第54講微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用高中總復(fù)習(xí)·生物課程標(biāo)準(zhǔn)1.

闡明在發(fā)酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。2.

闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污

染的技術(shù)。3.

舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。4.

概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的

常用方法。5.

概述稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用

方法。1.破考點(diǎn)·抓必備2.研真題·扣教材3.驗(yàn)收效·提能力目錄Contents01破考點(diǎn)·抓必備梳理歸納，鞏固基本知識(shí)考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.

培養(yǎng)基的配制（1）培養(yǎng)基的概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的

供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。（2）種類(lèi)及用途

（3）營(yíng)養(yǎng)組成①一般都含有

、

、

和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。②需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。水

碳源

氮源

微生物對(duì)培養(yǎng)基的需求乳酸菌添加

?霉菌將培養(yǎng)基調(diào)至

?性細(xì)菌將培養(yǎng)基調(diào)至

?性厭氧微生物提供

?的條件維生素

酸

中性或弱堿

無(wú)氧

提醒

①牛肉膏、蛋白胨提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有氮源、碳源、維生素等，牛

肉膏還可以提供磷酸鹽。②可通過(guò)培養(yǎng)基中碳源、氮源類(lèi)型判斷培養(yǎng)對(duì)象類(lèi)型。如培養(yǎng)基中無(wú)有機(jī)

碳源，則培養(yǎng)物為自養(yǎng)生物；若培養(yǎng)基中無(wú)有機(jī)氮源，則培養(yǎng)物一般為固

氮微生物。2.

無(wú)菌技術(shù)（1）目的：獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。（2）關(guān)鍵：防止

?。雜菌污染

（3）常用方法

【教材拾遺】

（選擇性必修3

P10相關(guān)信息）生物消毒法是指利用生物或

其代謝物除去環(huán)境中部分微生物的方法。3.

微生物的純培養(yǎng)（1）概念辨析

（2）酵母菌的純培養(yǎng)操作步驟

提醒

①平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，又可防止皿

蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。②倒平板整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。（3）平板劃線法操作步驟提醒培養(yǎng)基中微生物數(shù)量過(guò)多或成片可能的原因①菌液濃度過(guò)高。②培養(yǎng)過(guò)程中被雜菌污染。③利用接種環(huán)劃線時(shí)，每次劃線前未灼燒接種環(huán)滅菌。

1.

（選擇性必修3

P9正文）微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)，可

以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。

（

√

）2.

（選擇性必修3

P10正文）在培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性

或弱堿性。

（

×

）3.

（選擇性必修3

P10正文）為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱

快速挑取菌落。

（

×

）提示：接種環(huán)灼燒滅菌后，應(yīng)冷卻后再挑取菌落，以免高溫殺死菌種?！獭痢?.

（選擇性必修3

P10正文）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)

行清潔和滅菌。

（

×

）提示：對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。5.

（選擇性必修3

P12～13探究·實(shí)踐）倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一

邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。

（

×

）提示：倒平板時(shí)，用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，將

錐形瓶中的培養(yǎng)基（10～20

mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，

不能完全打開(kāi)皿蓋。6.

（選擇性必修3

P12～13探究·實(shí)踐）培養(yǎng)酵母菌時(shí)，可將接種后的平板

和一個(gè)未接種的平板倒置，放入適宜溫度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48

h。

（

√

）××√

1.

（2025·河北高三聯(lián)考）下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是（

）成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4含量10

g10

g2

g成分伊紅亞甲基藍(lán)蒸餾水含量0.4

g0.065

g1

000

mLA.

從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基B.

該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C.

該培養(yǎng)基缺少提供無(wú)機(jī)鹽的物質(zhì)D.

該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用√解析：

該培養(yǎng)基成分中不含瓊脂，不是固體培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)基成

分中的K2HPO4為其提供無(wú)機(jī)鹽，C錯(cuò)誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后需要滅菌

后才能接種使用，D錯(cuò)誤。2.

（2025·遼寧沈陽(yáng)高三期末）在做微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了防止雜菌污染，需要做好消毒和滅菌工作。下表中有關(guān)消毒和滅菌方法的使用，錯(cuò)誤的是（

）選項(xiàng)材料或器具方法A水源氯氣消毒B培養(yǎng)皿干熱滅菌C牛奶高壓蒸汽滅菌D涂布器灼燒滅菌√解析：

可用氯氣對(duì)水源進(jìn)行消毒，A正確；培養(yǎng)皿可在干熱滅菌箱中160～170

℃滅菌1～2

h，B正確；培養(yǎng)基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，牛奶一般用巴氏消毒法進(jìn)行消毒，C錯(cuò)誤；涂布器需采用灼燒滅菌的方法，冷卻后才能進(jìn)行涂布操作，D正確。3.

（2025·河北邢臺(tái)高三月考）如圖表示培養(yǎng)和純化X細(xì)菌的部分操作步

驟，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒處理B.

步驟①倒平板操作過(guò)程中，用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口

的縫隙，防止周?chē)h(huán)境中雜菌的污染C.

步驟③應(yīng)多個(gè)方向劃線，使接種物逐漸稀釋?zhuān)囵B(yǎng)后出現(xiàn)單個(gè)菌落D.

步驟③劃線結(jié)束后在培養(yǎng)皿皿蓋上做好標(biāo)注，培養(yǎng)皿需要倒置培養(yǎng)√解析：

步驟①倒平板操作過(guò)程中，用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)

一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即

蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，防止周?chē)h(huán)境中雜菌的污染，B正確；步驟③應(yīng)多個(gè)

方向劃線，劃三至五條平行線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相

連，使接種物逐漸稀釋?zhuān)囵B(yǎng)后出現(xiàn)單個(gè)菌落，C正確；步驟③劃線結(jié)束

后應(yīng)在皿底上做好標(biāo)注，D錯(cuò)誤。題后歸納平板劃線操作的注意事項(xiàng)（1）灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。（2）第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始，能使微生

物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)

的菌落。（3）劃線時(shí)最后一次劃線不要與第一次劃線相連。（4）劃線時(shí)力度大小要適當(dāng)，避免用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。（5）操作第一步即取菌種之前以及每次劃線之前都需要將接種環(huán)進(jìn)行火

焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒的目的不同：4.

（2025·安徽安慶高三聯(lián)考）在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過(guò)消

毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。下列相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.

玻璃和金屬材質(zhì)等實(shí)驗(yàn)器具可放入干熱滅菌箱中干熱滅菌B.

接種環(huán)在接種前后，均需在酒精燈的火焰上進(jìn)行灼燒消毒C.

沒(méi)有將高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡將影響培養(yǎng)基的滅菌效果D.

適量噴灑苯酚同時(shí)配合紫外線照射可提高對(duì)接種室的消毒效果√解析：

在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具可以放入干熱滅菌箱

中進(jìn)行干熱滅菌，一些金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具也可以灼燒滅菌，A正確；為

了防止雜菌污染和感染操作者，每次接種前后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌

（不是消毒），B錯(cuò)誤；若未將高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡，會(huì)因達(dá)

不到規(guī)定溫度而影響滅菌的效果，C正確；紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，密閉

空間常采用紫外線照射消毒，適量噴灑苯酚同時(shí)配合紫外線照射可提高對(duì)

接種室的消毒效果，D正確?？键c(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1.

微生物的選擇培養(yǎng)（1）選擇培養(yǎng)基

（2）稀釋涂布平板法

（3）培養(yǎng)觀察待涂布的菌液被培養(yǎng)基

后，將平板倒置，放入30～37

℃的恒溫培

養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2

d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離

的

?。吸收

單菌落

2.

微生物的數(shù)量測(cè)定

提醒

①每隔一定的時(shí)間（如24

h）統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定

時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目。②當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。稀釋涂

布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目比活菌實(shí)際數(shù)目少。

3.

活動(dòng)：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（1）實(shí)驗(yàn)原理

（2）操作步驟

（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1.

（選擇性必修3

P16正文）選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(lèi)。

（

×

）2.

（選擇性必修3

P18正文）菌液的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面會(huì)獲得

單菌落。

（

√

）3.

（選擇性必修3

P20概念檢測(cè)2）稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，平板上的一個(gè)

菌落就是一個(gè)細(xì)菌。

（

×

）4.

（選擇性必修3

P18正文）利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)

的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)。

（

×

）提示：當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落，故稀

釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少?！痢獭痢?.

（選擇性必修3

P18相關(guān)信息）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)量

就是活菌的數(shù)量。

（

×

）提示：顯微鏡直接計(jì)數(shù)法不能區(qū)分細(xì)菌的死活，因此統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活

菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。6.

（選擇性必修3

P20拓展應(yīng)用2）纖維素分解菌在剛果紅培養(yǎng)基上形成的

透明圈越大，說(shuō)明該類(lèi)纖維素分解菌分解纖維素的能力越強(qiáng)。

（

√

）×√

1.

（2023·廣東高考10題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽

毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和

選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是

（

）A.a點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基√解析：

由圖可知，隨著堆肥時(shí)間的延長(zhǎng)，堆肥溫度先升高后保持穩(wěn)

定，a點(diǎn)時(shí)堆肥溫度最低，c點(diǎn)時(shí)堆肥溫度最高。該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選能高

效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，應(yīng)該用以角蛋白為唯一氮

源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選培養(yǎng)，且應(yīng)該在高溫條件下取樣，即c點(diǎn)時(shí)取樣，D符

合題意。2.

（2025·福建福州高三質(zhì)檢）某研究小組用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基對(duì)新釀米

酒中的酵母菌進(jìn)行初步分離，結(jié)果如圖所示，下列敘述正確的是（

）A.

圖a中下一次劃線總是從上一次劃線的首端開(kāi)始B.

配制馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，其pH需要調(diào)節(jié)到中性C.

浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在火焰上灼燒D.

圖a、圖b的方法都可以實(shí)現(xiàn)對(duì)酵母菌的分離和計(jì)數(shù)√解析：

圖a的接種方法為平板劃線法，下一次劃線總是從上一次劃線的

末端開(kāi)始，起到逐級(jí)稀釋菌種的目的，A錯(cuò)誤；配制馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基用

于培養(yǎng)酵母菌時(shí)，其pH需要調(diào)節(jié)到酸性，B錯(cuò)誤；涂布器需要酒精浸泡再

放在酒精燈火焰上灼燒滅菌，以防止雜菌污染，C正確；圖a（平板劃線

法）、圖b（稀釋涂布平板法）的方法都可以實(shí)現(xiàn)對(duì)酵母菌的分離，但圖a

平板劃線法不能用于計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。題后歸納兩種純化方法的比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)

劃線①一系列的梯度稀釋?zhuān)虎?/p>

涂布平板操作項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法接種用具接種環(huán)涂布器優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌

進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落

特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)

平板共同點(diǎn)都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基

表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征3.

（2025·河北唐山高三一模）為了從土壤中篩選對(duì)抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，研究人員利用土壤浸出液進(jìn)行了如圖所示操作。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A.

用稀釋涂布平板法或平板劃線法將土壤浸出液接種在X培養(yǎng)基上B.

菌落①可能是硝化細(xì)菌，因不能產(chǎn)生淀粉酶所以無(wú)透明圈C.X培養(yǎng)基是含有淀粉和抗生素的固體培養(yǎng)基，Y培養(yǎng)基是不含瓊脂的液體培養(yǎng)基D.

圖中降解淀粉最高效的是菌落⑤，可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類(lèi)型√解析：

根據(jù)X培養(yǎng)基上形成的菌落分布特征可知，將含目的菌的土壤浸出液接種在X培養(yǎng)基上采用的是稀釋涂布平板法，A錯(cuò)誤；菌落①周?chē)鸁o(wú)透明圈，說(shuō)明其不能降解淀粉，可能是硝化細(xì)菌，因不能產(chǎn)生淀粉酶所以無(wú)透明圈，B正確；實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選對(duì)抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，可知X培養(yǎng)基上含有淀粉和抗生素，Y培養(yǎng)基用于將篩選到的目的菌擴(kuò)大培養(yǎng)，為不含瓊脂的液體培養(yǎng)基，C正確；碘液遇淀粉會(huì)變藍(lán)，淀粉被分解，形成透明圈，題圖中菌落⑤的透明圈最大，說(shuō)明菌落⑤降解淀粉的能力最強(qiáng)，不同菌落的特征不同，因此可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類(lèi)型，D正確。02研真題·扣教材探究分析，培養(yǎng)核心技能1.

（2024·海南高考12題）某小組為檢測(cè)1株粗糙脈孢霉突變株的氨基酸缺陷類(lèi)型，在相同培養(yǎng)溫度和時(shí)間的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）組別培養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果①基礎(chǔ)培養(yǎng)基無(wú)法生長(zhǎng)②基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、乙、丙3種氨基酸正常生長(zhǎng)③基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、乙2種氨基酸無(wú)法生長(zhǎng)④基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、丙2種氨基酸正常生長(zhǎng)⑤基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋乙、丙2種氨基酸正常生長(zhǎng)A.

組別①是②③④⑤的對(duì)照組B.

培養(yǎng)溫度和時(shí)間屬于無(wú)關(guān)變量C.

①②結(jié)果表明，甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生長(zhǎng)所必需的氨基酸D.

①～⑤結(jié)果表明，該突變株為氨基酸甲缺陷型√解析：

由表可知，除了組別①之外，其他組別的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中都添加

了氨基酸，因此組別①是②③④⑤的對(duì)照組，A正確；由題意表中信息可

知，實(shí)驗(yàn)的自變量為培養(yǎng)條件，各組別的培養(yǎng)溫度和時(shí)間均相同，說(shuō)明培

養(yǎng)溫度和時(shí)間均屬于無(wú)關(guān)變量，B正確；由①②結(jié)果可知：粗糙脈孢霉突

變株在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，但在添加了甲、乙、丙3種氨基酸的基礎(chǔ)

培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)，這表明甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生

長(zhǎng)所必需的氨基酸，C正確；與組別①相比，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，若添加的

氨基酸中含有丙種氨基酸，則粗糙脈孢霉突變株都能正常生長(zhǎng)，但在只添

加甲、乙2種氨基酸的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，說(shuō)明該突變株為氨基酸丙

缺陷型，D錯(cuò)誤。2.

（2024·黑吉遼高考19題改編）某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎病，其篩選流程及抗性檢測(cè)如圖。下列操作錯(cuò)誤的是（

）A.

在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內(nèi)，從未感染植株上采集樣品B.

將采集的樣品充分消毒后，用蒸餾水沖洗，收集沖洗液進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)C.

將無(wú)菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離得到內(nèi)生菌的單菌落D.

判斷內(nèi)生菌的抗性效果需比較有無(wú)接種內(nèi)生菌的平板上的病原菌菌斑大小√解析：

根據(jù)題干信息“某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要篩選出該內(nèi)生菌，應(yīng)該從未感染香蕉枯萎病的植株上采樣，A正確。要篩選內(nèi)生菌，同時(shí)防止樣品表面雜菌對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，需要對(duì)樣品進(jìn)行消毒，用無(wú)菌水沖洗樣品表面，收集沖洗液，對(duì)沖洗液進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，B錯(cuò)誤。稀釋涂布平板法可用于分離微生物，將無(wú)菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離能獲得內(nèi)生菌的單菌落，C正確。要想判斷內(nèi)生菌對(duì)病原菌的抗性效果，需要比較有無(wú)接種內(nèi)生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正確。3.

（2024·湖南高考6題）微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，下

列操作正確的是（

）A.

①②⑤⑥B.

③④⑥⑦C.

①②⑦⑧D.

①③④⑤√解析：

由圖可知，②中拔出棉塞后應(yīng)握住棉塞上部；⑥中劃線時(shí)不能

將培養(yǎng)皿的皿蓋完全拿開(kāi)，應(yīng)只打開(kāi)一條縫隙；⑦中劃線時(shí)第5次的劃線

不能與第1次的劃線相連；⑧中平板應(yīng)倒置培養(yǎng)。①③④⑤正確，故選D。4.

（2023·山東高考15題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確

的是（

）A.

不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B.

平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C.

接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D.

利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物√解析：

不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；平板涂布時(shí)涂布

器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，

不屬于消毒，B錯(cuò)誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行

滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；脲酶可以催化尿素分

解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲

得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無(wú)法生

長(zhǎng)，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。溯源教材（1）培養(yǎng)基的配方不同，一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物

質(zhì)。

（見(jiàn)選擇性必修3

P10正文）（2）將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂

布。

（見(jiàn)選擇性必修3

P17圖1－7）（3）使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。

（見(jiàn)選擇性必修3

P13正文）（4）只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作為唯一氮源

的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。

（見(jiàn)選擇性必修

3

P18探究·實(shí)踐）5.

（2023·遼寧高考9題）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面

的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并

檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理B.

細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C.

同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D.

稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高√解析：

為防止雜菌感染，接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣

器進(jìn)行滅菌處理，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒處理，A正確；純化培養(yǎng)

時(shí)，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培

養(yǎng)，B正確；微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對(duì)3個(gè)菌落數(shù)目在

30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；使用稀釋涂布平

板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起

時(shí)，在平板上只能觀察到一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。6.

（2024·全國(guó)甲卷37題，節(jié)選）合理使用消毒液有助于減少傳染病的傳播。某同學(xué)比較了3款消毒液A、B、C殺滅細(xì)菌的效果，結(jié)果如圖所示。

回答下列問(wèn)題。（1）該同學(xué)采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和菌落計(jì)數(shù)法分別測(cè)定同一樣品的細(xì)

菌數(shù)量，發(fā)現(xiàn)測(cè)得的細(xì)菌數(shù)量前者大于后者，其原因是

?

?

?

?。用菌落計(jì)數(shù)法計(jì)

數(shù)時(shí)，只有活菌被統(tǒng)計(jì)，且兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能連在一起形成一個(gè)菌落；

用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，不能區(qū)分死菌和活菌，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活

菌數(shù)和死菌數(shù)的總和解析：用菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，故活菌統(tǒng)計(jì)值比實(shí)際值??；用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，不能區(qū)分死菌和活菌，故測(cè)定的細(xì)菌數(shù)量往往大于實(shí)際的活菌數(shù)，因此使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果大。（2）該同學(xué)從100

mL細(xì)菌原液中取1

mL加入無(wú)菌水中得到10

mL稀釋菌

液，再?gòu)南♂尵褐腥?00

μL涂布平板，菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果為100，據(jù)此推算

細(xì)菌原液中細(xì)菌濃度為

個(gè)/mL。解析：100個(gè)菌落代表100個(gè)活菌，其來(lái)自200

μL（0.2

mL）稀釋液，推出1

mL稀釋液中大約有500個(gè)活菌，稀釋液由細(xì)菌原液稀釋10倍獲得，進(jìn)而推出細(xì)菌原液中細(xì)菌濃度為5×103個(gè)/mL。5×103（3）菌落計(jì)數(shù)過(guò)程中，涂布器應(yīng)先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼

燒的目的是

，冷卻的目的是

??。解析：將涂布器放在火焰上灼燒的目的是滅菌，以防止雜菌污染；涂布器冷卻后再進(jìn)行涂布的目的是避免高溫殺死菌種。滅菌，以防止雜菌污染避免殺死菌種

（4）據(jù)圖可知?dú)⒕Ч詈玫南疽菏?/p>

，判斷依據(jù)是

?

（答出2點(diǎn)即可）。解析：

由曲線圖可以直接看出，用消毒

液A處理后活細(xì)菌減少量最大且活細(xì)菌減少得

最快，說(shuō)明消毒液A殺菌效果最好。A活細(xì)菌減少

量最大且減少得最快

（1）從試管取菌種前，先在火焰旁拔棉塞，再將試管口迅速通過(guò)火焰以

滅菌。

（2024·江蘇高考）

（

√

）（2）血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)

定。

（2023·江蘇高考）

（

×

）提示：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板不適用于微小的細(xì)菌計(jì)數(shù)。（3）某同學(xué)欲分離產(chǎn)脲酶菌，可在選擇培養(yǎng)基中添加尿素作為唯一氮

源。

（2022·江蘇高考）

（

√

）√×√（4）為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行

滅菌。

（2022·湖北高考）

（

×

）提示：高溫變性的蛋白質(zhì)仍可作為微生物的氮源，可以用濕熱滅菌法對(duì)牛

肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。（5）稀釋涂布平板法既可分離菌株，又可用于計(jì)數(shù)。

（2024·貴州高

考）

（

√

）×√03驗(yàn)收效·提能力跟蹤訓(xùn)練，檢驗(yàn)學(xué)習(xí)效果一、選擇題1.

（2025·重慶聯(lián)考）防止雜菌污染，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用

微生物的前提。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

實(shí)驗(yàn)室里可用紫外線或化學(xué)藥物對(duì)物體表面或空氣進(jìn)行消毒B.

實(shí)驗(yàn)室里不可吃東西，離開(kāi)時(shí)一定要洗手以防被微生物感染C.

接種環(huán)、接種針等用具應(yīng)在酒精燈火焰的內(nèi)焰部位灼燒滅菌D.

使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境解析：

接種環(huán)、接種針等用具應(yīng)在酒精燈火焰的外焰部位灼燒滅菌，C

錯(cuò)誤。123456789√2.

（2025·福建南平高三聯(lián)考）下列關(guān)于微生物純培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是

（

）A.

倒平板操作應(yīng)等培養(yǎng)基冷卻至50

℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近進(jìn)行B.

微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟C.

用平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養(yǎng)基上得到單菌落D.

涂布平板時(shí)應(yīng)先將培養(yǎng)皿蓋置于實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)上√123456789解析：

平板劃線法通過(guò)連續(xù)劃線操作可得到單菌落，稀釋涂布平板法

在稀釋倍數(shù)足夠高的情況下，可通過(guò)將稀釋液涂布在培養(yǎng)基上獲得單菌

落，即平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養(yǎng)基上得到單菌落，C

正確；涂布平板時(shí)不能完全打開(kāi)培養(yǎng)皿，將皿蓋置于實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)上，應(yīng)在

火焰附近將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條縫隙，D錯(cuò)誤。1234567893.

（2025·福建寧德五校聯(lián)合檢測(cè)）為加速我國(guó)北方冬春季秸稈原位還田

的腐化過(guò)程，研究人員以凍牛糞為材料篩選出耐低溫（10

℃）的纖維素降

解菌。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.

選用凍牛糞為材料與其富含纖維素及含耐低溫微生物有關(guān)B.

初篩菌種前，要利用固體培養(yǎng)基在37

℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)菌種C.

用于篩選的培養(yǎng)基是加入剛果紅染料的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D.

應(yīng)選擇菌落直徑與周?chē)该魅χ睆奖戎荡蟮木溥M(jìn)行純化√123456789解析：

凍牛糞中富含纖維素，有很多微生物，凍牛糞因溫度低，其內(nèi)

的微生物是耐低溫微生物，故選用凍牛糞為材料篩選耐低溫的纖維素降解

菌，A正確；初篩菌種前，要利用液體培養(yǎng)基在37

℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)

菌種，B錯(cuò)誤；用于篩選的培養(yǎng)基是以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，

加入的剛果紅染料起鑒別作用，C錯(cuò)誤；由于剛果紅染料與纖維素形成紅

色復(fù)合物，因此會(huì)出現(xiàn)以纖維素降解菌為中心的透明圈，菌落直徑與周?chē)?/p>

透明圈直徑比值越小，菌株分解纖維素的能力越強(qiáng)，故應(yīng)選擇菌落直徑與

周?chē)该魅χ睆奖戎敌〉木溥M(jìn)行純化，D錯(cuò)誤。1234567894.

（2025·山東淄博模擬）從土壤中分離某種微生物的培養(yǎng)基配方如圖，

該培養(yǎng)基中，果膠被剛果紅染成紅色。將土壤稀釋液接種在該培養(yǎng)基上，

培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上出現(xiàn)多個(gè)周?chē)型该魅Φ木?。下列分析錯(cuò)誤的

是（

）A.

該培養(yǎng)基可用于分離產(chǎn)果膠酶的微生物B.

培養(yǎng)基配方中的X應(yīng)為瓊脂C.KH2PO4和Na2HPO4能維持培養(yǎng)基的pHD.

周?chē)霈F(xiàn)透明圈的菌落全部為同一種微生物的克隆√123456789解析：

該培養(yǎng)基的唯一碳源為果膠，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌是能分解果膠的

細(xì)菌，因此該培養(yǎng)基可用于分離產(chǎn)果膠酶的微生物，A正確；該平板培養(yǎng)

基為固體培養(yǎng)基，瓊脂為凝固劑，因此培養(yǎng)基配方中的X應(yīng)為瓊脂，B正

確；KH2PO4、Na2HPO4在提供無(wú)機(jī)鹽的同時(shí)還能維持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定，C正

確；能產(chǎn)生果膠酶的微生物不止一種，通常情況下，用此培養(yǎng)基篩選出來(lái)

的微生物種類(lèi)不一定相同，D錯(cuò)誤。1234567895.

（2025·山東濟(jì)寧模擬）耐高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)

用性。嗜熱菌可以在高溫環(huán)境中生存，其產(chǎn)生的淀粉酶最適溫度較高。篩

選能產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌過(guò)程如圖1所示，其中Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基用碘液處

理的結(jié)果如圖2所示。下列敘述正確的是（

）A.

圖2中周?chē)伙@藍(lán)色的菌落含有所需菌種B.

倒平板后對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌C.

淀粉是圖2所示固體培養(yǎng)基的唯一碳源D.

甲、乙試管中均為選擇培養(yǎng)基√123456789解析：

淀粉與碘液反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養(yǎng)基上生

長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，故周?chē)伙@藍(lán)色的菌落含有所

需菌種，A正確；倒平板時(shí)培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都已滅菌處理，因此倒平板后

不需要對(duì)培養(yǎng)皿再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，B錯(cuò)誤；據(jù)題圖2可知，培養(yǎng)基上出

現(xiàn)周?chē)@藍(lán)色的菌落和周?chē)伙@藍(lán)色的菌落，因此淀粉可能不是題圖2所

示固體培養(yǎng)基的唯一碳源，C錯(cuò)誤；題圖1中①過(guò)程是梯度稀釋?zhuān)谶^(guò)程是

接種，因此甲、乙試管主要是對(duì)嗜熱菌樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)痪邆溥x擇作用，

不屬于選擇培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。1234567896.

（2025·廣東湛江模擬）自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立進(jìn)行固氮的細(xì)菌?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。已知步驟④獲得的3個(gè)平板的菌落數(shù)分別為90、95、100，對(duì)照組平板為0。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.

步驟②振蕩20

min的目的是擴(kuò)大菌種數(shù)量，屬于選擇培養(yǎng)B.

步驟④使用接種環(huán)劃線接種，使用前需要灼燒滅菌C.1

g土壤中平均自生固氮菌數(shù)約為9.5×106個(gè)D.

所用培養(yǎng)基應(yīng)加入碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水和瓊脂√123456789解析：

步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到

無(wú)菌水中，A錯(cuò)誤；由題圖觀察可知，步驟④平板中的菌落分布均勻，故

步驟④所用的接種工具是涂布器，接種方法是稀釋涂布平板法，B錯(cuò)誤；1

g土壤中平均自生固氮菌數(shù)約為（90＋95＋100）/3÷0.1×104＝9.5×106

（個(gè)），C正確；本實(shí)驗(yàn)需要分離的自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾?/p>

為氮源，故所用培養(yǎng)基中不能加入氮源，D錯(cuò)誤。1234567897.

（2025·江蘇南京、鹽城模擬）為了解病原微生物對(duì)四種抗生素的敏感程度，某研究小組進(jìn)行了相關(guān)藥敏實(shí)驗(yàn)，圖1為部分實(shí)驗(yàn)器材。將含有相同濃度的抗生素Ⅰ～Ⅳ四個(gè)大小相同的紙片分別貼在長(zhǎng)滿測(cè)試菌的平板上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.

為獲得長(zhǎng)滿測(cè)試菌的平板，需要使用圖1中器材①②③B.

圖2中Ⅱ形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對(duì)藥物較敏感C.

圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下產(chǎn)生了突變株D.

不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果√123456789解析：

為獲得長(zhǎng)滿測(cè)試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使用圖1中①酒精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，酒精燈對(duì)涂布器進(jìn)行灼燒滅菌）、③培養(yǎng)基和④涂布器，②為接種環(huán)（接種工具），是平板劃線法接種時(shí)需要使用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長(zhǎng)滿測(cè)試菌的平板，A錯(cuò)誤；圖2中Ⅱ處透明圈最小，說(shuō)明此處微生物對(duì)該藥物敏感度最低，B錯(cuò)誤；突變株的出現(xiàn)不是在抗生素的作用下產(chǎn)生的，抗生素只能起選擇作用，C錯(cuò)誤。1234567898.

（2025·山東日照模擬）三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）含有牛肉膏、蛋白胨、糖

類(lèi)（乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10∶10∶1）、酚紅（在酸性條件下呈

黃色、堿性條件下呈紅色）等成分。TSI瓊脂試驗(yàn)法通過(guò)觀察腸桿菌科細(xì)

菌對(duì)三種糖的分解產(chǎn)生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來(lái)鑒別

其種類(lèi)。操作過(guò)程是：用接種針挑取待測(cè)菌落后，刺入斜面TSI內(nèi)，后緩

慢抽出接種針，在斜面上進(jìn)行“之”字劃線。下列分析錯(cuò)誤的是（

）A.

牛肉膏可為細(xì)菌提供氮源和維生素等B.

穿刺和劃線的過(guò)程需嚴(yán)格控制雜菌污染C.

若培養(yǎng)基中底層與斜面均呈黃色，推測(cè)細(xì)菌只能分解乳糖D.

若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測(cè)細(xì)菌可能只分解葡萄糖√123456789解析：

牛肉膏可為細(xì)菌提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等，A正確；本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TSI瓊脂試驗(yàn)法，觀察腸桿菌科細(xì)菌對(duì)三種糖的分解產(chǎn)生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來(lái)鑒別其種類(lèi)，故穿刺和劃線的過(guò)程需嚴(yán)格控制雜菌污染，B正確；由于酚紅在酸性條件下呈黃色、堿性條件下呈紅色，若培養(yǎng)基的中底層與斜面均呈黃色，說(shuō)明細(xì)菌產(chǎn)酸的量多，推測(cè)細(xì)菌也可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量較多的乳糖和蔗糖（或其中之一），C錯(cuò)誤；若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培養(yǎng)基中葡萄糖的含量較少，其產(chǎn)酸的量也較少，斜面上所生成的少量酸被空氣緩慢氧化，使斜面由黃色變成紅色；底層由于處于缺氧狀態(tài)，細(xì)菌分解葡萄糖所產(chǎn)生的酸一時(shí)不能被空氣氧化而仍保持黃色。故若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測(cè)細(xì)菌可能只分解葡萄糖，D正確。123456789二、非選擇題9.

（2025·江蘇鎮(zhèn)江聯(lián)考）我國(guó)衛(wèi)生部門(mén)規(guī)定飲用水標(biāo)準(zhǔn)是1

mL自來(lái)水中

細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)100個(gè)（37

℃培養(yǎng)24

h），1

000

mL自來(lái)水中大腸桿菌菌落

數(shù)不能超過(guò)3個(gè)（37

℃培養(yǎng)48

h）。水中大腸桿菌的含量常采用伊紅—亞

甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)，生長(zhǎng)在此培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且

帶有金屬光澤。某校生物興趣小組開(kāi)展校園桶裝純凈水微生物含量檢測(cè)活

動(dòng)，請(qǐng)回答問(wèn)題：（1）檢測(cè)飲用水中的細(xì)菌，需要配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，牛肉

膏和蛋白胨可以為細(xì)菌生長(zhǎng)提供

?

（至少寫(xiě)出兩點(diǎn)）等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。從物理狀態(tài)角度分析，此培養(yǎng)基屬

于

培養(yǎng)基。碳源、氮源、磷酸鹽、維生素固體123456789解析：

該實(shí)驗(yàn)中用到的培養(yǎng)基中加入了牛肉膏、蛋白胨，其中蛋白胨來(lái)源于動(dòng)物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，故蛋白胨可以為微生物的生長(zhǎng)提供碳源、氮源和維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；該培養(yǎng)基含有瓊脂，故屬于固體培養(yǎng)基。123456789（2）某同學(xué)分別向3個(gè)培養(yǎng)基中各加入1

mL，未經(jīng)稀釋的待測(cè)水樣，涂布

均勻后置于37

℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24

h，結(jié)果如圖1所示。檢測(cè)時(shí)使用

的接種量為1

mL而不是0.1

mL，其理由是