高效液相色譜儀第五節(jié)第十五章高效液相色普法第五節(jié)高效液相色譜儀組成輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)高效液相色譜儀第五節(jié)高效液相色譜儀進(jìn)樣口檢測器色譜圖色譜柱溶劑高壓泵混合器高效固定相在線檢測高靈敏檢測器高效液相色譜儀示意圖1.輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）輸液泵應(yīng)具備的性能：流量精度高且穩(wěn)定。流量范圍寬且可調(diào)。能在高壓下連續(xù)工作。液缸容積小。密封性能好，耐腐蝕。第五節(jié)高效液相色譜儀1.輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）高壓輸液泵恒流泵：在輸送流動相的過程中流量恒定，常用柱塞往復(fù)泵。雙泵：為了克服流量的脈動，常用串聯(lián)式。第五節(jié)高效液相色譜儀1.輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）第五節(jié)高效液相色譜儀柱塞往復(fù)泵結(jié)構(gòu)示意圖1.轉(zhuǎn)動凸輪；2.柱塞；3.密封墊；4.液缸；5.入口單向閥；6.出口單向閥；7.流動相入口；8.流動相出口1.輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）第五節(jié)高效液相色譜儀串聯(lián)式柱塞往復(fù)泵示意圖單向閥泵1阻尼器泵21.輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）第五節(jié)高效液相色譜儀洗脫方式等強度洗脫：在同一個分析周期內(nèi)流動相的組成保持恒定。適合于組分?jǐn)?shù)目少、性質(zhì)差別小的試樣。梯度洗脫：在一個分析周期內(nèi)，程序控制改變流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度、pH等。分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差別大的復(fù)雜試樣。2.進(jìn)樣系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀進(jìn)樣器進(jìn)樣閥（六通閥），常用帶有定量管的六通閥。自動進(jìn)樣裝置。六通閥進(jìn)樣示意圖來自泵來自泵充樣位置（load)進(jìn)樣位置(inject)3.分離系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀色譜柱（column）由柱管和固定相組成?？芍貜?fù)使用。實驗結(jié)束，要用經(jīng)過濾和脫氣的適當(dāng)溶劑沖洗色譜系統(tǒng)。4.檢測系統(tǒng)對檢測器（detector）的要求：靈敏度（sensitivity）高（檢測限低）。噪聲（noise）低。線性范圍（linearrange）寬。重復(fù)性（repeatability）好。適用范圍廣（通用型、專屬型）。第五節(jié)高效液相色譜儀4.檢測系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀（1）紫外檢測器(ultravioletdetector)檢測原理：朗伯-比爾定律，即A=KcL。特點：紫外檢測器的靈敏度、精密度及線性范圍好，不易受溫度和流速的影響，可用于梯度洗脫。

局限：只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截止波長應(yīng)小于檢測波長。為專屬型、濃度型檢測器。4.檢測系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀紫外檢測器的分類：固定波長檢測器：254nm。可變波長檢測器：200~400（800）nm。光電二極管陣列檢測器(photodiodearraydetector，PDAD)：一系列光電二極管，可以進(jìn)行波長快速掃描，同時獲得樣品的色譜圖和每個色譜組分的光譜圖。

吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量，

判斷峰純度。4.檢測系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀（2）熒光檢測器(fluorescencedetector，F(xiàn)D)特點：選擇性好，專屬型檢測器，靈敏度比紫外檢測器高（檢測限為10-10g/ml）。（3）示差折光檢測器利用樣品池和參比池之間折光率的差別來對組分進(jìn)行檢測，測得的折光率差值與樣品組分的濃度成正比。每種物質(zhì)的折射率不同，原則上講都可以用示差折光檢測器來檢測。其主要缺點是折光率受溫度影響較大，且檢測靈敏度較低，不能用于梯度洗脫。

4.檢測系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀（4）蒸發(fā)光散射檢測器：樣品組分在蒸發(fā)室內(nèi)形成氣溶膠，而后進(jìn)入檢測室。用強光或激光照射氣溶膠而產(chǎn)生散射，測定散射光強而獲得組分的濃度信號。

（5）安培檢測器：利用組分在氧化還原過程中產(chǎn)生的電流或電壓變化來對樣品進(jìn)行檢測。只適于測定具有氧化還原活性的物質(zhì)，測定的靈敏度較高，檢測限可達(dá)10-9g/ml。5.數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)第五節(jié)高效液相色譜儀微機采集和分析色譜數(shù)據(jù)：給出峰寬、峰高、峰面積、對稱因子、分離度等色譜參數(shù)。復(fù)雜的試樣需要“色譜專家系統(tǒng)”。6.高效液相色譜儀的主要性能指標(biāo)第五節(jié)高效液相色譜儀流量精度噪聲漂移檢測限定性與定量重復(fù)性

第五節(jié)高效液相色譜儀課堂活動試說出高效液相色譜儀的基本組成及工作流程。

第五節(jié)高效液相色譜儀高效液相色譜儀主要包括輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)。高效液