油脂化學(xué)檢驗

主講教師：王鳳玲農(nóng)產(chǎn)品食品檢驗員——油脂不皂化物的測定2油脂不皂化物測定學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解不皂化物的定義和測定原理2.熟悉不皂化物測定所需的儀器和用具3.能夠配制實驗所需試劑及藥品安全常識4.掌握測定操作和結(jié)果計算等技能5.根據(jù)檢驗結(jié)果，判斷油脂品質(zhì)。3油脂不皂化物測定相關(guān)知識1.油脂不皂化物的定義油脂不皂化物是指在油脂皂化時不與堿起作用，不溶于水的物質(zhì)。規(guī)定的操作條件下,試樣用氫氧化鉀皂化后的全部生成物，用一種特定的溶劑提取，蒸發(fā)溶劑，干燥后的殘留物。2.油脂中的不皂化物包括天然類脂物,如:甾醇、高分子脂肪醇及烯類化合物等。任何在103℃的溫度下被溶劑提取的不揮發(fā)的有機雜質(zhì)(如礦物油)。4油脂不皂化物測定相關(guān)知識3.測定方法我國動植物油脂國家標(biāo)準(zhǔn)中有兩種測定方法（1）GB/T5535.1—2008乙醚提取法（2）GB/T5535.2—2008己烷提取法

適用于所有油脂，不適用于蠟脂5油脂不皂化物的測定乙醚提取法

油脂與氫氧化鉀-乙醇溶液在煮沸回流情況

下進行皂化,用乙醚從皂化液中提取不皂化物,

蒸發(fā)溶劑并對殘留物干燥后稱量。

一.測定原理6油脂不皂化物的測定乙醚提取法二、試劑1.乙醚

不含過氧化物和殘留物。2.丙酮3.氫氧化鉀-乙醇溶液c(koH）≈1mol/L。

在50mL水中溶解60g氫氧化鉀,然后用乙醇

95%(體積分數(shù))稀釋至1L。溶液應(yīng)為無色或淺黃色。4.氫氧化鉀水溶液c(kOH)≈0.5mol/L。5.酚酞指示劑溶液10g/L的95%(體積分數(shù))乙醇溶液。7油脂不皂化物的測定乙醚提取法三.儀器與設(shè)備1.圓底燒瓶

帶標(biāo)準(zhǔn)磨口的250mL圓底燒瓶。2.回流冷凝管

具有與燒瓶配套的磨口。3.500mL分液漏斗使用聚四氟乙烯活塞和塞子。4.水浴鍋5.電烘箱

可控制溫度在(103±2)℃。8油脂不皂化物的測定乙醚提取法四.操作流程稱樣→加氫氧化鉀-乙醇溶液→回流皂化→加水旋搖→冷卻→轉(zhuǎn)移→提取→洗滌乙醚提取液→蒸發(fā)溶劑→殘留物干燥→稱量→結(jié)果計算9油脂不皂化物的測定乙醚提取法五.測定步驟1.稱樣稱取約5g試樣,精確至0.01g，放入250mL燒瓶中。2.皂化

加50mL氫氧化鉀乙醇溶液和一些沸石。將燒瓶與回流冷凝管連接好后煮沸回流1h。停止加熱，從回流管頂部加100mL水并旋轉(zhuǎn)搖動。如果提取的不皂化物用于測定生育酚,則必須添加聯(lián)苯三酚且盡快地完成操作(30min以內(nèi))。10油脂不皂化物的測定乙醚提取法3.不皂化物的提取冷卻后轉(zhuǎn)移皂化液到500mL分液漏斗，用100mL乙醚分幾次洗滌燒瓶和沸石，并將洗滌液倒入分液漏斗。蓋好塞子,倒轉(zhuǎn)分液漏斗，用力搖1min，小心打開活塞,間歇地釋放內(nèi)部壓力。靜置分層后,將下層皂液盡量完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，可加少量乙醇或濃氫氧化鉀或氯化鈉溶液進行破乳。采用相同的方法,每次用100mL乙醚再提取皂化液兩次，收集3次乙醚提取液放入裝有40mL水的分液漏斗中。11油脂不皂化物的測定乙醚提取法4.乙醚提取液的洗滌

輕輕轉(zhuǎn)動裝有提取液和40mL水的分液漏斗。

(劇烈的搖動可能會形成乳化液）等到完全分層后棄去下面水層。用40mL水再洗滌乙醚溶液兩次，每次都要劇烈振搖。且在分層后棄去下面水層。

排出洗滌液時需留2mL,然后沿其軸線旋轉(zhuǎn)分液漏斗,等待幾分鐘讓保留的水層分離。棄去水層，當(dāng)乙醚溶液到達旋塞口時關(guān)閉旋塞。12油脂不皂化物的測定乙醚提取法用40mL氫氧化鉀水溶液、40mL水相連續(xù)洗滌乙醚溶液后，再用40mL氫氧化鉀水溶液進行洗滌，然后用40m水洗滌至少兩次以上。繼續(xù)用水洗滌,直到加入1滴酚酞溶液至洗滌液后,不再呈粉紅色為止。13油脂不皂化物的測定乙醚提取法

5.蒸發(fā)溶劑

通過分液漏斗的上口，小心地將乙醚溶液全部轉(zhuǎn)移至250mL燒瓶中,此燒瓶需預(yù)先于(103士2)℃的烘箱中干燥,冷卻后稱量,精確至0.1mg，在沸水浴上蒸餾回收溶劑。加入5mL丙酮,在沸水浴上轉(zhuǎn)動時傾斜握住燒瓶,在緩緩的空氣流下，將揮發(fā)性溶劑完全蒸發(fā)。14油脂不皂化物的測定乙醚提取法6.殘留物的干燥和測定（1）將燒瓶水平放置在(103士2)℃的烘箱中,干燥15min。然后放在干燥器中冷卻，取出稱量，精確至0.1mg。

按上述方法間隔15min重復(fù)干燥,直至兩次稱量質(zhì)量相差不超過1.5mg。如果3次干燥后還不恒質(zhì),則不皂化物可能被污染,需重新進行測定。15油脂不皂化物的測定乙醚提取法（2）當(dāng)需要對殘留物中的游離脂肪酸進行校正時，將稱量后的殘留物溶于4mL乙醚中，然后加入20mL預(yù)先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇。用0.1mol/L氫氧化鉀-乙醇溶液滴定到相同的終點顏色。以油酸來計算游離脂肪酸的質(zhì)量,并以此校正殘留物的質(zhì)量。16

油脂不皂化物的測定乙醚提取法7.測定次數(shù)：同一試樣需進行兩次測定。8.空白試驗用相同的步驟及相同量的所有試劑，但不加試樣進行空白試驗，如果殘留物超過1.5mg,需對試劑和方法進行檢查。17油脂不皂化物的測定乙醚提取法

18油脂不皂化物的測定乙醚提取法m3----游離脂肪酸的質(zhì)量如果需要,等于0.28VC，g;

其中:V----滴定所用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鉀乙醇溶液的體積,mL;C----氫氧化鉀-乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度,mol/L;19油脂不皂化物的測定己烷提取法

油脂與氫氧化鉀-乙醇溶液在煮沸回流情況

下進行皂化,用己烷或石油醚從肥皂液中提取

不皂物,蒸發(fā)溶劑并對殘留物干燥后稱量。

一.測定原理20油脂不皂化物的測定己烷提取法二.試劑1.正已烷或沸程40~60℃的石油醚。溴價低于1,且不得含有雜質(zhì)。2.10%(體積分數(shù))乙醇溶液3.酚酞指示劑10g/L的95%(體積分數(shù))乙醇溶液。4.氫氧化鉀-乙醇溶液c（KOH）≈lmol/L。在50mL水中溶解60g氫氧化鉀然后95%(體積分數(shù))乙醇稀釋至1000mL。溶液應(yīng)為無色或淺黃色。21油脂不皂化物的測定己烷提取法三.儀器與設(shè)備1.圓底燒瓶

帶標(biāo)準(zhǔn)磨口的250mL圓底燒瓶。2.回流冷凝管

具有與燒瓶配套的磨口。3.500mL分液漏斗使用聚四氟乙烯活塞和塞子。4.恒溫水浴鍋5.電烘箱

可控制溫度在(103±2)℃。22油脂不皂化物的測定己烷提取法測定步驟1.取樣

稱約5g試樣,精確至0.01g,放入

250mL燒瓶中。2.試樣皂化

試樣中加50mL氫氧化鉀溶液和一些沸石,燒瓶與回流冷凝管連接好后煮沸,回流1h。停止加熱，從回流管頂部加50mL.水并旋轉(zhuǎn)搖動。23油脂不皂化物的測定己烷提取法3.不皂化物的提取冷卻后轉(zhuǎn)移皂化液到250mL分液漏斗,用

50mL己烷分幾次洗滌燒瓶和沸石,并將洗滌液倒入分液漏斗。蓋好塞子,用力搖1min,倒轉(zhuǎn)分液漏斗，小心打開旋塞,間歇地釋放內(nèi)壓。靜置分液漏斗,至溶液分層后,盡量將下層皂液放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液,可加少量乙醇或濃氫氧化鉀或氯化鈉溶液進行破乳。24油脂不皂化物的測定己烷醚提取法用相同的方法,每次用50mL己烷對皂化液再提取兩次。3次已烷提取液收集在同一分液漏斗中。25油脂不皂化物的測定己烷醚提取法4.己烷提取物的洗滌用乙醇溶液洗滌提取液3次,每次用量25mL,并劇烈搖動,洗滌后棄去乙醇水溶液,每次棄去洗滌液后,保持分液漏斗中剩2mL洗滌液,然后將分液漏斗沿其軸線旋轉(zhuǎn)。靜置數(shù)分鐘,使剩余的乙醇水相進一步分離,然后棄去。當(dāng)己烷溶液到達旋塞孔道時關(guān)閉旋塞。繼續(xù)用乙醇水溶液洗滌。26油脂不皂化物的測定己烷醚提取法等到完全分層后棄去下面水層。用40mL水再洗滌乙醚溶液兩次，每次都要劇烈振搖，且在分層后棄去下面水層。排出洗滌液時需留2mL，然后沿其軸線旋轉(zhuǎn)分液漏斗，等待幾分鐘讓保留的水層分離。棄去水層，直到洗滌液加人1滴酚酞溶液后不呈現(xiàn)粉紅色為止。27油脂不皂化物的測定己烷醚提取法5.蒸發(fā)溶劑通過分液漏斗的上口小心地將溶液轉(zhuǎn)移到準(zhǔn)確稱量至0.1mg的250mL燒瓶中,燒瓶需預(yù)先于103℃的烘箱中干燥冷卻后稱量。在沸水浴中蒸發(fā)溶劑。28油脂不皂化物的測定己烷醚提取法6.殘留物的干燥和測定將燒瓶水平放置在103℃的烘箱中,干燥殘留物15min之后。在干燥器中冷卻,并精確稱量至0.lmg。重復(fù)進行干燥,直至兩次稱量的質(zhì)量相差不超過15mg。如果3次干燥后還不恒質(zhì),則不皂化物可能被污染,需重新進行測定。29

油脂不皂化物的測定己烷醚提取法若需用游離脂肪酸進行校正,則將稱量后的

殘留物溶于4mL正己烷中,然后加入20mL預(yù)先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇。用0.1mol/L氫氧化鉀-乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到終點。30油脂不皂化物的測定己烷醚提取法以油酸來計算游離脂肪酸的質(zhì)量,并以此校正殘留物的質(zhì)量。同一試樣需進行2次測定。需進行一個空白試驗,用相同的步驟及相同量的所有試劑，但不加試樣。如果殘留物超過1.5mg，需檢查測定方法和試劑。31油脂不皂化物的測定己烷提取法

32油脂不皂化物的測定己烷提取法其中:V----滴定所用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鉀乙

醇溶液的體積,mL;C--氫氧化鉀-乙醇標(biāo)