有限公司Co.,Ltd.文件名稱文件編號(hào)潔凈區(qū)表面微生物檢測(cè)規(guī)程版本狀態(tài)V1.4頁(yè)碼第3頁(yè)有限公司Co.,Ltd.潔凈區(qū)表面微生物檢測(cè)規(guī)程文件編號(hào)：HM-WI-SYS-0018版次：V1.4生效日期：20XX年6月28日分發(fā)號(hào)：文件變更記錄序號(hào)更改原因更改內(nèi)容更改后版本更改人/日期1新編制全部V1.02第一次修改增加采樣表面的分類與頻次V1.13第二次修改修改4.2測(cè)試計(jì)劃V1.24第三次修改格式調(diào)整V1.35第四次修改采樣方式增加直接采樣方式V1.4潔凈區(qū)表面微生物檢測(cè)規(guī)程目的：建立表面微生物監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序，便于更準(zhǔn)確的掌握潔凈室微生物的負(fù)荷情況，為生產(chǎn)合格產(chǎn)品和檢驗(yàn)準(zhǔn)確性提供保障。范圍：適用于潔凈區(qū)表面、設(shè)備以及與產(chǎn)品接觸表面的微生物負(fù)載的測(cè)試，包括人員表面微生物的監(jiān)測(cè)。職責(zé)：質(zhì)管部門制定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)，檢驗(yàn)室檢驗(yàn)人員嚴(yán)格按本文件操作，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性負(fù)責(zé)。內(nèi)容：4.1試驗(yàn)儀器與試劑4.1.1所用儀器250mL的錐形瓶、高壓蒸汽滅菌器、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、天平、培養(yǎng)皿（φ=9cm）。與培養(yǎng)基接觸的錐形瓶、培養(yǎng)皿和其他器具在使用前用壓力蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌（參數(shù)：103.4Ka，121℃，30min）。4.1.2所用培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：按需求量配制培養(yǎng)基，在培養(yǎng)要求的條件下在高壓蒸汽滅菌器中滅菌，并在微生物無(wú)菌室潔凈操作臺(tái)內(nèi)冷卻至約45℃，將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15～20mL，待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，即可供采樣用。4.2測(cè)試計(jì)劃4.2.1所采樣表面的分類根據(jù)潔凈區(qū)內(nèi)設(shè)施、設(shè)備等表面對(duì)產(chǎn)品和潔凈室環(huán)境的影響程度，將表面分為兩類：1）關(guān)鍵表面（與產(chǎn)品直接接觸的表面）：?jiǎn)T工手指、操作臺(tái)（流水線）、傳送帶、擠管機(jī)內(nèi)表面；2）一般表面（不與產(chǎn)品直接接觸，但會(huì)影響產(chǎn)品和環(huán)境的表面）：注塑機(jī)表面。4.2.2測(cè)試頻率1）關(guān)鍵表面、一般表面：每月測(cè)試一次。4.2.3取樣點(diǎn)潔凈車間的取樣點(diǎn)如下：1）員工手指：3個(gè)點(diǎn)/每次4）擠管機(jī)內(nèi)表面：3個(gè)點(diǎn)/每次2）操作臺(tái)（流水線）：3個(gè)點(diǎn)/每次5）注塑機(jī)表面：3個(gè)點(diǎn)/每次3）傳送帶：3個(gè)點(diǎn)/每次6）：微生物實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái):3個(gè)點(diǎn)/每次備注：不宜每次固定在同一點(diǎn)取樣，表面微生物取樣面積宜控制在25cm2（5cm×5cm）左右。4.3測(cè)試方法4.3.1采樣方法4.3.1.1物體表面：取無(wú)菌棉簽1支，用無(wú)菌的0.9%氯化鈉溶液浸濕，握住棉簽柄，在取樣點(diǎn)處選擇約為25cm2取樣面上，以30°傾斜角與取樣表面接觸，縱向緩慢并充分擦拭，反轉(zhuǎn)棉簽，同法橫向擦拭（見(jiàn)下圖）；或使用微生物接觸碟直接于需檢測(cè)的物體表面進(jìn)行直接接觸采樣。4.3.1.2生產(chǎn)人員手表面：隨機(jī)抽取生產(chǎn)人員A、B、C（代號(hào)）3人，被測(cè)人五指并攏，將浸有滅菌生理鹽水的棉拭子在右手指曲面，從指尖、甲溝至指根處往返涂抹10次，或使用微生物接觸碟直接于需檢測(cè)的物體表面進(jìn)行直接接觸采樣。4.3.2供試品溶液制備：按照4.3.1描述的取樣方法取樣后將棉簽擦拭端用無(wú)菌剪刀剪斷置于10mL的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，左右震搖30min，做好標(biāo)識(shí)，作為供試品溶液。4.3.3檢驗(yàn)方法：取全部供試品溶液，混勻，以10倍稀釋，然后用移液槍吸取稀釋液1mL于平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（TSA）平皿上，置于30～35℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天，觀察結(jié)果，取菌落數(shù)為1→100的平板計(jì)算，求出平均菌落數(shù)；若使用接觸碟采樣后直接可置于30～35℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天，觀察結(jié)果，記錄菌落數(shù)（直接采樣無(wú)稀釋倍數(shù)）。4.3.4陰性對(duì)照組制備：取0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10mL代替供試品溶液，其它操作同4.3.3。4.3.5菌數(shù)計(jì)數(shù)：菌數(shù)/cm2=平均菌數(shù)×稀釋倍數(shù)采樣面積（cm2）菌數(shù)/每只手＝平均菌數(shù)×稀釋倍數(shù)4.4結(jié)果判斷和措施要求4.4.1要求值：潔凈度級(jí)別表面微生物物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/25cm2）人員手菌落總數(shù)（cfu/皿）潔凈度級(jí)別要求值行動(dòng)限警戒線要求值行動(dòng)限警戒線百級(jí)/A級(jí)≤111≤111萬(wàn)級(jí)/C級(jí)≤554≤554十萬(wàn)級(jí)/D級(jí)≤504540≤3002802504.4.2結(jié)果評(píng)定和措施要求1）物體表面及生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù)低于要求值時(shí)為合格。2）物體表面及生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù)超過(guò)警報(bào)限值時(shí)，要求進(jìn)行調(diào)查研究，采取措施保證過(guò)程和環(huán)境處于受控狀態(tài)下。3）物體表面及生