2025年版中國(guó)藥典《生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制》變化及解讀（一）前言2025年版《中國(guó)藥典》將于10月1日起正式實(shí)施，在生物制品質(zhì)量控制及病毒安全性評(píng)價(jià)方面做出了關(guān)鍵修訂，對(duì)推動(dòng)生物醫(yī)藥行業(yè)發(fā)展十分重要。在保持與國(guó)際接軌的同時(shí)，基于WHO、ICH等國(guó)際相關(guān)指導(dǎo)原則的變化趨勢(shì)，結(jié)合我國(guó)生物制品發(fā)展的需求，“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”部分被拆分為兩部分：“生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制（通則0234）”和“生物制品檢定用動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)量控制（通則0235）”。通則0234首次新增昆蟲細(xì)胞的適用范圍，加入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估策略，優(yōu)化細(xì)胞庫檢定項(xiàng)目，并在傳統(tǒng)檢測(cè)方法基礎(chǔ)上新增病毒核酸擴(kuò)增方法或NGS（下一代測(cè)序或高通量測(cè)序）法作為補(bǔ)充或替代的內(nèi)容，提升檢測(cè)的科學(xué)性、合理性和安全性。通則0235在2020年版版藥典內(nèi)容基礎(chǔ)上，新增了針對(duì)特定基因修飾細(xì)胞的具體檢測(cè)要求，涵蓋構(gòu)建過程、特征鑒別、使用代次內(nèi)穩(wěn)定性等方面，滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要。為更好的遵循監(jiān)管要求進(jìn)行藥品的研制、生產(chǎn)和質(zhì)量管理，義翹神州將與大家一起對(duì)2025年版《中國(guó)藥典》“通則0234”和“通則0235”的變化進(jìn)行詳細(xì)解讀。今天我們先解讀“細(xì)胞檢定”項(xiàng)目要求的變化。注：以下內(nèi)容中，綠色字體表示更改內(nèi)容，紅色字體為新增內(nèi)容。一、細(xì)胞檢定項(xiàng)目要求的總體變化與解讀1細(xì)胞檢定2025年版藥典：細(xì)胞檢定主要包括以下幾個(gè)方面：細(xì)胞鑒別、外源因子和內(nèi)源因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。必要時(shí)還須進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)特性、細(xì)胞染色體檢查、細(xì)胞均一性及穩(wěn)定性檢查。這些檢測(cè)內(nèi)容對(duì)于MCB細(xì)胞和WCB細(xì)胞、生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞均適用。修改說明：增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞可代替生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）2細(xì)胞檢定項(xiàng)目要求2025年版藥典：應(yīng)對(duì)細(xì)胞來源、培養(yǎng)及建庫過程進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并制定檢定策略。通常應(yīng)至少對(duì)MCB細(xì)胞及EOPC細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞進(jìn)行一次全面檢定，WCB細(xì)胞進(jìn)行部分檢定。如對(duì)MCB細(xì)胞不能進(jìn)行全面檢定，可對(duì)首個(gè)WCB細(xì)胞進(jìn)行全面檢定，后續(xù)建立的WCB細(xì)胞可通過評(píng)估后進(jìn)行部分檢定。當(dāng)生產(chǎn)工藝發(fā)生變更時(shí)，需經(jīng)評(píng)估，必要時(shí)應(yīng)重新對(duì)EOPC細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞檢定的基本要求見表1。修改說明：增加需根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估制定檢定策略；增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞可替代EOPC進(jìn)行全檢；增加首個(gè)WCB全檢可替代MCB增加生產(chǎn)工藝變更時(shí)，可經(jīng)評(píng)估是否重新檢測(cè)。解讀：·檢定策略制定中引入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的理念·明確了主庫、工作庫的檢定策略·某些細(xì)胞治療產(chǎn)品（干細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞等）MCB數(shù)量是有限的，進(jìn)行WCB全檢對(duì)樣品量具有挑戰(zhàn)性，可首個(gè)WCB全檢替代MCB·不是所有的工藝變更都要復(fù)檢EOPC，需要經(jīng)過評(píng)估后確定是否需要復(fù)檢表1：細(xì)胞檢定的基本要求注：“+”為必檢項(xiàng)目，“-”為非強(qiáng)制檢定項(xiàng)目，（+）表示需要根據(jù)細(xì)胞特性、傳代歷史、培養(yǎng)過程等情況評(píng)估后進(jìn)行的檢定項(xiàng)目。a.EOPC，是指達(dá)到或超過生產(chǎn)末期時(shí)收獲的細(xì)胞，盡可能取按生產(chǎn)規(guī)模制備的生產(chǎn)末期細(xì)胞。b.對(duì)分枝桿菌易感的細(xì)胞進(jìn)行該項(xiàng)檢查。c.根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果確定是否進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，如在建庫或細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在外源因子引入的風(fēng)險(xiǎn)，可進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或用經(jīng)驗(yàn)證的NGS法替代。d.從MCB或WCB復(fù)蘇細(xì)胞，擴(kuò)增至或超過生產(chǎn)用細(xì)胞齡限制代次作為待檢樣本。修改說明：增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞（LIVCA）可替代EOPC更改EOPC/LIVCA細(xì)胞鑒別為必檢項(xiàng)

新增螺原體檢查

刪除細(xì)胞形態(tài)觀察及血吸附試驗(yàn)更改MCB及EOPC/LIVCA動(dòng)物和雞胚體內(nèi)接種法為可選項(xiàng)，且可用經(jīng)驗(yàn)證的NGS方法替代

刪除染色體檢查，染色體檢查作為新建二倍體細(xì)胞的檢測(cè)項(xiàng)目，不放在細(xì)胞基質(zhì)總的檢定要求更改EOPC/LIVCA成瘤性檢查為可選項(xiàng)

增加成瘤性/致瘤性檢查待檢樣本要求9.增加穩(wěn)定性檢查，為可選項(xiàng)（原為重組細(xì)胞的特殊要求，現(xiàn)調(diào)整至此處）二、細(xì)胞檢定項(xiàng)目及方法的變化與解讀1細(xì)胞鑒別2025年版藥典：細(xì)胞庫（MCB和WCB）和生產(chǎn)終末細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，以確認(rèn)所用細(xì)胞正確，且無其他細(xì)胞的交叉污染。重組細(xì)胞系的專屬特性的鑒別，還應(yīng)通過檢測(cè)目的蛋白基因或目的蛋白進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。細(xì)胞鑒別試驗(yàn)方法有多種，包括細(xì)胞形態(tài)、生物化學(xué)法（如同工酶試驗(yàn)）、免疫學(xué)檢測(cè)（如組織相容性抗原、種特異性免疫血清）、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)（如染色體核型、標(biāo)記染色體檢測(cè)）、遺傳標(biāo)志檢測(cè)［如DNA指紋圖譜，包括短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLPPCR）和內(nèi)含子多態(tài)性（EPIC-PCR）法等］以及其他方法（如雜交法、PCR法、報(bào)告基因法等）。應(yīng)至少選擇上述一種或幾種方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行種屬和細(xì)胞株間及專屬特性的鑒別。種屬鑒別可依法檢查（通則3430）。修改說明：刪除“新建細(xì)胞系/株的鑒別要求”更改鑒別試驗(yàn)結(jié)果“確認(rèn)為本細(xì)胞”為“確認(rèn)所用細(xì)胞正確”更改重組細(xì)胞系的專屬特性鑒別要求的位置增加種屬鑒別依通則3430檢查解讀：·

種屬鑒別法（通則3430），內(nèi)容均為分子類方法，并提到傳統(tǒng)的生物化學(xué)法，如同工酶法，準(zhǔn)確性差，靈敏度低。2細(xì)菌、真菌檢查2025年版藥典：分別取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管樣品，依法檢查（通則1101），應(yīng)符合規(guī)定。對(duì)于MCB及WCB培養(yǎng)物，至少取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液10ml，盡可能采用薄膜過濾法檢測(cè)。對(duì)于凍存細(xì)胞，至少取凍存細(xì)胞總支數(shù)的1%或至少2支凍存細(xì)胞管（取量大者），可采用直接接種法檢測(cè)。通則1101?

制備好的培養(yǎng)基若不及時(shí)使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在2~25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。?

培養(yǎng)基無菌性檢查每批隨機(jī)取部分培養(yǎng)基。

?

方法適用性實(shí)驗(yàn)對(duì)大腸埃希菌敏感的抗生素類產(chǎn)品宜選用大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。?

培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。?

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的要求，綜合評(píng)估確定日常檢驗(yàn)過程中陽性對(duì)照試驗(yàn)的必要性。修改說明：更改“細(xì)菌、真菌無菌檢查”為“細(xì)菌、真菌檢查”更改“取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液或凍存細(xì)胞管樣品”為“分別取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管樣品”培養(yǎng)基不需要避光保存，無菌性檢查對(duì)檢查數(shù)量不做規(guī)定適用性試驗(yàn)將大腸埃希菌替換為銅綠假單胞菌，但對(duì)大腸埃希菌敏感的抗生素類樣品還需用大腸埃希菌無菌檢查硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)置于一個(gè)溫度即可增加了質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的要求，評(píng)估日常檢驗(yàn)中陽性對(duì)照試驗(yàn)的必要性解讀：·

需要做細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管兩種樣品·

與國(guó)際方法接軌，硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基減少為一個(gè)培養(yǎng)溫度，陽性對(duì)照無強(qiáng)制要求添加義翹神州小助手微信（sinobio2023），回復(fù)關(guān)鍵詞：“生物安全檢測(cè)”，即可獲取“細(xì)胞檢定項(xiàng)目的變化與解讀”PDF版資料>>>義翹神州生物安全檢測(cè)平臺(tái)義翹神州在北京和蘇州設(shè)有雙檢測(cè)中心（4200m2），并建立了生物安和CNAS認(rèn)證，嚴(yán)格按照GMP、GLP和CANS規(guī)范進(jìn)行設(shè)計(jì)與管理。義翹神州的檢測(cè)團(tuán)隊(duì)具備扎實(shí)的生物醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等相關(guān)專業(yè)背景，具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)的技術(shù)能力，深刻了解并能夠隨時(shí)跟蹤中外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）最新法規(guī)及要求，可全程提供技術(shù)指導(dǎo)，并在項(xiàng)目開展之前提供相關(guān)咨詢。義翹神州能夠提供最佳的病毒清除驗(yàn)證和細(xì)胞庫檢測(cè)方案，為企業(yè)藥品申報(bào)保駕護(hù)航，助力客戶順利完成IND和BLA的國(guó)內(nèi)外申報(bào)工作。截止目前，已成功完成5000+樣品的細(xì)胞庫檢測(cè)及5000多次病毒清除驗(yàn)證研究，涉及的產(chǎn)品類型有抗體、蛋白、疫苗等。協(xié)助客戶完成近300+