T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2Acetylcholinesterase-Determinationofactivity-Spectrophotometricme2022-10-28發(fā)布2023-I20001.4-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定起草。T/CSTM01090—2022與T/CAIA/請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國材料與試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化委員會科學(xué)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化領(lǐng)域委員會（CSTM/FC98）和中國分析測本文件由中國材料與試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化委員會科學(xué)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化領(lǐng)域委員會（CSTM/FC98）和中國分析測1乙酰膽堿酯酶活性檢測分光光度法本文件規(guī)定了用分光光度法測定乙酰膽堿酯酶活性量限為0.01μmol/(mL·min)，測量范圍為0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL在規(guī)定的反應(yīng)條件下，乙酰膽堿酯酶具有催化分解碘化硫代乙酰膽堿的特性，雙（2-硝基苯甲酸DTNB）反應(yīng)生成黃色化合物5-巰基-2-硝基苯甲酸（TNBTNB2稱取72mg碘化硫代乙酰膽堿置于帶蓋離心管，用10mL磷酸緩沖液（55.35,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸DTNB）溶液稱取19.8mgDTNB置于燒杯中，用磷酸緩沖液（此溶液lmL相當(dāng)于1μmol谷胱甘肽。因其易被氧化，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，水應(yīng)先經(jīng)煮沸去氧冷卻后使用。）：g)50mL離心管和15mm×150mm稱取酶粉樣品10.0mg或吸取酶液樣品0.100mL置于燒杯中，用2mL磷酸緩沖液（5.1）溶解，mL磷酸緩沖液的試管中，振搖試管或反復(fù)吹打30.03μmol~0.40μmol范圍內(nèi)。選擇2個~3個濃度樣品原液或樣品稀釋液進(jìn)行酶活性的測定。取兩支50mL離心管，一支加入1.0mL碘化硫代乙酰膽堿溶液（5.2），并加入9.0mL磷酸緩沖液稀釋；另一支加入20mLDTNB（5.3），37℃水浴鍋中預(yù)熱10min。取兩支試管，一支加入1.0mL待測樣對照管，37℃水浴鍋中預(yù)熱5min。向樣品管和對照管中分別依次加入預(yù)熱后的DTNB（5.3）和碘化硫代乙酰膽堿稀釋液各1.0mL；加入碘化硫代乙酰min后，立即向樣品管和對照管中分別加入0.1mL抑制劑（5.4）并混勻，以終止反應(yīng)。每個樣品應(yīng)平行使用分光光度計(jì)在412nm波長處，以對照管為參比，測試樣品管注2：在酶稀釋后若溶液肉眼可見不澄清或者有顏色可將對照管變?yōu)槊赶♂屢海?.1mL抑制劑提前加入管中。01234500在412nm波長處，以空白溶液（0號管）為參比，反應(yīng)后每管的吸光度值為縱坐標(biāo)，每管谷胱甘肽按照此校準(zhǔn)曲線，計(jì)算出酶稀釋液催化分解碘化硫代乙酰），A——乙酰膽堿酯酶的活性，單位為微摩爾每毫升（或每毫克）每分鐘(μmol/(mL·min)或n-——由校準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的酶稀釋液催化分解碘化硫代乙酰膽堿量的平均值，單位為微摩爾D——稀釋倍數(shù)；4m——吸取酶液的體積或稱取酶粉的質(zhì)量，單位為毫升（mL）或毫