《雷公藤多甙調節(jié)Th細胞平衡和巨噬細胞浸潤早期干預2型糖尿病腎病的機制研究》糖尿病腎病?DN?是影響糖尿病患者生存質量的主要微血管并發(fā)癥，循證研究證實："嚴格控制血糖可減少腎臟并發(fā)癥的發(fā)生，但并不能完全阻止DN的發(fā)生和發(fā)展"。提示"糖毒性"并不能完全解釋DN的成因。腎活檢證實：糖尿病腎臟存在大量免疫復合物沉積，揭示了炎癥-免疫反應在DN的可能作用。前期臨床工作發(fā)現(xiàn)，雷公藤多甙可顯著降低DN的蛋白尿，但機制不明。結合中西醫(yī)對雷公藤多甙的認識，我們提出了應用雷公藤多甙早期干預，通過祛風除濕、活血化瘀、舒筋通絡以及改善巨噬細胞浸潤、調節(jié)Th細胞平衡而延緩DN進展的假說。本研究擬以2型糖尿病腎病大鼠為研究對象，應用流式細胞術、實時熒光定量PCR、ELISA法、免疫組化法，探討雷公藤多甙早期干預對預防2型糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展的作用及對Th細胞、單核／巨噬細胞的影響，以期明確雷公藤多甙治療DN的作用途徑，同時了解最佳的量效關系，為臨床應用提供科學依據(jù)?！妒牌延行С煞终{控ERK1/2-CREB信號通路對抑郁癥神經(jīng)保護作用的研究》抑郁癥的發(fā)生與海馬神經(jīng)元再生障礙密切相關，ERK1/2-CREB信號通路是抑郁癥神經(jīng)元再生的關鍵環(huán)節(jié)之一，同時也是抗抑郁治療的重要靶點。石菖蒲是治療腦病的中藥方劑中出現(xiàn)頻率最高的少數(shù)幾味中藥之一，治療抑郁癥具有很好的臨床基礎。本項目以神經(jīng)元再生與保護為切入點，擬采用慢性不可預知性輕度應激動物模型和皮質酮損傷神經(jīng)細胞模型，通過免疫熒光雙標法、細胞凋亡檢測術、WesternBlot、實時定量PCR、RNAi、工具藥信號通路阻斷等實驗方法和手段，從動物、細胞和分子水平多層次系統(tǒng)探討石菖蒲活性成分通過促進神經(jīng)元再生和神經(jīng)保護發(fā)揮抗抑郁的作用。揭示石菖蒲活性成分對ERK1/2-CREB信號通路的調控作用及其關鍵靶點，將為抑郁癥防治提供新的有效手段，為研發(fā)有效的抗抑郁新藥開拓新思路，具有重要的科學意義和廣闊的應用前景?！秙iRNA沉默層粘連蛋白及整合素基因研究層粘連蛋白-整合素跨膜系統(tǒng)在難治性癲癇形成機制中的作用》研究表明生長錐異常生長，異常神經(jīng)網(wǎng)絡形成是癲癇難治性形成基礎，層粘連蛋白-整合素系統(tǒng)是生長錐的分子生物學基礎，前期對人類難治性癲癇腦組織的研究發(fā)現(xiàn)其明顯高表達，阻斷這個系統(tǒng)可能阻止難治性癲癇生長錐的異常生長，作為新的治療突破點。課題組擬建立臨床難治性癲癇細胞模型；在培養(yǎng)液中添加外源性層粘連蛋白，及siRNA對內源性層粘連蛋白進行表達沉默，研究外源性和內源性層粘連蛋白對海馬細胞生長錐的影響；利用siRNA沉默層粘連蛋白及整合素基因，轉染海馬細胞，通過光電鏡研究觀察海馬細胞的形態(tài)、超微結構和生長錐變化；對目標基因進行特異性表達沉默，檢測海馬細胞目標基因和蛋白表達。通過觀察目標基因被抑制后海馬細胞從基因到蛋白，生長錐從形態(tài)到各項生理生化的變化，對層粘連蛋白-整合素系統(tǒng)在難治性癲癇中的發(fā)病機制進行研究。《IDO/TTS平衡格局與腫瘤干細胞免疫逃逸調控機制關系研究》腫瘤轉移復發(fā)是導致腫瘤患者死亡主因，而腫瘤干細胞及其免疫逃逸又是其轉移復發(fā)誘因。目前腫瘤干細胞免疫逃逸研究雖取得進展，但對與之相關的調控機制尚不清楚。近年發(fā)現(xiàn)，代謝性免疫調節(jié)酶IDO可能參與腫瘤免疫逃逸，且趨化因子受體與IDO存在互調關系?；谖覀冊谧陨砻庖卟⊙芯恐邪l(fā)現(xiàn)IDO調節(jié)作用可被同屬調節(jié)酶TTS拮抗，以及提出的IDO與TTS平衡調控假說，推測IDO/TTS制約模式在腫瘤干細胞免疫逃逸調控機制中也起重要作用。為此項目組在前期工作基礎上，即已將從人乳腺癌組織成功分離高表達IDO、TTS腫瘤干細胞，輸注動物體內可引發(fā)腫瘤，擬進一步以乳腺癌干細胞為切入點，結合干預手段，從臨床與基礎，體內和體外，系統(tǒng)研究和確立IDO/TTS及其相關輔調因素趨化因子受體等在腫瘤干細胞免疫逃逸中的調控作用。籍此為進一步闡明腫瘤免疫逃逸的分子調控機制，以及建立針對此的特異性靶向治療新策略，提供實驗依據(jù)和防治手段?！妒彻荀[-柱狀上皮交界區(qū)和食管癌細胞的生物學行為及與Notch信號通路的相關性研究》食管癌是常見十大惡性腫瘤之一。近30年來，東、西方的食管癌構成發(fā)生了很大的變化，我國的食管癌90%以上仍為鱗狀細胞癌（鱗癌），而在西方工業(yè)化國家，食管腺癌發(fā)病率快速上升，目前已占食管癌的60%以上，并且公認Barrett食管（由長期胃食管反流所致食管下段鱗狀上皮被特殊化生的柱狀上皮所替代）為食管腺癌的癌前病變。細胞增生／凋亡平衡狀態(tài)的失控是所有惡性腫瘤的最突出的生物學行為。本研究擬采用免疫組學及原位雜交技術率先比較中加兩國食管癌患者癌組織及食管鱗-柱狀上皮交界區(qū)細胞增殖／凋亡狀態(tài)及決定細胞分化凋亡的Notch信號轉導通路的激活情況，探討其是否與上述現(xiàn)象有關。由于兩個人群不同的生活習慣或基因易感性，食管鱗-柱狀上皮交界處細胞可能呈現(xiàn)不同的增生/凋亡平衡狀態(tài)及Notch基因表達水平，從而導致最終發(fā)生食管癌的組織類型差異。若此，則為進一步研究食管癌致病基因及尋找小分子靶向抑制治療的靶點提供依據(jù)?！栋螂妆颇蚣≈幸环N新型二聚體Cajal樣間質細胞起搏作用研究》我們前期研究發(fā)現(xiàn)逼尿肌中除單體ICCs樣細胞（InterstitialcellsofCajal-like,ICC-like）外，還存在另一種不同形態(tài)類型的二聚體ICCs樣細胞,迄今國內外未見相關報道。本研究擬通過全細胞膜片鉗技術檢測離體膀胱確定不同興奮區(qū)域，結合免疫熒光化學染色觀察逼尿肌不同興奮區(qū)二聚體ICCs樣細胞與單體ICCs樣細胞的分布差異；采用免疫透射電鏡觀察二聚體ICCs樣細胞超微結構與分布，了解二聚體ICCs樣細胞間有無類閏盤樣結構，兩類ICCs樣細胞間及其與平滑肌細胞的關系；采用單細胞膜片鉗技術記錄體外培養(yǎng)的單體和二聚體ICCs樣細胞的動作電位，并通過體外添加細胞連結通迅干預劑，動態(tài)觀察對兩種類型ICCs樣細胞動作電位的影響。通過上述研究，旨在尋找二聚體ICCs樣細胞充當膀胱逼尿肌起搏細胞的形態(tài)學和生理學依據(jù)，豐富對兩種類型ICCs樣細胞在膀胱逼尿肌中各自功能的認識?！陡咛黔h(huán)境下逼尿肌中SCF/c-kit信號變化及其對膀胱Cajal樣間質細胞的影響》國內外報道及我們前期研究表明，逼尿肌中ICC樣細胞（ICC-likecells）可能是膀胱自發(fā)興奮的起源及調控樞紐，它在糖尿病膀胱病變（Diabeticcystopathy，DCP）發(fā)病中可能扮演重要角色。本研究擬通過制作DCP動物模型，采用免疫組織化學、電鏡等技術觀察逼尿肌中ICC樣細胞形態(tài)學變化，從轉錄、翻譯水平檢測c-kit、干細胞因子(Stemcellfactor,SCF)基因；通過體外培養(yǎng)逼尿肌ICC樣細胞，動態(tài)觀察高糖環(huán)境對ICC樣細胞形態(tài)、電生理及c-kit基因的影響；采用SCF刺激和/或SCL基因轉入，觀察高糖環(huán)境培養(yǎng)的ICC樣細胞形態(tài)、電生理變化能否逆轉。通過上述研究，旨在探討高糖環(huán)境對膀胱起搏細胞-ICC樣細胞形態(tài)、機能的影響及SCF/c-kit信號變化在其中的作用，為豐富DCP發(fā)病機制的認識并為其尋找新的治療手段尋找線索?！禢eurogenesin-1基因促進成體脊髓神經(jīng)生發(fā)的研究》如何促進脊髓損傷修復一直是研究的難題。新近文獻和本課題組的研究均證實：成體脊髓本身存在一定數(shù)量神經(jīng)干細胞（內源性神經(jīng)干細胞），并且在脊髓損傷后可以大量增殖。誘導增殖的內源性神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化，促進成體脊髓的神經(jīng)生發(fā)，將給脊髓損傷修復的研究提供新的方法。最新的研究提示：海馬中存在的Neurogenesin-1基因可能是促進海馬神經(jīng)生發(fā)的重要因素，其表達產物能夠明顯促進海馬內源性神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化。本課題擬克隆Neurogenesin-1基因，構建真核表達載體,分離培養(yǎng)成體脊髓神經(jīng)干細胞。將Neurogenesin-1真核表達載體轉染成體脊髓神經(jīng)干細胞，觀察其對成體脊髓神經(jīng)干細胞增殖分化的影響。分離純化Neurogenesin-1蛋白后，通過微泵持續(xù)灌注到大鼠損傷脊髓的局部，應用免疫熒光染色的方法觀察其對成體脊髓神經(jīng)生發(fā)的影響,并對脊髓功能恢復情況做初步評定?！秲仍葱陨窠?jīng)干細胞增殖分化治療脊髓損傷的實驗研究》探討內源性神經(jīng)干細胞治療實驗性大鼠脊髓損傷的可行性；啟動Wnt信號通路刺激內源性神經(jīng)干細胞增殖、分化，建立神經(jīng)干細胞治療實驗性大鼠脊髓損傷的新方法。分離培養(yǎng)胚胎大鼠脊髓神經(jīng)干細胞（載體神經(jīng)干細胞）；抽提大鼠胚腦總RNA；RT-PCR制備Wnt-3acDNA；構建pSecTagB真核表達載體；Westernblot鑒定Wnt-3a信號蛋白表達；轉染載體神經(jīng)干細胞，培養(yǎng)并篩選穩(wěn)定表達Wnt-3a《基因修飾去糖基化對HBsAg核酸疫苗的抗原表位及免疫應答的影響》乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）是乙肝病毒唯一的中和抗體，在機體完全清除病毒的過程中起著至關重要的作用。慢性乙型肝炎患者幾乎都對HBsAg免疫耐受，不能產生抗-HBs，以致感染持續(xù)存在。HBsAg表達基因中共有3個潛在的糖基化位點，其連接的多糖分子可能結構屏蔽某些抗原表位，他們從未暴露于機體的免疫系統(tǒng)，因而機體未對其產生免疫耐受，因此有可能刺激機體產生相應的抗體，成為新的中和性抗體。本研究擬采用《雌激素通過PI3K/AKT信號轉導通路調控HIF-1α表達促進卵巢癌細胞轉移的研究》雌激素能通過兩種方式對卵巢癌轉移產生影響。一種是雌激素受體介導的經(jīng)典途徑，另一種是通過磷酸化信號轉導通路，激活一系列下游分子產生對腫瘤細胞生長、轉移的調節(jié)。本課題通過Westernblot、RT-PCR、siRNA、質粒轉染、信號轉導通路抑制劑、裸鼠皮下移植瘤體內試驗等方法，研究雌激素不經(jīng)核受體介導激活PI3K/AKT信號轉導通路非經(jīng)典途徑調控轉導因子HIF-1α，調節(jié)腫瘤轉移相關因子nm23－H1、OPN、CathepsinD是否存在逐級調控的作用機制；PI3K/AKT信號轉導通路非經(jīng)典途徑與雌激素特異性受體經(jīng)典途徑是否協(xié)同作用；雌激素受體表達量是否能作為雌激素促進卵巢癌細胞轉移經(jīng)典與非經(jīng)典途徑關鍵的調控因素；對PI3K/AKT信號轉導通路或轉導因子HIF-1α進行干預，能否阻斷腫瘤轉移，下調腫瘤轉移相關因子，為解析卵巢癌生長與轉移特征提供科學依據(jù)，為卵巢癌治療新策略奠定理論基礎?！稒z測NPM基因突變并探討NPM對白血病細胞生物學特性的影響》最近國內外文獻報道近三分之一的急性髓系白血病患者可發(fā)生核仁磷酸蛋白（NPM）基因突變及NPM蛋白胞漿移位，提出一種新的白血病亞群（NPMc+AML）。它的出現(xiàn)有助于完善白血病的WHO分型、預后判斷和微量殘留病監(jiān)測，因此迫切需要建立適合臨床的NPM突變檢測方法，并進一步闡明NPM突變在白血病發(fā)病中的作用機制。本項目首先采用PCR技術在分子水平上檢測NPM基因突變，同時利用熒光標記自制的突變型NPM蛋白單抗在細胞水平上檢測胞漿蛋白；然后通過轉染將攜NPM突變基因或者NPM基因RNA干擾片段的病毒重組體導入白血病細胞系中，采用軟瓊脂克隆形成實驗、FCM、RT-PCR和濾膜小室法等方法檢測靶細胞增殖潛能、周期分布、凋亡特性和趨化性的改變，觀察NPM突變對白血病細胞生物學特性的影響。本研究將推動NPM突變這項新指標在臨床血液學檢驗的廣泛應用，同時也有助于了解NPM基因突變在白血病發(fā)病中的分子機制?！栋邹继J醇抑制白介素（IL）-1β誘導的關節(jié)軟骨細胞凋亡機制的可視化研究》骨關節(jié)炎(OA)是麻醉科疼痛門診常見的疾病之一，軟骨細胞凋亡是其主要發(fā)病機理。致炎細胞因子白細胞介素-1β是通過誘導軟骨細胞凋亡導致AO的重要因子，白黎蘆醇具有極強的抑制IL-1β誘導軟骨細胞凋亡的能力，但是其分子調控機理并不確切。以兔關節(jié)軟骨細胞為對象，本項目結合現(xiàn)代分子生物技術，重點采用基因質粒標記、顯微熒光成像和熒光共振能量轉移（FRET）等技術在活細胞中實時可視化研究白黎蘆醇誘導軟骨細胞增殖以及抑制軟骨細胞凋亡的分子調控機理。通過基因熒光質粒分別標記Bcl-2、Bax和caspases等細胞凋亡因子以及JNK、Akt等細胞增殖因子，然后利用顯微熒光成像術在單個活細胞中實時監(jiān)測靶蛋白的空間動態(tài)分布以及相互之間的動態(tài)相互作用，從分子水平揭示白黎蘆醇促進軟骨細胞增值和抑制IL-1β誘導軟骨細胞凋亡的早期分子事件及其信號調控通路，探索OA疾病的分子機理和防治骨關節(jié)炎的新方法?！禦ig-1缺陷結腸炎小鼠的T細胞穩(wěn)態(tài)異常及清腸栓清熱化瘀效應機制研究》通過比較野生型（wt）和Rig-I-/-小鼠在結腸Gαi2表達、脾T細胞亞型分析、Peyer's淋巴結數(shù)量及大小、結腸IL-10、IL-12及IFN-γ含量、組織病理學評價之間的差異，研究Rig-I-/-小鼠結腸炎T細胞穩(wěn)態(tài)異常的Th1免疫損傷特征性。通過體內實驗觀察對照清腸栓治療Rig-I-/-結腸炎小鼠后，在結腸Gαi2表達、脾T細胞亞型分析、Peyer's淋巴結數(shù)量及大小、結腸IL-10、IL-12、IFN-γ含量、組織病理學評價方面的變化；通過體外實驗觀察清腸栓有效成分靛玉紅、三七皂苷Rg1對體外培養(yǎng)的wt和Rig-I-/-小鼠脾細胞Rig-I、Gαi2表達的影響，明確清腸栓調節(jié)T細胞穩(wěn)態(tài)異常的可能作用靶點，探討清腸栓調節(jié)Rig-I-/-小鼠結腸炎T細胞穩(wěn)態(tài)異常的機制。為臨床運用清腸栓治療潰瘍性結腸炎提供免疫調節(jié)作用的科學數(shù)據(jù)基礎?！豆烟酋ヮ惓煞諯XS-T抗抑郁作用的化學和細胞分子機制研究》前期多模型篩選證實開心散寡糖酯類成分（KXS-T）具有明確的抗抑郁作用，可增強5-HT系統(tǒng)功能并且可以提高海馬p-CREB表達。在此基礎上，本研究以現(xiàn)代化學方法，確定KXS-T的結構和來源歸屬；采用行為藥理、免疫組化、免疫印跡和神經(jīng)干細胞培養(yǎng)等研究方法，圍繞神經(jīng)元再生理論，結合神經(jīng)營養(yǎng)作用和cAMP-CREB通路等神經(jīng)元再生的關鍵環(huán)節(jié)，正反兩個方面結合研究KXS-T促進神經(jīng)元再生抗抑郁的細胞分子《重組慢病毒介導TAT(Ant)-apoptin融合蛋白治療肝癌的實驗研究》表達自殺基因的復制缺欠病毒用于治療惡性腫瘤的體外研究顯示出很好的治療效果,然而，治療基因不能全部轉導至實體瘤細胞內啟動殺瘤效應,應用研究從而陷入窘境。體外增殖雞貧血病毒的VP3蛋白又稱凋亡素(apoptin)能特異誘導腫瘤細胞凋亡，本研究擬體外克隆合成CAVVP3基因作為新的抗腫瘤目的基因,使用重組慢病毒技術來增強目的基因VP3在肝癌組織內的轉導能力；并使用信號肽和引導肽序列來實現(xiàn)非腫瘤細胞轉導后的長期持續(xù)分泌表達；采用Ant-apoptin和TAT-apoptin融合表達方式使治療分子進入未轉導重組病毒的殘余瘤細胞和已經(jīng)遠隔轉移的瘤細胞,并確保治療分子導入瘤細胞核內的靶部位，改變細胞線粒體膜電位，使線粒體釋放細胞色素C和凋亡誘導因子，導致腫瘤細胞快速死亡。apoptin的凋亡特異性決定了安全性，非瘤細胞持續(xù)表達決定了抗腫瘤高效性。本研究有望為肝癌基因治療探索出更新、更有效的方法《特異性siRNA抑制NF-κBp65基因治療創(chuàng)傷性骨關節(jié)炎的實驗研究》骨關節(jié)炎是運動醫(yī)學領域中常見疾病。近年來，隨著全民健身運動的開展和競技體育的提高，運動性損傷日益突出。由于軟骨的自身修復能力有限，損傷后不能再生或者只能由纖維軟骨組織修復，往往繼發(fā)骨性關節(jié)炎。而慢性勞損和軟骨退變導致的骨性關節(jié)炎也不少見。雖然有體育療法、物理療法、關節(jié)沖洗、藥物療法、微創(chuàng)手術療法、器官和組織移植等方法，但不能從根本上解決軟骨退變的問題，最后不得不采取人工關節(jié)置換手術。這不僅嚴重影響運動員的運動能力，影響人們的生活質量，而且長期困擾著運動醫(yī)學的臨床和科研工作者。本研究利用大鼠膝關節(jié)炎模型為研究對象，采用siRNA技術，抑制NF-kBp65基因的表達，降低NF-kB的活性，抑制炎性介質的表達，減緩早期創(chuàng)傷性骨關節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展，探討基因治療骨性關節(jié)炎的新思路，為臨床預防和治療骨性關節(jié)炎提供新的方法?！吨委煾伟┑淖詺⒒虬邢虼偶{米載體研究》本課題采用氧化鐵磁性納米材料制備磁性納米脂質體作為肝癌自殺基因-單純皰疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)基因第一載體，該載體可在磁場作用下靶向定位于肝癌病灶，再利用包裹的第二載體--肝癌腫瘤組織特異性的調控元件AFP增強子/CMV啟動子攜帶自殺基因靶向轉染肝癌細胞。這樣通過物理和生物學作用使自殺基因HSV-TK靶向定位于肝癌細胞內,實現(xiàn)肝癌的基因治療;且磁性納米脂質體作為載體的同時又可以通過磁場物理作用升溫到45－48℃而直接殺滅肝癌細胞,從而形成了肝癌的雙重載體雙重治療,為肝癌的治療提供嶄新的思路?！段⒘８渭毎锓磻鳎律⒛胰S多孔微載體/肝細胞復合體構建的研究》本研究針對目前BAL研究中肝細胞培養(yǎng)的難點，根據(jù)肝小葉的三維微觀結構和肝ECM的構成，依仿生學原理用殼聚糖、膠原等材料模擬肝ECM組分而構建三維多孔微載體（3D-MM），建立3D-MM/肝細胞復合體，再外被ACA微囊，建立微囊3D-MM/肝細胞復合體。用LSCM、SEM、FCM、免疫組化、原位雜交、RT-PCR、WesternBlot、Elisa、全自動生化分析儀等儀器、方法對3D-MM的理化特性、微載體/肝細胞復合體中肝細胞的黏附、增殖、生物合成、轉化、代謝活性和微囊對抗體、淋巴細胞及細胞因子介導的體液、細胞免疫反應的隔離效應進行系統(tǒng)檢測，以期建立一種模擬肝小葉結構、并降低免疫排斥反應、取用簡便的高活性微粒肝細胞生物反應器－微囊3D-MM/肝細胞復合體。這將為更好的解決目前困擾BAL研究深入的高密度、高活性培養(yǎng)肝細胞的難題提供有益的途徑，同時對胰島移植也有著重要的借鑒價值《HGF誘導ESC和MSC分化為自發(fā)搏動的心肌細胞及其分子機理研究》干細胞源性心肌細胞移植治療心肌梗死，預防心衰具有廣闊前景。ES細胞(ESC)和骨髓間質干細胞(MSC)是合適的干細胞來源，建立完善的體外誘導分化為功能性心肌細胞的方法是亟待解決的關鍵問題。本項目在首先發(fā)現(xiàn)肝細胞生長因子(HGF)可誘導ESC和MSC在體外分化為自主搏動心肌細胞的基礎上，進一步開展以下研究：①確定分化效率最高的HGF濃度區(qū)間，并進行分化心肌細胞的特異性標志、形態(tài)學觀察和電生理特征分析；②初步建立基于HGF的多因子組合誘導體系，為進一步建立無血清誘導分化體系打下基礎；③通過檢測分化進程中心肌細胞特異基因的時序性表達和阻斷HGF信號通道后細胞分化和基因表達的變化，分析HGF的作用機制與作用時相，揭示相關的分子機制；④分別采用基因操作方法和直接分選ESC源性的心肌干細胞兩種方法分離干細胞源性的心肌細胞，并進行動物實驗?！禤IR-B介導的抑制性T細胞級聯(lián)誘導小鼠骨髓移植后免疫耐受的作用研究》抑制性T細胞級聯(lián)是以抑制性T細胞（Ts）促發(fā)人DC高表達ILT4（在小鼠則稱為PIR-B）而稱之為耐受性DC，后者可誘導調節(jié)性T細胞（Treg）和Ts的產生，而Treg和Ts又能誘生耐受性DC形成一個不斷放大的級聯(lián)反應系統(tǒng)。本課題構建了CD1a啟動子啟動PIR-B轉錄的慢病毒表達載體，感染DC后檢測其PIR-B的表達和功能，比較基因修飾、Ts作用或細胞因子誘導的3種耐受性DC的功能差異；重點觀察基《復蘇后大鼠胃粘膜Ghrelin分泌和營養(yǎng)代謝影響的研究》創(chuàng)傷、休克、和復蘇等病理因素導致組織細胞繼發(fā)性損傷和MODS，機體分解代謝增強，消耗增加。應激反應后機體損傷細胞進入修復期，細胞修復所需的營養(yǎng)物質基礎不足，提高機體合成代謝能力是危重病營養(yǎng)代謝面臨的重要問題，臨床上重組生長激素已越來越多用于促進危重病人營養(yǎng)合成代謝。Ghrelin為生長激素促分泌素受體的內源性配體，主要由胃粘膜分泌，可促進生長激素的分泌，增強胃酸分泌和腸蠕動；在生理狀態(tài)下對能量缺失具有代償性分泌增加的能力，組織細胞缺血情況下，細胞功能出現(xiàn)障礙，這種代償能力下降或喪失。大黃具有清熱解毒、活血的功能，通過大黃改善胃粘膜微循環(huán)灌注，改善細胞缺血缺氧狀態(tài)，保護胃粘膜細胞功能，提高或恢復其對病理因素打擊后的應激代償能力，使Ghrelin分泌增加，并為腸內營養(yǎng)創(chuàng)造條件，提高內源性合成代謝能力。為危重病人提供有效和經(jīng)濟的救治措施?！痘赟mad3的抗瘢痕增生藥物高通量篩選體系建立與初步應用研究》瘢痕增生防治是目前燒傷、整形外科亟待解決的難題之一，但迄今為止，人們尚未找到一種十分有效的抗瘢痕增生藥物。其中一個重要的原因就是缺乏抗瘢痕增生藥物高效篩選體系。由于TGF-β是促進瘢痕增生的主要細胞因子，且TGF-β促進創(chuàng)面瘢痕增生依賴于信號分子Smad3激活，本研究基于TGF-β促進成纖維細胞膠原合成時，Smad3激活后充當以"CAGACA"序列為順式作用元件的成纖維細胞COL1A2基因上調轉錄因子的特點，構建含弱啟動子并"CAGACA"序列為增強子、以不穩(wěn)定增強型綠色熒光蛋白基因為報告基因的真核表達載體，轉染3T3細胞作為監(jiān)測Smad3活性變化的反應性報告系統(tǒng)。將該系統(tǒng)與熒光分析儀結合，觀測外源性物質對TGF-β促膠原合成作用的阻斷效果，從而建立抗瘢痕增生藥物的高通量篩選體系，為抗瘢痕增生藥物的研究提供一個理想的技術平臺，并利用該技術平臺從角質細胞培養(yǎng)上清液中篩選抗瘢痕增生藥物?！短悄虿∫暰W(wǎng)膜病變新生血管差異基因的研究》糖尿病視網(wǎng)膜病變是常見的致盲病因之一，新生血管的出現(xiàn)是糖尿病視網(wǎng)膜病變惡化的標志，本課題擬運用基因表達序列分析技術（SAGE），研究糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管與正常視網(wǎng)膜血管在基因表達上存在的差異，從分子水平分析兩者的不同之處，分析這些異常表達的基因在新生血管形成中的作用，試圖尋找觸發(fā)糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管形成的關鍵基因，以便深入認識視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)生發(fā)展機理，為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療開辟新的途《小G蛋白RhoC調控胃癌轉移的新機制研究》深入探討腫瘤轉移的分子機制，有助于尋找預防和治療腫瘤轉移的有效途徑，然而目前的研究尚存在不足之處。Rho蛋白是調控細胞骨架的重要信號分子，我們前期對Rho家族幾種主要分子在胃癌中的表達及活性狀態(tài)的研究發(fā)現(xiàn)：RhoC蛋白在胃癌中的表達與腫瘤的轉移呈顯著正相關；基因功能研究發(fā)現(xiàn)，改變細胞中RhoC的表達顯著影響細胞的侵襲能力，同時伴隨信號分子AKT的磷酸化改變。結合文獻研究，我們認為RhoC可能是調控胃癌轉移的關鍵分子。在此基礎上，本研究擬進一步明確RhoC調控胃癌轉移的關鍵作用；借助共聚焦顯微鏡、信號分子磷酸化檢測等技術從信號轉導通路和細胞骨架調節(jié)方面探討其具體分子機制；采用基因芯片和抗體芯片檢測RhoC轉染細胞前后分子的差異表達，并探討RhoC參與調控的其他通路及通路相互間聯(lián)系。這將為進一步闡明腫瘤轉移的分子機制奠定一定的理論基礎，并為研發(fā)新的腫瘤轉移預防治療藥物提供一定的理論依據(jù)。《高親和力肝癌人源性Fab片段抗體的研制》本項目擬利用噬菌體表面呈現(xiàn)技術、導向選擇及定點突變技術，構建抗體組合文庫，從中篩選高新和力抗肝癌相關抗原HAb18G的人源性抗體Fab片段，力爭使之達到或接近新本鼠源性抗體HAb18的新和力水平。篩選的抗體基因亞克隆后，誘導分泌表達并純化，然后對獲得的固迤?謂?刑匭約?ǎ??浯?媸笤蔥鑰固逵糜詬偉┑牡枷蛘鋃霞暗賈瘟頻於ɑ?《基于EEG-fMRI的原發(fā)全面性癲癇活動起源的探討》原發(fā)全面性癲癇以全身性強直、陣攣發(fā)作或典型失神為臨床表現(xiàn)，嚴重影響患者智力及日常生活。前期研究表明額葉是該類癲癇活動中的一個關鍵點，我們的研究也發(fā)現(xiàn)了額葉結構與功能的顯著變化。但關于額葉是否為原發(fā)全面性癲癇活動的起源，一直存在爭議，電磁生理及影像學研究結果存在較大差異。本課題擬采用以同步腦電聯(lián)合功能磁共振成像為主的多種神經(jīng)影像技術，在觀察額葉等腦區(qū)的結構、代謝、靜息態(tài)局域神經(jīng)活動與功能連接的變化狀況以及檢測癲癇活動的基礎上，著重利用Granger因果分析方法，分析癲癇活動在額葉與其他腦區(qū)間的傳播因果關系，并觀察神經(jīng)活動強度與活動傳播因果信息流在額葉相關網(wǎng)絡中各個腦區(qū)的分布模式及二者的關聯(lián)性。綜合多模態(tài)神經(jīng)影像分析結果，深入探討額葉在原發(fā)全面性癲癇活動的發(fā)生發(fā)展中的作用機制。本研究將有助于揭示原發(fā)全面性癲癇活動的起源與傳播機理，也有助于甄別有效的癲癇分類指標，為臨床鑒別診斷提供影像學依據(jù)?！禨hh信號通路在腦梗塞中雙重調控血管新生和血管滲漏的作用及機制研究》基于我們前期研究初步發(fā)現(xiàn)：激活Shh信號可促進腦梗塞后血管新生，減少血管滲漏。本課題采用siRNA技術、激光散斑成像技術、核素顯像技術、免疫組織化學、Real-timePCR等多種方法相結合，在InVivo和InVitro條件下，進一步探討Shh信號雙重調控血管新生和血管滲漏的作用及分子機制。在ＭＣＡＯ大鼠模型上觀察Shh信號活動促進梗塞區(qū)域血管新生的生物學特點和時空變化規(guī)律以及對神經(jīng)血管單元的影響，分別在VEGF、Ang-1和Ang-2基因沉默的MCAO大鼠模型和原代培養(yǎng)的缺氧細胞上，檢測Shh信號的激活或抑制對血管新生和血管滲漏的作用及與VEGF和Ang家族的相關性,并檢測其可能激活的下游分子（Notch，EphB,ephrin等），闡明相關的分子調控機制，為腦缺血治療中血管新生和灌注重建的靶向治療提供理論依據(jù)?！禙oxp3在CD4+CD25+Treg誘導的器官移植免疫調節(jié)功能中的作用研究》獲得移植物特異性的免疫耐受是同種異型器官移植的最終目標。CD4+CD25+Treg是一種調節(jié)性T細胞亞類，它所介導的免疫抑制在移植耐受的誘導和維持中起關鍵作用，目前認為Foxp3是Treg細胞啟動免疫抑制功能的"開關"。本課題應用RNA干擾技術阻斷Foxp3表達，通過體外、體內實驗多水平、多層次動態(tài)比較研究：①有免疫調節(jié)功能的CD4+CD25+Treg和Foxp3沉默的CD4+CD25+Treg對CD4+CD25-T細胞增殖影響的差別；②有免疫調節(jié)功能的CD4+CD25+Treg和Foxp3沉默的CD4+CD25+Trg，F(xiàn)oxp3mRNA和細胞因子量的差別；③體內實驗驗證Foxp3mRNA干擾的效果；④基因芯片技術篩選Foxp3的下游靶基因。旨在明確在CD4+CD25+Treg的免疫調節(jié)功能中，F(xiàn)oxp3調控的信號通路中的下游靶基因，為誘導移植物特異性免疫耐受奠定理論基礎?！堆t素加氧酶-1介導Th17細胞在哮喘氣道炎癥中的免疫調節(jié)作用》目前認為支氣管哮喘是以Th2分泌的細胞因子所致炎性細胞浸潤為主的慢性氣道炎癥。近年研究發(fā)現(xiàn)，一類新的Th細胞亞群-Th17，具有調控Th1和Th2的作用。Th17主要分泌IL-17，迄今發(fā)現(xiàn)有6種亞型（IL-17A-F）。在哮喘氣道炎癥中，IL-17A/F可促發(fā)中性粒細胞性炎癥，而IL-17E能促進Th2反應，誘導并激發(fā)嗜酸性粒細胞性慢性炎癥，但具體機制尚未闡明。血紅素加氧酶-1（HO-1）是血紅素代謝的限速酶，作為保護蛋白，具有抗氧化應激和抗炎作用。課題組最近研究表明HO-1高表達后可明顯減輕氣道炎癥和氣道高反應性；預實驗顯示：經(jīng)血紅素誘導HO-1表達可影響IL-17分泌。因此本課題設想通過Th17培養(yǎng)和構建小鼠哮喘模型，分析血紅素干預前后Th17及其分泌的細胞因子IL-17變化，探討HO-1、Th17和哮喘三者關系，闡明HO-1抗炎作用機制并提供臨床防治新思路?！禗DR2介導MMP-1分泌的信號途徑與類風濕性關節(jié)炎軟骨破壞的關系》DDR2是一種受體型蛋白酪氨酸激酶，纖維型膠原（I、II和II型膠原）是它的配體。膠原對DDR2的激活可以使細胞分泌基質金屬蛋白酶（MMPs）。類風濕性關節(jié)炎（RA）的主要病理表現(xiàn)是滑膜組織的過度增殖并帖附于關節(jié)軟骨上，通過分泌多種MMPs侵蝕破壞軟骨。而RA滑膜細胞和滑膜組織高表達DDR2，因此有必要深入研究DDR2介導的MMPs的分泌在RA關節(jié)軟骨破壞中的作用。鑒于MMP-1（膠原酶1）在軟骨破壞中的限速作用，擬從DDR2介導MMP-1分泌這一途徑出發(fā)，首先在細胞模型系統(tǒng)中尋找介導這一通路的關鍵信號轉導分子，闡明主要的信號轉導途徑，并觀察阻斷相關分子的功能是否能減少RA滑膜細胞分泌MMP-1。最后綜合上述研究結果，在動物模型水平探討可能的干擾方式，觀察是否能減輕RA大鼠模型的關節(jié)炎癥狀，從而為減輕RA關節(jié)軟骨破壞提供新的藥物靶位或線索?！赌X缺血性卒中后縫隙連接的功能變化及對神經(jīng)血管單元的影響及機制》進行半暗帶的保護可以減小缺血性腦卒中的梗死體積，改善患者預后。而由于腦結構和功能的復雜性，針對由神經(jīng)元、膠質細胞和血管內皮細胞構成的神經(jīng)血管單元的綜合性保護措施可能具有真正的臨床意義。星形膠質細胞上的縫隙連接直接參與代謝底物、損害因子、信號通路、水和離子的轉運，對神經(jīng)血管單元的功能維持具有重要意義。本項目在明確了缺血后縫隙功能變化規(guī)律的前期工作基礎上，選取甘珀酸抑制縫隙連接功能，采用體內體外實驗相結合的設計，研究干預后神經(jīng)血管單元在腦缺血損傷中的結構及功能變化，分析縫隙連接蛋白Cx43胞內合成及運輸?shù)淖兓瘷C制，以期初步揭示縫隙連接功能變化對星形膠質細胞、神經(jīng)元和內皮細胞間相互關聯(lián)的影響及作用機制，為深入認識縫隙連接在缺血性卒中中的作用奠定基礎，為挽救半暗帶、探索真正具有臨床應用價值的神經(jīng)保護策略提供新的思路。《MMPs基因多態(tài)性對急性腦梗死伴微出血患者遺傳易感性及預后的影響》腦微出血（cerebralmicrobleeds，CMBs）是腦內小血管病變所致、以微小出血為特征的一種腦實質亞臨床損害。CMBs與腦出血、腦梗死的出血轉化密切相關。近期研究證實，CMBs患者認知功能明顯受損。CMBs是腦小血管病變的標志，而MMP-2、MMP-9基因多態(tài)性和腦小血管疾病的發(fā)生有相關性。我們推測，MMP-2和MMP-9可能是CMBs重要的易感基因，其遺傳多態(tài)性會影響急性腦梗死CMBs患者的易感性及預后情況。本課題將通過南京卒中注冊系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫，采用基因測序、TaqMan熒光探針、Real-timePCR及ELISA等實驗技術，結合病例隨訪，研究MMP-2、MMP-9基因多態(tài)性與急性腦梗死CMBs患者遺傳易感性，及對急性腦梗死CMBs患者預后（血管事件、神經(jīng)功能缺損、認知功能）的影響，為闡述急性腦梗死CMBs發(fā)病的分子機制，采用個體化治療方案，改善患者預后提供理論依據(jù)?！督鼒龉鈱W研究納米金與量子點標記的VEGF、VEGFR分子作用》血管內皮生長因子（VEGF）的異構體VEGF165具有肝素結合位點，VEGF121缺乏肝素結合位點。納米金能夠阻止VEGF165與其受體VEGFR-2結合，抑制VEGF165誘導的血管內皮細胞增殖及血管生成；但納米金不能夠阻止VEGF121與受體VEGFR-2結合。為了研究納米金與VEGF165、VEGF121和VEGFR-2的分子作用，用近場光學顯微鏡提高探測的分辨率；用不同波長量子點（QD）標記VEGF165、VEGF121、VEGFR-2，增強熒光強度和熒光壽命，實現(xiàn)對單個生物分子較長時間的連續(xù)探測。觀察VEGF165和VEGF121在內皮細胞表面與受體的結合過程，信號傳導的變化；用原子力顯微鏡表征納米金與VEGF165、VEGF121作用前后納米尺度的變化；用免疫組化方法研究納米金對裸鼠體內移植肝癌血管生成及肝癌生長的影響；探討納米金抑制血管內皮細胞增殖和體內血管生成的分子調控機制《血管緊張素II受體“失能”對創(chuàng)面愈合的影響及機制研究》研究表明：皮膚是一個內分泌器官，又是一個激素、神經(jīng)遞質敏感性器官。皮膚的神經(jīng)內分泌系統(tǒng)在皮膚組織損傷后的修復與再生過程中扮演重要角色。血管緊張素II（angiotensinII,AngII）除作為重要的應激激素起作用外，還作為一個多效應生長因子在局部組織器官損傷修復中發(fā)揮重要作用。已證明局部應用AngII可明顯加速創(chuàng)面愈合，然而AngII受體在這個過程中的表達、作用及機制缺乏深入系統(tǒng)的研究。本研究將通過建立小鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型，應用免疫組織化學和分子生物學技術檢測創(chuàng)面愈合過程中AngII受體AT1和AT2表達的組織細胞定位和mRNA水平的時相性變化，觀察比較AT1或AT2受體"失能"（基因敲除和受體阻斷）對創(chuàng)面愈合以及創(chuàng)傷部位生長因子表達的影響，試圖闡明AngII調控皮膚損傷修復的機制。該研究將為應激反應影響創(chuàng)傷愈合尋找物質基礎，并為改善創(chuàng)傷愈合的結局提供新的線索?！禩rps1調控乳腺癌上皮-間葉轉化影響浸潤轉移的研究》遠處轉移是乳腺癌死亡率居高不下的主要原因，目前針對乳腺癌轉移尚缺乏有效的遏制手段。近年來研究發(fā)現(xiàn)上皮-間葉轉化即EMT在腫瘤惡性進展過程中發(fā)揮重要作用，乳腺癌等腫瘤上皮細胞可通過EMT獲得遷移和侵襲能力從而形成遠處轉移。本課題組前期工作表明轉錄調節(jié)因子Trps1能夠在腎臟中介導和調控EMT過程?，F(xiàn)有線索提示Trps1在乳腺癌中兼具組織表達的特異性和EMT調節(jié)的靶向性，但有關Trps1調節(jié)乳腺癌上皮-間葉轉化的作用機制尚不明了。本課題擬從Trps1在乳腺癌中的特異性表達入手，對Trps1-EMT-乳腺癌浸潤轉移軸線進行研究，探尋Trps1的下游底物，并對Trps1上游信號Bmp7和下游靶基因實施干預，闡明Trps1調控乳腺癌EMT的作用機制?？赏ㄟ^Trps1抑制乳腺癌EMT，保留和維持癌組織的上皮特性，弱化其浸潤和轉移能力，為乳腺癌的靶向治療、抑制/逆轉EMT提供新的理論依據(jù)和實驗支持?！栋捉樗?10在康復訓練促進大鼠腦缺血后神經(jīng)重塑和功能重建中的作用和分子機制》神經(jīng)系統(tǒng)的重塑和功能重建由神經(jīng)突起生長并建立新的突觸聯(lián)系所完成，是急性缺血性腦損傷后功能恢復的基礎，而康復訓練能夠促進這一過程。我們前期的工作觀察到康復訓練能夠提高大鼠腦缺血后腦內白介素-10（IL-10）的表達水平。IL-10能通過抑制腦缺血后炎癥反應而減輕腦損傷，更重要的是其能夠活化JAK/STAT和PI3K/Akt信號通路，而這兩條信號通路參與了調節(jié)神經(jīng)突起的生長。但是IL-10信號通路是否參與了腦缺血后神經(jīng)重塑尚未見報道。本項目擬在前期工作基礎上，從細胞水平上觀察IL-10信號通路對缺氧性損傷神經(jīng)元突起生長和建立突觸聯(lián)系的影響；進而通過建立腦缺血損傷大鼠模型，探討IL-10信號通路在康復訓練促進大鼠腦缺血性損傷后神經(jīng)重塑和功能重建中的作用。本項目從炎癥因子IL-10這個新視點為揭示康復訓練促進腦缺血后結構和功能重塑提供新的分子機制，為腦缺血后康復訓練的臨床應用提供新的線索。《Wnt信號途徑與乳腺干細胞自我更新及乳腺癌發(fā)生的關系》本項目利用DMBA誘導建立人乳腺癌動物模型，選取從正常→乳癌不同時間點的乳腺組織，應用基因芯片技術篩選有差異表達的Wnt信號途徑相關基因，應用Westblot與ELISA技術檢測Wnt信號途徑相關蛋白，并從發(fā)生時間順序、發(fā)生頻率、發(fā)生強度等因素分析相關蛋白與基因改變與最終癌變的關系；采用流式細胞分選技術篩選出乳腺上皮干細胞，利用基因轉染技術和/或蛋白拮抗技術干預正常和惡性乳腺干細胞的Wnt信號途徑《經(jīng)鼻給予病毒載體介導的BDNF基因在腦缺血大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達》血腦屏障的存在使大分子物質很難經(jīng)血液循環(huán)進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這一特點成為開發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的一大障礙。研究表明，具有調節(jié)功能的多種神經(jīng)肽類物質可能成為治療一些中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的新希望。如何使這些多肽分子安全有效地進入腦內，成為開發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)大分子藥物的關鍵。嗅覺通路是某些病毒入腦的途徑，其中皰疹病毒具有嗜神經(jīng)性,能在嗅神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內長期潛伏，并沿樹突、軸突和神經(jīng)間隙擴散。根據(jù)這些特點，以皰疹病毒為載體，將治療基因載入中樞神經(jīng)系統(tǒng)并表達，可能成為將多肽類藥物導入腦內的一條有效途徑。本研究選擇對缺血腦組織有保護作用的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因為治療基因，以重組皰疹病毒為載體，以大腦中動脈栓塞大鼠為腦梗死模型，經(jīng)鼻給予重組皰疹病毒載體，觀察治療基因在正常大鼠和腦梗死模型大鼠腦內的表達，并評價經(jīng)這種方法是否對缺血腦組織有保護作。旨在為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療探索一條新的給藥途徑。《高危型HPV新型免疫原的分子設計》針對高危型人乳頭瘤病毒16型和18型的E7抗原表位，運用MHCⅠ-肽四聚復合物標記細胞毒T細胞的FACS檢測法對E7抗原CTL表位進行定量研究，將免疫優(yōu)勢性CTL表位進行氨基酸置換修飾。選擇保留抗原特異性的CTL修飾表位、E7抗原B細胞表位和破傷風類毒素通用Th表位，N端連接穿膜肽、C端連接核心基質賴氨酸，設計并合成8分支多重抗原肽的新型免疫原，通過體外和在體實驗鑒定其免疫原性。為臨床上開展高危型HPV感染的特異性免疫治療奠定實驗研究基礎。《抑郁癥神經(jīng)網(wǎng)絡基礎的功能核磁共振研究》本研究結合國內外精神病學研究領域最新動態(tài)和發(fā)展趨勢，利用臨床量表評定抑郁癥狀，選擇臨床同質性高的患者為研究對象，結合神經(jīng)心理學測試探討各特定腦區(qū)認知功能損害與抑郁嚴重程度的相關性；利用結構MRI結合VBM技術分析抑郁癥患者腦灰、白質結構改變；通過不同認知任務設計的事件相關和靜息狀態(tài)功能MRI的掃描，在體研究與抑郁癥相關的腦功能區(qū)及其相互間的功能連接；并結合功能核磁共振DTI技術實現(xiàn)對腦白質纖維束的《磁探針標記自體骨髓間充質干細胞移植治療急性心肌梗死的核磁共振示蹤實驗研究》以小型豬為動物模型，分離、純化及培養(yǎng)其骨髓間充質干細胞（mesenchymalstemcell,MSC），利用超順磁性氧化鐵納米顆粒標記MSC。建立急性心肌梗死模型豬，分別于心梗后即刻、第2、7天經(jīng)皮冠脈內自體MSC移植治療急性心肌梗死，明確心肌梗死后細胞移植的最佳治療時機及冠脈內移植的有效性。同時運用核磁共振成像技術進行磁性標記的干細胞活體無創(chuàng)性動態(tài)示蹤，觀察和評價移植后MSC的定位、遷移、分裂及分化，移植后梗死處心肌血液灌注及心功能的改善。并將結果與隨后的組織病理學、免疫組織化學等方法進行一致性比較。本動物實驗研究運用被磁性納米顆粒標記的MSC移植治療急性心梗，通過無創(chuàng)、高分辨率的磁共振成象進行活體動態(tài)示蹤和評價，建立MSC移植治療急性心梗的核磁共振影像學示蹤方法和科學、客觀的評價標準，為進一步的臨床試驗提供理論依據(jù)?！督Y腸癌中IFITM3基因差異表達的機制及其功能研究》課題組前期研究提示W(wǎng)NT/β-catenin信號通路新靶基因IFITM3表達上調參與結腸癌發(fā)生發(fā)展，但其差異表達的機制和功能尚不清楚。本項目擬應用RNA干擾技術沉默結腸癌細胞株中WNT/β-catenin通路下游基因轉錄激活復合物β-catenin/BRG1表達，檢測該復合物表達對IFITM3基因表達的調控作用。應用基因轉染技術上調IFITM3低表達結腸癌細胞株RKO中IFITM3基因表達；RNA干擾技術沉默IFITM3高表達結腸癌細胞株HCT116中IFITM3基因表達。分別探討正向、負向調節(jié)IFITM3基因表達對結腸癌細胞增殖、細胞粘附、克隆形成及侵襲能力的影響。應用小動物活體成像技術觀察IFITM3基因表達改變對結腸癌細胞株在小鼠體內成瘤和轉移的影響。本研究旨在闡明結腸癌中IFITM3基因表達上調的分子機制和生物學作用，為結腸癌防治提供新的基因靶點及理論依據(jù)?！兑谎趸偁幰种艻DO酶活性對脂肪肝供體肝移植后缺血再灌注損傷的影響》肝臟移植缺血再灌注損傷（IRI）可致肝功能障礙或移植物失功，其產生機制中活性氧和活性氮扮演重要角色。其中一氧化氮（NO）對IRI的作用存在正反兩種意見。近來蛋白結構分析發(fā)現(xiàn)NO分子能競爭抑制吲哚胺雙加氧酶（IDO酶）活化。而IDO酶具有較強的抗氧化活性，其活化時能消耗大量O2-；其催化色氨酸代謝產物也是氧自由基的強清除劑。因此，我們假設肝移植后NO在體內能通過競爭抑制IDO酶活化，加重IRI損傷。本研究將以大鼠脂肪肝肝移植為IRI模型，采用創(chuàng)新"微透析-HPLC"技術實時監(jiān)測移植肝內IDO酶活性，研究移植后NO、O2-與IDO酶的競爭結合影響IRI的新機制；并應用iNOS酶抑制劑減少NO合成，或利用"睡美人"轉座子載體介導上調移植物IDO基因表達，以此調節(jié)NO-IDO酶競爭抑制途徑減輕脂肪肝IRI損傷。這將深化肝移植IRI發(fā)生機制的理解，并為擴大肝臟供體來源和IRI治療提供新的思路和手段?！稄娭毙约I養(yǎng)不良癥（DM）新的分子發(fā)病機制研究》前期某強直性肌營養(yǎng)不良癥（DM）大家系已反復運用長模板PCR擴增、Southern雜交及DM1、DM2位點克隆檢測方法確認為"非DM1及非DM2型"DM家系，肯定有致病新位點（DM3）存在，并將可能的致病新位點進行了初步定位(部分結果已發(fā)表)。本課題即在此基礎上運用微衛(wèi)星標記的全基因組掃描技術和連鎖分析技術精細檢測其家系成員血樣DNA，以準確定位DM3位點，隨之克隆DM3位點，分析其核苷酸序列，確定基因變異情況。最后通過檢測廣泛收集的其它DM家系及散在DM患者的DM3位點來進行臨床論證。DM3位點的定位和克隆將有助于進一步闡明DM分子發(fā)病機制，完善DM病人的基因分型，并建立一種更為全面有效的DM早期分子生物學診斷方法，為DM基因治療方案的制定和優(yōu)生優(yōu)育提供依據(jù)?！渡险{CXCR4促進蛛網(wǎng)膜下腔注射的MSCs向脊髓損傷區(qū)靶向遷移的機制研究》骨髓間充質干細胞（MSCs）移植治療脊髓損傷時，蛛網(wǎng)膜下腔移植途徑與原位移植相比具有損傷小等優(yōu)點，但移植細胞遷移到損傷部位的數(shù)量有限，這限制了其治療效果。前期研究發(fā)現(xiàn)脊髓損傷后損傷組織基質衍生因子（SDF-1）表達增加，在此基礎上我們提出增加MSCs的CXCR4表達，促進蛛網(wǎng)膜下腔注射的MSCs向脊髓損傷區(qū)靶向遷移的設想。用已建立的磁性標記、MRI活體內連續(xù)示蹤、免疫熒光等技術定量追蹤移植細胞的遷移，并用AMD3100特異性阻斷CXCR4，檢測SDF-1蛋白表達水平和MSCs遷移的關系，旨在獲得SDF-1/CXCR4在大鼠脊髓損傷后吸引MSCs遷移的可靠證據(jù)。通過慢病毒載體轉染CXCR4，增加MSCs中極少量的CXCR4的表達，從而促進MSCs向損傷處靶向遷移發(fā)揮治療作用，為干細胞應用于脊髓損傷的治療提供實驗依據(jù)。?！秹毫φT導的髓核細胞自噬在椎間盤退行性變中的作用及其機制研究》過度壓力是椎間盤退行性變的首要誘因，可以引起細胞內細胞器廣泛損傷及系列應激反應（如內質網(wǎng)內未折疊蛋白質增多）。自噬是清除細胞內受損細胞器及未折疊蛋白的主要途徑，對于維持細胞內環(huán)境的穩(wěn)定具有至關重要的作用。本課題擬構建兔椎間盤髓核細胞（脊索細胞和類軟骨細胞）的體外可控壓力培養(yǎng)模型，觀察不同壓力對這些細胞內細胞器腫脹、變形及細胞凋亡的影響，揭示細胞器損傷、應激與細胞自噬及凋亡的關系；檢測線粒體膜通透性、膜電位的改變、內質網(wǎng)應激相關蛋白及下游MAPK途徑相關蛋白的表達等，闡明壓力誘導髓核細胞自噬的可能機制；進而探討壓力誘導的細胞自噬與自噬性細胞死亡及細胞凋亡之間的關系，明確壓力誘導的細胞自噬在椎間盤退行性變中具體作用及其機制，將有助于進一步深入研究椎間盤退行性變的病理過程，為椎間盤退行性變的防治，改善和延長椎間盤退行性變治療的療效，提供新的理論依據(jù)和思路?！稕鲅龇揭种评夏晷渣S斑變性新生血管生長及分子機理研究》老年性黃斑變性（AMD）是目前全球主要不可逆致盲性眼病之一，我國60歲以上發(fā)病率為6.04-11.9%，濕性AMD脈絡膜新生血管（CNV）導致的反復出血是引起視力喪失的主要原因，目前西醫(yī)對此尚無有效的治療方法，常用的激光及手術療法療效不確且費用昂貴。我們臨床采用中藥涼血化瘀方治療AMD，能促進黃斑區(qū)出血吸收、CNV消退，提高視力、控制復發(fā).本課題應用缺乏單核細胞粘附蛋白-1的AMD鼠動物模型，采用眼底照相、熒光造影、OCT、掃描電鏡等方法觀測CNV的形態(tài)改變，觀察涼血化瘀方對該模型的干預作用。檢測含涼血化瘀中藥大鼠血清對由光損傷、缺氧誘導的體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的凋亡模型的影響，通過觀測第二信使、bax、bcl-2凋亡基因及增殖動力學的變化，從細胞及分子水平闡述涼血化瘀方治療AMD的機理，本研究將為中藥消退老年性黃斑變性CNV提供實驗依據(jù)，對AMD防治取得突破性進展具有深遠意義。《靜脈麻醉藥依托咪酯抗膿毒癥條件下腎上腺損傷機制研究》膿毒癥的病死率約與心肌梗塞相當，其救治過程中常試用靜脈麻醉藥。依托咪酯在該類藥物中對循環(huán)和呼吸影響最小，但其對膿毒癥的應用頗有爭議，因為依托咪酯被報道可減少皮質醇合成進而影響機體抗病能力。本組前期研究發(fā)現(xiàn)依托咪酯預處理可以通過減少caspas3,8,9等凋亡相關蛋白、開放mKATP、減少自由基合成而減輕腎上腺皮質細胞損傷，顯然這與已知依托咪酯抑制腎上腺功能似有矛盾。本課題將試用依托咪酯預處理膿毒癥大鼠，采用液相芯片、免疫熒光、蛋白免疫印跡等方法綜合評價預處理大鼠在膿毒癥條件下丘腦-垂體-腎上腺軸的具體變化，并探討其與糖皮質激素合成信號轉導通路NFκB-IP3/PLC/Ca2+-PKA/cAMP和/或客觀上另外具有的直接抗腎上腺損傷作用的相關性，進而了解依托咪酯可以維持抗炎/促炎平衡的最佳給藥方式。此研究對擴展膿毒癥臨床治療新思路具有重要意義，有望為膿毒癥中恰當應用靜脈麻醉藥物奠定重要基礎。《特發(fā)性脊柱側凸生物力學模型構建及三維支具數(shù)字仿真》根據(jù)脊柱力學原理，用三維CT掃描重建個體化特發(fā)性脊柱側凸形態(tài)模型，利用有限元方法，設定側凸的材料力學參數(shù)、邊界條件、載荷大小，分析側凸在屈曲、旋轉、側屈時的應力變化，結合臨床隨訪，通過多元回歸分析研究特發(fā)性脊柱側凸的進展、轉歸的可能機制；建立國人特發(fā)性脊柱側凸力學模型數(shù)據(jù)庫，根據(jù)該數(shù)據(jù)庫研究輕中度青少年特發(fā)性側凸的最優(yōu)化三維支具的數(shù)字仿真，通過臨床隨訪驗證并修改模型參數(shù)，并對支具有效性進行觀察驗證，申報國家發(fā)明專利。本課題首次對國人特發(fā)性脊柱側凸進展的力學機制研究，并建立特發(fā)性脊柱側凸生物力學數(shù)據(jù)庫。對于從特發(fā)性脊柱側凸側凸的早期治療，干預影響其進展的因素，研究應用于臨床的個體化三維支具，最大限度地避免手術，減少創(chuàng)傷和痛苦，具有科學的指導意義。《三維培養(yǎng)體系模擬干細胞Niche調控心臟瓣膜再生》利用功能性支架材料人工模擬Niche，促進干細胞自我更新和定向分化，調控組織再生，正成為組織工程領域的熱點問題。本項目嘗試制備干細胞-水凝膠-去細胞瓣的三維培養(yǎng)體系構建組織工程心臟瓣膜，一方面將自體骨髓間充質干細胞和內皮祖細胞分別三維培養(yǎng)于不同的聚乙二醇水凝膠，然后借助生物素-親和素分子對反應與去細胞瓣復合，使兩種干細胞混合種植、共培養(yǎng)，增殖、分泌活力增強；另方面將源自瓣膜間質細胞的條件培養(yǎng)基和血管內皮生長因子封裝于酶敏感型水凝膠，復合支架上通過酶解基質金屬蛋白酶底物肽的細胞行為智能化地啟閉誘導液及生長因子釋放，然后應力場和體內培養(yǎng)，促進干細胞部位專一性分化。擬通過該三維培養(yǎng)體系的制備，推動新型瓣膜替代物研發(fā)，同時探討Niche與細胞行為、組織再生的關系，有助揭示瓣膜相關病理生理機制?！督舛净觫蚍綄Ω嗡ソ叽笫蟾渭毎€粒體保護機制的研究》本研究以硫代乙酰胺(TTA)為試劑,復制暴發(fā)性肝衰竭大鼠動物模型,并以西藥乳果糖.中藥安宮牛黃丸作對比來觀察解毒化瘀Ⅱ方抗肝細胞損傷的影響。取肝組織進行線粒體分離行功能檢測；采用鱟試劑法測定血漿內毒素含量;全自動生化儀測定ALT、AST、TBIL、GLU;凝集法測定PT;酶聯(lián)免疫法測定TNFа;硝酸還原酶的化學比色法測定NO;并取肝左葉用于病理形態(tài)學觀察（光、電鏡）,肝組織壞死面積測定,肝組織Fa《晶體上皮細胞的周期調控防治后發(fā)性白內障的研究》用免疫印跡和反轉錄PCR方法研究體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細胞的周期調控,探索后發(fā)性白內障發(fā)生的分子機制。應用cyclin和CDK的反義核酸技術和p21基因轉染等方法阻斷晶體上皮細胞的周期進程。于兔晶體囊外摘除術中注入脂質體包裹的cyclin和CDK的反義核酸和p21重組腺病毒復合體于囊袋，觀察對后發(fā)性白內障形成的影響，探索后發(fā)性白內障防治的新方法?！豆菢虻鞍谆騿误w型影響江西贛南地區(qū)特發(fā)性草酸鈣結石形成的分子機制研究》江西贛南地區(qū)為我國泌尿系結石高發(fā)區(qū)之一，草酸鈣結石最常見，骨橋蛋白(OPN)是其強抑制物。國外研究顯示，OPN基因多態(tài)性位點與泌尿系結石發(fā)病相關，但其機制尚未闡明。國內尚未見OPN基因多態(tài)性與泌尿系結石相關性的報道。項目組前期研究發(fā)現(xiàn)OPN基因多態(tài)性位點-156delG/G與特發(fā)性草酸鈣結石（ICS）發(fā)病相關?，F(xiàn)有研究表明，與泌尿系結石發(fā)病相關的OPN基因多態(tài)性位點均位于啟動子區(qū)；另外，OPN去磷酸化后，會降低它與草酸鈣晶體的親和力。我們推測，OPN基因多態(tài)性位點可能通過OPN基因轉錄調節(jié)和OPN蛋白翻譯后修飾參與ICS形成。為驗證這一假說，本項目將繼續(xù)選擇OPN其它多態(tài)性位點，檢測SNPs，分析基因型和單體型與ICS發(fā)病風險及表型的相關性，并從特定單體型影響轉錄調控和OPN蛋白質翻譯后修飾入手，探討OPN基因單體型影響ICS形成的分子機制，為ICS的基因治療提供新的線索和思路《量子點-RNAi技術進一步研究caveolin-1與肺癌侵襲轉移的關系》在剛結題的國家基金委青年基金資助下，發(fā)現(xiàn)caveolin-1(Cav-1)在肺癌發(fā)生及侵襲轉移過程中有動態(tài)變化，呈雙向性，與肺癌細胞適應不同的生長需要密切相關。但Cav-1與肺癌侵襲轉移的具體機制還不清楚。而新型熒光標記物-量子點（QD）的成像和RNAi技術是近年來腫瘤研究的熱點，siRNA可成功地在體外逆轉腫瘤細胞的Cav-1表型，但如何將其應用于體內成為其走向臨床的瓶頸。本課題設想將量子點成像與RNAi技術相結合，構建能夠在體內高效、持久表達并能實時跟蹤的QD-Cav-1siRNA，以本課題組新建立的Cav-1高表達肺癌A549細胞株和裸鼠種植瘤為模型，通過半定量RT-PCR、免疫印跡、活細胞和活體動物成像、量子點免疫熒光和共聚焦等方法檢測其在體內外逆轉肺癌Cav-1的效果。尋找到一種多功能并能實時跟蹤RNAi的新型納米載體，為RNAi技術應用于肺癌的基因治療奠定理論和實驗基礎?！赌c癌術前同期放化療后pCR病例的篩選模型研究》"術前同期放化療（CRT）+根治性手術"是局部晚期和低位直腸癌的標準治療，術后病理證實高達27%的患者獲病理學完全緩解（pCR），但同時手術的并發(fā)癥及后遺癥發(fā)生率也較高，影響了患者的生活質量。據(jù)此我們提出：直腸癌經(jīng)術前CRT后達到pCR者是否還需要根治性手術嗎？回答這個問題必須分二步研究：第一步，建立一套能準確篩選直腸癌經(jīng)術前CRT后是否達到pCR的模型；第二步，用該模型對經(jīng)術前CRT的直腸癌進行篩選，并對篩出達到pCR的病例進行前瞻性隨機對照研究。本課題擬就第一步內容進行研究，即在分子腫瘤學、組織病理學、臨床影像學等不同層面上，對直腸癌患者在CRT前、中、后及術后等四個時相進行相關參數(shù)動態(tài)的、量化的研究分析，以期建立一套準確、實用的篩選模型。研究結果是進行第二步研究（即對達到pCR的直腸癌進行前瞻性隨機對照研究）的基礎，將對直腸癌治療方案的選擇、提高患者的生活質量具深遠影響?！都毎蜃泳W(wǎng)絡調控與中藥復方干預SLE模型的分子機制》SLE的中醫(yī)藥治療可明顯減少西藥的毒副作用，在減撤激素、提高SLE患者的生存質量等方面具有廣闊的應用前景。本課題在既往研究基礎上選擇臨床確有療效，代表名中醫(yī)精華的滋陰清熱方，采用能較好的反映SLE免疫學和病理學特征的自發(fā)性BXSB狼瘡鼠模型，首次運用微量樣本多指標流式蛋白定量技術（CBA），對滋陰清熱方等措施干預BXSB狼瘡鼠模型后外周血多種細胞因子的表達進行芯片式集成測定，以整體、同步的視角分析《線粒體心磷脂與活性氧在心肌缺血中的地位》心肌缺血時肌纖維膜下線粒體（SSM）中心磷脂（CL）含量降低，而其含量減少可降低細胞色素氧化酶的氧化功能，并且促進細胞色素C釋放。但缺血期限制電子流進入復合體Ⅲ則可防止CL和細胞色素C含量下降，并可維持細胞色素氧化酶活性。眾所周知，缺血可通過電子傳遞鏈產生活性氧（ROS）導致氧化性損害。由于CL中含有豐富的不飽和亞油酸酰基，所以對氧化性損害十分敏感。因此，本研究探討電子傳遞鏈產生的ROS對CL氧化性損害與其含量降低之間的關系；并在此基礎上進一步研究缺血期間維持CL含量能否保護再灌注期間線粒體功能、減輕心肌再灌注損害。該研究能夠明確ROS生成和CL含量減少之間的關系，并為發(fā)現(xiàn)減輕心肌缺血－再灌注損傷的新措施提供根據(jù)。《自體內皮祖細胞移植防治經(jīng)頸靜脈門腔分流道再狹窄的實驗研究》通過分離培養(yǎng)動物自體外周血血管內皮祖細胞;建立豬的TIPS模型，采用多孔灌注球囊導管直接注射纖維蛋白原(作黏附劑)與血管內皮祖細胞(EPC)混懸液，使EPC黏附于支架和分流道管壁,促進支架內分流道的內皮化進程。應用病理學，免疫組織化學，生物化學和細胞分子生物學等多種方法綜合評價細胞移植后EPC的生存狀況，以及移植EPC對TIPS分流道假性內膜和平滑肌增生的抑制作用;用放射學和病理學方法評價其預防再狹窄的療效.本研究的重要科學意義在于為TIPS再狹窄的預防和治療開辟新的途徑；同時也進一步反證膽汁損傷內皮細胞是導致TIPS再狹窄的重要原因的理論。《基于納米SPIO的動脈粥樣硬化血管損傷與修復的MR研究》由于內皮祖細胞（EPC）對動脈粥樣斑塊有靶向歸巢性，超順磁性氧化鐵納米粒子（SPIO）有良好的超順磁性，因此，若將EPC與SPIO結合就有可能在活體狀態(tài)下用磁共振（MR）對動脈粥樣硬化斑塊進行特異性的細胞成像。另一方面，實驗證實EPC和eNOS基因對動脈粥樣硬化有修復治療作用。本項目擬用SPIO為MR示蹤劑，并同時作為eNOS基因的轉染載體，對以上假設進行實驗。應用病理學，免疫組化和細胞分子生物學《早期動脈粥樣硬化斑塊靶向的MR分子影像學研究》本項目擬以基質金屬蛋白酶（MMPs）為成像靶點，通過合成超順磁性氧化鐵－多聚賴氨酸納米顆粒（SPIO-PLL），化學交聯(lián)法制備并純化單抗性SPIO-McAb（抗小鼠MMPs），并完成安全性實驗，測定其蛋白含量、抗體與SPIO的結合率及馳豫率，放射性核素123I標記SPIO-McAb，從離體、ApoE基因敲除鼠活體兩方面研究SPIO-McAb這一靶向MR造影劑在早期動脈粥樣硬化斑塊的特異性顯像作用，分析對比MR、SPECT對動脈粥樣硬化斑塊靶向早期顯像的可行性，建立在體早期、特異性評價體系，探討其在動脈粥樣硬化斑塊早期特異性MR分子顯像中的應用價值，以期開發(fā)斑塊特異性的MR分子探針?！赌X卒中后抑郁大鼠海馬神經(jīng)細胞再生與5-羥色胺1A受體關系的研究》最新研究表明原發(fā)性抑郁的發(fā)生與以5-羥色胺1A受體（5-HTR1A）為主的5-HT系統(tǒng)介導的海馬神經(jīng)再生障礙關系密切。本研究率先采用腦卒中后抑郁（PSD）大鼠模型，利用多種現(xiàn)代細胞分子生物學技術探討海馬齒狀回顆粒細胞層神經(jīng)細胞再生及其與5-HTR1A的關系；并探討5-HT再攝取抑制劑（SSRI）促進神經(jīng)再生以及治療PSD的神經(jīng)保護分子機制；同時綜合利用反義寡核苷酸技術和現(xiàn)代分子功能影像技術，定位、《PRM復合體篩選抗乳腺癌特異性多肽及其分子解析與功能改造》腫瘤生物治療已發(fā)展到以腫瘤靶點結構分析為基礎的新藥研究和開發(fā)階段。多肽因其來源廣泛、抗耐藥性、高效低毒、易重組改造等優(yōu)點而成為新藥開發(fā)的良好生物分子。建立多肽篩選平臺及數(shù)據(jù)庫、進行多肽抗癌機理研究并重組改造其結構功能是多肽藥物開發(fā)的關鍵和焦點。本研究擬采用核糖體表達法，設計DNA肽庫，表達Peptide-Ribosome-mRNA（PRM）復合體，以純化乳腺癌細胞膜為篩選平臺，洗提出與膜模型特異結合的多肽分子，通過MTT及流式細胞儀技術再次篩選出特異性更強的多肽分子，利用質譜技術、掃描電鏡技術、激光共聚焦顯微鏡技術作為研究新型多肽的下游體系，功能蛋白質組學研究篩選出多肽的抗癌機理。根據(jù)其抗癌作用機制，重組設計新型靶向性多肽分子，力求優(yōu)化其抗癌作用及穩(wěn)定性，驗證其體內外抗乳腺癌活性。實驗的成功為尋找抗腫瘤特異性多肽提供了一種高通量、高流速、可信度高的方法，其深遠意義將不僅局限于乳腺癌的治療?！吨兴幹苿┕に囉袩o實質性改變的快速檢測》中藥制劑工藝有無質的改變是長期困擾藥品審評和研發(fā)人員的技術難題。提取分離工藝的改變常被視為存在質的改變，而濃縮干燥和成型工藝由于缺少快速靈敏的檢測指標和方法，其有無實質性改變易被忽視。本項目以療效確切、單味藥制劑眾多但藥效物質不明確、質量控制困難的中藥板藍根制劑為模型，序貫應用常規(guī)理化分析、熱分析、含量測定、化學指紋圖譜、生物熱動力學等方法，以產品的理化數(shù)據(jù)、指紋圖譜相似度、熱動力學相關參數(shù)等多維指標，綜合評價中藥制劑工藝特別是干燥和制粒等單元操作工藝改變的程度和性質，輔以常規(guī)藥理試驗驗證其準確性和可靠性，建立一套評價中藥制劑工藝有無實質性變化的快速檢測方法體系，并在大黃、甘草等中藥制劑中示范應用，為保證中藥產品安全有效、穩(wěn)定可控提供新的技術支持?！冻赡晔笮呐K干細胞分化心肌細胞電生理特性和離子通道m(xù)RNA表達》長期以來人們認為心肌細胞缺乏增殖再生能力，心肌梗死后瘢痕組織將替代壞死心肌。然而最近的研究顯示，在成年鼠等哺乳動物包括成年人體心臟中含有原始未分化的Lin-c-kit+干細胞，并被認為是心臟干細胞(CSC)，它是一種多潛能細胞，具有再生和克隆能力，能修復并重建梗死的心肌組織。但CSC分化心肌細胞是否具備正常心室肌細胞的電生理學特性，有無相應的離子通道電流和mRNA表達等，目前尚未見報道。本項目采用CSC分離技術從成年大鼠心臟分離CSC，體外標記后植入心臟，移植后1-4周，應用全細胞膜片鉗技術記錄標記細胞動作電位和離子通道電流，探討神經(jīng)體液因素對相關離子通道的調節(jié)，并采用單細胞RT-PCR技術檢測標記細胞相關離子通道m(xù)RNA表達，從電生理學水平鑒定CSC分化細胞。其研究結果對正確選擇與心室肌細胞電生理特性相匹配的干細胞重建功能心肌，防止心律失常將有十分重要意義。《應用慢病毒干擾文庫篩選胰腺癌細胞獲得性耐藥基因的初步研究》腫瘤的多藥耐藥（multidrugresistance,MDR）的存在嚴重影響了化療藥物的療效，其潛在機理錯綜復雜。對腫瘤細胞耐藥機理的深入研究可以為尋找有效的方法來對抗或逆轉腫瘤耐藥提供基礎，是提高化療療效和改善腫瘤患者預后的關鍵所在。我們前期研究發(fā)現(xiàn)：胰腺癌細胞株中多個抗凋亡基因的異常活化與細胞株耐藥性的獲得密切相關，推測細胞內多條凋亡信號通路傳導的異?？赡軈⑴c胰腺癌的MDR的發(fā)生。在此基礎上，本研究擬構建基于慢病毒的、針對惡性腫瘤相關基因表達譜的RNA干擾基因文庫，結合基因芯片和shRNA技術分析腫瘤耐藥與非耐藥細胞中凋亡相關基因的差異表達，從而篩選出與獲得性耐藥相關的基因，并分析這些潛在耐藥基因在胰腺癌細胞株的表達和細胞定位及其與化療反應敏感性之間的關系，并探討相應的信號傳導通路對胰腺癌化療藥物反應性的影響，為臨床上逆轉胰腺癌的獲得性耐藥、增加化療敏感性提供實驗依據(jù)。《正、反義tankyrase寡核苷酸的構建及對SCCHN惡性表型的逆轉作用》本項目擬用現(xiàn)代分子生物學、酶學及生物組織化學等先進技術研究tankyrase與頭頸部鱗癌發(fā)生、發(fā)展之間的關系。通過構建正、反義tankyrase寡核苷酸載體并轉染頭頸部鱗癌細胞，探討正、反義tankyrase寡核苷酸對頭頸部鱗癌（SCCHN）細胞惡性表型的逆轉作用。利用雙向驗證分析系統(tǒng)在DNA、RNA、蛋白三個層次全面研究頭頸部鱗癌發(fā)生發(fā)展的機制。提出逆轉tankyrase酶活性持續(xù)表達的途徑和策略，彌補端粒酶抑制劑在基因治療方面的不足，為新的基因治療腫瘤方法提供理論依據(jù)?！赌强啥〉牟粚ΨQ全合成及其類似物的合成與活性研究》那可丁(Noscapine)是從鴉片中分離得到的生物堿。其光學異構體(-)-a-(1R,9S)-那可丁(1)具有強效鎮(zhèn)咳活性。迄今為止，1的合成研究報道不多，所用原料均為那可丁的降解產物Cotarnine，尚未有1的不對稱全合成的研究報道。由于目前罌粟的種植在全世界范圍內受到了極其嚴格的限制，植物來源的那可丁越來越少，國內那可丁的市場價突破到每公斤萬元以上。利用人工合成手段，解決那可丁的來源問題《Etk基因調控小細胞肺癌細胞凋亡與肺癌化療的抗藥性研究》Etk是新近發(fā)現(xiàn)的非受體類酪氨酸激酶的重要信號傳導分子，Etk對癌細胞的增殖、分化及凋亡起重要的調節(jié)作用。本項目選擇我國高發(fā)病率的小細胞肺癌作為研究對象，采用免疫組化、Westernblotting、PCR、免疫吸附沉淀（IP）、及RNA干擾（RNAi)等技術，分析（1）Etk對小細胞肺癌凋亡的調節(jié)作用及與Bcl-2，Bcl-XL，p53等凋亡相關基因表達的關系；（2）哪些凋亡相關基因參與了小細胞肺癌細胞化療抗藥性的生成；（3）Etk與小細胞肺癌的化療抗藥性有無關系，與化療抗藥性相關基因間的關系如何。闡明這些問題，將有助于進一步了解（1）小細胞肺癌凋亡的調控機制；（2）小細胞肺癌化療抗藥性的產生機制。一方面可為開展Etk靶基因治療的研究提供重要依據(jù)，另一方面可指導小細胞肺癌的臨床治療，具有重要的臨床應用價值。有關方面的研究國內外尚未見報道?！禘RM蛋白在晚期糖基化終產物致內皮細胞損傷中的作用》內皮細胞功能損傷致血管通透性增加是糖尿病性微血管病發(fā)生的重要機制，晚期糖基化終產物（advancedglycationendproduct,AGE）的聚積對內皮細胞的損傷作用是主要原因。ERM作為細胞膜蛋白和胞內骨架蛋白的重要連接蛋白，在內皮細胞形態(tài)和功能變化中起重要作用。本研究通過培養(yǎng)細胞、游離微血管和整體動物模型，利用免疫組化、蛋白磷酸化檢測、激酶特異性抑制劑、激酶無活性突變體重組腺病毒感染技術、RNAi干擾技術和和通透性測定等方法，在細胞、組織和整體水平研究AGE對內皮細胞ERM蛋白磷酸化水平的影響以及與內皮細胞形態(tài)和屏障功能的關系，鑒定AGE調控ERM磷酸化的上游信號通路以及ERM磷酸化位點，闡明ERM蛋白在AGE所致內皮細胞功能變化以及微血管損傷的信號通路及其機制?！禘GFR-2單抗介導的188Re-Morpholino預定位反義顯像研究》人工合成的寡核苷酸類似物Morpholino(MORF)是第三代極具發(fā)展前景的反義寡核苷酸。本課題以針對癌基因HER-2/neu高表達產物表皮生長因子受體-2(EGFR-2)蛋白為靶點的人源化單抗Herceptin作為MORF特異靶向轉運載體，制備Herceptin-MORF交聯(lián)物，選用診治兼用的核素188Re，采