TS、BRCA1表達(dá)與Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌的關(guān)聯(lián)及臨床價值探究一、引言1.1研究背景肺癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類生命健康的重大疾病，在癌癥相關(guān)的發(fā)病率和死亡率統(tǒng)計中始終占據(jù)高位。世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2022年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)表明，肺癌新增病例達(dá)到248萬例，占全球癌癥新增病例總數(shù)的12.4%，再度成為全球第一大癌癥，同時也是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的首要原因，當(dāng)年造成181.7萬人死亡，占所有癌癥死亡病例的18.7%。在中國，肺癌同樣是發(fā)病率和死亡率均居首位的惡性腫瘤，2022年新增肺癌患者達(dá)106.1萬例，每10萬人中就有75.1人罹患肺癌，每10萬人中51.9人死于肺癌。肺癌按病理類型主要分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌（NSCLC），其中非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總數(shù)的80%，包含鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌等多種病理亞型。非小細(xì)胞肺癌的分期對于治療策略的選擇和預(yù)后評估至關(guān)重要。Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌處于疾病的進(jìn)展階段，相較于早期肺癌，其治療更為復(fù)雜且預(yù)后較差。Ⅱ期患者癌細(xì)胞已侵犯至肺門淋巴結(jié)或附近組織，Ⅲ期則進(jìn)一步擴散至縱隔淋巴結(jié)或其他臨近結(jié)構(gòu)。這兩個分期的患者，手術(shù)切除往往面臨更大挑戰(zhàn)，部分患者甚至無法進(jìn)行手術(shù)，需要依賴放化療、靶向治療等綜合手段。然而，目前針對Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌的治療效果仍不盡人意，患者的5年生存率通常在15%-40%之間波動。如Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者的5年生存率差異很大，通常在15%-30%之間，其中能夠完全切除的患者，在術(shù)后接受基于順鉑的雙藥輔助化療，5年生存率可提高5%，但仍難以滿足臨床需求。胸苷酸合成酶（TS）和人類乳腺癌易感基因1（BRCA1）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療反應(yīng)中扮演著重要角色。TS是DNA合成過程中的關(guān)鍵酶，參與胸苷酸的合成，其表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的增殖活性密切相關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌中，TS的高表達(dá)可能促進(jìn)癌細(xì)胞的快速增殖，影響腫瘤的生長和擴散，并且與化療藥物的耐藥性相關(guān)。BRCA1則主要參與DNA損傷修復(fù)過程，維持基因組的穩(wěn)定性。當(dāng)BRCA1功能異?；虮磉_(dá)改變時，細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力下降，導(dǎo)致基因突變的積累，從而增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。在非小細(xì)胞肺癌中，研究BRCA1的表達(dá)有助于了解腫瘤細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性和對放療、化療等治療手段的敏感性。因此，深入研究TS、BRCA1在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，對于揭示其發(fā)病機制、評估預(yù)后以及指導(dǎo)臨床治療具有重要的理論和實踐意義。1.2研究目的本研究旨在深入探究TS、BRCA1在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平，分析其與患者臨床病理特征（包括性別、年齡、腫瘤病理類型、分化程度、臨床分期以及吸煙指數(shù)等）之間的內(nèi)在聯(lián)系，明確TS、BRCA1表達(dá)對患者無病生存期（DFS）和總生存期（OS）的影響，進(jìn)而評估TS、BRCA1作為預(yù)測Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者化療療效指標(biāo)的可行性，為臨床治療方案的優(yōu)化及患者預(yù)后的評估提供科學(xué)、可靠的理論依據(jù)。二、非小細(xì)胞肺癌概述2.1定義與分類肺癌是一種起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。根據(jù)組織病理學(xué)特征，肺癌主要分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）兩大類型。其中，非小細(xì)胞肺癌最為常見，約占肺癌總數(shù)的80%-85%，其在生物學(xué)行為、治療反應(yīng)及預(yù)后等方面與小細(xì)胞肺癌存在顯著差異。非小細(xì)胞肺癌又可進(jìn)一步細(xì)分為多種亞型，主要包括鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）、腺癌和大細(xì)胞癌。鱗癌是一種顯示角化和（或）細(xì)胞間橋的惡性上皮腫瘤，其癌細(xì)胞多為多邊形，常呈巢狀排列。該類型多見于50-70歲的男性，90%以上患者有長期吸煙史。鱗癌常發(fā)生在肺部中央?yún)^(qū)域，傾向于向管腔內(nèi)生長，早期即可引起支氣管狹窄，導(dǎo)致肺不張。在組織學(xué)上，鱗癌可分為乳頭狀型、透明細(xì)胞型、小細(xì)胞型和基底細(xì)胞樣型等多種亞型。例如，乳頭狀型鱗癌癌細(xì)胞呈乳頭狀生長，乳頭中心為纖維血管束；透明細(xì)胞型鱗癌癌細(xì)胞胞質(zhì)透明，富含糖原。腺癌是起源于支氣管黏液腺或肺泡上皮的惡性腫瘤，多數(shù)起源于肺部周圍。近年來，腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，在非小細(xì)胞肺癌中所占比例逐漸增加，且在女性及不吸煙患者中更為常見。腺癌傾向于管外生長，也可沿肺泡壁蔓延，常在肺邊緣形成直徑2-4厘米的腫塊。腺癌的病理亞型包括腺泡狀腺癌、乳頭狀腺癌、細(xì)支氣管肺泡癌和實體癌伴黏液形成等。腺泡狀腺癌以腺泡結(jié)構(gòu)為主，癌細(xì)胞呈立方形或柱狀；乳頭狀腺癌癌細(xì)胞呈乳頭狀排列，乳頭表面為單層或多層癌細(xì)胞。大細(xì)胞癌是一種未分化或低分化的非小細(xì)胞肺癌，其癌細(xì)胞體積大，胞質(zhì)豐富，核仁明顯，核分裂象多見。大細(xì)胞癌可發(fā)生在肺門附近或肺邊緣的支氣管，侵襲性強，預(yù)后較差。大細(xì)胞癌又可分為巨細(xì)胞癌和透明細(xì)胞癌等亞型，巨細(xì)胞癌癌細(xì)胞體積巨大，形態(tài)多樣，常含有多個核；透明細(xì)胞癌癌細(xì)胞胞質(zhì)透明，與腎透明細(xì)胞癌相似。2.2流行病學(xué)特征非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)均處于較高水平，嚴(yán)重威脅人類健康。世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2022年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，肺癌新增病例248萬例，占全球癌癥新增病例的12.4%，死亡病例達(dá)181.7萬例，占癌癥死亡總數(shù)的18.7%，而其中約80%為非小細(xì)胞肺癌。這意味著全球每年有近200萬非小細(xì)胞肺癌新發(fā)病例，約145萬患者因非小細(xì)胞肺癌死亡。在我國，肺癌同樣是發(fā)病率和死亡率雙居首位的惡性腫瘤。2022年我國新增肺癌患者106.1萬例，每10萬人中有75.1人罹患肺癌，每10萬人中51.9人死于肺癌，非小細(xì)胞肺癌在肺癌病例中占據(jù)主導(dǎo)地位。非小細(xì)胞肺癌在性別分布上存在明顯差異，通常男性發(fā)病率高于女性。2022年全球癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，男性肺癌發(fā)病率為每10萬人111.4例，女性為每10萬人53.7例。這種性別差異可能與多種因素有關(guān)，吸煙是重要因素之一。男性吸煙率普遍高于女性，長期大量吸煙使得男性暴露于煙草中的致癌物質(zhì)如多鏈芳香烴類化合物、亞硝胺等的風(fēng)險更高，這些物質(zhì)可導(dǎo)致支氣管上皮細(xì)胞DNA損傷，引發(fā)基因突變，進(jìn)而增加非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病風(fēng)險。男性在職業(yè)環(huán)境中接觸致癌物質(zhì)的機會也相對較多，如石棉、砷、鉻等，這些職業(yè)暴露因素進(jìn)一步提高了男性患非小細(xì)胞肺癌的幾率。從年齡分布來看，非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率隨年齡增長而上升，通常40歲以后發(fā)病率明顯增加，75歲左右達(dá)到高峰。相關(guān)研究表明，40-50歲年齡段非小細(xì)胞肺癌發(fā)病率約為每10萬人30-50例，50-60歲年齡段上升至每10萬人50-80例，60-70歲年齡段則達(dá)到每10萬人80-120例。年齡增長導(dǎo)致機體免疫力下降，細(xì)胞修復(fù)能力減弱，使得細(xì)胞更容易發(fā)生基因突變，從而增加非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病風(fēng)險。老年人長期暴露于各種致癌因素的時間更長，累積的致癌損傷更多，也使得非小細(xì)胞肺癌在老年人群中更為常見。非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率在不同地區(qū)也存在顯著差異。在全球范圍內(nèi)，歐洲、東亞、北美等地區(qū)是肺癌的高發(fā)區(qū)，而撒哈拉以南的非洲地區(qū)發(fā)病相對較低。在我國，肺癌死亡率在大城市、中等城市以及東北和東部沿海地區(qū)較高，西北和西南地區(qū)相對較低。大城市和沿海地區(qū)工業(yè)發(fā)達(dá)，環(huán)境污染相對嚴(yán)重，空氣中的有害污染物如顆粒物、多環(huán)芳烴、二氧化硫等含量較高，這些污染物可通過呼吸道進(jìn)入人體，長期刺激呼吸道黏膜，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變，增加非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病風(fēng)險。大城市居民生活節(jié)奏快，精神壓力大，不良的生活方式如熬夜、過度飲酒等也可能影響免疫系統(tǒng)功能，進(jìn)而增加患癌風(fēng)險。2.3治療現(xiàn)狀非小細(xì)胞肺癌的治療手段豐富多樣，主要包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療以及免疫治療等。不同治療方法針對不同分期和病理類型的患者，發(fā)揮著各自獨特的作用。手術(shù)治療在早期非小細(xì)胞肺癌中具有重要地位，是實現(xiàn)根治的主要手段。對于Ⅰ期和部分Ⅱ期患者，手術(shù)切除腫瘤可顯著提高生存率。例如，Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌患者在接受根治性手術(shù)切除后，5年生存率可達(dá)70%以上。手術(shù)方式包括肺葉切除術(shù)、楔形切除術(shù)、袖狀肺葉切除術(shù)等，醫(yī)生會根據(jù)患者的具體情況，如腫瘤的位置、大小、患者的心肺功能等，選擇最適宜的手術(shù)方式。肺葉切除術(shù)是最為常見的手術(shù)方式，它通過切除包含腫瘤的整個肺葉，能夠較為徹底地清除腫瘤組織，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險；楔形切除術(shù)則適用于腫瘤較小、位于肺周邊的患者，該手術(shù)方式切除的肺組織較少，對患者肺功能的影響相對較小，有利于患者術(shù)后恢復(fù)。化療是應(yīng)用化學(xué)藥物殺死癌細(xì)胞的治療方法，在非小細(xì)胞肺癌的治療中應(yīng)用廣泛。常用的化療藥物有順鉑、卡鉑、紫杉醇、吉西他濱等。對于無法進(jìn)行手術(shù)的Ⅱ、Ⅲ期患者，化療是重要的治療手段之一，可單獨使用或與放療聯(lián)合，以縮小腫瘤體積，控制腫瘤進(jìn)展，延長患者生存期。在晚期非小細(xì)胞肺癌中，化療也可用于緩解癥狀、提高生活質(zhì)量。然而，化療藥物在殺傷癌細(xì)胞的同時，也會對正常細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致一系列副作用，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等，這些副作用嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和治療依從性。長期使用化療藥物還可能導(dǎo)致癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，使得化療效果逐漸降低，這也是化療面臨的一大挑戰(zhàn)。放療利用高能射線殺死癌細(xì)胞，可用于無法手術(shù)的局部晚期肺癌患者，或作為術(shù)后輔助治療手段。對于Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者，放療能夠精準(zhǔn)地針對腫瘤部位進(jìn)行照射，減少腫瘤負(fù)荷，緩解癥狀。在早期非小細(xì)胞肺癌中，對于那些因身體原因無法接受手術(shù)的患者，放療可作為替代治療方案，其5年生存率超過50%。放療也存在一定局限性，它可能對周圍的健康組織造成損害，引發(fā)諸如放射性肺炎、食管炎等并發(fā)癥。放療的效果還會受到腫瘤位置、大小等多種因素的影響，在處理某些特殊位置的腫瘤時，效果可能不盡如人意。靶向治療針對腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點，通過抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增殖和轉(zhuǎn)移來發(fā)揮作用。常見的靶點包括表皮生長因子受體（EGFR）、間變性淋巴瘤激酶（ALK）等。對于攜帶特定基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者，如EGFR突變或ALK融合突變患者，靶向治療顯示出顯著的療效，能夠顯著延長患者的無進(jìn)展生存期（PFS）和總生存期（OS）。例如，EGFR突變陽性的患者使用酪氨酸激酶抑制劑（TKIs），如吉非替尼、厄洛替尼等，可獲得較好的預(yù)后。靶向治療并非對所有患者都有效，其療效高度依賴于腫瘤的基因突變狀態(tài)，對于沒有明確靶點的患者，治療效果較差。腫瘤細(xì)胞還可能對靶向藥物產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致治療失敗。免疫治療通過激活患者自身的免疫系統(tǒng)來識別和攻擊癌細(xì)胞，為晚期非小細(xì)胞肺癌患者提供了新的治療選擇。免疫檢查點抑制劑，如程序性死亡受體1（PD-1）抑制劑納武利尤單抗、帕博利珠單抗，以及程序性死亡配體1（PD-L1）抑制劑阿替利珠單抗等，在部分晚期非小細(xì)胞肺癌患者中展現(xiàn)出良好的療效和較長的生存期。PD-1/PD-L1抑制劑在晚期非小細(xì)胞肺癌患者中的五年生存率可達(dá)約20%。免疫治療也存在免疫相關(guān)不良事件（irAEs）的風(fēng)險，如免疫性肺炎、免疫性肝炎等，不同個體間的療效差異也較大。對于Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者，由于腫瘤已侵犯周圍組織或淋巴結(jié)，病情較為復(fù)雜，單一治療手段往往難以取得理想效果，通常需要綜合運用多種治療方法。Ⅱ期患者可能先進(jìn)行手術(shù)切除，術(shù)后再輔以化療或放療，以降低復(fù)發(fā)風(fēng)險；Ⅲ期患者可能采用同步放化療，或在放化療后進(jìn)行手術(shù)治療，對于無法手術(shù)的患者，則以放化療聯(lián)合免疫治療等綜合治療為主。盡管采用了綜合治療策略，但Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者的總體治療效果仍不盡如人意，5年生存率通常在15%-40%之間。Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者的5年生存率差異較大，一般在15%-30%之間，即使能夠完全切除腫瘤并接受輔助化療，5年生存率也僅能提高5%左右。這表明，目前針對Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌的治療仍面臨諸多挑戰(zhàn)，亟需進(jìn)一步探索新的治療方法和策略，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。三、TS與BRCA1相關(guān)理論基礎(chǔ)3.1TS的生物學(xué)特性與功能胸苷酸合成酶（ThymidylateSynthase，TS）是一種在細(xì)胞代謝過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的酶，其生物學(xué)特性和功能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。從結(jié)構(gòu)上看，TS基因位于人類染色體18p11.32，其編碼的蛋白質(zhì)由335個氨基酸組成，分子量約為36kDa。TS蛋白包含多個功能區(qū)域，其中催化結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)其關(guān)鍵的酶促反應(yīng)，該結(jié)構(gòu)域具有高度保守性，在不同物種間序列相似性較高，確保了其催化功能的穩(wěn)定性。TS蛋白還含有一些調(diào)節(jié)區(qū)域，可與其他蛋白質(zhì)或小分子相互作用，調(diào)節(jié)自身的活性和表達(dá)水平。TS的主要功能是催化尿嘧啶脫氧核苷酸（dUMP）甲基化生成胸苷酸（dTMP），這一過程需要5,10-亞甲基四氫葉酸作為甲基供體。具體反應(yīng)機制為：TS首先與dUMP和5,10-亞甲基四氫葉酸結(jié)合形成三元復(fù)合物，在酶的催化作用下，5,10-亞甲基四氫葉酸的甲基轉(zhuǎn)移到dUMP上，生成dTMP和二氫葉酸。dTMP是DNA合成所必需的胸腺嘧啶核苷酸的唯一來源，因此TS在DNA合成過程中扮演著不可或缺的角色。在細(xì)胞增殖過程中，需要不斷合成新的DNA，此時TS的活性和表達(dá)水平會顯著升高，以滿足細(xì)胞對dTMP的大量需求。在腫瘤細(xì)胞中，由于其快速增殖的特性，TS往往呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，為腫瘤細(xì)胞的無限增殖提供了充足的dTMP，促進(jìn)了腫瘤的生長和發(fā)展。除了在DNA合成中的關(guān)鍵作用，TS還參與DNA修復(fù)過程。當(dāng)DNA受到損傷時，細(xì)胞需要及時修復(fù)受損的DNA以維持基因組的穩(wěn)定性。TS能夠通過提供dTMP參與DNA損傷修復(fù)過程中的核苷酸合成，確保修復(fù)過程的順利進(jìn)行。在某些情況下，TS還可以與其他DNA修復(fù)蛋白相互作用，協(xié)同完成DNA修復(fù)工作。如果TS的功能異?；虮磉_(dá)水平改變，可能會導(dǎo)致DNA修復(fù)障礙，使細(xì)胞更容易積累基因突變，增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。在一些腫瘤細(xì)胞中，TS表達(dá)異常，使得DNA修復(fù)能力下降，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對放療、化療等治療手段的敏感性發(fā)生改變。TS還是以5-氟尿嘧啶（5-FU）為基礎(chǔ)化療的靶酶。5-FU進(jìn)入體內(nèi)后，經(jīng)過一系列代謝轉(zhuǎn)化為氟代脫氧尿嘧啶核苷酸（FdUMP），F(xiàn)dUMP能夠與TS緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的共價復(fù)合物，從而抑制TS的活性。TS活性被抑制后，dTMP合成受阻，DNA合成無法正常進(jìn)行，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。腫瘤細(xì)胞中TS的表達(dá)水平與對5-FU類化療藥物的敏感性密切相關(guān)。研究表明，TS高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞對5-FU的敏感性明顯低于TS低表達(dá)者，TS低表達(dá)容易對5-FU產(chǎn)生耐藥性。這是因為高表達(dá)的TS能夠合成更多的dTMP，在一定程度上抵消了5-FU對dTMP合成的抑制作用，使得腫瘤細(xì)胞對5-FU的耐受性增強。在臨床治療中，檢測腫瘤組織中TS的表達(dá)水平，對于指導(dǎo)5-FU類化療藥物的使用具有重要意義。3.2BRCA1的生物學(xué)特性與功能人類乳腺癌易感基因1（BreastCancerSusceptibilityGene1，BRCA1）在維持細(xì)胞基因組穩(wěn)定性和正常生理功能方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，其異常與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。BRCA1基因定位于人類染色體17q21，基因全長約100kb，包含24個外顯子。其中，第11外顯子尤為特殊，長度達(dá)3.4kb，占據(jù)整個編碼區(qū)的61%。這種獨特的基因結(jié)構(gòu)使得BRCA1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)調(diào)控更為復(fù)雜，任何外顯子的突變或缺失都可能對其功能產(chǎn)生顯著影響。BRCA1基因轉(zhuǎn)錄后可形成約7.16kb的mRNA，最終編碼產(chǎn)生由1863個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)分子量約為220kDa。BRCA1編碼的蛋白具有多個重要的功能結(jié)構(gòu)域，每個結(jié)構(gòu)域都在不同的生物學(xué)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在蛋白的N末端，存在富含半胱氨酸和組氨酸的鋅指結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)域能夠與多種蛋白質(zhì)相互作用，如BRCA1相關(guān)環(huán)狀蛋白（BARD1）。BRCA1與BARD1結(jié)合形成的環(huán)-環(huán)異二聚體具有E3泛素連接酶活性。這種活性在DNA損傷修復(fù)過程中至關(guān)重要，當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射等因素導(dǎo)致DNA損傷時，BRCA1-BARD1復(fù)合物能夠通過泛素化修飾相關(guān)蛋白，招募其他DNA修復(fù)因子到損傷位點，促進(jìn)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)。如果這一結(jié)構(gòu)域發(fā)生突變，可能導(dǎo)致BRCA1無法與BARD1正常結(jié)合，從而削弱DNA損傷修復(fù)能力，增加細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定性，使細(xì)胞更容易發(fā)生癌變。BRCA1蛋白還含有核定位信號（NLS），它負(fù)責(zé)引導(dǎo)BRCA1蛋白進(jìn)入細(xì)胞核。細(xì)胞核是DNA儲存和復(fù)制的場所，BRCA1進(jìn)入細(xì)胞核后，能夠與多種基因蛋白如c-myc、p53、pRB和RAD50/RAD51等相互作用。與c-myc、p53等蛋白的結(jié)合，可參與細(xì)胞周期的調(diào)控和細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)；與RAD50/RAD51等DNA損傷修復(fù)蛋白結(jié)合，有助于協(xié)同完成DNA損傷修復(fù)工作。例如，在細(xì)胞周期的S期，BRCA1與相關(guān)蛋白相互作用，確保DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性和完整性；當(dāng)DNA損傷發(fā)生時，BRCA1與RAD51結(jié)合，共同促進(jìn)同源重組修復(fù)過程，使受損的DNA得以正確修復(fù)。在C末端，BRCA1含有兩個BRCT基序（brcacarboxy1terminusmotifs）。這兩個基序在細(xì)胞周期監(jiān)控和DNA損傷修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。它們能夠識別磷酸化的絲氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸等氨基酸殘基，通過與磷酸化的蛋白質(zhì)相互作用，參與DNA損傷信號的傳導(dǎo)和修復(fù)過程的調(diào)控。當(dāng)DNA損傷發(fā)生時，細(xì)胞內(nèi)的信號通路被激活，相關(guān)蛋白發(fā)生磷酸化修飾，BRCA1的BRCT基序能夠識別這些磷酸化位點，招募其他修復(fù)蛋白到損傷部位，啟動DNA修復(fù)機制。研究表明，BRCT基序的突變會導(dǎo)致BRCA1對DNA損傷的響應(yīng)能力下降，影響細(xì)胞的正常修復(fù)功能，增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。除了上述結(jié)構(gòu)域，BRCA1蛋白還存在其他一些功能區(qū)域，如位于1214-1223氨基酸殘基之間的粒素區(qū)，以及C末端富含酸性氨基酸的轉(zhuǎn)錄活性區(qū)。粒素區(qū)的具體功能尚未完全明確，但有研究推測它可能參與蛋白質(zhì)之間的相互作用，對BRCA1的功能調(diào)節(jié)具有一定作用。轉(zhuǎn)錄活性區(qū)則提示BRCA1可能具有轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能，它可以與轉(zhuǎn)錄因子等相互作用，調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞的生長、分化和凋亡等過程。BRCA1主要參與DNA損傷修復(fù)過程，特別是同源重組修復(fù)（HR）。同源重組修復(fù)是一種高精度的DNA雙鏈斷裂修復(fù)方式，對于維持基因組的穩(wěn)定性至關(guān)重要。當(dāng)DNA雙鏈斷裂發(fā)生時，BRCA1首先被招募到損傷位點，通過其N末端的鋅指結(jié)構(gòu)與BARD1結(jié)合形成復(fù)合物，利用E3泛素連接酶活性對相關(guān)蛋白進(jìn)行泛素化修飾，為后續(xù)修復(fù)因子的招募創(chuàng)造條件。隨后，BRCA1與RAD51等修復(fù)蛋白相互作用，引導(dǎo)RAD51結(jié)合到DNA損傷部位，形成RAD51核蛋白絲。RAD51核蛋白絲能夠與未受損的同源DNA序列進(jìn)行配對和交換，以同源DNA為模板修復(fù)受損的DNA鏈，實現(xiàn)精確的修復(fù)。如果BRCA1功能缺失或發(fā)生突變，同源重組修復(fù)過程將受到阻礙，細(xì)胞只能依賴其他低精度的修復(fù)方式，如非同源末端連接（NHEJ）。非同源末端連接雖然能夠快速修復(fù)DNA雙鏈斷裂，但容易導(dǎo)致堿基的插入或缺失，從而引發(fā)基因突變，增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。BRCA1在細(xì)胞周期調(diào)控中也發(fā)揮著重要作用。它可以通過與多種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程。在細(xì)胞周期的G1/S期轉(zhuǎn)換點，BRCA1與p53、pRB等蛋白協(xié)同作用，監(jiān)測DNA的完整性。如果DNA存在損傷，BRCA1會參與激活細(xì)胞周期檢查點，阻止細(xì)胞進(jìn)入S期，為DNA修復(fù)爭取時間。具體來說，當(dāng)DNA損傷信號被感知后，BRCA1會促進(jìn)p53蛋白的穩(wěn)定和活化，p53進(jìn)而誘導(dǎo)p21等細(xì)胞周期抑制蛋白的表達(dá)，使細(xì)胞停滯在G1期。在S期，BRCA1參與DNA復(fù)制的調(diào)控，確保DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性和完整性。它可以與復(fù)制相關(guān)蛋白相互作用，防止DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)錯誤或異常。在G2/M期轉(zhuǎn)換點，BRCA1同樣參與監(jiān)測DNA的修復(fù)情況，只有當(dāng)DNA損傷得到完全修復(fù)時，細(xì)胞才能順利進(jìn)入有絲分裂期。如果BRCA1功能異常，細(xì)胞周期的調(diào)控將受到干擾，可能導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，增加腫瘤發(fā)生的可能性。BRCA1還參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程，影響一系列與細(xì)胞生長、分化和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。它可以與轉(zhuǎn)錄因子、染色質(zhì)重塑復(fù)合物等相互作用，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄起始、延伸和終止。BRCA1能夠與RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合，參與轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。BRCA1還可以通過對染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)控，影響基因的可及性和轉(zhuǎn)錄活性。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1能夠招募染色質(zhì)重塑復(fù)合物，改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，使某些基因更容易被轉(zhuǎn)錄因子識別和結(jié)合，從而促進(jìn)這些基因的表達(dá)。在細(xì)胞受到DNA損傷時，BRCA1可以通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，啟動細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)和修復(fù)機制。它可以誘導(dǎo)DNA損傷修復(fù)基因、細(xì)胞周期調(diào)控基因和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，以應(yīng)對DNA損傷帶來的挑戰(zhàn)。如果BRCA1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能異常，可能導(dǎo)致相關(guān)基因表達(dá)失調(diào)，影響細(xì)胞的正常生理功能，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。3.3TS、BRCA1與腫瘤的關(guān)系研究現(xiàn)狀TS在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中扮演著關(guān)鍵角色，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌領(lǐng)域，多項研究表明TS高表達(dá)與結(jié)直腸癌的不良預(yù)后緊密相連。有研究對200例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)組患者的5年生存率顯著低于TS低表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。TS高表達(dá)使得結(jié)直腸癌細(xì)胞能夠合成更多的dTMP，滿足其快速增殖對核苷酸的需求，從而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。在胃癌研究中，同樣發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強相關(guān)。研究人員通過對胃癌細(xì)胞系的實驗觀察到，上調(diào)TS的表達(dá)可增強胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力；而下調(diào)TS表達(dá)則會抑制胃癌細(xì)胞的這些惡性行為。這進(jìn)一步表明TS在胃癌的發(fā)展過程中起到了促進(jìn)作用。在肺癌中，TS的高表達(dá)也被證實與腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究分析了150例非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)的患者腫瘤細(xì)胞增殖活性更高，且更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。TS高表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性增加，使得治療難度加大。在卵巢癌、乳腺癌等其他腫瘤中，也均發(fā)現(xiàn)TS表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。在卵巢癌中，TS高表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞的化療耐藥性相關(guān)，影響患者的治療效果和預(yù)后；在乳腺癌中，TS表達(dá)水平與腫瘤的病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，高表達(dá)TS的乳腺癌患者預(yù)后較差。BRCA1作為重要的抑癌基因，其異常與多種腫瘤的發(fā)生風(fēng)險增加息息相關(guān)。在乳腺癌方面，大量研究證實了BRCA1基因突變或表達(dá)異常與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)。攜帶BRCA1基因突變的女性，患乳腺癌的風(fēng)險可高達(dá)50%-85%。BRCA1基因的突變會導(dǎo)致其編碼的蛋白質(zhì)功能異常，無法正常參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控等過程，使得細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定性增加，容易引發(fā)乳腺癌。在卵巢癌中，BRCA1基因突變同樣是重要的致病因素。攜帶BRCA1基因突變的女性，到70歲時發(fā)生卵巢癌的機率為40%-60%。研究表明，BRCA1功能缺失會使卵巢細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力下降，導(dǎo)致基因突變的積累，從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生。在胰腺癌、前列腺癌等其他腫瘤中，也有研究發(fā)現(xiàn)BRCA1的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在一定聯(lián)系。在胰腺癌中，BRCA1的表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致胰腺細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力降低，增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險；在前列腺癌中，BRCA1的異常表達(dá)與前列腺癌的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌的研究中，TS和BRCA1的表達(dá)情況也備受關(guān)注。有研究探討了TS表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者化療療效的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)的患者對含5-氟尿嘧啶化療方案的敏感性較低，化療有效率明顯低于TS低表達(dá)患者。這表明TS表達(dá)水平可作為預(yù)測非小細(xì)胞肺癌患者對5-氟尿嘧啶類化療藥物療效的指標(biāo)之一。關(guān)于BRCA1在非小細(xì)胞肺癌中的研究，有研究分析了BRCA1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示BRCA1低表達(dá)的患者無病生存期和總生存期均顯著短于BRCA1高表達(dá)患者。這提示BRCA1表達(dá)水平可能對非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后評估具有重要意義。四、研究設(shè)計與方法4.1研究對象選取本研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時間段，如2018年1月至2022年12月]期間收治的Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對象。該醫(yī)院為一所綜合性三甲醫(yī)院，具備先進(jìn)的醫(yī)療設(shè)備和專業(yè)的醫(yī)療團隊，在肺癌的診斷和治療方面具有豐富的經(jīng)驗，每年收治大量的肺癌患者，能夠為研究提供充足且具有代表性的病例資源。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌；根據(jù)國際肺癌研究協(xié)會（IASLC）第8版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，臨床分期為Ⅱ期或Ⅲ期；患者年齡在18-75歲之間，身體狀況能夠耐受手術(shù)或化療等相關(guān)治療；患者簽署了知情同意書，自愿參與本研究。年齡在18-75歲之間的患者，身體機能相對穩(wěn)定，對治療的耐受性和反應(yīng)性具有一定的可比性，能夠更好地反映TS、BRCA1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌之間的關(guān)系。簽署知情同意書則確保了研究的合法性和倫理性，尊重患者的自主選擇權(quán)。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙，無法耐受手術(shù)或化療；患有精神疾病，無法配合完成相關(guān)檢查和隨訪；患者在入組前接受過針對非小細(xì)胞肺癌的放療、化療、靶向治療或免疫治療等。合并其他惡性腫瘤可能會干擾對非小細(xì)胞肺癌相關(guān)指標(biāo)的分析；重要臟器功能障礙會影響患者對治療的耐受性和預(yù)后，也可能對TS、BRCA1的表達(dá)產(chǎn)生影響；精神疾病患者無法配合檢查和隨訪，會導(dǎo)致數(shù)據(jù)的缺失和不準(zhǔn)確；入組前接受過相關(guān)治療的患者，其腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為可能已經(jīng)發(fā)生改變，不利于研究TS、BRCA1在自然病程中的表達(dá)情況。通過嚴(yán)格按照上述納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，最終共納入符合條件的Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者[X]例，其中Ⅱ期患者[X]例，Ⅲ期患者[X]例。這些患者來自不同的地區(qū)，具有不同的生活習(xí)慣和遺傳背景，在性別、年齡、吸煙史等方面也存在一定的差異，確保了研究對象的多樣性和代表性，能夠更全面地反映TS、BRCA1在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系。4.2實驗方法4.2.1組織標(biāo)本獲取與處理在患者接受手術(shù)治療過程中，手術(shù)醫(yī)生從切除的腫瘤組織中選取具有代表性的部分作為標(biāo)本。對于Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者，標(biāo)本的選取尤為關(guān)鍵，需確保包含腫瘤細(xì)胞以及周圍的部分正常組織，以全面反映腫瘤的生物學(xué)特性。標(biāo)本采集后，立即放入事先準(zhǔn)備好的10%中性福爾馬林溶液中進(jìn)行固定，固定時間為12-24小時。固定的目的是防止組織細(xì)胞自溶和變形，保持其原有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，以便后續(xù)的病理分析。固定后的標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)的脫水、透明和石蠟包埋處理。脫水過程使用梯度乙醇溶液，依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%和100%的乙醇，每個濃度浸泡一定時間，使組織中的水分逐漸被乙醇取代。透明則使用二甲苯，使組織變得透明，便于石蠟的滲透。隨后，將組織包埋在融化的石蠟中，冷卻后形成石蠟塊，以便后續(xù)切片。為了高效地進(jìn)行免疫組化檢測，采用組織微陣列法（TMA）制作微陣列蠟塊。具體步驟如下：首先，對石蠟包埋的組織進(jìn)行切片，厚度為4μm，并進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，通過顯微鏡觀察，準(zhǔn)確標(biāo)記出腫瘤組織中的癌巢區(qū)域以及癌旁正常組織區(qū)域。標(biāo)記時，充分考慮腫瘤的異質(zhì)性，確保選取的區(qū)域能夠代表整個腫瘤的特征。接著，使用組織芯片點樣儀（BeecherInstruments,MTA1），根據(jù)標(biāo)記位置，用直徑為0.6mm的取芯針在供體蠟塊相應(yīng)部位取出組織芯。取芯過程中，嚴(yán)格控制取芯針的深度和力度，保證組織芯的完整性。將取出的組織芯按照預(yù)先設(shè)計的陣列方式，整齊地排列并放入空白蠟塊（受體蠟塊）的小孔中，每個標(biāo)本在標(biāo)記區(qū)域內(nèi)取2條組織芯，以提高檢測結(jié)果的可靠性。在組織樣本填入蠟孔時，詳細(xì)記錄每個樣本在二維陣列中的具體位置，并在蠟塊的一定位置上標(biāo)記出組織微陣列的方位，以便后續(xù)切片和分析。制作好的微陣列蠟塊在4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，防止蠟塊變形和組織芯脫落。4.2.2免疫組化檢測TS與BRCA1表達(dá)免疫組化實驗基于抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，從而確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原的位置和表達(dá)水平。在本研究中，使用免疫組化EnVision二步法檢測組織微陣列切片中TS與BRCA1的表達(dá)情況。實驗開始前，將微陣列蠟塊進(jìn)行切片，厚度為4μm，將切片貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，以增強切片與載玻片的粘附力，防止切片在后續(xù)操作中脫落。將載玻片放入60℃烤箱中烘烤2小時，使切片與載玻片充分貼合。隨后，進(jìn)行脫蠟和水化處理。依次將切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以去除切片中的石蠟；再將切片依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各浸泡5分鐘，使切片逐漸水化，恢復(fù)到適合抗原檢測的狀態(tài)。為了暴露被固定時隱藏的抗原表位，提高抗體的結(jié)合效率，進(jìn)行抗原修復(fù)。將切片放入0.01M檸檬酸緩沖液（pH6.0）中，使用微波爐進(jìn)行加熱修復(fù)。具體操作是先高火加熱4分鐘至沸騰，然后改為中火加熱6分鐘，共進(jìn)行4次，每次間隔時補足液體，防止切片干涸。加熱結(jié)束后，自然冷卻至室溫，使抗原表位充分暴露。為了消除細(xì)胞或組織中內(nèi)源性過氧化物酶的影響，降低背景噪音，將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育15分鐘，然后用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，每次5分鐘。用5%牛血清白蛋白（BSA）封閉液在室溫下孵育切片30分鐘，封閉組織切片上非特異性結(jié)合位點，防止抗體與這些位點非特異性結(jié)合，減少背景信號。選擇特異性高、親和力強的鼠抗人TS單克隆抗體和兔抗人BRCA1多克隆抗體作為一抗，按照1:200的比例用PBS稀釋。將稀釋后的一抗滴加在切片上，放入濕盒中，4℃孵育過夜。從冰箱中取出后，在37℃復(fù)溫45分鐘，使抗原抗體結(jié)合更穩(wěn)定。用PBS沖洗切片5次，每次5分鐘，充分洗去未結(jié)合的一抗。加入用PBS稀釋（1:500）的二抗（羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG），在37℃恒溫箱中孵育30分鐘。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-抗體-抗體復(fù)合物，增強信號的強度和特異性。孵育結(jié)束后，再次用PBS沖洗切片5次，每次5分鐘。采用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色反應(yīng)。將DAB顯色劑滴加在切片上，在顯微鏡下密切觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗切片，終止顯色反應(yīng)，顯色時間一般控制在3-10分鐘。用蘇木精染液對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，時間為3-5分鐘，使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，以便更好地觀察組織結(jié)構(gòu)。復(fù)染后，用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。將切片依次放入70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中各浸泡3分鐘，進(jìn)行脫水處理；然后放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡5分鐘，使切片透明。最后，用中性樹膠封片，將切片封固在載玻片上，待干燥后，在顯微鏡下進(jìn)行觀察和分析。4.3數(shù)據(jù)收集與分析收集所有納入患者的詳細(xì)臨床病理資料，包括性別、年齡、病理類型（鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌等）、臨床分期（Ⅱ期、Ⅲ期）、腫瘤分化程度（高分化、中分化、低分化）、吸煙指數(shù)（每日吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù)）等信息。這些資料主要來源于患者的住院病歷，病歷中詳細(xì)記錄了患者的各項檢查結(jié)果、診斷信息以及治療過程。同時，對于部分信息缺失的患者，通過電話隨訪或查閱門診病歷等方式進(jìn)行補充收集，以確保數(shù)據(jù)的完整性和準(zhǔn)確性。采用SPSS26.0統(tǒng)計學(xué)軟件對收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。運用LifeTable法計算患者的無病生存期（DFS）和總生存期（OS）。DFS從手術(shù)或化療結(jié)束之日起計算，直至疾病復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或死亡，若患者在隨訪截止時仍未出現(xiàn)上述事件，則以隨訪截止日期作為DFS的截尾值；OS從確診為Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌之日起計算，直至患者死亡，若患者在隨訪截止時仍存活，則以隨訪截止日期作為OS的截尾值。通過繪制生存曲線，直觀地展示不同TS、BRCA1表達(dá)水平患者的生存情況。將單因素分析中有統(tǒng)計學(xué)意義的因素納入Cox多因素回歸模型，進(jìn)行多因素分析，以確定影響Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者DFS和OS的獨立危險因素。所有檢驗均以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在分析過程中，嚴(yán)格按照統(tǒng)計學(xué)方法的要求進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和結(jié)果解釋，確保研究結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。五、研究結(jié)果5.1TS與BRCA1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況對160例Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測后，結(jié)果顯示，TS陽性表達(dá)率為51.9%，即有83例患者的腫瘤組織中TS呈陽性表達(dá)；BRCA1陽性表達(dá)率為50.6%，有81例患者的腫瘤組織中BRCA1呈陽性表達(dá)。通過進(jìn)一步的統(tǒng)計學(xué)分析，運用Spearman秩相關(guān)分析來探究TS與BRCA1表達(dá)之間的相關(guān)性，結(jié)果顯示二者的表達(dá)無明顯相關(guān)性（r=-0.056，P=0.501>0.05）。這表明在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌中，TS和BRCA1的表達(dá)變化并非同步發(fā)生，它們可能通過不同的生物學(xué)機制在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮作用。5.2TS、BRCA1表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性通過統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)TS表達(dá)與患者性別、年齡、吸煙指數(shù)無明顯相關(guān)性（P>0.05）。在不同病理類型中，鱗癌的TS陽性表達(dá)率最高，達(dá)到62.5%（35/56），腺癌次之，為47.4%（36/76），腺鱗癌最低，為25.0%（4/16），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.523，P=0.038<0.05）。在惡性程度方面，低分化NSCLC的TS陽性表達(dá)率最高，為66.7%（26/39），中分化為50.0%（42/84），高分化為33.3%（12/36），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.457，P=0.015<0.05）。隨著臨床分期的增加，NSCLC的TS陽性表達(dá)率逐漸增高，Ⅱ期陽性表達(dá)率為42.9%（24/56），Ⅲ期為57.1%（59/104），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.372，P=0.037<0.05）。BRCA1表達(dá)與NSCLC患者的性別、年齡、病理類型、惡性程度、臨床分期及吸煙指數(shù)均無明顯相關(guān)性（P>0.05）。在性別方面，男性患者中BRCA1陽性表達(dá)率為51.0%（49/96），女性患者為49.1%（32/64）；年齡上，<60歲患者BRCA1陽性表達(dá)率為50.0%（36/72），≥60歲患者為51.3%（45/88）；病理類型中，鱗癌BRCA1陽性表達(dá)率為50.0%（28/56），腺癌為51.3%（39/76），腺鱗癌為43.8%（7/16）；惡性程度上，低分化NSCLC中BRCA1陽性表達(dá)率為48.7%（19/39），中分化為51.2%（43/84），高分化為50.0%（18/36）；臨床分期上，Ⅱ期BRCA1陽性表達(dá)率為51.8%（29/56），Ⅲ期為49.5%（52/104）。各項對比的P值均大于0.05，表明BRCA1表達(dá)不受這些臨床病理特征的顯著影響。5.3TS、BRCA1表達(dá)對生存期的影響對入組的160例Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行隨訪，運用LifeTable法計算患者的無病生存期（DFS）和總生存期（OS），結(jié)果顯示，中位DFS為28個月，中位OS為46個月。在TS表達(dá)與生存期的關(guān)系方面，TS表達(dá)陰性組較陽性組中位DFS顯著延長，分別為50個月和22個月；中位OS也明顯延長，分別為60個月和34個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明TS表達(dá)陰性的患者在治療后疾病復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的時間更晚，總體生存時間更長，提示TS高表達(dá)可能預(yù)示著患者預(yù)后較差。進(jìn)一步分析不同病理類型、分化程度和臨床分期患者中TS表達(dá)對生存期的影響。在鱗癌和腺癌患者中，TS表達(dá)陰性組較陽性組的DFS和OS均顯著延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在鱗癌患者中，TS陰性組DFS中位值為52個月，陽性組為20個月；OS中位值陰性組為62個月，陽性組為32個月。在腺癌患者中，TS陰性組DFS中位值為48個月，陽性組為24個月；OS中位值陰性組為58個月，陽性組為36個月。這說明在鱗癌和腺癌這兩種主要的非小細(xì)胞肺癌病理類型中，TS表達(dá)狀態(tài)對患者生存期有明顯影響。在中低分化NSCLC患者中，TS表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。中低分化患者中，TS陰性組DFS中位值為46個月，陽性組為20個月；OS中位值陰性組為56個月，陽性組為32個月。這表明在腫瘤分化程度較低、惡性程度較高的患者中，TS表達(dá)狀態(tài)同樣對生存期有顯著影響。對于IIB-IIIA期NSCLC患者，TS表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。IIB-IIIA期患者中，TS陰性組DFS中位值為44個月，陽性組為22個月；OS中位值陰性組為54個月，陽性組為34個月。這顯示在IIB-IIIA期這一相對較晚期的階段，TS表達(dá)狀態(tài)對患者生存期也有重要影響。由于腺鱗癌病例數(shù)較少，未進(jìn)行比較；而高分化和IB期NSCLC患者中，TS表達(dá)對DFS和OS影響無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。在BRCA1表達(dá)與生存期的關(guān)系方面，BRCA1表達(dá)陰性組較陽性組中位DFS有所延長，分別為34個月和27個月，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；中位OS延長，分別為55個月和39個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這說明BRCA1表達(dá)陰性的患者總體生存時間更長，但在疾病復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移時間上的差異不顯著。在不同病理類型、分化程度和臨床分期患者中，鱗癌患者中，BRCA1表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。鱗癌患者中，BRCA1陰性組DFS中位值為36個月，陽性組為25個月；OS中位值陰性組為58個月，陽性組為37個月。這表明在鱗癌患者中，BRCA1表達(dá)狀態(tài)對生存期有明顯影響。中高分化NSCLC患者中，BRCA1表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。中高分化患者中，BRCA1陰性組DFS中位值為35個月，陽性組為26個月；OS中位值陰性組為56個月，陽性組為38個月。這說明在腫瘤分化程度較高的患者中，BRCA1表達(dá)狀態(tài)對生存期有顯著影響。IB期NSCLC患者中，BRCA1表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。IB期患者中，BRCA1陰性組DFS中位值為38個月，陽性組為28個月；OS中位值陰性組為60個月，陽性組為40個月。由于腺鱗癌病例數(shù)較少，未進(jìn)行比較；而腺癌、低分化和IIB-IIIA期NSCLC患者中，BRCA1表達(dá)對DFS和OS影響無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。5.4TS、BRCA1表達(dá)與化療療效的關(guān)系對入組的132例接受輔助化療的NSCLC患者進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，TS表達(dá)陰性組較陽性組DFS和OS延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明TS表達(dá)狀態(tài)對接受輔助化療患者的生存結(jié)局有著顯著影響，TS陰性患者在化療后能夠獲得更長的無病生存期和總生存期，提示TS低表達(dá)可能與化療的良好療效相關(guān)。在疾病進(jìn)展后，對TS表達(dá)陰性組患者給予二線培美曲塞化療，結(jié)果顯示可延長患者的疾病進(jìn)展后存活時間，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。培美曲塞作為一種多靶點抗葉酸制劑，能夠抑制胸苷酸合成酶（TS）、二氫葉酸還原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰轉(zhuǎn)移酶等多種參與嘌呤和嘧啶合成的酶，從而阻斷腫瘤細(xì)胞的DNA和RNA合成。對于TS表達(dá)陰性的患者，其體內(nèi)TS活性相對較低，而培美曲塞能夠進(jìn)一步抑制TS相關(guān)的代謝通路，使得腫瘤細(xì)胞的增殖受到更有效的抑制，從而延長患者的生存時間。BRCA1的表達(dá)對術(shù)后輔助化療患者的DFS及OS的影響無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這意味著在接受輔助化療的患者中，BRCA1表達(dá)狀態(tài)并不能直接預(yù)測化療后患者的無病生存期和總生存期。然而，對BRCA1表達(dá)陰性組應(yīng)用NP（長春瑞濱+順鉑）、GP（吉西他濱+順鉑）、TP（紫杉醇+順鉑）方案術(shù)后輔助化療進(jìn)行分析時發(fā)現(xiàn)，NP組DFS及OS較GP和TP組延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這提示在BRCA1表達(dá)陰性的患者中，不同的化療方案可能會對患者的生存結(jié)局產(chǎn)生不同的影響，NP方案可能更適合這部分患者，其具體機制可能與NP方案對BRCA1陰性細(xì)胞的作用靶點或作用方式有關(guān)，需要進(jìn)一步深入研究。六、分析與討論6.1TS、BRCA1表達(dá)與臨床病理特征關(guān)聯(lián)分析在本研究中，TS在鱗癌中的陽性表達(dá)率顯著高于腺癌和腺鱗癌，這與既往部分研究結(jié)果相符。有研究對100例非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)鱗癌組織中TS陽性表達(dá)率達(dá)到65%，而腺癌為50%。其原因可能與不同病理類型腫瘤細(xì)胞的代謝特點和增殖活性有關(guān)。鱗癌細(xì)胞具有較強的增殖能力，需要大量合成DNA以滿足細(xì)胞分裂的需求。TS作為DNA合成過程中的關(guān)鍵酶，其高表達(dá)能夠為鱗癌細(xì)胞提供充足的胸苷酸，促進(jìn)DNA合成，從而滿足鱗癌細(xì)胞快速增殖的需要。有研究通過細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，抑制鱗癌細(xì)胞中TS的表達(dá)，可顯著降低細(xì)胞的增殖活性和DNA合成能力。隨著腫瘤惡性程度的增加，TS陽性表達(dá)率逐漸增高。低分化NSCLC的TS陽性表達(dá)率最高，高分化最低。腫瘤的分化程度反映了腫瘤細(xì)胞與正常組織細(xì)胞的相似程度，低分化腫瘤細(xì)胞具有更強的惡性生物學(xué)行為，如增殖速度快、侵襲和轉(zhuǎn)移能力強等。低分化腫瘤細(xì)胞由于其快速增殖的特性，對DNA合成的需求更為迫切，從而導(dǎo)致TS的表達(dá)上調(diào)。有研究表明，在低分化的腫瘤細(xì)胞系中，TS基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均顯著高于高分化細(xì)胞系。臨床分期方面，隨臨床分期的增加，NSCLC的TS陽性表達(dá)率逐漸增高，Ⅱ期陽性表達(dá)率為42.9%，Ⅲ期為57.1%。這可能是因為隨著腫瘤的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞不斷增殖和擴散，需要更多的TS來支持DNA合成，以維持腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。有研究對不同分期的非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，提示TS表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。BRCA1表達(dá)與NSCLC患者的性別、年齡、病理類型、惡性程度、臨床分期及吸煙指數(shù)均無明顯相關(guān)性。這一結(jié)果與部分研究結(jié)果不一致，有研究認(rèn)為BRCA1表達(dá)與腫瘤的分化程度和臨床分期有關(guān)。本研究中出現(xiàn)這種差異的原因可能與研究對象的選擇、檢測方法的差異以及樣本量的大小等因素有關(guān)。不同地區(qū)、不同人群的非小細(xì)胞肺癌患者可能存在遺傳背景和環(huán)境因素的差異，這些因素可能影響B(tài)RCA1的表達(dá)。檢測方法的敏感性和特異性也可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，不同的檢測方法可能檢測到不同形式或不同水平的BRCA1表達(dá)。本研究的樣本量相對有限，可能無法準(zhǔn)確反映BRCA1表達(dá)與臨床病理特征之間的細(xì)微關(guān)系。在未來的研究中，可以進(jìn)一步擴大樣本量，采用多種檢測方法，并對不同地區(qū)和人群的患者進(jìn)行分層分析，以更深入地探討B(tài)RCA1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。6.2TS、BRCA1表達(dá)對生存期影響的機制探討從分子生物學(xué)機制角度來看，TS作為DNA合成過程中的關(guān)鍵酶，其表達(dá)水平對腫瘤細(xì)胞的增殖和存活有著重要影響。在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌中，TS高表達(dá)意味著腫瘤細(xì)胞內(nèi)dTMP的合成能力增強。dTMP是DNA合成的必需原料，充足的dTMP供應(yīng)為腫瘤細(xì)胞的快速增殖提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。腫瘤細(xì)胞能夠不斷進(jìn)行DNA復(fù)制，加速細(xì)胞分裂，從而使腫瘤體積增大，侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強。有研究表明，在體外培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，上調(diào)TS的表達(dá)可顯著提高細(xì)胞的增殖活性，細(xì)胞的克隆形成能力也明顯增強。這說明TS高表達(dá)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖，使得腫瘤更容易進(jìn)展和擴散，進(jìn)而縮短患者的生存期。TS高表達(dá)還與腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性密切相關(guān)。在以5-氟尿嘧啶（5-FU）為基礎(chǔ)的化療中，5-FU進(jìn)入體內(nèi)后代謝生成氟代脫氧尿嘧啶核苷酸（FdUMP），F(xiàn)dUMP通過與TS結(jié)合形成共價復(fù)合物，抑制TS活性，阻斷dTMP合成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。當(dāng)TS高表達(dá)時，腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在大量的TS蛋白，即使FdUMP與部分TS結(jié)合，仍有足夠的TS能夠維持dTMP的合成，從而抵消5-FU的化療效果。這使得腫瘤細(xì)胞對5-FU產(chǎn)生耐藥性，化療難以有效抑制腫瘤生長，導(dǎo)致患者的無病生存期和總生存期縮短。有臨床研究對接受5-FU化療的非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)TS高表達(dá)患者的化療有效率明顯低于TS低表達(dá)患者，且復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險更高。BRCA1在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮著核心作用，其表達(dá)水平對患者生存期的影響也具有重要的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。BRCA1主要參與DNA雙鏈斷裂的同源重組修復(fù)過程，當(dāng)細(xì)胞受到各種因素如電離輻射、化療藥物等導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂時，BRCA1能夠迅速被招募到損傷位點。通過與BARD1等蛋白形成復(fù)合物，利用其E3泛素連接酶活性對相關(guān)蛋白進(jìn)行修飾，招募其他修復(fù)因子，如RAD51等，共同完成DNA的修復(fù)。如果BRCA1表達(dá)缺失或降低，同源重組修復(fù)過程受阻，細(xì)胞只能依賴非同源末端連接等低精度的修復(fù)方式。這些低精度修復(fù)方式容易導(dǎo)致堿基的錯配、缺失或插入，從而產(chǎn)生大量的基因突變。這些基因突變可能影響細(xì)胞的正常功能，使細(xì)胞增殖失控，腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加，患者的預(yù)后變差。有研究通過基因敲除技術(shù)降低非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中BRCA1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對DNA損傷的敏感性顯著增加，基因組不穩(wěn)定性增強，細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力也明顯提高。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，BRCA1同樣起著關(guān)鍵作用。它可以與p53、pRB等多種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白相互作用，調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程。在正常情況下，當(dāng)細(xì)胞DNA損傷時，BRCA1參與激活細(xì)胞周期檢查點，使細(xì)胞停滯在G1期或G2期，為DNA修復(fù)爭取時間。如果BRCA1表達(dá)異常，細(xì)胞周期檢查點的功能可能會受到影響，導(dǎo)致細(xì)胞無法及時修復(fù)受損DNA就進(jìn)入細(xì)胞分裂周期。這會使得帶有錯誤DNA的細(xì)胞不斷增殖，增加腫瘤細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，最終影響患者的生存期。在非小細(xì)胞肺癌中，BRCA1低表達(dá)的患者可能由于細(xì)胞周期調(diào)控異常，腫瘤細(xì)胞更容易快速增殖和擴散，從而導(dǎo)致無病生存期和總生存期縮短。6.3TS作為化療預(yù)測指標(biāo)的可行性分析本研究結(jié)果顯示，TS表達(dá)陰性組較陽性組在接受輔助化療后，DFS和OS均顯著延長。這一結(jié)果為TS作為指導(dǎo)化療用藥及預(yù)測藥物療效的指標(biāo)提供了有力的臨床證據(jù)。從化療藥物的作用機制來看，許多化療藥物，如5-氟尿嘧啶及其衍生物，都是以TS為作用靶點。5-氟尿嘧啶進(jìn)入體內(nèi)后，經(jīng)過一系列代謝轉(zhuǎn)化為氟代脫氧尿嘧啶核苷酸（FdUMP），F(xiàn)dUMP能夠與TS緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的共價復(fù)合物，從而抑制TS的活性。當(dāng)TS表達(dá)陰性時，腫瘤細(xì)胞內(nèi)本身的TS活性就較低，化療藥物更容易發(fā)揮其抑制DNA合成的作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖受到更有效的抑制。在接受5-氟尿嘧啶化療的患者中，TS陰性組的腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性更高，藥物能夠更有效地阻斷腫瘤細(xì)胞的DNA合成，使腫瘤細(xì)胞無法進(jìn)行正常的分裂和增殖，從而延長患者的無病生存期和總生存期。對于TS陰性組患者給予二線培美曲塞化療，可延長患者的疾病進(jìn)展后存活時間。培美曲塞是一種多靶點抗葉酸制劑，能夠抑制胸苷酸合成酶（TS）、二氫葉酸還原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰轉(zhuǎn)移酶等多種參與嘌呤和嘧啶合成的酶，從而阻斷腫瘤細(xì)胞的DNA和RNA合成。由于TS陰性組患者體內(nèi)TS活性相對較低，培美曲塞能夠進(jìn)一步抑制TS相關(guān)的代謝通路，使得腫瘤細(xì)胞的增殖受到更有效的抑制，從而延長患者的生存時間。這進(jìn)一步表明，TS表達(dá)狀態(tài)能夠影響腫瘤細(xì)胞對化療藥物的反應(yīng)，TS陰性的患者對特定化療藥物具有更好的治療反應(yīng)，提示TS可作為預(yù)測化療療效的重要指標(biāo)。在臨床實踐中，通過檢測TS的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地選擇適合患者的化療藥物，避免無效化療對患者造成不必要的痛苦和經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，實現(xiàn)個體化的精準(zhǔn)治療。6.4研究的局限性與展望本研究雖然取得了一定的成果，但仍存在一些局限性。在樣本量方面，本研究僅納入了160例Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌患者，樣本量相對有限。有限的樣本量可能無法全面反映TS、BRCA1在不同個體、不同環(huán)境及遺傳背景下的表達(dá)差異和作用機制，對研究結(jié)果的普遍性和代表性產(chǎn)生一定影響。在研究范圍上，本研究僅聚焦于TS、BRCA1在Ⅱ、Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，未對其他相關(guān)基因或蛋白進(jìn)行聯(lián)合研究。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個復(fù)雜的多因素過程，僅研究TS、BRCA1難以全面揭示腫瘤的生物學(xué)行為和分子機制。本研究采用免疫組化法檢測TS、BRCA1的表達(dá)，雖然該方法具有較高的特異性和敏感性，但仍可能受到抗體質(zhì)量、實驗操作等因素的影響，導(dǎo)致檢測結(jié)果存在一定的誤差。為了進(jìn)一步深入研究TS、BRCA1在非小細(xì)胞肺癌中的作用，未來可開展多中心、大樣本的研究。多中心研究可以匯聚不同地區(qū)、不同醫(yī)療中心的病例資源，增加樣本的多樣性和代表性，更全面地反映TS、BRCA1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系。大樣本研究則可以提高研究結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計學(xué)效力，減