pcr實(shí)驗(yàn)考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)中，延伸溫度一般是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.4℃2.PCR反應(yīng)的模板可以是（）A.DNAB.蛋白質(zhì)C.多糖D.脂質(zhì)3.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.特異性強(qiáng)D.穩(wěn)定性好4.引物設(shè)計(jì)的長(zhǎng)度一般為（）A.10-15個(gè)堿基B.15-30個(gè)堿基C.30-50個(gè)堿基D.50-70個(gè)堿基5.一個(gè)完整的PCR循環(huán)不包括以下哪個(gè)過(guò)程（）A.變性B.退火C.連接D.延伸6.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)必需的（）A.dNTPB.Mg2+C.限制性?xún)?nèi)切酶D.引物7.通常PCR反應(yīng)體系總體積是（）A.5-10μLB.10-20μLC.20-100μLD.100-200μL8.用于判斷PCR產(chǎn)物是否正確的常用方法是（）A.凝膠成像B.紫外分光光度計(jì)C.酶標(biāo)儀D.離心9.PCR技術(shù)的發(fā)明者是（）A.沃森B.克里克C.穆利斯D.桑格10.退火溫度的設(shè)定與什么有關(guān)（）A.模板長(zhǎng)度B.引物長(zhǎng)度和堿基組成C.Taq酶活性D.dNTP濃度二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)需要的成分有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg2+2.設(shè)計(jì)引物時(shí)需要考慮的因素（）A.引物長(zhǎng)度B.堿基組成C.避免引物二聚體D.引物特異性E.Tm值3.PCR常見(jiàn)的應(yīng)用領(lǐng)域有（）A.基因克隆B.疾病診斷C.親子鑒定D.法醫(yī)物證分析E.生物進(jìn)化研究4.可能影響PCR擴(kuò)增效果的因素有（）A.模板濃度B.引物濃度C.Taq酶量D.反應(yīng)溫度E.循環(huán)次數(shù)5.關(guān)于Taq酶，下列說(shuō)法正確的是（）A.具有5'→3'聚合酶活性B.具有3'→5'外切酶活性C.熱穩(wěn)定性高D.可用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增E.是PCR常用酶6.PCR產(chǎn)物可以進(jìn)行的后續(xù)分析有（）A.測(cè)序B.酶切C.克隆D.熒光定量分析E.凝膠電泳分析7.以下哪些屬于PCR技術(shù)延伸階段的特點(diǎn)（）A.Taq酶發(fā)揮作用B.以dNTP為原料C.形成新的DNA鏈D.需要適宜的溫度E.引物與模板結(jié)合8.優(yōu)化PCR反應(yīng)體系可以采取的措施有（）A.調(diào)整模板量B.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)C.選擇合適Taq酶D.改變緩沖液配方E.優(yōu)化反應(yīng)程序9.構(gòu)成PCR反應(yīng)緩沖液的成分通常有（）A.Tris-HClB.KClC.MgCl2D.牛血清白蛋白E.甘油10.下列與PCR技術(shù)的原理相關(guān)的有（）A.DNA半保留復(fù)制B.堿基互補(bǔ)配對(duì)C.熱變性復(fù)性原理D.核酸分子雜交E.蛋白質(zhì)變性三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)中引物濃度越高越好。（）2.Taq酶沒(méi)有3'→5'外切酶活性，所以保真性較差。（）3.只要模板DNA量足夠多，PCR反應(yīng)就能成功。（）4.退火溫度越高，引物與模板結(jié)合越穩(wěn)定。（）5.PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分析，條帶越亮說(shuō)明純度越高。（）6.可以用PCR技術(shù)擴(kuò)增RNA。（）7.Mg2+濃度對(duì)PCR反應(yīng)沒(méi)有影響。（）8.不同的模板DNA進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)條件一般相同。（）9.引物設(shè)計(jì)時(shí)，引物之間可以有較高的互補(bǔ)性。（）10.熒光定量PCR可以對(duì)模板進(jìn)行絕對(duì)定量。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)原理基于DNA半保留復(fù)制，在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時(shí)引物與模板退火結(jié)合，中溫時(shí)Taq酶以dNTP為原料，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)過(guò)多次循環(huán)獲得大量目的DNA片段。2.列舉3種影響PCR結(jié)果的因素及解決辦法因素：模板濃度過(guò)高可能抑制反應(yīng)，可稀釋模板；引物設(shè)計(jì)不當(dāng)影響擴(kuò)增，需重新設(shè)計(jì)；退火溫度不合適會(huì)使引物結(jié)合不佳，應(yīng)調(diào)整退火溫度。3.PCR反應(yīng)體系中各成分的作用分別是什么？模板DNA提供復(fù)制的起始序列；引物引導(dǎo)DNA合成起始；Taq酶催化合成新的DNA鏈；dNTP作為合成原料；Mg2+激活Taq酶活性。4.簡(jiǎn)述瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的目的及原理目的是判斷PCR產(chǎn)物的大小和有無(wú)。原理是DNA帶負(fù)電，在電場(chǎng)作用下向正極移動(dòng)，不同大小的DNA片段在電場(chǎng)中遷移速度不同，從而在凝膠上形成不同的條帶。五、討論題（每題5分，共20分）1.談?wù)凱CR技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用及意義在醫(yī)學(xué)診斷中用于檢測(cè)病原體、遺傳性疾病基因等。應(yīng)用如檢測(cè)新冠病毒核酸。意義在于能快速、靈敏、準(zhǔn)確判斷疾病，有助于早期診斷和治療，提高治愈率和防控疾病傳播。2.當(dāng)PCR擴(kuò)增結(jié)果出現(xiàn)非特異性條帶時(shí)，可能的原因及解決策略原因可能是引物特異性不好、退火溫度過(guò)低等。解決策略包括重新設(shè)計(jì)引物，提高引物特異性；適當(dāng)提高退火溫度，減少非特異性結(jié)合；也可優(yōu)化PCR反應(yīng)條件如調(diào)整各成分濃度等。3.對(duì)比傳統(tǒng)PCR與熒光定量PCR的優(yōu)缺點(diǎn)傳統(tǒng)PCR優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、成本低，可擴(kuò)增出大量產(chǎn)物用于多種后續(xù)分析；缺點(diǎn)是無(wú)法精確定量起始模板量。熒光定量PCR優(yōu)點(diǎn)是能對(duì)模板進(jìn)行定量分析，靈敏性高；缺點(diǎn)是技術(shù)要求高，儀器和試劑成本高。4.如何確保PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性要確保準(zhǔn)確性和可靠性，需優(yōu)化反應(yīng)體系，包括合適的模板、引物、酶濃度；準(zhǔn)確設(shè)置溫度和循環(huán)次數(shù)；嚴(yán)格規(guī)范操作，防止污染；同時(shí)設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷分析。答案一、單項(xiàng)選擇題1.B2.A3.A4.B5.C6.C