重難點(diǎn)17微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)一：選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品原理依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好或抗性而設(shè)計(jì)產(chǎn)生特定的顏色或其他變化用途從眾多微生物中分離出所需的微生物鑒別不同種類的微生物知識(shí)點(diǎn)二：消毒和滅菌的辨析項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌知識(shí)點(diǎn)三：兩種純化方法的比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋②涂布平板操作接種用具接種環(huán)涂布器注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：①第一次劃線前，避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；②再次劃線前，殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端；③劃線結(jié)束后，殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。(2)接種環(huán)灼燒后，要冷卻后才能接觸菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時(shí)用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破(1)在進(jìn)行稀釋操作時(shí)，每支試管及其中的9mL水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1～2cm處。(2)涂布平板時(shí)：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，取出時(shí)要讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何其他物體優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延共同點(diǎn)都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征知識(shí)點(diǎn)四：兩種微生物計(jì)數(shù)方法的比較項(xiàng)目間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計(jì)數(shù)法(顯微鏡計(jì)數(shù)法)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù)＝eq\f(C,V)×M每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格內(nèi)平均細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)缺點(diǎn)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落不能區(qū)分細(xì)胞死活結(jié)果比實(shí)際值偏小比實(shí)際值偏大注：細(xì)菌的數(shù)目還可以通過(guò)濾膜法來(lái)測(cè)定。知識(shí)點(diǎn)五：微生物的篩選與鑒別方法(1)微生物的篩選方法單菌落挑取法利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培養(yǎng)法利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物鑒定培養(yǎng)法利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物(2)微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別指示劑鑒別法如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說(shuō)明該種微生物能夠分解尿素染色鑒別法如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來(lái)鑒別分解纖維素的微生物知識(shí)點(diǎn)六：微生物的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組和重復(fù)組的設(shè)置及作用(1)兩種對(duì)照組的設(shè)置及作用①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用：為排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置至少3個(gè)平板作重復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個(gè)平板，用“平均值”代入計(jì)數(shù)公式予以計(jì)算菌落數(shù)。以微生物為背景，主要考查微生物的分離篩選、滅菌和計(jì)數(shù)等知識(shí)，微生物的分離與純化過(guò)程以及相關(guān)注意點(diǎn)，掌握微生物純化的方法，需要學(xué)生加強(qiáng)理解，同時(shí)熟悉課本。微生物這章節(jié)會(huì)有一定的計(jì)算量，對(duì)學(xué)生的理解能力要求較高。（建議用時(shí)：30分鐘）一、單選題1．某興趣小組對(duì)培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化進(jìn)行研究，結(jié)果如下圖。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．實(shí)驗(yàn)需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿、培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌處理，并在酒精燈火焰附近接種B．該實(shí)驗(yàn)中搖床的轉(zhuǎn)速、溫度、培養(yǎng)液的體積是無(wú)關(guān)變量，時(shí)間是唯一的自變量C．該實(shí)驗(yàn)需每隔2小時(shí)記數(shù)一次或每隔2小時(shí)接種一支試管最后一起計(jì)數(shù)D．用臺(tái)盼藍(lán)染色后對(duì)酵母菌計(jì)數(shù)，只計(jì)呈無(wú)色的個(gè)體，超過(guò)母體一半大的芽體也計(jì)數(shù)2．下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．用花生子葉通過(guò)切片法做脂肪的鑒定，需用顯微鏡才能看到紅色的脂肪滴B．用萃取法提取胡蘿卜素時(shí)，應(yīng)該避免明火加熱，采用水浴加熱C．將正常奶粉樣液2mL注入試管，再加入一定量的蛋白酶，再加入雙縮脲試劑，不會(huì)產(chǎn)生紫色反應(yīng)D．平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)3、已知固體培養(yǎng)基會(huì)因碳酸鈣的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培養(yǎng)基中碳酸鈣。某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為材料進(jìn)行了分離純化乳酸菌的實(shí)驗(yàn)，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是鑒別乳酸菌B．分離純化所用的培養(yǎng)基加入錐形瓶后一般還要進(jìn)行滅菌處理C．分離純化乳酸菌時(shí)，需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋D．分離純化乳酸菌時(shí)，應(yīng)挑選出不具有透明圈的菌落作為候選菌4、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B．A操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量C．B的正確操作是用涂布器蘸取菌液后均勻地涂布在②表面D．經(jīng)C過(guò)程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進(jìn)行純化培養(yǎng)5、為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示。下列分析正確的是（

）菌株秸稈總重(g)秸稈殘重(g)秸稈失重(%)纖維素降解率(%)A2．001．5124．5016．14B2．001．5323．5014．92C2．001．4229．0023．32A．從土壤中篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中的唯一氮源是纖維素B．如果將上述實(shí)驗(yàn)中的溫度條件調(diào)整至25℃，效果會(huì)更明顯C．實(shí)驗(yàn)中需要設(shè)置一個(gè)不接種纖維素分解菌的空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)D．纖維素酶活力最高的是菌株C，需用選擇培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)6、為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（

）A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．每次劃線前都需要蘸取菌液7、下列關(guān)于篩選分解尿素的微生物的培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．可以將尿素作為培養(yǎng)基的唯一氮源B．脲酶可以將尿素分解為NH3，然后直接被植物吸收利用C．培養(yǎng)基中含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)D．用酚紅鑒定尿素分解菌的原理是pH升高酚紅試劑會(huì)變紅8、下圖為利用玉米秸稈制備綠色能源——乙醇的工藝流程圖，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．對(duì)玉米秸稈進(jìn)行預(yù)處理的酶也可從腐木上的霉菌中提取B．圖中培養(yǎng)產(chǎn)酶微生物的培養(yǎng)基中的碳源一般為葡萄糖C．在糖液發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵裝置一般應(yīng)嚴(yán)格密封處理D．發(fā)酵產(chǎn)生的酒精可與酸性重鉻酸鉀溶液反應(yīng)變成灰綠色9、下列關(guān)于探究抗生素對(duì)細(xì)菌選擇作用的相關(guān)描述，正確的是（）A．平板培養(yǎng)基劃了4個(gè)區(qū)域，1個(gè)區(qū)域?yàn)閷?duì)照組，另外3個(gè)均為實(shí)驗(yàn)組B．對(duì)照組不放置無(wú)菌紙片，實(shí)驗(yàn)組放置含抗生素的無(wú)菌紙片C．接種涂布后的培養(yǎng)皿正向放置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12~16hD．抑菌圈越大細(xì)菌耐藥性越強(qiáng)，應(yīng)從遠(yuǎn)離抑菌圈的菌落挑取細(xì)菌繼續(xù)培養(yǎng)10、下圖表示研究人員在實(shí)驗(yàn)室中使用的分批培養(yǎng)細(xì)菌的方法，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因?yàn)槟芎铣呻迕窧．短期保存的菌種，可將菌液加入甘油后放在冷凍箱中冷藏C．液體選擇培養(yǎng)基通?？捎糜谶x擇培養(yǎng)，增加目標(biāo)菌種的濃度D．將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率11、大腸桿菌的體積大小通常在0.5~3μm，下圖為分離培養(yǎng)獲得大腸桿菌噬菌體的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程。相關(guān)敘述正確的是（）A．使用污水是因?yàn)槠渲泻写罅看竽c桿菌，能很容易地分離到大腸桿菌噬菌體B．步驟A的目的是讓大腸桿菌噬菌體利用培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)等成分迅速增殖C．步驟B的目的是促進(jìn)噬菌體與大腸桿菌分離，從而獲得更純的大腸桿菌D．檢測(cè)濾液中是否有大腸桿菌噬菌體，應(yīng)該用含有大腸桿菌的液體培養(yǎng)基12、酵母中的蛋白含量高，可用作飼料蛋白，且有些酵母能利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行繁殖。研究人員擬從土壤中分離該類酵母并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．土樣、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和接種工具等都必須嚴(yán)格滅菌B．只有③過(guò)程中使用的培養(yǎng)基需以甲醇作為唯一的碳源C．⑤過(guò)程擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要保證充足的營(yíng)養(yǎng)并營(yíng)造無(wú)氧環(huán)境D．通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度可獲得甲醇高耐受菌株二、非選擇題13．產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯(cuò)誤的是___________________（填編號(hào)）。編號(hào)①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧(2)稱取1．0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無(wú)菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)梯度稀釋后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0．1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長(zhǎng)出了46個(gè)酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌___________________個(gè)。(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對(duì)分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行___________________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以___________________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑___________________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。(4)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株___________________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是_________________________________________________________。14、解磷菌是一種能將土壤中植物不能利用的磷轉(zhuǎn)化為植物可以利用磷的功能微生物（主要為細(xì)菌），在提高土壤中有效磷含量、促進(jìn)磷循環(huán)方面發(fā)揮著重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈。如圖為從某植物根際土壤中篩選出高效解磷菌的部分流程示意圖，據(jù)圖回答下列問(wèn)題。(1)為篩選解磷菌，A培養(yǎng)基的碳源最合適的是_______。A．葡萄糖 B．難溶性磷酸鹽 C．二氧化碳 D．碳酸鹽(2)為避免雜菌影響，需要對(duì)操作Ⅱ所需儀器進(jìn)行滅菌的是_______。A．B培養(yǎng)基 B．滴管 C．接種環(huán) D