tài)學名：青霉屬(Pennicilliumsp.)

青霉屬真菌無性態(tài)特征：病菌菌落灰綠色，圓形，平坦，質(zhì)地絨狀，分生孢子易脫落。分生孢子梗

直立，頂端一次至多次分支，形成掃帚狀，長約400μm，分生孢子橢圓形或長圓形，無色，單孢，直徑

3.5μm～5.0μm。

A.2青霉菌的分子鑒定

對青霉菌脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid，DNA）中的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（InternalTranscribed

Spacer，ITS）進行PCR擴增。對擴增片段進行測序和比對，確定種的分類地位。

PCR反應體系：擴增的引物為真菌的通用引物：PCR反應體系（25μL）：上下游引物（10μmol/L）

各1μL，模板DNA（100ng/μL）1μL，2×TaqPCRmix12.5μL，ddH2O9.5μL。

PCR反應條件：95℃預變性5min；95℃1min，退火55℃1min，72℃1min，循環(huán)30次；72℃延伸5min。

PCR擴增引物見表A.1。

表A.1PCR擴增引物

基因引物名稱序列（5'-3'）

TAATTCACAATGGAGGGTAGG

ITSITS1/ITS4

GTAAGGATACCACGCTTGG

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附錄B

（資料性）

青霉菌培養(yǎng)基配方

B.1PDA培養(yǎng)基

馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g～20g，蒸餾水1000mL。分裝在三角瓶中后121℃高壓滅菌20min

后備用。PDA培養(yǎng)基用于青霉菌生長培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25℃。

B.2PD培養(yǎng)基

馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL。分裝在三角瓶中（500mL三角瓶中分裝150mL），121℃高

壓滅菌20min后備用。PD培養(yǎng)基用于青霉菌的菌絲培養(yǎng)（用于病菌DNA提?。┖彤a(chǎn)孢培養(yǎng)。

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