模塊驗(yàn)收小卷（五）生物技術(shù)與工程(本欄目對(duì)應(yīng)學(xué)生用書P439)一、選擇題：每個(gè)小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合要求的。1.（2025年廣東潮州階段練習(xí)）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員從土壤中篩選纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，部分操作流程如圖。下列敘述正確的是

（）①土壤取樣時(shí)，應(yīng)做到隨機(jī)取樣②富集培養(yǎng)可采用液體培養(yǎng)基，可充分利用其中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)③選擇培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)以纖維素為唯一碳源④進(jìn)行系列梯度稀釋的目的是便于涂布平板后得到單菌落⑤涂布平板時(shí)，將接種環(huán)從酒精中取出后，應(yīng)放在火焰上灼燒防止污染⑥菌落計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際數(shù)目少A.①②③④B.①③④⑥C.②③④⑥D(zhuǎn).②③④⑤C【解析】獲取土壤中纖維素分解菌時(shí)需要選擇富含纖維素的環(huán)境，如樹林中堆積的落葉經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵分解形成的腐殖土，①錯(cuò)誤；富集培養(yǎng)可采用液體培養(yǎng)基，可充分利用其中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，②正確；分析題意，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菑耐寥乐泻Y選纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，選擇培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)以纖維素為唯一碳源，③正確；進(jìn)行系列梯度稀釋的目的是便于涂布平板后得到單菌落，④正確；將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后放在火焰上灼燒，以免引燃酒精，⑤錯(cuò)誤；菌落計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，⑥正確。綜上所述，②③④⑥正確，故選C。2.（2024年廣東廣州模擬預(yù)測(cè)）發(fā)酵制作醬油在我國(guó)具有悠久的歷史。某企業(yè)通過發(fā)酵制作醬油的流程示意圖如下，其中米曲霉為好氧微生物，可分泌一些酶類將大分子物質(zhì)分解。下列敘述正確的是

（）A.米曲霉分泌的蛋白酶和脂肪酶，能分解氨基酸、脂肪酸等物質(zhì)B.該發(fā)酵過程的菌種為米曲霉、乳酸菌、酵母菌等，所需氮源主要來(lái)自小麥C.糧食為米曲霉發(fā)酵提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還需向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣并進(jìn)行攪拌D.轉(zhuǎn)至發(fā)酵池發(fā)酵的過程中，需要提供有氧條件，以抑制雜菌污染和繁殖C【解析】酶具有專一性，米曲霉分泌的蛋白酶和脂肪酶，能分解蛋白質(zhì)和脂肪，A錯(cuò)誤；該發(fā)酵過程的菌種為米曲霉、乳酸菌、酵母菌等，所需氮源主要來(lái)自大豆中的蛋白質(zhì)，B錯(cuò)誤；米曲霉代謝類型是異養(yǎng)需氧型，所以糧食為米曲霉發(fā)酵提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還需向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣并進(jìn)行攪拌以增加發(fā)酵罐內(nèi)的氧氣，C正確；發(fā)酵池內(nèi)的發(fā)酵主要是無(wú)氧發(fā)酵，所以轉(zhuǎn)至發(fā)酵池發(fā)酵的過程中，需要提供無(wú)氧條件，D錯(cuò)誤。3.（2024年廣東深圳一模）三白草和魚腥草二者因療效相近且具有疊加效應(yīng)常被中醫(yī)用作“藥對(duì)”，在我國(guó)全年可采收兩次。研究者欲利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍（兩種或兩種以上藥物配合使用）提前到個(gè)體生長(zhǎng)或生產(chǎn)過程，并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)，操作如下圖。下列敘述正確的是

（）A.①過程除了使用酶解法外，還可以利用鹽酸和酒精1∶1混合配制的解離液來(lái)完成B.②過程通常在等滲的培養(yǎng)液中，采用化學(xué)法或物理法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合C.④過程需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例，誘導(dǎo)生芽和生根D.圖中所示的生產(chǎn)流程中體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性B【解析】植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，因此過程①三白草和魚腥草體細(xì)胞雜交過程中要利用纖維素酶和果膠酶水解細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，鹽酸和酒精1∶1混合配制的解離液會(huì)殺死細(xì)胞，A錯(cuò)誤；過程②通常在等滲培養(yǎng)液中，以維持原生質(zhì)體的正常形態(tài)，可以采用化學(xué)法（聚乙二醇融合法）或物理法（離心、振動(dòng)、電激等）誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，B正確；④過程是從利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得愈傷組織或細(xì)胞中直接提取次級(jí)代謝物，不需要誘導(dǎo)生芽和生根，C錯(cuò)誤；圖中過程②原生質(zhì)體融合體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，③過程是利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得愈傷組織或細(xì)胞，沒有體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性，雜種細(xì)胞培育成一個(gè)完整的新的植物體的過程才體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。4.（2025年廣東珠海階段練習(xí)）雙抗體夾心法是常用的檢測(cè)抗原含量的方法，流程如下圖所示。其中固相抗體是由固相載體連接后的單克隆抗體。下列敘述正確的是

（）A.將抗原A注射到小鼠體內(nèi)，可從脾臟中獲得相應(yīng)單克隆抗體B.檢測(cè)過程中兩種抗體的使用數(shù)量均應(yīng)多于待測(cè)抗原的數(shù)量C.采用該法進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，所得的結(jié)果越準(zhǔn)確D.反應(yīng)體系中光信號(hào)越強(qiáng)（顏色越深），則抗原A含量越低B【解析】將抗原A注射到小鼠體內(nèi)，可從脾臟中獲得相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞，A錯(cuò)誤；固相載體連接后的單克隆抗體具有特異性，故其使用種類（量）應(yīng)明顯多于待測(cè)抗原的數(shù)量才能識(shí)別并結(jié)合更多的抗原，B正確；實(shí)驗(yàn)組只要和對(duì)照組時(shí)間相同，就可以檢測(cè)光信號(hào)，可以不給予足夠長(zhǎng)的時(shí)間，C錯(cuò)誤；反應(yīng)體系中光信號(hào)強(qiáng)度（顏色的深淺）可能與抗原A有一定的關(guān)系，但不能用它來(lái)具體判斷抗原A含量的高低，D錯(cuò)誤。5.（2024年廣東惠州模擬預(yù)測(cè)）水牛養(yǎng)殖是中國(guó)重要的農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)之一。與傳統(tǒng)繁殖方法相比，家畜胚胎工程技術(shù)可以挖掘動(dòng)物的繁殖潛力，提升家畜種質(zhì)資源質(zhì)量。以下敘述錯(cuò)誤的是

（）A.取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行DNA分析、選育優(yōu)良品種，可以提升水牛種質(zhì)資源B.注射促性腺激素促超數(shù)排卵和體外受精可以增加水牛胚胎數(shù)量C.胚胎移植使優(yōu)良母畜免去了冗長(zhǎng)的妊娠期，同時(shí)需要用免疫抑制劑處理代孕母畜D.同一胚胎分割產(chǎn)生的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，是動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一C【解析】從囊胚中取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行DNA分析、選育優(yōu)良品種，可以提升水牛種質(zhì)資源，A正確；用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理，以獲得大量卵母細(xì)胞，再通過體外受精可以增加水牛胚胎數(shù)量，B正確；受體母畜的子宮對(duì)于植入的具有抗原性質(zhì)的胚胎，一般來(lái)說(shuō)，在同一物種之內(nèi)并不產(chǎn)生排斥現(xiàn)象，因此不需要使用免疫抑制劑處理代孕母畜，C錯(cuò)誤；同一胚胎分割產(chǎn)生的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，是動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一，D正確。6.（2024年廣東東莞開學(xué)考試）2017年我國(guó)科學(xué)家在國(guó)際上首次實(shí)現(xiàn)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的體細(xì)胞克隆，如圖為培育克隆猴“中中”的流程圖。下列敘述正確的是

（）A.重組細(xì)胞c的培養(yǎng)基中加入動(dòng)物血清，可以激發(fā)成纖維細(xì)胞a的全能性B.受體動(dòng)物d要進(jìn)行同期發(fā)情處理，可降低對(duì)胚胎的免疫排斥反應(yīng)C.克隆猴“中中”e的性狀不受卵子b的遺傳物質(zhì)的影響D.克隆猴用于人類疾病研究和診治藥物研發(fā)可以減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾D【解析】在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入一定量的動(dòng)物血清，其作用是模擬內(nèi)環(huán)境和補(bǔ)充未知的缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，激發(fā)成纖維細(xì)胞核全能性的是卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的物質(zhì)，A錯(cuò)誤；受體動(dòng)物d要進(jìn)行同期發(fā)情處理，目的是為胚胎移入受體提供相同的生理環(huán)境，B錯(cuò)誤；克隆猴“中中”e的性狀受卵子b的遺傳物質(zhì)的影響，C錯(cuò)誤；克隆一批遺傳背景相同的動(dòng)物用于人類疾病研究和診治藥物研發(fā)可以減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，D正確。7.（2024年重慶九龍坡二模）中國(guó)科學(xué)家發(fā)展了一種可工作于活細(xì)胞環(huán)境的框架核酸狀態(tài)智能機(jī)（如圖），可以在活細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)時(shí)序信號(hào)調(diào)控的CRISPR（基因編輯）系統(tǒng)的分級(jí)運(yùn)輸、基因組定位與基因編輯功能。下列說(shuō)法正確的是

（）A.核仁蛋白不能分布到細(xì)胞膜上，參與細(xì)胞的識(shí)別作用B.有限狀態(tài)機(jī)與向?qū)NA結(jié)合后，進(jìn)入細(xì)胞的過程不需要消耗能量C.Cas9（核酸編輯酶：一種蛋白質(zhì)）/向?qū)NA復(fù)合物能通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核D.向?qū)NA能夠通過堿基互補(bǔ)配對(duì)定位到特定的基因位置并切斷磷酸二酯鍵C【解析】據(jù)圖可知，有限狀態(tài)機(jī)與向?qū)NA結(jié)合后，與分布在細(xì)胞膜上的核仁蛋白接觸，進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)入細(xì)胞的過程是胞吞，胞吞需要消耗能量，A、B錯(cuò)誤；核孔是大分子物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞核的通道，Cas9（核酸編輯酶：一種蛋白質(zhì)）/向?qū)NA復(fù)合物能通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核，C正確；向?qū)NA能夠通過堿基互補(bǔ)配對(duì)定位到特定的基因位置，但不能切割磷酸二酯鍵，D錯(cuò)誤。8.（2024年廣東佛山三模）圖1表示基因工程中用到的質(zhì)粒，其中PstⅠ是目的基因插入位點(diǎn)，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因。圖2表示篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌的方法（四環(huán)素和氨芐青霉素在高溫下不穩(wěn)定易失效）。下列說(shuō)法正確的是

（）A.構(gòu)建重組DNA分子用到的工具酶有限制酶和質(zhì)粒B.圖2所用培養(yǎng)基應(yīng)加入抗生素并調(diào)好pH后再滅菌處理C.圖2中利用絨布接種的方法為稀釋涂布平板法D.原板上的甲、乙菌落中，甲菌落是成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌D【解析】構(gòu)建重組DNA分子用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶，質(zhì)粒為載體，A錯(cuò)誤；由于四環(huán)素和氨芐青霉素在高溫下不穩(wěn)定易失效，因此應(yīng)在滅菌后再加入抗生素，B錯(cuò)誤；圖2中利用絨布接種的方法為影印法，不改變菌落的位置，C錯(cuò)誤；原板上的甲、乙菌落中，甲菌落在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能生存，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生存，說(shuō)明甲菌落質(zhì)粒中的氨芐青霉素抗性基因被破壞，由圖1可知，重組質(zhì)粒中的氨芐青霉素抗性基因被破壞，說(shuō)明甲菌落是成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌，D正確。9.（2024年黑龍江哈爾濱期末）水稻是重要的糧食作物，培育轉(zhuǎn)基因水稻，對(duì)創(chuàng)制高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)新品種意義重大。為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻中的抗除草劑基因d是否會(huì)擴(kuò)散到其他物種導(dǎo)致基因污染，令該轉(zhuǎn)基因水稻與雜草A、B一起種植。取各種植物細(xì)胞的DNA經(jīng)酶切、PCR后進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖所示。下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是

（）注：A1、B1為對(duì)應(yīng)植株的子一代。A.由圖可知，轉(zhuǎn)基因水稻中的抗除草劑基因d通過基因交流轉(zhuǎn)移到了雜草B1中B.抗除草劑基因有可能通過花粉傳播進(jìn)入雜草，從而產(chǎn)生“超級(jí)雜草”C.電泳時(shí)，點(diǎn)樣孔位于乙側(cè)，電泳條帶遷移的速度與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象有關(guān)D.為避免培育過程中的基因污染，可將外源a-淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入水稻中C【解析】結(jié)合圖示可知，雜草A和B中不含有基因d，而B1細(xì)胞中出現(xiàn)基因d，所以基因d通過基因交流轉(zhuǎn)移到了雜草B1中，A正確；抗除草劑基因有可能通過花粉傳播進(jìn)入雜草，使雜草成為用除草劑除不掉的“超級(jí)雜草”，B正確；小型的DNA移動(dòng)速度要比大型DNA快，在電泳圖上，小型的DNA距離電泳點(diǎn)樣孔最遠(yuǎn)，因此點(diǎn)樣孔位于甲側(cè)，電泳條帶遷移的速度與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象有關(guān)，C錯(cuò)誤；將α-淀粉酶基因與抗除草劑基因?qū)爰?xì)胞核的同一DNA分子后，α-淀粉酶基因可以阻斷淀粉儲(chǔ)藏使花粉失去活性，從而可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播。D正確。二、非選擇題：本題有3個(gè)小題。10.（2024年青海海東二模）綏陽(yáng)空心面、岐山掛面、中江掛面等是具有顯著地方特色的發(fā)酵空心面。與普通生鮮面條相比，發(fā)酵空心面具有久煮不爛、細(xì)嫩滑爽、易于消化的特點(diǎn)，深受人們喜愛?？招拿娴闹谱鞴に嚵鞒倘鐖D所示，回答下列問題：（1）乳酸菌和酵母菌的新陳代謝類型

（填“相同”或“不同”）。從上述流程分析，空心面在干燥過程中逐漸形成“空心”，這主要與

菌呼吸作用生成的

有關(guān)。

（2）面團(tuán)類似于實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)微生物的

，其包含了乳酸菌和酵母菌生長(zhǎng)、繁殖所需的

等基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。三次發(fā)酵的溫度都保持在30℃，這樣做的原因是________________________

。

不同酵母CO2培養(yǎng)基碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽30℃條件下，乳酸菌和酵母菌的發(fā)酵旺盛，有利于空心面的制作（3）游離氨基酸可使空心面具有甜鮮味，提高面條的感官品質(zhì)。與普通面條相比，空心面中游離氨基酸的總量較高，推測(cè)原因最可能是________

。（4）無(wú)須嚴(yán)格滅菌，但空心面制作過程中不會(huì)出現(xiàn)發(fā)霉、腐敗等現(xiàn)象，這可能與乳酸菌和酵母菌發(fā)酵使面團(tuán)形成

（答出2點(diǎn)）等環(huán)境條件有關(guān)。

乳酸菌或酵母菌在發(fā)酵過程中分泌了蛋白酶（和肽酶）等水解酶催化蛋白質(zhì)水解低pH和低O2含量【解析】（1）乳酸菌是厭氧生物，而酵母菌是兼性厭氧生物，兩者的新陳代謝類型不同；從圖中流程分析，空心面在干燥過程中逐漸形成“空心”，這主要與酵母菌呼吸作用產(chǎn)生CO2有關(guān)。（2）面團(tuán)含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，類似于實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基；雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無(wú)機(jī)鹽，故面團(tuán)包含了乳酸菌和酵母菌生長(zhǎng)、繁殖所需的碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽；微生物發(fā)酵需要適宜的溫度，三次發(fā)酵的溫度都保持在30

℃，這樣做的原因是：30

℃條件下，乳酸菌和酵母菌的發(fā)酵旺盛，有利于空心面的制作。（3）與普通面條相比，空心面中游離氨基酸的總量較高，推測(cè)原因最可能是乳酸菌或酵母菌在發(fā)酵過程中分泌了蛋白酶（和肽酶）等水解酶催化蛋白質(zhì)水解。（4）空心面制作過程中不會(huì)出現(xiàn)發(fā)霉、腐敗等現(xiàn)象，這可能與乳酸菌和酵母菌發(fā)酵使面團(tuán)形成低pH和低O2含量。11.（2025年寧夏石嘴山開學(xué)考試）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機(jī)化合物）在土壤中不易降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下圖程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）。（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理?，F(xiàn)有1L土壤浸出液，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣液至盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次稀釋103稀釋度。各取0.1mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液中的菌株數(shù)為

。

（2）接種技術(shù)的核心是

，________

是研究和應(yīng)用微生物的前提。只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是____________________________

或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。

5.6×108防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度稀釋獲得單個(gè)菌落培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源（3）在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無(wú)透明帶菌落利用的氮源主要是

，有透明帶菌落利用的氮源主要是

，

據(jù)此可篩選出目的菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖顯示的A~E五種菌株中，

是最理想菌株。

氮?dú)庠摮輨〦【解析】（1）圖中稀釋的倍數(shù)是103，三個(gè)菌落的平均數(shù)=（55+56+57）÷3=56，則每毫升原土壤浸出液中的菌株數(shù)=56÷0.1×103=5.6×105個(gè)，所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)=5.6×105×103=5.6×108個(gè)。（2）接種技術(shù)的核心是無(wú)菌操作，防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的，稀釋獲得單個(gè)菌落是研究和應(yīng)用微生物的前提。在以該除草劑作為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的大部分細(xì)菌是不能生長(zhǎng)的，因此大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。（3）由于含該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產(chǎn)生透明圈，無(wú)透明圈說(shuō)明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮?dú)?；而出現(xiàn)透明圈說(shuō)明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細(xì)菌繁殖產(chǎn)生的，氮源是該除草劑；E透明圈（或透明圈與菌落的比值）最大，說(shuō)明其降解除草劑的能力最強(qiáng)，是最理想菌株。12.（2025年廣東梅州開學(xué)考試）半乳糖醇可作為新型甜味劑應(yīng)用于糖果、面包等食品工業(yè)。釀酒酵母長(zhǎng)期用于食品加工業(yè)，具有很強(qiáng)的食品安全性與大規(guī)模發(fā)酵能力。為構(gòu)建釀酒酵母工程菌株生產(chǎn)半乳糖醇，回答下列問題：（1）為將木糖還原酶基因（如圖甲）準(zhǔn)確連接至pRS313質(zhì)粒（如圖乙）內(nèi)，需在引物1、2的5'端分別加上限制酶B、A的識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)PCR擴(kuò)增得到木糖還原酶基因。對(duì)目的基因和pRS313質(zhì)粒進(jìn)行限制酶B、A雙酶切處理，目的是______________________________________________________

。經(jīng)酶切后的目的基因和質(zhì)粒經(jīng)DNA連接酶連接得到

。

（注：氨芐青霉素作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成）防止目的基因和質(zhì)粒反向連接（或確保目的基因和質(zhì)粒正向連接），防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化重組質(zhì)粒（表達(dá)載體）（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入

（填“釀酒酵母”或“大腸桿菌”）中，采用

法將菌液接種至含有氨芐青霉素的LB平板進(jìn)行篩選。挑取單菌落進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序驗(yàn)證正確后，利用質(zhì)粒提取試劑盒提取重組質(zhì)粒。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入釀酒酵母時(shí)，需利用醋酸鋰-Tris-EDTA和緩沖液-PEG共同處理釀酒酵母，其中EDTA的作用是抑制DNA酶的活性，防止

。

大腸桿菌稀釋涂布平板導(dǎo)入細(xì)胞的重組質(zhì)粒被破壞（被降解）（4）取各重組菌株制成等濃度的菌液，等量接種到含