河南歐諾生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD地址：河南省鄭州市惠濟(jì)區(qū)大河路街道中原物流港B6-1-06郵編：450049電話：136412806261/5慶大霉素ELISA檢測試劑盒使用說明書產(chǎn)品編碼：Ounuo99002本品采用競爭性酶免檢測技術(shù)用于牛奶、組織（牛/豬/雞/火雞）以及奶粉等樣本中慶大霉素的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。產(chǎn)品特性：快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法高靈敏度（0.1ng/g,或ppb）和檢測低限（2.5ng/g，或ppb）快速，檢測時間＜1.5h高的重現(xiàn)性定量限：組織（定量限：組織（牛/豬/雞/火雞）：5ppb牛奶：15ppb組織/細(xì)胞上清：500ppb奶粉：10ppb檢測限：組織（牛/豬/雞/火雞）：2.5ppb牛奶：10ppb組織/細(xì)胞上清：200ppb奶粉：5ppb技術(shù)服務(wù)：電話工請您提供產(chǎn)品貨號、批號、實驗數(shù)據(jù)等相關(guān)信息，以便能快速而高效的為您服務(wù)（貨號及批號見試劑盒外包裝）使用前須知當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標(biāo)分子且還能識別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對數(shù)據(jù)做出合理的分析。任何試劑、檢測程序的改變都可能導(dǎo)致檢測失敗。不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。實驗用水的質(zhì)量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內(nèi)使用完。需要但未提供的設(shè)備和試劑酶標(biāo)儀：配備450nm波長單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL量程各一支多道移液器：30-300μL量程一支白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干恒溫培養(yǎng)箱渦旋儀多管振蕩器離心機(jī)均質(zhì)器或絞肉機(jī)氯化鈉蔗糖1.5mL、10mL塑料離心管1.樣本前處理一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，牛奶樣本（滅菌乳）約7天，奶粉約15天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20℃保存，請勿使用反復(fù)凍融的樣本。試劑配制10%氯化鈉溶液稱取10g氯化鈉[NaCl]，加去離子水100mL混勻20%蔗糖溶液TIP吸取上層溶液時，應(yīng)避免吸取到脂類物質(zhì)，影響回收稱取20g蔗糖[C12H22O11]，加去離子水100mL混勻TIP吸取上層溶液時，應(yīng)避免吸取到脂類物質(zhì)，影響回收樣本稀釋液取1體積2x樣本稀釋液，加入等體積超純水混勻組織（牛/豬/雞/火雞）稱取0.5g均質(zhì)的樣本于10mL塑料離心管，加入2.5mL10%氯化鈉振蕩3min，

4000rpm離心3min；吸取0.1mL上層清液于1.5mL離心管，加0.4mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：25牛奶稱取0.5g均質(zhì)的樣本于10mL塑料離心管，加入4.5mL10%氯化鈉振蕩3min，

4000rpm離心3min；吸取0.1mL上層清液于1.5mL離心管，加0.9mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：100奶粉稱取0.5g均質(zhì)的樣本于10mL塑料離心管，加入2.5mL10%氯化鈉，再加

入2.5mL20%蔗糖振蕩3min，4000rpm離心3min；吸取0.1mL上層清液于1.5mL離心管，加0.4mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：50組織/細(xì)胞上清量取0.1mL樣本于1.5mL塑料離心管，加入0.9mL去離子水渦旋混勻；吸取0.1mL上層清液于新的1.5mL離心管，加0.9mL去離子水渦旋混勻；再次吸取0.25mL上層清液于新的1.5mL離心管，加0.75mL10%氯化鈉渦旋混勻；取100μL于新的1.5mL離心管中，加900μL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：40002.檢測步驟檢測前準(zhǔn)備所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失敗洗液（1×）配制取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻TIPTIP加標(biāo)準(zhǔn)品時，建議從低濃度到高濃度檢測步驟移取50μL慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；移取50μL酶結(jié)合物至每一所需微孔中；加入50μL慶大霉素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；室溫（20-25℃）孵育30min；甩干微孔板，加入300μL洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；TIP加終止液后，請于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL底物，室溫（TIP加終止液后，請于30min內(nèi)讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)結(jié)果計算以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。其中公式如下logit(B/B0)=klnB為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；logit(BK為斜率；C為截距計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值

代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋

倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如右：3.原理基于競爭性免疫檢測原理：慶大霉素與預(yù)包被在板上的慶大霉素蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合有限的抗慶大霉素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗慶大霉素抗體—慶大霉素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中慶大霉素含量與樣本的吸光度呈負(fù)相關(guān)。4.產(chǎn)品性能檢測限和定量限樣本類別檢測限ng/g或ppb定量限ng/g或ppb組織（牛/豬/雞/火雞）2.55牛奶1015組織/細(xì)胞上清200500奶粉510特異性（交叉反應(yīng)）化合物交叉反應(yīng)率%慶大霉素（Gentamicin）100其他抗生素＜0.1精密度：批內(nèi)/間≤10%；準(zhǔn)確度（添加回收）樣本類型添加回收率%組織（牛/豬/雞/火雞）100±20牛奶100±20組織/細(xì)胞上清100±25奶粉100±20線性區(qū)間：0.1~2ng/mL檢測時間：45min；保存及有效期：本產(chǎn)品需保存在2-8℃，有效期為12個月；開封使用后建議一個月內(nèi)使用完。5.產(chǎn)品組成組分?jǐn)?shù)量組分?jǐn)?shù)量預(yù)包被微孔板96孔（8孔*12