ICS6502020

B31..

江蘇省地方標準

DB32/T3775—2020

豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-LAMP

檢測方法

RT-LAMPmethodfordetectiongporcinereproductiveandrespiratory

syndromevirus

2020-04-08發(fā)布2020-05-15實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3775—2020

目次

前言

…………………………Ⅰ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

縮略語

3……………………1

原理

4………………………1

試劑和儀器設(shè)備

5…………………………2

檢測程序

6…………………2

結(jié)果判定

7…………………4

安全和防污染措施

8………………………4

附錄規(guī)范性附錄試劑配制

A()…………5

附錄資料性附錄引物序列

B()…………6

DB32/T3775—2020

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)提出并歸口

。

本標準起草單位南京農(nóng)業(yè)大學(xué)

:。

本標準主要起草人姜平張日騰白娟熊富強王先煒李玉峰陳聞

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3775—2020

豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-LAMP

檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測原理試劑和儀器設(shè)備檢測程序和結(jié)果

RT-LAMP、、

判定

。

本標準適用于豬臨床樣品肺臟脾臟和血清和細胞培養(yǎng)物中豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢測同

(、);

時適用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒經(jīng)典型高致病性類型三種基因亞型的分型檢測

、、NADC30。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實驗室生物安全通用要求

GB19489

實驗室質(zhì)量控制規(guī)范動物檢疫

GB/T27401

獸醫(yī)診斷樣品采集保存與運輸技術(shù)規(guī)范

NY/T541、

基因檢驗實驗室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

PRRSV:(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus)

環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴增

LAMP:(loop-mediatedisothermalamplification)

反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴增

RT-LAMP:(reversetranscription,loop-mediatedisothermalamplifica-

tion)

4原理

豬繁殖與呼吸綜合征病毒主要引起豬繁殖與呼吸綜合征俗稱藍耳病該病毒有美洲

(PRRSV)(),

型和歐洲型兩個血清型美洲型又有多個基因亞型我國流行的美洲型主要有傳統(tǒng)型高致病

,。PRRSV、

性和類型毒株其主要區(qū)別存在于病毒的基因環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴增是一種體

NADC30,Nsp2。(LAMP)

外恒溫核酸擴增技術(shù)用于快速檢測是一種逆轉(zhuǎn)錄用于檢測本標準

,DNA。RT-LAMPLAMP,RNA。

根據(jù)開放閱讀框架基因序列非結(jié)構(gòu)蛋白基因序列設(shè)計

RT-LAMP,PRRSV7(ORF7)、ORF1a(Nsp2)

組引物建立種檢測方法即和其中的

4,4RT-LAMP(LAMP1、LAMP2、LAMP3LAMP4),LAMP1

特異性引物識別基因和的特異性引物識別基因每種

ORF7,LAMP2、LAMP3LAMP4Nsp2。LAMP

引物均包括兩對內(nèi)外引物內(nèi)引物與外引物與和一對環(huán)引物與利用

、(