廣東醫(yī)學院2003級

碩士研究生開題報告

研究生：鄧飛導師：胡新榮教授時間：2004年10月22日

立題依據(jù)腫瘤的發(fā)生是一個多因素、多步驟的長期過程，其中多個基因的改變導致細胞周期失調(diào)，細胞增殖失控在腫瘤形成的過程中發(fā)揮了重要作用。p16基因又稱MTS1〔多腫瘤抑制基因〕是人們發(fā)現(xiàn)的第一個直接作用于細胞周期，抑制細胞分裂的基因。p16在諸多腫瘤中的改變，使它在腫瘤發(fā)生中的作用日益受到人們的重視。一、p16的基因結(jié)構(gòu)和功能

1、p16的基因結(jié)構(gòu)

p16基因定位于9p21，全長8.5kb，由三個外顯子和兩個內(nèi)含子構(gòu)成，三個外顯子的長度分別為126、307、11bp，其cDNA全長450bp。p16基因啟動子和外顯子1、2含有多個可甲基化的5’－CpG島。p16基因編碼產(chǎn)物p16蛋白，由148個氨基酸構(gòu)成，為16kd2、p16的功能RBE2FRBPPPPE2FINK4Ap16cyclinD1CDK4/6PCDKcyclinD1CDK4/6cyclinD1CDK4/6CDK4/6P競爭性抑制二、p16與腫瘤

研究說明，p16基因的缺失、突變和甲基化存在于多種人腫瘤細胞，提示其與腫瘤的發(fā)生、開展有著密切的關系。p16除了調(diào)節(jié)細胞周期，抑制細胞異常增殖以外，還與腫瘤細胞中端粒酶活性的調(diào)節(jié)和腫瘤細胞的永生化有關。

大量的實驗證據(jù)使人們相信在大多數(shù)腫瘤中p16扮演者抑癌基因的角色。以上問題迄今為止，都還沒有得到滿意合理的解釋，國內(nèi)也缺乏此類相關研究。本實這些驗即是針對以上問題展開初步的探討。實驗目的

擬解決的關鍵問題擬采取的研究方法一、臨床實驗1、p16表達的檢測：臨床病例標本切片、HE同一組織來源不同組織來源癌前病變癌前病變p16P16的表達趨勢圖像分析IHC2、p16功能檢測提取組織塊中的蛋白質(zhì)p16-CDK4/6

pRb-P

比照不同組結(jié)果，研究p16表達與pRb磷酸化的關系比照不同組的結(jié)果，研究p16表達升高對其功能的影響。CO-IP、westernIPwestern二、體外實驗篩選CyclinD1-CDK4/6pRb-P

CyclinD1-CDK4/6pRb-PCO-IP、IP、western-blot

比照分析得出結(jié)論siRNA腺病毒轉(zhuǎn)染預期結(jié)果

進度安排

2004.10－2005.7臨床病理標本的收集。細胞系的篩選，細胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后篩選。2005.8－2006.1IHC、CO-IP、IP、western-blot。2006.2－2006.4結(jié)果分析，撰寫論文，準備辯論。經(jīng)費預算

免疫組化2000元免疫沉淀5000元Western-blot3000元細胞培養(yǎng)