兒童呼吸道合胞病毒疫苗的研究進(jìn)展2025呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)是一種單股負(fù)鏈非節(jié)段性RNA病毒，主要通過飛沫、接觸等途徑傳播，能夠引發(fā)呼吸道感治療甚至導(dǎo)致死亡的嚴(yán)重下呼吸道感染。RSV感染是全世界5歲以下兒一生中會(huì)反復(fù)感染，對(duì)人體的危害較大。2019年開展的一項(xiàng)針對(duì)兒童的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，全球范圍內(nèi)因RSV引發(fā)的急性下呼吸道感染的病例數(shù)估計(jì)達(dá)到了3300萬例，因RSV相關(guān)的急性下呼吸道感染死亡的5歲以下兒童數(shù)量為6.6萬~19.0萬[1]。除此之外，在嬰幼兒階段感染RSV因此，開發(fā)可用的RSV疫苗非常重要。但由于對(duì)RSV融合蛋白(fusionproteins,F)構(gòu)象變化的認(rèn)識(shí)不明晰、生物技術(shù)不夠成熟，及福爾馬林滅活疫苗(Formalin-inactivatedRSVvaccine,FI-RSV)研發(fā)失敗等原因，造成此前RSV疫苗研發(fā)并不順利。近年來，隨著對(duì)RSV生物結(jié)構(gòu)及發(fā)病機(jī)制的理解，以及在新型冠狀病毒肺炎(CoronaVirusDisease2019,COVID-19)期間成分疫苗的快目前已有亞單位疫苗及核酸疫苗被批準(zhǔn)用于老年人預(yù)防RSV感染。但由(vaccine-enhanceddiseases,VED),低齡兒童疫苗的研發(fā)尤為艱難。母體疫苗的研發(fā)改善了兒童疫苗的現(xiàn)狀。2023年，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)首次批準(zhǔn)了用于預(yù)防嬰個(gè)月對(duì)嚴(yán)重RSV疾病提供短暫保護(hù)，不足以持久保護(hù)大齡嬰兒和幼兒免受感染，而80%的RSV相關(guān)下呼吸道感染和超過一半的RSV死亡發(fā)生現(xiàn)對(duì)RSV生物結(jié)構(gòu)及預(yù)防兒童RSV感染疫苗的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。RSV有10個(gè)基因，共編碼11種蛋白質(zhì)，包括核蛋白(nuclearproteins,N)、基質(zhì)蛋白(matrixproteins,M)、F蛋白、黏附蛋白(glycoproteins,G)、小疏水蛋白(smallhydro磷蛋白(phosphoproteins,P)、大聚合酶亞單位蛋白(largepolymeraseproteins,L)、調(diào)節(jié)M2蛋白(regulatoryM2proteins,M2)及非結(jié)構(gòu)蛋白[3]。膜表面的F、G蛋白含有抗原表位，在RSV感染或接種疫苗后附因子相互作用將病毒黏附在宿主細(xì)胞上。亞組中的大多數(shù)G蛋白，根據(jù)其抗原性，將RSV分為RSV-A和RSV-B兩種亞型。病毒F蛋白通過強(qiáng)烈的構(gòu)象變化驅(qū)動(dòng)病毒和宿主細(xì)胞膜的融合[4],促進(jìn)病毒的進(jìn)入。融合前亞穩(wěn)定狀態(tài)的F蛋白(PreF)目前被解析的抗原位點(diǎn)有6個(gè)：I、Ⅱ、Ⅲ、IV、V和φ,融合后F蛋白(PostF)的抗原位點(diǎn)有4及相對(duì)保守性，目前已成為疫苗最廣泛的靶向抗原蛋白。SH參與延遲感自RSV首次被發(fā)現(xiàn)到2023年批準(zhǔn)第一批疫苗，疫苗研發(fā)已歷經(jīng)60多年。答：血清陰性的疫苗接種患兒較對(duì)照組高熱、氣喘及肺炎的發(fā)生率更高，且2名注射嬰兒死亡，引起VED,最終以失敗告終[7]。后續(xù)研究表明VED產(chǎn)生的原因可能是FI-RSV在處理過程中，導(dǎo)致部分抗原表位變化；也可能是剛出生嬰兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟及體內(nèi)被FI-RSV誘導(dǎo)產(chǎn)生以輔助性T細(xì)胞2(Thelper2cell,Th2)偏向物，激活補(bǔ)體，引起炎癥和組織損傷；FI-RSV引起Th2偏向的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)，促進(jìn)無效抗體應(yīng)答IgE產(chǎn)生及相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素4和白細(xì)胞介素13分泌，引起類似過敏樣表現(xiàn)，再次感染時(shí)致使嗜酸性粒細(xì)胞增多及產(chǎn)生氣道高反應(yīng)性[8]。2013年，RSVF蛋白結(jié)構(gòu)得到解析，逐漸明晰F蛋白融合前與融合后的構(gòu)象差異，疫苗研究隨之進(jìn)入新階段。目前正在研發(fā)中的兒童RSV疫苗包括減毒活疫苗(live-attenuatedmRNA疫苗及載體疫苗等類型。下列為部分正在研發(fā)的兒童RSV疫苗。耗時(shí)較長，且難以預(yù)測(cè)回復(fù)突變的概率及產(chǎn)來，隨著反向遺傳技術(shù)的成熟，通過突變病抗體與感染野生型RSV的初次應(yīng)答相當(dāng)，疫苗誘導(dǎo)的空斑減少中和實(shí)驗(yàn) (plaquereductionneutral呼吸道感染的保護(hù)[9]。MV-012-968:是美國MeissaVaccines公司2017年通過密碼子優(yōu)化下調(diào)RSV的毒力基因減弱毒性，及增加RSVF蛋白的表達(dá)，增加免疫原性研發(fā)的一種LAV。2023年8月公布的針對(duì)6~36個(gè)月血清陰性兒童的臨床數(shù)據(jù)顯示：100%的RSV血清陰性的嬰幼兒對(duì)間隔28d予2劑10?PFU/L的MV-012-968可產(chǎn)生免疫反應(yīng)，且是美國國家過敏和傳染病研究所通過缺失M2-2基因制備的一種LAV,與從而增加保護(hù)性抗原的表達(dá)量。2015年的I期臨床試驗(yàn)顯示：RSV血清陰性兒童中接種MEDI△M2-2,體內(nèi)疫苗復(fù)制受到高度限制，但是，抗RSV的中和抗體滴度提高了4倍[11]。為優(yōu)化該疫苗候選物的免疫保護(hù)效能，針對(duì)低溫適應(yīng)型RSVA2株進(jìn)行基因工程改造，通過缺失M2-2基因調(diào)控蛋白表達(dá)，構(gòu)建新型減毒活疫苗株LID△M2-2?；?~24月齡嬰幼兒群體的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，該疫苗免疫后受試群體血清中和抗體效價(jià)較基線水平提升超過4倍，達(dá)到90%的血清轉(zhuǎn)化率，但疫苗接種組呼吸道癥狀及發(fā)熱反應(yīng)發(fā)生率較高[率可能會(huì)使其在大量人群中耐受不良，在2019年，通過刪除M2-2和5個(gè)冷傳突變制備了LIDcp△M2-2疫苗，I期臨床試驗(yàn)顯示：90%的疫苗接種者RSV中和抗體滴度及85%的RSVIgG滴度增加4倍以上，但較多疫苗接種者和安慰劑組接種者也出現(xiàn)了呼吸道癥狀[13]。2020年，RSV候選疫苗D46/NS2/N/△M2-2-HindⅢ在6~24月齡的兒童中進(jìn)行的I期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示：21例疫苗接種者中，95%的疫苗接種者肺泡灌洗液中監(jiān)測(cè)到疫苗脫落，95%的接種者血清RSV中和抗體和100%抗RSVIgG滴度升高超過4倍，76%的接種者在接種期間出現(xiàn)輕度上呼癥狀的免疫應(yīng)答。該疫苗具有良好的感染性和InstituteofHealth,NIH)和Med-Immune公司前期通過化學(xué)誘變和低溫條件下連續(xù)傳代篩選得到冷適應(yīng)溫度敏感株cpts248/404,但因其臨床試驗(yàn)顯示會(huì)引起鼻塞，影響新生兒的睡眠和哺乳。隨后，通過剔除SH基因，并在L基因1030位引入點(diǎn)突變制備重組疫苗2013年針對(duì)5~24個(gè)月的血清陰性的嬰幼兒進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示59%的MEDI-599疫苗接種者可以觀察到功能性免疫反應(yīng)，有良好因組248及1030位點(diǎn)表現(xiàn)出較高的回復(fù)突變頻率。為優(yōu)化疫苗株的基因在6~24月齡嬰幼兒中開展的I期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示：60%的接種者血RSV/△NS2/△1313/I1314L:該LAV是NIH聯(lián)合賽諾菲公司研發(fā)的，通過將MEDI-599的NS2基因片段和1313位點(diǎn)氨基酸殘基靶向缺失，一項(xiàng)針對(duì)12~59個(gè)月RSV血清陽性和陰性兒童的I期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示：在RSV血清陰性的兒童中，10?PFU/劑耐△1313/I1314L和RSV/2762種候選疫苗，結(jié)果顯示：2種疫苗均具有良好的安全性和免疫原性，RSV/276疫苗組的咳嗽癥狀略多[17]。因清陰性的患兒接種后有產(chǎn)生VED的風(fēng)險(xiǎn)[18]。因此，該疫苗目標(biāo)人群為的亞單位疫苗，包含RSVA、B2種具有穩(wěn)定性和免疫原性的構(gòu)建體847,引入3種突變，即二硫橋(T103C-I148C),利用非極性氨基酸填充空腔(S190I)和電荷中和突變，減少離子排斥或增強(qiáng)預(yù)融合構(gòu)象中三聚體的離子吸引制備[19]。Abrysvo是一種母體疫苗，可通過胎盤傳給胎兒，剛出生的嬰兒通過母乳從母體獲得抗RSV特異性抗體。Ⅲ期臨床試驗(yàn)的結(jié)果顯示，Abrysvo在降低出生90d內(nèi)與RSV相關(guān)的嚴(yán)重下呼吸道感染風(fēng)險(xiǎn)方面的有效性為81.8%,在降低180d后的有效性為69.4%[20]。但是，Ⅱb和Ⅲ期臨床試驗(yàn)中，妊娠24~36周的孕婦注射RSVPreF疫苗，與安慰劑組相比，疫苗組早產(chǎn)發(fā)生率稍高，疫苗組5.7%的嬰兒為早產(chǎn)兒，安慰劑組只有4.7%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但沒有充足證據(jù)排除對(duì)早產(chǎn)的影響[21]。因此，在2023年8月，F(xiàn)DA首個(gè)批準(zhǔn)該疫苗用于妊娠32~36周的孕婦來預(yù)防6個(gè)月內(nèi)嬰兒因RSV引起的下呼吸道感染[22]。RSVPreF3疫苗(Arexvy):英國GSK公司以RSVF蛋白的預(yù)融合構(gòu)象為主要抗原，通過引入二硫橋(S155C和S290C)和疏水空間(S190F和V207L)突變制成[23]。針對(duì)60歲及以上個(gè)體的臨床試驗(yàn)顯示出良好的安全性和免疫原性，將發(fā)生RSV相關(guān)下呼吸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)降低了71.7%[24]。2023年5月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)Arexvy用于60歲及以上的老年人[17]。在妊娠中晚期的孕婦中使用無佐劑RSVPreF3疫苗的I/Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，在母親和嬰兒中具有良好的安全性(無妊娠相關(guān)或新生兒不B2種亞型，在出生后181d下降[25]。但針對(duì)妊娠24~34周孕婦的Ⅲ示：疫苗組的早產(chǎn)率為6.8%,新生兒死亡率為0.4%,而安慰劑組早產(chǎn)率為4.9%,新生兒死亡率為0.2%,這種現(xiàn)象主要發(fā)生在中低收入國家[26]。2.3mRNA疫苗宿主細(xì)胞內(nèi)，在體內(nèi)可自然降解，促進(jìn)不穩(wěn)具有較高的安全性，同時(shí)還能激活體液和細(xì)胞免疫。但在COVID-19流重視mRNA疫苗的安全性問題。RNA-1345:是美國Moderna公司為了提高免疫原性，通過序列設(shè)計(jì)和密碼子優(yōu)化改進(jìn)mRNA-1777疫苗，得到編碼穩(wěn)定的預(yù)融合F蛋白的疫苗，主要結(jié)構(gòu)是利用脂質(zhì)納米顆粒(lipidnano-particle,LNP)包裹編碼預(yù)融合F蛋白全長的mRNA。2024年5月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)該疫苗用于保護(hù)60歲及以上成年人免受RSV引起的下呼吸道疾病[27],這是基于美國Moderna公司公布的初步臨床數(shù)據(jù)：針對(duì)≥60歲的成人的Ⅲ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，該疫苗對(duì)至少有2種RSV相關(guān)下呼吸道感染癥狀或體征的保護(hù)效力為83.7%,且具有良好的安全性[28],但近期公布的臨床數(shù)據(jù)也顯示該疫苗的功效較Arexvy減弱得更快[29]。目前正在針對(duì)2~18歲的兒童和有生育能力的女性進(jìn)行對(duì)兒童的核酸疫苗有效性及耐受性的數(shù)據(jù)公布，重組載體疫苗通過基因工程改造的復(fù)制缺陷型病毒載體系統(tǒng)，將RSV抗制。近年來，隨著腺病毒疫苗的開發(fā)，新的在2種COVID-19腺病毒載體疫苗中觀察到疫苗誘導(dǎo)的免疫性血栓性血小板減少[30]。因此，載體疫苗在開發(fā)過程中應(yīng)更加關(guān)注其安全性問題。目前常用的載體有腺病毒、副流感病毒等。ChAd155-RSV:英國GSK公司利用黑猩猩腺病毒-155(ChimpanzeeAdenovirus,ChAd155)載至病毒載體基因組，構(gòu)建出重組載體疫苗。在針對(duì)12~23月齡RSV血清陽性兒童的免疫原性研究中，該疫苗誘導(dǎo)的RSV特異性抗體滴度呈現(xiàn)劑量依賴性增長，且受試者耐受性良好[31]。2024年進(jìn)行的一項(xiàng)I/Ⅱ期隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)評(píng)估了ChAd155RSV在嬰兒中的安全性和免疫原性，結(jié)果顯示在接種后第31天、第61天和第1個(gè)RSV季節(jié)(平均隨訪7個(gè)月)結(jié)期積極數(shù)據(jù)，目前該疫苗已進(jìn)入針對(duì)RSV血清陰性嬰幼兒的Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段。BLB-201: