電泳技術(shù)第一節(jié)第八章其他分離純化技術(shù)第一節(jié)電泳技術(shù)一、電泳的基本原理遷移率μ：單位電場強度下的電泳速度，粒子的遷移率在一定條件下決定于粒子本身的性質(zhì)及其所帶電荷及大小和形狀。v--質(zhì)點移動速度，單位：m/s；E--電場強度，單位：N/cQ--質(zhì)點所帶凈電荷量，單位：cr--質(zhì)點半徑，單位：mη--介質(zhì)黏度，單位：N·s/㎡二、影響電泳的因素1.電場強度過高，產(chǎn)熱，樣品和緩沖液擴散增加，條帶增寬；蛋白變性。過低，電泳時間增加，擴散。當需要增大電場強度以縮短電泳時間時，需附有冷卻裝置。2.

pH

pH距離其等電點愈遠，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大；但是pH過高或過低引起蛋白變性。第一節(jié)電泳技術(shù)3.緩沖液離子強度

緩沖液通常要保持一定的離子強度；強度過低，則緩沖能力差，不易維持PH恒定，離子強度過高，在待分離分子周圍形成較強的帶相反電荷的離子擴散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。一般所用離子強度為0.02～0.20mol/L之間。4.電滲

在電場中液體對固體支持物的相對移動；當電滲方向與電泳方向一致時，會加快顆粒泳動速度，反之，當兩者方向相反時，會減慢顆粒泳動速度。

第一節(jié)電泳技術(shù)二、影響電泳的因素三、常見電泳技術(shù)1.醋酸纖維薄膜纖維素的羥乙酰化為乙酸酯，溶于丙酮后涂布成有均一細密微孔的薄膜，其厚度為0.1~0.15mm2.醋酸纖維薄膜電泳與特點分離效果好：吸附少，無拖尾、區(qū)帶清楚；快速省時：薄膜比濾紙吸水少，電滲作用小，分離速度快、電泳時間短；靈敏度高，樣品用量少；應(yīng)用面廣；利于保存3.操作薄膜的處理與放置；點樣；電泳；顯色第一節(jié)電泳技術(shù)（一）醋酸纖維薄膜電泳法凝膠電泳具有電泳和分子篩的雙重作用，分辨率很高1.凝膠介質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠；瓊脂糖凝膠2.凝膠電泳的分類（1）聚丙烯酰胺凝膠電泳（2）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

（3）瓊脂糖凝膠電泳3.凝膠電泳的操作

凝膠的制備；緩沖液的選擇；電泳；染色與固定；脫色

第一節(jié)電泳技術(shù)三、常見電泳技術(shù)（二）凝膠電泳法1.等電聚焦電泳電泳系統(tǒng)中加進兩性電解質(zhì)載體，當通已直流電時，兩性電解質(zhì)載體即形成一個由陽極到陰極連續(xù)增高的pH梯度。蛋白質(zhì)進入時，不同的蛋白質(zhì)移動到與其等電點相當?shù)膒H位置上，從而使不同等電點的蛋白質(zhì)得以分離。第一節(jié)電泳技術(shù)三、常見電泳技術(shù)（三）其他電泳法二維聚丙烯酰胺凝膠電泳（二維電泳）

第一向：等電聚焦電泳第二向：SDS雙向電泳后的凝膠經(jīng)染色后蛋白呈