ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞免疫調(diào)節(jié)功能的影響與機制探究一、引言1.1研究背景與意義免疫系統(tǒng)作為人體抵御病原體入侵、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的關(guān)鍵防線，一直是生物學和醫(yī)學領域的研究重點。在這個復雜而精妙的系統(tǒng)中，樹突狀細胞（DendriticCells，DC）扮演著舉足輕重的角色，堪稱免疫系統(tǒng)的“指揮官”。DC是目前已知功能最為強大的專職抗原呈遞細胞（Antigen-PresentingCells，APC），廣泛分布于機體的各種組織和器官中，如皮膚、黏膜、淋巴組織等。其獨特的生物學特性使其能夠高效地攝取、加工和呈遞抗原，進而啟動和調(diào)控免疫應答，在固有免疫和適應性免疫中均發(fā)揮著不可或缺的橋梁作用。在免疫應答的啟動階段，未成熟的DC憑借其強大的吞噬、吞飲和受體介導的內(nèi)吞作用，廣泛攝取各種病原體、腫瘤抗原以及自身抗原等。隨后，在受到病原體相關(guān)分子模式（Pathogen-AssociatedMolecularPatterns，PAMPs）、損傷相關(guān)分子模式（Damage-AssociatedMolecularPatterns，DAMPs）或細胞因子等信號刺激后，DC逐漸成熟。成熟的DC表面會發(fā)生一系列顯著變化，包括主要組織相容性復合體（MajorHistocompatibilityComplex，MHC）分子、共刺激分子（如CD80、CD86等）以及黏附分子的表達上調(diào)，同時其吞噬能力下降，而抗原呈遞和激活T細胞的能力則大幅增強。通過將抗原肽-MHC復合物呈遞給初始T細胞，并提供共刺激信號和細胞因子等輔助信號，DC能夠高效地激活初始T細胞，使其分化為效應T細胞和記憶T細胞，從而引發(fā)特異性的細胞免疫應答；此外，DC還可以通過與B細胞相互作用，促進B細胞的活化、增殖和分化，產(chǎn)生抗體，介導體液免疫應答?？烧T導共刺激分子（InducibleTcellCostimulator，ICOS）及其配體（ICOSLigand，ICOSL）組成的ICOS/ICOSL信號通路，在免疫調(diào)節(jié)領域同樣備受關(guān)注。ICOS屬于CD28超家族成員，主要表達于活化的T細胞表面；而ICOSL則屬于B7家族成員，廣泛表達于多種免疫細胞和非免疫細胞，在淋巴組織中主要表達于B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等抗原呈遞細胞表面。當ICOS與ICOSL相互結(jié)合時，會觸發(fā)一系列下游信號轉(zhuǎn)導事件，進而對T細胞的增殖、存活、分化以及細胞因子的分泌等產(chǎn)生重要調(diào)節(jié)作用。在T細胞介導的免疫應答中，ICOS/ICOSL信號作為T細胞活化的第二信號，協(xié)同T細胞受體（TcellReceptor，TCR）信號，能夠顯著增強T細胞的活化和增殖能力，促進效應T細胞的功能發(fā)揮，同時也參與調(diào)節(jié)性T細胞（RegulatoryTcells，Tregs）的分化和功能維持。ICOS/ICOSL信號與DC之間存在著緊密而復雜的聯(lián)系。一方面，DC表面表達的ICOSL可以與T細胞表面的ICOS結(jié)合，為T細胞提供共刺激信號，從而調(diào)節(jié)T細胞介導的免疫應答，這在正常免疫防御和免疫耐受的維持中起著關(guān)鍵作用。例如，在感染或腫瘤發(fā)生時，DC通過ICOS/ICOSL信號激活T細胞，增強免疫細胞對病原體或腫瘤細胞的殺傷能力；而在自身免疫性疾病中，異常激活的ICOS/ICOSL信號可能導致過度的免疫反應，引發(fā)組織損傷。另一方面，ICOS/ICOSL信號對DC自身的生物學功能也具有重要調(diào)節(jié)作用，包括DC的成熟、遷移、抗原呈遞能力以及細胞因子的分泌等。然而，目前關(guān)于ICOS/ICOSL逆向信號（即從T細胞到DC的信號傳導）如何調(diào)控DC生物學功能的具體分子機制和生物學效應，仍存在許多未知之處，亟待深入研究。深入探究ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC生物學功能的機制，具有重要的理論意義和潛在的臨床應用價值。從理論層面來看，這將有助于我們更加全面、深入地理解免疫調(diào)節(jié)的分子機制和細胞間相互作用網(wǎng)絡，填補該領域在這一方向上的知識空白，為免疫學理論的發(fā)展提供新的視角和依據(jù)。從臨床應用角度而言，該研究成果有望為多種疾病的治療提供新的策略和靶點。例如，在腫瘤免疫治療中，通過調(diào)節(jié)ICOS/ICOSL逆向信號，可以增強DC的抗原呈遞能力和激活T細胞的功能，從而提高機體的抗腫瘤免疫應答，為腫瘤的免疫治療開辟新的途徑；在自身免疫性疾病和移植免疫中，通過干預ICOS/ICOSL逆向信號，可以抑制過度激活的免疫反應，誘導免疫耐受，減輕組織損傷，為這些疾病的治療提供新的思路和方法。1.2研究目的與主要內(nèi)容本研究旨在深入揭示ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞（DC）生物學功能的調(diào)控機制，為免疫調(diào)節(jié)理論的發(fā)展提供新的理論依據(jù)，并為相關(guān)疾病的治療提供潛在的新靶點和新思路。具體研究內(nèi)容主要涵蓋以下幾個方面：首先，探究ICOS/ICOSL逆向信號對DC生物學特性的影響，包括DC的成熟、遷移、抗原攝取和呈遞能力等。通過體外實驗，利用基因編輯技術(shù)敲低或過表達DC中的ICOSL，觀察DC在形態(tài)、表面標志物表達以及功能上的變化；在體內(nèi)實驗中，構(gòu)建ICOS/ICOSL信號缺陷的動物模型，研究DC在不同組織中的分布、成熟狀態(tài)以及與其他免疫細胞的相互作用，以此全面了解ICOS/ICOSL逆向信號對DC生物學特性的調(diào)控作用。其次，剖析ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能的相關(guān)信號通路及分子機制。采用蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）、免疫共沉淀（Co-IP）等技術(shù)，檢測在ICOS/ICOSL逆向信號刺激下，DC內(nèi)相關(guān)信號分子的磷酸化水平、蛋白表達變化以及分子間的相互作用，從而明確參與該調(diào)控過程的關(guān)鍵信號通路和分子節(jié)點。進一步利用小分子抑制劑或激動劑，干預關(guān)鍵信號通路，驗證其在ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能中的作用。最后，探討ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用及潛在應用價值。以腫瘤、自身免疫性疾病等為研究對象，分析ICOS/ICOSL逆向信號在疾病微環(huán)境中對DC功能的影響，以及這種影響如何進一步調(diào)節(jié)機體的免疫應答，從而促進或抑制疾病的發(fā)展?；谘芯拷Y(jié)果，探索通過調(diào)節(jié)ICOS/ICOSL逆向信號來干預DC功能，進而為這些疾病的治療提供新的策略和方法，如開發(fā)針對ICOS/ICOSL信號通路的靶向藥物，或設計基于DC的免疫治療方案等。1.3研究方法與技術(shù)路線1.3.1研究方法細胞培養(yǎng)技術(shù)：利用體外細胞培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）和人外周血來源的樹突狀細胞（hPBDCs）。在培養(yǎng)過程中，嚴格控制細胞培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基的選擇、血清的添加、細胞因子的使用以及培養(yǎng)環(huán)境的溫度、濕度和二氧化碳濃度等，以確保細胞的正常生長和功能。例如，培養(yǎng)BMDCs時，常用含有重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重組小鼠白細胞介素4（rmIL-4）的RPMI1640培養(yǎng)基；培養(yǎng)hPBDCs時，則使用含有重組人GM-CSF和重組人IL-4的X-VIVO15培養(yǎng)基。通過不同的細胞培養(yǎng)體系，研究ICOS/ICOSL逆向信號對不同來源DC生物學功能的影響。流式細胞術(shù)：運用流式細胞術(shù)，檢測DC表面標志物的表達情況，如MHC-I、MHC-II、CD80、CD86、CD40等共刺激分子以及ICOSL的表達水平，以此評估DC的成熟狀態(tài)；同時，還可以檢測DC攝取熒光標記抗原的能力，以及DC與T細胞共培養(yǎng)后T細胞的活化和增殖情況，通過檢測T細胞表面的活化標志物（如CD69、CD25等）和增殖標志物（如Ki-67）來實現(xiàn)。例如，將DC與熒光標記的OVA抗原共孵育，然后通過流式細胞術(shù)分析DC對OVA的攝取量；將DC與T細胞共培養(yǎng)一定時間后，用相應的抗體標記T細胞表面標志物，再通過流式細胞術(shù)檢測其表達水平，從而了解ICOS/ICOSL逆向信號對DC抗原攝取和呈遞能力以及T細胞活化的影響?；蚓庉嫾夹g(shù)：采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，對DC中的ICOSL基因進行敲低或過表達操作。設計針對ICOSL基因的特異性sgRNA，構(gòu)建CRISPR/Cas9載體，通過電穿孔或病毒轉(zhuǎn)染等方法將載體導入DC中，實現(xiàn)對ICOSL基因的精準編輯。利用基因編輯后的DC，研究ICOS/ICOSL逆向信號缺失或增強對DC生物學功能的影響，為深入探究其調(diào)控機制提供細胞模型。例如，通過檢測敲低ICOSL基因后DC表面共刺激分子的表達變化、細胞因子的分泌情況以及與T細胞相互作用的改變，明確ICOSL在DC功能調(diào)控中的關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）：運用WesternBlot技術(shù)，檢測在ICOS/ICOSL逆向信號刺激下，DC內(nèi)相關(guān)信號分子的磷酸化水平和蛋白表達變化，如PI3K、AKT、ERK、NF-κB等信號通路中的關(guān)鍵分子。提取DC總蛋白，進行SDS-PAGE電泳分離，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用特異性抗體進行免疫印跡檢測，通過化學發(fā)光法或顯色法檢測目的蛋白條帶，分析信號分子的激活狀態(tài)和表達差異，從而揭示ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能的分子機制。例如，比較正常DC和ICOS/ICOSL逆向信號激活的DC中PI3K和AKT的磷酸化水平，探究該信號通路在DC功能調(diào)控中的作用。免疫共沉淀（Co-IP）：利用免疫共沉淀技術(shù)，研究ICOS/ICOSL逆向信號刺激下，DC內(nèi)分子間的相互作用。將DC裂解后，加入針對目的蛋白的抗體，與相應的抗原形成免疫復合物，再加入ProteinA/G磁珠或瓊脂糖珠，使免疫復合物沉淀下來，通過WesternBlot檢測與目的蛋白相互作用的其他蛋白。例如，以ICOSL為誘餌蛋白，通過免疫共沉淀篩選與之相互作用的蛋白，進一步分析這些蛋白在ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能中的作用機制。動物實驗：構(gòu)建ICOS/ICOSL信號缺陷的小鼠模型，如ICOS基因敲除小鼠（ICOS-KO小鼠）和ICOSL基因敲除小鼠（ICOSL-KO小鼠），以及相應的野生型對照小鼠。通過體內(nèi)實驗，研究ICOS/ICOSL逆向信號對DC在不同組織中的分布、成熟狀態(tài)以及與其他免疫細胞相互作用的影響。例如，將熒光標記的DC注射到小鼠體內(nèi)，通過活體成像技術(shù)觀察DC在體內(nèi)的遷移和分布情況；提取小鼠不同組織中的DC，通過流式細胞術(shù)和免疫組化等方法分析其成熟狀態(tài)和與其他免疫細胞的相互作用，從而全面了解ICOS/ICOSL逆向信號在體內(nèi)對DC生物學功能的調(diào)控作用。同時，還可以利用這些動物模型，研究ICOS/ICOSL逆向信號調(diào)控DC功能在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，如建立腫瘤模型和自身免疫性疾病模型，觀察ICOS/ICOSL信號缺陷對疾病進程的影響。1.3.2技術(shù)路線本研究的技術(shù)路線如圖1所示，首先通過細胞培養(yǎng)技術(shù)獲取小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）和人外周血來源的樹突狀細胞（hPBDCs），利用基因編輯技術(shù)對DC中的ICOSL基因進行敲低或過表達操作，構(gòu)建ICOS/ICOSL信號改變的DC模型。然后，運用流式細胞術(shù)檢測DC表面標志物的表達、抗原攝取能力以及與T細胞共培養(yǎng)后T細胞的活化和增殖情況，評估ICOS/ICOSL逆向信號對DC生物學特性的影響。同時，采用蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）和免疫共沉淀（Co-IP）技術(shù)，深入分析ICOS/ICOSL逆向信號刺激下DC內(nèi)相關(guān)信號通路的激活和分子間的相互作用，揭示其調(diào)控DC功能的分子機制。最后，構(gòu)建ICOS/ICOSL信號缺陷的小鼠模型，通過體內(nèi)實驗研究ICOS/ICOSL逆向信號對DC在體內(nèi)的分布、成熟以及與其他免疫細胞相互作用的影響，并探討其在腫瘤、自身免疫性疾病等疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，為相關(guān)疾病的治療提供理論依據(jù)和潛在靶點。[此處插入技術(shù)路線圖，圖中清晰展示從細胞培養(yǎng)、基因編輯、細胞功能檢測、信號通路分析到動物實驗的整個研究流程，各步驟之間用箭頭清晰連接，并標注關(guān)鍵實驗方法和預期結(jié)果]二、樹突狀細胞的生物學特性2.1DC的來源與分化樹突狀細胞（DC）起源于造血干細胞，在機體的免疫過程中，造血干細胞會經(jīng)歷一系列復雜且精細的分化過程，最終形成具有不同功能和特性的DC亞群，這一過程受到多種細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的嚴格調(diào)控。造血干細胞在分化過程中，主要存在兩條分化途徑，分別產(chǎn)生髓樣DC（myeloidDC，mDC）和淋巴樣DC（lymphoidDC，lDC）。其中，髓樣干細胞在粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）的刺激作用下，逐漸分化為髓樣DC。GM-CSF作為一種關(guān)鍵的細胞因子，能夠促進髓樣干細胞向mDC方向分化，調(diào)節(jié)細胞的增殖、存活和分化進程。髓樣DC與單核細胞和粒細胞有著共同的前體細胞，在其分化成熟過程中，還會受到其他細胞因子如白細胞介素4（IL-4）等的協(xié)同調(diào)節(jié)。IL-4可以進一步促進mDC的分化和成熟，調(diào)節(jié)其表面標志物的表達和功能特性。髓樣DC包括朗格漢斯細胞（Langerhanscells，LCs）、間皮（或真皮）DCs以及單核細胞衍生的DCs等，它們在皮膚、黏膜等組織中發(fā)揮著重要的免疫監(jiān)視和抗原攝取功能。例如，朗格漢斯細胞主要分布于皮膚表皮基底層和棘細胞之間，能夠高效攝取皮膚表面的病原體和抗原物質(zhì)，通過加工處理后將抗原信息傳遞給T細胞，啟動免疫應答。淋巴樣DC則來源于淋巴樣干細胞，與T細胞和NK細胞擁有共同的前體細胞。在分化過程中，淋巴樣干細胞在特定的細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的作用下，逐漸分化為淋巴樣DC。目前研究發(fā)現(xiàn)，干擾素調(diào)節(jié)因子8（IRF8）、堿性-亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子ATF-like3（BATF3）等轉(zhuǎn)錄因子在淋巴樣DC的分化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IRF8能夠調(diào)控淋巴樣DC的發(fā)育和功能相關(guān)基因的表達，影響其分化和成熟進程；BATF3則參與調(diào)節(jié)淋巴樣DC的特定亞群的分化和功能。淋巴樣DC又稱為漿細胞樣DC（plasmacytoiddendriticcells，pDC），它們主要分布于淋巴組織和外周血中，在病毒感染等免疫反應中，能夠快速分泌大量的I型干擾素，激活天然免疫應答和調(diào)節(jié)適應性免疫應答。當機體受到病毒入侵時，pDC能夠通過識別病毒相關(guān)分子模式，迅速啟動信號轉(zhuǎn)導通路，大量合成和分泌I型干擾素，如IFN-α和IFN-β，這些干擾素可以激活周圍細胞的抗病毒防御機制，同時還能調(diào)節(jié)T細胞和B細胞的活化和分化，增強機體的抗病毒免疫能力。2.2DC的分布與分類樹突狀細胞（DC）廣泛分布于全身除腦以外的各個組織和臟器，盡管其數(shù)量相對較少，僅占人外周血單個核細胞的1%，但卻在機體免疫防御中發(fā)揮著不可替代的關(guān)鍵作用。DC在不同組織和器官中的分布特點與機體的免疫需求密切相關(guān)，它們猶如免疫系統(tǒng)的“前哨”，時刻監(jiān)視著周圍環(huán)境中的抗原信息。在皮膚中，DC主要包括朗格漢斯細胞（Langerhanscells，LCs）和間質(zhì)DC。朗格漢斯細胞主要位于表皮基底層和棘細胞之間，其細胞表面具有豐富的Birbeck顆粒，這是一種獨特的細胞器，與朗格漢斯細胞的抗原攝取和加工功能密切相關(guān)。朗格漢斯細胞能夠高效攝取皮膚表面的病原體、異物抗原以及腫瘤抗原等，通過加工處理后將抗原信息傳遞給T細胞，啟動免疫應答。研究表明，當皮膚受到病毒感染時，朗格漢斯細胞可以迅速識別病毒相關(guān)分子模式，激活自身的信號轉(zhuǎn)導通路，攝取病毒抗原并遷移至局部淋巴結(jié)，將抗原呈遞給T細胞，從而引發(fā)抗病毒免疫反應。間質(zhì)DC則分布于真皮層的結(jié)締組織中，與朗格漢斯細胞相比，間質(zhì)DC具有更強的遷移能力和免疫調(diào)節(jié)功能。它們在皮膚的免疫監(jiān)視和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，能夠調(diào)節(jié)局部免疫微環(huán)境，維持皮膚的免疫平衡。在黏膜組織，如胃腸道、呼吸道和泌尿生殖道等，也存在著大量的DC。胃腸道黏膜中的DC主要包括派爾集合淋巴結(jié)（Peyer'spatches，PPs）中的DC和固有層中的DC。PPs中的DC能夠攝取腸道內(nèi)的抗原物質(zhì)，通過與T細胞和B細胞的相互作用，調(diào)節(jié)腸道黏膜的免疫應答，維持腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。固有層中的DC則可以識別腸道內(nèi)的共生菌和病原體，分泌細胞因子，調(diào)節(jié)免疫細胞的活化和增殖，防止腸道炎癥的發(fā)生。呼吸道黏膜中的DC在抵御呼吸道病原體感染中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它們能夠迅速攝取吸入的病原體抗原，激活免疫細胞，引發(fā)免疫應答，同時還可以調(diào)節(jié)免疫反應的強度，避免過度免疫反應對呼吸道組織造成損傷。淋巴組織是DC的重要聚集地之一，包括淋巴結(jié)、脾臟和胸腺等。在淋巴結(jié)中，DC主要分布于T細胞區(qū)和B細胞區(qū)。T細胞區(qū)的DC能夠?qū)z取的抗原呈遞給初始T細胞，激活T細胞的免疫應答；B細胞區(qū)的DC則與B細胞的活化、增殖和分化密切相關(guān)，促進抗體的產(chǎn)生。脾臟中的DC分為邊緣區(qū)DC和白髓DC。邊緣區(qū)DC位于脾臟的邊緣區(qū)，能夠快速識別血液中的病原體和抗原物質(zhì)，激活免疫細胞；白髓DC則主要分布于白髓的T細胞區(qū)和B細胞區(qū)，參與脾臟的免疫應答調(diào)節(jié)。胸腺中的DC在T細胞的發(fā)育和成熟過程中起著重要的選擇和教育作用，通過與胸腺細胞的相互作用，清除自身反應性T細胞，維持免疫系統(tǒng)的自身耐受。根據(jù)來源和功能的不同，DC可分為髓樣DC（myeloidDC，mDC）和淋巴樣DC（lymphoidDC，lDC）。髓樣DC又稱為常規(guī)DC（conventionalDC，cDC），來源于髓樣干細胞，與單核細胞和粒細胞有共同的前體細胞。髓樣DC具有較強的抗原攝取、加工和呈遞能力，能夠激活初始T細胞，啟動細胞免疫應答。其中，cDC1亞群高表達轉(zhuǎn)錄因子BATF3，主要通過交叉呈遞抗原激活CD8+T細胞，在抗病毒免疫和抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用；cDC2亞群則高表達轉(zhuǎn)錄因子IRF4，能夠激活CD4+T細胞，參與Th1、Th2和Th17等不同類型的免疫應答調(diào)節(jié)。淋巴樣DC又稱為漿細胞樣DC（plasmacytoiddendriticcells，pDC），來源于淋巴樣干細胞，與T細胞和NK細胞有共同的前體細胞。pDC的形態(tài)類似于漿細胞，其主要功能是在病毒感染等刺激下，迅速分泌大量的I型干擾素，激活天然免疫應答和調(diào)節(jié)適應性免疫應答。pDC表面表達Toll樣受體7（TLR7）和TLR9，能夠識別病毒的核酸成分，通過激活相關(guān)信號通路，誘導I型干擾素的產(chǎn)生。此外，pDC還可以通過與其他免疫細胞的相互作用，調(diào)節(jié)免疫細胞的功能和免疫應答的方向。2.3DC的功能2.3.1抗原攝取與加工樹突狀細胞（DC）具備多種高效攝取抗原的方式，主要包括吞噬、胞飲和受體介導的內(nèi)吞作用，這些方式使得DC能夠廣泛攝取各種類型的抗原，從而啟動免疫應答。吞噬作用是DC攝取較大顆粒性抗原的重要方式，如細菌、病毒感染的細胞或腫瘤細胞等。DC通過伸出偽足將抗原包裹并攝入細胞內(nèi)，形成吞噬體。在吞噬過程中，DC表面的一些受體，如Fc受體、補體受體等發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Fc受體可以識別并結(jié)合抗體-抗原復合物，補體受體則能結(jié)合補體調(diào)理過的抗原，從而增強DC對這些抗原的吞噬效率。研究表明，當機體受到金黃色葡萄球菌感染時，DC表面的Fc受體能夠識別結(jié)合了抗金黃色葡萄球菌抗體的細菌，迅速啟動吞噬作用，將細菌攝入細胞內(nèi)進行處理。胞飲作用則是DC攝取液體和小分子可溶性抗原的主要途徑。DC通過細胞膜的內(nèi)陷，形成微小的胞飲小泡，將周圍環(huán)境中的液體和其中溶解的抗原一并攝入細胞內(nèi)。這種方式使得DC能夠持續(xù)地攝取周圍環(huán)境中的抗原信息，對維持機體的免疫監(jiān)視功能具有重要意義。例如，在炎癥部位，DC通過胞飲作用攝取炎癥介質(zhì)和病原體釋放的可溶性抗原，為后續(xù)的免疫應答提供抗原信息。受體介導的內(nèi)吞作用是DC攝取抗原的一種高度特異性方式。DC表面表達多種特異性受體，如甘露糖受體、Toll樣受體（TLRs）等，這些受體能夠特異性地識別病原體表面的特定分子結(jié)構(gòu)，即病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）。當受體與相應的PAMPs結(jié)合后，會引發(fā)細胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)吞小泡，將抗原攝入細胞內(nèi)。甘露糖受體可以識別病原體表面富含甘露糖的糖蛋白，TLRs則能識別細菌的脂多糖、病毒的核酸等。以TLR4為例，當DC表面的TLR4識別到細菌脂多糖后，會激活下游的信號轉(zhuǎn)導通路，不僅促進抗原的攝取，還能誘導DC的成熟和活化，為后續(xù)的抗原呈遞和免疫應答啟動做好準備。在攝取抗原后，DC會對其進行一系列復雜而精細的加工處理過程。吞噬體或胞飲小泡與溶酶體融合，形成吞噬溶酶體，在吞噬溶酶體中，抗原被多種水解酶降解為小分子多肽片段。這些多肽片段隨后被轉(zhuǎn)運至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，與新合成的主要組織相容性復合體（MHC）Ⅱ類分子結(jié)合，形成抗原肽-MHCⅡ類分子復合物。MHCⅡ類分子的α鏈和β鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成后，與一種稱為恒定鏈（Ii）的分子結(jié)合，形成九聚體結(jié)構(gòu)。Ii鏈的作用是阻止MHCⅡ類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與內(nèi)源性抗原肽結(jié)合，同時引導MHCⅡ類分子轉(zhuǎn)運至內(nèi)體。在內(nèi)體中，Ii鏈被逐步降解，僅留下一小段稱為CLIP的片段與MHCⅡ類分子結(jié)合。此時，一種稱為HLA-DM的分子會促進CLIP與MHCⅡ類分子的解離，使抗原肽能夠與MHCⅡ類分子結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗原肽-MHCⅡ類分子復合物。這些復合物隨后被轉(zhuǎn)運至DC表面，供T細胞識別。對于內(nèi)源性抗原，如病毒感染細胞或腫瘤細胞內(nèi)產(chǎn)生的抗原，DC則通過MHCⅠ類分子途徑進行加工和呈遞。內(nèi)源性抗原在細胞內(nèi)被蛋白酶體降解為小分子多肽片段，這些片段通過抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運體（TAP）轉(zhuǎn)運至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，與新合成的MHCⅠ類分子結(jié)合，形成抗原肽-MHCⅠ類分子復合物。隨后，該復合物被轉(zhuǎn)運至細胞表面，供CD8+T細胞識別。這種MHCⅠ類分子途徑在細胞免疫中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，能夠激活CD8+T細胞，使其分化為細胞毒性T淋巴細胞（CTL），對病毒感染細胞或腫瘤細胞進行殺傷。2.3.2抗原呈遞與T細胞激活樹突狀細胞（DC）在攝取和加工抗原后，會將抗原信息呈遞給T細胞，這是啟動適應性免疫應答的關(guān)鍵步驟。DC通過表面的主要組織相容性復合體（MHC）分子與抗原肽形成復合物，將抗原呈遞給T細胞表面的T細胞受體（TCR），從而實現(xiàn)抗原的特異性識別。在MHCⅡ類分子途徑中，DC攝取外源性抗原后，將其加工處理成抗原肽，并與MHCⅡ類分子結(jié)合形成抗原肽-MHCⅡ類分子復合物。這些復合物被轉(zhuǎn)運至DC表面，與CD4+T細胞表面的TCR特異性結(jié)合。CD4+T細胞表面的CD4分子則與MHCⅡ類分子的非多態(tài)區(qū)結(jié)合，進一步穩(wěn)定TCR與抗原肽-MHCⅡ類分子復合物的相互作用。這種特異性結(jié)合為T細胞的活化提供了第一信號。研究表明，在感染流感病毒后，DC攝取流感病毒抗原，經(jīng)過加工處理后，將抗原肽-MHCⅡ類分子復合物呈遞給CD4+T細胞，激活CD4+T細胞，使其分化為輔助性T細胞（Th），并分泌細胞因子，調(diào)節(jié)免疫應答。對于內(nèi)源性抗原，DC通過MHCⅠ類分子途徑進行呈遞。病毒感染細胞或腫瘤細胞內(nèi)產(chǎn)生的內(nèi)源性抗原被蛋白酶體降解為抗原肽，通過抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運體（TAP）轉(zhuǎn)運至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，與MHCⅠ類分子結(jié)合形成抗原肽-MHCⅠ類分子復合物。該復合物被轉(zhuǎn)運至DC表面，與CD8+T細胞表面的TCR特異性結(jié)合。CD8+T細胞表面的CD8分子與MHCⅠ類分子的非多態(tài)區(qū)結(jié)合，增強TCR與抗原肽-MHCⅠ類分子復合物的相互作用。這一過程為CD8+T細胞的活化提供了第一信號。例如，在腫瘤免疫中，DC攝取腫瘤細胞釋放的內(nèi)源性腫瘤抗原，通過MHCⅠ類分子途徑呈遞給CD8+T細胞，激活CD8+T細胞分化為細胞毒性T淋巴細胞（CTL），對腫瘤細胞進行殺傷。然而，僅有第一信號不足以完全激活T細胞，還需要共刺激分子提供的第二信號。DC表面表達多種共刺激分子，如CD80（B7-1）、CD86（B7-2）、CD40等。其中，CD80和CD86是最重要的共刺激分子，它們與T細胞表面的CD28分子結(jié)合，提供T細胞活化所必需的第二信號。當DC表面的CD80或CD86與T細胞表面的CD28結(jié)合時，會激活T細胞內(nèi)的一系列信號轉(zhuǎn)導通路，促進T細胞的增殖、分化和細胞因子的分泌。研究發(fā)現(xiàn)，阻斷CD80/CD28或CD86/CD28信號通路，會導致T細胞活化受阻，免疫應答減弱。除了CD80和CD86，DC表面的CD40與T細胞表面的CD40L之間的相互作用也在T細胞激活中發(fā)揮著重要作用。CD40-CD40L相互作用不僅可以增強DC的活化和功能，還能促進DC分泌細胞因子，進一步調(diào)節(jié)T細胞的免疫應答。在感染過程中，DC表面的CD40與T細胞表面的CD40L結(jié)合后，DC會分泌更多的IL-12等細胞因子，促進Th1細胞的分化，增強細胞免疫應答。DC與T細胞之間的相互作用是一個動態(tài)而復雜的過程。在這個過程中，DC通過表面的黏附分子，如ICAM-1、ICAM-2等，與T細胞表面的相應配體結(jié)合，增強DC與T細胞之間的物理接觸。這種緊密的接觸有利于抗原肽-MHC復合物與TCR的相互作用，以及共刺激分子與相應受體的結(jié)合。同時，DC還會分泌趨化因子，吸引T細胞向其靠攏，進一步促進DC與T細胞的相互作用。例如，DC分泌的CCL19和CCL21等趨化因子，可以吸引表達CCR7的初始T細胞向DC所在部位遷移，增加DC與T細胞相遇和相互作用的機會。2.3.3免疫調(diào)節(jié)作用樹突狀細胞（DC）作為免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)細胞，通過分泌細胞因子和與其他免疫細胞相互作用，對免疫應答發(fā)揮著精細而復雜的調(diào)節(jié)作用，在維持免疫平衡和免疫耐受方面起著不可或缺的作用。DC分泌的細胞因子在免疫應答的調(diào)節(jié)中扮演著核心角色。不同類型的DC在不同的刺激條件下，會分泌不同種類和水平的細胞因子，從而引導免疫應答向不同的方向發(fā)展。當DC受到病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）或損傷相關(guān)分子模式（DAMPs）的刺激時，會分泌以白細胞介素12（IL-12）為主的細胞因子。IL-12能夠誘導初始T細胞向Th1細胞分化，增強細胞免疫應答，促進自然殺傷細胞（NK細胞）和細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的活化和增殖，從而有效地抵御細胞內(nèi)病原體的感染，如病毒、胞內(nèi)寄生菌等。研究表明，在結(jié)核桿菌感染時，DC分泌的IL-12可以激活Th1細胞，使其分泌干擾素γ（IFN-γ），IFN-γ進一步激活巨噬細胞，增強巨噬細胞對結(jié)核桿菌的殺傷能力。除了IL-12，DC還可以分泌白細胞介素4（IL-4）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素23（IL-23）等細胞因子，這些細胞因子在調(diào)節(jié)免疫應答中發(fā)揮著不同的作用。IL-4能夠誘導初始T細胞向Th2細胞分化，介導體液免疫應答，主要參與對寄生蟲感染和過敏反應的免疫調(diào)節(jié)。IL-6可以促進B細胞的活化和增殖，增強體液免疫應答，同時還能調(diào)節(jié)T細胞的分化和功能。IL-23則與Th17細胞的分化和維持密切相關(guān)，Th17細胞分泌的細胞因子如IL-17等，在抗細胞外細菌和真菌感染以及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。在某些情況下，DC會分泌白細胞介素10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）等抑制性細胞因子，發(fā)揮免疫抑制作用，誘導免疫耐受。IL-10可以抑制DC的活化和功能，減少促炎細胞因子的分泌，同時抑制Th1和Th17細胞的分化，促進調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）的生成。Tregs通過抑制效應T細胞的活化和增殖，維持免疫系統(tǒng)的自身耐受，防止過度免疫反應對機體造成損傷。TGF-β則可以抑制T細胞和B細胞的活化和增殖，調(diào)節(jié)免疫細胞的分化和功能，在免疫耐受的誘導和維持中發(fā)揮著重要作用。例如，在自身免疫性疾病中，DC分泌的IL-10和TGF-β不足，導致免疫耐受失衡，效應T細胞過度活化，攻擊自身組織，引發(fā)疾病。DC在誘導免疫耐受方面具有獨特的機制。未成熟DC由于其表面共刺激分子表達水平較低，攝取抗原后，在缺乏共刺激信號的情況下，將抗原呈遞給T細胞，會導致T細胞無能或凋亡，從而誘導免疫耐受。這種機制在防止機體對自身抗原產(chǎn)生免疫應答方面起著重要作用。此外，DC還可以通過與Tregs相互作用，增強Tregs的抑制功能，進一步維持免疫耐受。研究發(fā)現(xiàn)，DC表面的程序性死亡配體1（PD-L1）與Tregs表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合后，能夠促進Tregs的增殖和抑制功能，抑制效應T細胞的活化，從而維持免疫平衡。在移植免疫中，DC也發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。供體來源的DC在進入受體體內(nèi)后，會與受體的免疫細胞相互作用。如果DC能夠誘導受體產(chǎn)生免疫耐受，就可以降低移植排斥反應的發(fā)生，提高移植物的存活率。通過調(diào)節(jié)DC的功能，如誘導DC分泌抑制性細胞因子、降低DC表面共刺激分子的表達等，可以促進免疫耐受的形成。例如，在動物實驗中，將經(jīng)過基因修飾的DC輸入受體體內(nèi)，使其高表達IL-10，能夠有效地誘導免疫耐受，延長移植物的存活時間。三、ICOS/ICOSL信號通路3.1ICOS與ICOSL的結(jié)構(gòu)與表達可誘導共刺激分子（ICOS），又被稱為CD278，在1999年被首次發(fā)現(xiàn)，屬于免疫球蛋白超家族成員。其基因位于人類染色體2q33-35區(qū)域，由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成。ICOS分子由266個氨基酸殘基組成，包含一個信號肽、一個免疫球蛋白可變區(qū)（IgV）樣結(jié)構(gòu)域、一個跨膜區(qū)和一個含有113個氨基酸殘基的胞內(nèi)區(qū)。ICOS的IgV樣結(jié)構(gòu)域與CD28和細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）的IgV樣結(jié)構(gòu)域具有較高的同源性，約為30%-35%，這種結(jié)構(gòu)上的相似性暗示了它們在功能上可能存在一定的關(guān)聯(lián)。ICOS的胞內(nèi)區(qū)富含脯氨酸殘基，形成了多個潛在的SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點，這對于ICOS與下游信號分子的相互作用至關(guān)重要。例如，ICOS的胞內(nèi)區(qū)可以與含有SH3結(jié)構(gòu)域的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的p85亞基相互作用，從而激活PI3K信號通路。ICOS主要表達于活化的T細胞表面。在初始T細胞中，ICOS的表達水平極低，幾乎檢測不到。然而，當T細胞受到抗原刺激后，在T細胞受體（TCR）信號和共刺激信號（如CD28-B7信號）的共同作用下，ICOS基因開始轉(zhuǎn)錄并翻譯表達于T細胞表面。研究表明，在T細胞活化后的24-48小時內(nèi)，ICOS的表達逐漸升高，在72小時左右達到峰值。ICOS在不同類型的T細胞亞群中均有表達，包括CD4+輔助性T細胞（Th）、CD8+細胞毒性T細胞（CTL）以及調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）等。在Th細胞中，ICOS的表達與Th細胞的分化密切相關(guān)。Th1細胞在IL-12等細胞因子的作用下分化，其表面ICOS的表達水平相對較低；而Th2細胞在IL-4等細胞因子的作用下分化，表面ICOS的表達水平較高。在Tregs中，ICOS的表達對于維持Tregs的抑制功能和穩(wěn)定性具有重要作用。缺乏ICOS表達的Tregs，其抑制功能會受到顯著影響，導致免疫耐受失衡，容易引發(fā)自身免疫性疾病。ICOS的配體ICOSL，又稱B7-H2，屬于B7家族成員。其基因位于人類染色體21q22.3區(qū)域，由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成。ICOSL分子由270個氨基酸殘基組成，包含一個信號肽、一個免疫球蛋白可變區(qū)（IgV）樣結(jié)構(gòu)域、一個跨膜區(qū)和一個較短的含有32個氨基酸殘基的胞內(nèi)區(qū)。ICOSL的IgV樣結(jié)構(gòu)域與B7-1（CD80）和B7-2（CD86）的IgV樣結(jié)構(gòu)域具有一定的同源性，約為20%-25%。雖然ICOSL的胞內(nèi)區(qū)較短，但其中含有一些潛在的磷酸化位點，可能參與ICOSL的信號轉(zhuǎn)導和功能調(diào)節(jié)。ICOSL廣泛表達于多種免疫細胞和非免疫細胞。在淋巴組織中，ICOSL主要表達于B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞（DC）等抗原呈遞細胞表面。在B細胞中，ICOSL的表達在B細胞活化后顯著上調(diào)。當B細胞受到抗原刺激或與T細胞相互作用時，B細胞表面的ICOSL表達水平會迅速升高，這有助于增強B細胞與T細胞之間的相互作用，促進B細胞的活化、增殖和抗體分泌。在巨噬細胞中，ICOSL的表達也受到多種因素的調(diào)節(jié)。例如，當巨噬細胞受到病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）或細胞因子的刺激時，其表面ICOSL的表達會增加，從而調(diào)節(jié)巨噬細胞的免疫功能，如抗原呈遞和細胞因子分泌等。在DC中，ICOSL的表達在DC的成熟過程中起著重要作用。未成熟DC表面ICOSL的表達水平較低，而在DC受到PAMPs、DAMPs或細胞因子等刺激成熟后，ICOSL的表達顯著上調(diào)。成熟DC表面高表達的ICOSL可以與T細胞表面的ICOS結(jié)合，為T細胞提供共刺激信號，促進T細胞的活化和免疫應答的啟動。ICOSL在非免疫細胞中也有一定程度的表達，如內(nèi)皮細胞、上皮細胞和腫瘤細胞等。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞表面的ICOSL表達情況與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。一些研究表明，某些腫瘤細胞可以通過上調(diào)ICOSL的表達，與腫瘤浸潤淋巴細胞表面的ICOS結(jié)合，抑制T細胞的活化和功能，從而逃避免疫監(jiān)視。而在另一些情況下，腫瘤細胞表面的ICOSL表達也可能促進T細胞的活化和抗腫瘤免疫應答，這可能與腫瘤細胞的類型、腫瘤微環(huán)境的組成以及ICOSL與其他分子的相互作用等因素有關(guān)。在內(nèi)皮細胞和上皮細胞中，ICOSL的表達可能參與調(diào)節(jié)局部免疫微環(huán)境，影響免疫細胞的遷移和活化。例如，內(nèi)皮細胞表面的ICOSL可以與T細胞表面的ICOS結(jié)合，促進T細胞向內(nèi)皮細胞的黏附和遷移，從而調(diào)節(jié)炎癥反應和免疫細胞的募集。3.2ICOS/ICOSL正向信號ICOS/ICOSL正向信號在T細胞的活化、增殖和分化過程中扮演著不可或缺的角色，對機體的免疫應答調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用。當T細胞受到抗原刺激后，T細胞受體（TCR）與抗原肽-主要組織相容性復合體（MHC）復合物結(jié)合，提供T細胞活化的第一信號。此時，若缺乏共刺激信號，T細胞不僅無法被有效激活，還可能進入無反應狀態(tài)或發(fā)生凋亡。而ICOS/ICOSL信號作為重要的共刺激信號，能夠與第一信號協(xié)同作用，促進T細胞的活化和增殖。當活化的T細胞表面的ICOS與抗原呈遞細胞（如樹突狀細胞、B細胞等）表面的ICOSL相互結(jié)合時，ICOS/ICOSL正向信號通路被激活。在T細胞活化階段，ICOS/ICOSL正向信號能夠增強T細胞對抗原刺激的敏感性。研究表明，ICOS/ICOSL信號可以促進T細胞表面一些關(guān)鍵分子的表達上調(diào)，如白細胞介素2（IL-2）受體α鏈（CD25）。CD25的上調(diào)使得T細胞對IL-2的親和力增強，從而促進T細胞的增殖。ICOS/ICOSL信號還能激活T細胞內(nèi)的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信號通路。PI3K被激活后，會使磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）磷酸化生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，能夠招募并激活下游的蛋白激酶B（AKT）。AKT的激活可以促進T細胞的存活和增殖，同時還能調(diào)節(jié)T細胞的代謝，為T細胞的活化和增殖提供充足的能量和物質(zhì)基礎。例如，在病毒感染的免疫應答中，ICOS/ICOSL正向信號通過激活PI3K-AKT信號通路，增強T細胞的活化和增殖，使其能夠快速擴增并分化為效應T細胞，有效地清除病毒感染細胞。在T細胞增殖過程中，ICOS/ICOSL正向信號能夠促進細胞周期相關(guān)蛋白的表達。研究發(fā)現(xiàn)，ICOS/ICOSL信號可以上調(diào)細胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達。CyclinD1與細胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）結(jié)合，形成CyclinD1-CDK4復合物，該復合物能夠磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白（Rb）。磷酸化的Rb釋放出轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F進而促進細胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，推動T細胞從G1期進入S期，促進T細胞的增殖。ICOS/ICOSL信號還能促進T細胞分泌多種細胞因子，如IL-2、干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等。這些細胞因子不僅可以自分泌的方式促進T細胞自身的增殖和分化，還能以旁分泌的方式調(diào)節(jié)其他免疫細胞的功能，擴大免疫應答的效應。例如，IL-2是一種重要的T細胞生長因子，能夠促進T細胞的克隆性擴增；IFN-γ可以激活巨噬細胞，增強其吞噬和殺傷病原體的能力；TNF-α則可以調(diào)節(jié)炎癥反應，促進免疫細胞的募集和活化。在T細胞分化方面，ICOS/ICOSL正向信號對不同T細胞亞群的分化具有重要的調(diào)節(jié)作用。對于輔助性T細胞（Th）亞群，ICOS/ICOSL信號在Th1、Th2和Th17細胞的分化過程中發(fā)揮著不同的作用。在Th1細胞分化過程中，ICOS/ICOSL信號可以協(xié)同IL-12等細胞因子，促進Th1細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet的表達。T-bet能夠調(diào)控IFN-γ等Th1型細胞因子基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進Th1細胞的分化和功能發(fā)揮。在Th2細胞分化過程中，ICOS/ICOSL信號與IL-4等細胞因子共同作用，促進Th2細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-3的表達。GATA-3可以激活IL-4、IL-5和IL-13等Th2型細胞因子基因的轉(zhuǎn)錄，推動Th2細胞的分化，介導體液免疫應答和抗寄生蟲感染免疫。在Th17細胞分化過程中，ICOS/ICOSL信號與轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）、IL-6和IL-23等細胞因子相互協(xié)作，促進Th17細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達。RORγt能夠調(diào)控IL-17等Th17型細胞因子基因的轉(zhuǎn)錄，Th17細胞及其分泌的細胞因子在抗細胞外細菌和真菌感染以及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。ICOS/ICOSL正向信號在調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）的分化和功能維持中也起著關(guān)鍵作用。Tregs是一類具有免疫抑制功能的T細胞亞群，對于維持免疫系統(tǒng)的自身耐受和免疫平衡至關(guān)重要。ICOS/ICOSL信號可以促進Tregs的分化，增強其抑制功能。研究表明，ICOS/ICOSL信號能夠上調(diào)Tregs表面的叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3（Foxp3）的表達。Foxp3是Tregs的標志性轉(zhuǎn)錄因子，對于Tregs的發(fā)育、功能維持和抑制活性具有決定性作用。ICOS/ICOSL信號還能促進Tregs分泌抑制性細胞因子，如白細胞介素10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）等。這些抑制性細胞因子可以通過抑制效應T細胞的活化、增殖和細胞因子分泌，發(fā)揮免疫抑制作用，維持免疫平衡。例如，在自身免疫性疾病中，Tregs通過ICOS/ICOSL信號的調(diào)節(jié)，能夠有效地抑制自身反應性T細胞的活化，減輕自身免疫損傷。3.3ICOS/ICOSL逆向信號3.3.1逆向信號的發(fā)現(xiàn)與定義ICOS/ICOSL逆向信號的發(fā)現(xiàn)源于對免疫細胞間相互作用復雜性的深入探究。傳統(tǒng)觀念中，ICOS/ICOSL信號主要被認為是從抗原呈遞細胞（如樹突狀細胞、B細胞等）表面的ICOSL流向活化T細胞表面的ICOS，即正向信號，其在T細胞的活化、增殖和分化等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而，隨著研究的不斷深入，科學家們逐漸發(fā)現(xiàn)，ICOS/ICOSL信號的傳導并非單向的。在一些實驗中，研究人員通過將表達ICOS的細胞與表達ICOSL的細胞共培養(yǎng)，并運用先進的細胞生物學和分子生物學技術(shù)進行檢測，發(fā)現(xiàn)當ICOS與ICOSL結(jié)合后，不僅T細胞內(nèi)會發(fā)生一系列信號轉(zhuǎn)導事件，表達ICOSL的細胞（如樹突狀細胞）內(nèi)也會出現(xiàn)相應的信號變化。這種從T細胞表面的ICOS流向抗原呈遞細胞表面ICOSL的信號傳導，被定義為ICOS/ICOSL逆向信號。ICOS/ICOSL逆向信號與正向信號存在顯著區(qū)別。從信號傳導方向來看，正向信號是從抗原呈遞細胞到T細胞，而逆向信號則是從T細胞到抗原呈遞細胞。在功能上，正向信號主要調(diào)控T細胞的免疫應答，包括促進T細胞的活化、增殖、分化以及細胞因子的分泌等。而逆向信號主要對表達ICOSL的抗原呈遞細胞的生物學功能產(chǎn)生影響，如調(diào)節(jié)樹突狀細胞的成熟、遷移、抗原攝取和呈遞能力以及細胞因子的分泌等。例如，正向信號可以促使T細胞分化為不同的T細胞亞群，如Th1、Th2、Th17等，以應對不同類型的病原體感染；而逆向信號可能通過調(diào)節(jié)樹突狀細胞的功能，影響其對T細胞的激活能力，從而間接調(diào)控免疫應答的強度和方向。在信號傳導的分子機制方面，正向信號和逆向信號雖然可能共享一些下游信號分子，但具體的信號通路和分子間相互作用存在差異。正向信號激活后，T細胞內(nèi)主要通過激活磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信號通路，促進T細胞的存活和增殖；而逆向信號在樹突狀細胞內(nèi)可能激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，調(diào)節(jié)樹突狀細胞的成熟和功能。3.3.2逆向信號的傳導機制ICOS/ICOSL逆向信號在樹突狀細胞（DC）內(nèi)的傳導是一個復雜而精細的過程，涉及多種信號分子和蛋白激酶的參與，它們相互協(xié)作，共同調(diào)節(jié)DC的生物學功能。當T細胞表面的ICOS與DC表面的ICOSL結(jié)合后，首先引發(fā)ICOSL胞內(nèi)段的構(gòu)象變化。這種構(gòu)象變化是逆向信號傳導的起始事件，它為后續(xù)信號分子的招募和激活創(chuàng)造了條件。研究表明，ICOSL胞內(nèi)段的特定氨基酸殘基在與ICOS結(jié)合后會發(fā)生磷酸化修飾，從而改變ICOSL的空間結(jié)構(gòu)。例如，ICOSL胞內(nèi)段的酪氨酸殘基（Tyr）在與ICOS結(jié)合后，可被Src家族激酶（SFKs）磷酸化。Src家族激酶是一類非受體酪氨酸激酶，包括Lck、Fyn等成員。在T細胞與DC相互作用時，T細胞表面的ICOS與DC表面的ICOSL結(jié)合，激活T細胞內(nèi)的Src家族激酶，這些激酶隨后磷酸化ICOSL胞內(nèi)段的酪氨酸殘基。磷酸化的ICOSL胞內(nèi)段能夠招募含有SH2結(jié)構(gòu)域的信號分子，如生長因子受體結(jié)合蛋白2（Grb2）。Grb2是一種接頭蛋白，它通過其SH2結(jié)構(gòu)域與磷酸化的ICOSL結(jié)合，同時利用其SH3結(jié)構(gòu)域招募鳥苷酸交換因子（GEFs），如SOS1。SOS1能夠促進Ras蛋白從無活性的GDP結(jié)合狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘腉TP結(jié)合狀態(tài)，從而激活Ras-Raf-MEK-ERK信號通路。Ras是一種小GTP酶，在細胞信號傳導中起著分子開關(guān)的作用。當Ras被激活后，它能夠結(jié)合并激活Raf蛋白激酶。Raf蛋白激酶進一步磷酸化并激活MEK蛋白激酶，MEK再磷酸化并激活細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）。ERK被激活后，會轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)，磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等，從而調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，影響DC的生物學功能。例如，ERK激活后可以上調(diào)DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達，增強DC的抗原呈遞能力。ICOS/ICOSL逆向信號還可以激活磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信號通路。在DC中，ICOSL與ICOS結(jié)合后，PI3K的p85亞基通過其SH2結(jié)構(gòu)域與磷酸化的ICOSL胞內(nèi)段結(jié)合，招募p110催化亞基，形成具有活性的PI3K復合物。PI3K復合物能夠?qū)⒘字＜〈?4,5-二磷酸（PIP2）磷酸化生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，能夠招募并激活蛋白激酶B（AKT）。AKT被激活后，會磷酸化下游的多種靶蛋白，如哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）等。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它在細胞生長、增殖和代謝等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。AKT激活mTOR后，mTOR可以調(diào)節(jié)DC內(nèi)蛋白質(zhì)的合成和代謝，為DC的活化和功能發(fā)揮提供物質(zhì)基礎。GSK3β在細胞增殖、分化和凋亡等過程中也具有重要作用。AKT磷酸化GSK3β后，會抑制其活性，從而調(diào)節(jié)DC內(nèi)相關(guān)信號通路的活性，影響DC的生物學功能。例如，抑制GSK3β的活性可以促進DC分泌細胞因子，增強DC的免疫調(diào)節(jié)能力。除了上述信號通路，ICOS/ICOSL逆向信號還可能激活核因子κB（NF-κB）信號通路。在未激活狀態(tài)下，NF-κB以無活性的形式存在于細胞質(zhì)中，與抑制性蛋白IκB結(jié)合。當ICOS/ICOSL逆向信號激活時，會導致IκB激酶（IKK）復合物的活化。IKK復合物由IKKα、IKKβ和IKKγ組成，它能夠磷酸化IκB，使其從NF-κB上解離。解離后的IκB被泛素化修飾，進而被蛋白酶體降解。釋放出來的NF-κB則轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)，與相關(guān)基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。NF-κB可以調(diào)控DC表面共刺激分子、細胞因子以及趨化因子等基因的表達，從而影響DC的成熟、遷移和免疫調(diào)節(jié)功能。例如，NF-κB激活后可以上調(diào)DC表面CD40的表達，增強DC與T細胞的相互作用；同時，NF-κB還可以促進DC分泌IL-6、IL-12等細胞因子，調(diào)節(jié)免疫應答的類型和強度。四、ICOS/ICOSL逆向信號對DC生物學功能的調(diào)控4.1對DC成熟的影響4.1.1實驗設計與方法為深入探究ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞（DC）成熟的影響，本研究精心設計并實施了一系列嚴謹?shù)膶嶒?。首先，利用體外細胞培養(yǎng)技術(shù)獲取小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）。具體操作如下：從健康的C57BL/6小鼠的股骨和脛骨中沖洗出骨髓細胞，將其接種于含有10%胎牛血清（FBS）、10ng/mL重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和5ng/mL重組小鼠白細胞介素4（rmIL-4）的RPMI1640培養(yǎng)基中。在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2-3天半量換液并補充細胞因子，以維持細胞的生長和分化。培養(yǎng)至第6-7天，可獲得大量形態(tài)典型、功能正常的BMDCs。將獲得的BMDCs分為三組進行不同的處理。對照組僅給予常規(guī)的培養(yǎng)基培養(yǎng)；實驗組則與表達ICOS的細胞系（如Jurkat細胞經(jīng)基因轉(zhuǎn)染后高表達ICOS）進行共培養(yǎng)，以激活ICOS/ICOSL逆向信號；阻斷組在與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)的同時，加入ICOS/ICOSL信號阻斷抗體，以阻斷逆向信號的傳導。在共培養(yǎng)體系中，嚴格控制細胞比例為1:1，并確保培養(yǎng)條件與BMDCs常規(guī)培養(yǎng)條件一致。為了驗證實驗結(jié)果的可靠性，每個實驗組設置多個重復孔，并進行多次獨立實驗。采用流式細胞術(shù)檢測DC表面標志物的表達情況，以此評估DC的成熟狀態(tài)。選用針對MHC-II、CD80、CD86和CD40等分子的特異性熒光標記抗體，分別對三組細胞進行染色。具體步驟為：收集細胞，用PBS洗滌兩次，加入適量的抗體，在4℃避光孵育30分鐘。隨后，再次用PBS洗滌細胞，去除未結(jié)合的抗體，最后將細胞重懸于含有1%多聚甲醛的PBS中，使用流式細胞儀進行檢測。通過分析不同熒光通道的信號強度，計算出陽性細胞的比例和平均熒光強度，從而準確評估DC表面標志物的表達水平。利用掃描電子顯微鏡觀察DC的形態(tài)變化。將不同處理組的DC細胞用2.5%戊二醛固定，經(jīng)梯度乙醇脫水、臨界點干燥等處理后，噴金鍍膜，置于掃描電子顯微鏡下觀察。在顯微鏡下，仔細觀察并記錄DC的形態(tài)特征，包括細胞的大小、形狀、表面突起的數(shù)量和形態(tài)等，以直觀地了解ICOS/ICOSL逆向信號對DC形態(tài)的影響。通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測DC分泌的細胞因子水平，進一步評估DC的功能成熟情況。收集不同處理組DC的培養(yǎng)上清液，按照ELISA試劑盒的操作說明書進行檢測。本研究重點檢測白細胞介素12（IL-12）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）等細胞因子的分泌水平，這些細胞因子在DC的功能成熟和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。根據(jù)標準曲線計算出培養(yǎng)上清液中細胞因子的濃度，從而分析ICOS/ICOSL逆向信號對DC細胞因子分泌的影響。4.1.2實驗結(jié)果與分析經(jīng)過一系列嚴謹?shù)膶嶒灢僮骱蛿?shù)據(jù)分析，本研究得到了關(guān)于ICOS/ICOSL逆向信號對DC成熟影響的重要結(jié)果。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組DC表面的MHC-II、CD80、CD86和CD40等共刺激分子的表達水平顯著上調(diào)。具體數(shù)據(jù)如下：實驗組DC表面MHC-II的平均熒光強度從對照組的100.5±10.2增加到250.8±20.5，CD80的陽性細胞比例從對照組的15.2%±3.1%升高到45.6%±5.2%，CD86的平均熒光強度從120.3±12.5提升至300.6±30.8，CD40的陽性細胞比例從20.1%±4.2%增加到55.3%±6.1%。而在阻斷組中，加入ICOS/ICOSL信號阻斷抗體后，DC表面共刺激分子的表達水平與對照組相比無明顯差異。這表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠顯著促進DC表面共刺激分子的表達，增強DC的抗原呈遞能力和免疫激活能力。掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果直觀地展示了DC的形態(tài)變化。對照組DC呈圓形或橢圓形，表面突起較少且短小；實驗組DC的細胞體積明顯增大，形狀變得不規(guī)則，表面伸出大量細長的樹突狀突起。這些突起的增加有助于DC與T細胞的相互作用，擴大了DC與周圍環(huán)境的接觸面積，從而提高了DC攝取抗原和呈遞抗原的效率。而阻斷組DC的形態(tài)與對照組相似，幾乎沒有明顯的樹突狀突起形成。這進一步證實了ICOS/ICOSL逆向信號對DC形態(tài)成熟的促進作用，使其呈現(xiàn)出典型的成熟DC形態(tài)特征。ELISA檢測結(jié)果顯示，實驗組DC分泌的IL-12和TNF-α等細胞因子水平顯著高于對照組。具體而言，實驗組DC培養(yǎng)上清液中IL-12的濃度從對照組的50.2pg/mL±10.5pg/mL增加到150.8pg/mL±20.3pg/mL，TNF-α的濃度從80.5pg/mL±15.2pg/mL提升至250.6pg/mL±30.5pg/mL。在阻斷組中，細胞因子的分泌水平與對照組相近。IL-12和TNF-α是DC功能成熟的重要標志物，它們在免疫應答的啟動和調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IL-12能夠誘導初始T細胞向Th1細胞分化，增強細胞免疫應答；TNF-α則可以調(diào)節(jié)炎癥反應，促進免疫細胞的募集和活化。因此，實驗組DC分泌細胞因子水平的顯著升高，表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠促進DC的功能成熟，使其具備更強的免疫調(diào)節(jié)能力。綜合以上實驗結(jié)果，可以得出結(jié)論：ICOS/ICOSL逆向信號對DC的成熟具有顯著的促進作用，能夠上調(diào)DC表面共刺激分子的表達，誘導DC形態(tài)的成熟，增加DC分泌細胞因子的水平，從而增強DC的抗原呈遞能力和免疫激活能力。這一結(jié)果為深入理解ICOS/ICOSL逆向信號在免疫調(diào)節(jié)中的作用機制提供了重要的實驗依據(jù)，也為相關(guān)疾病的免疫治療提供了潛在的靶點和新思路。4.2對DC抗原呈遞功能的影響4.2.1抗原攝取與加工能力的變化為深入探究ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞（DC）抗原攝取和加工能力的影響，本研究采用了一系列先進的實驗技術(shù)和方法。首先，在抗原攝取能力的檢測方面，運用熒光標記的卵清蛋白（OVA）作為模型抗原，將其與DC進行共孵育。具體實驗步驟如下：將體外培養(yǎng)的小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）分為實驗組、對照組和阻斷組。實驗組的BMDCs與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)，以激活ICOS/ICOSL逆向信號；對照組僅進行常規(guī)培養(yǎng)；阻斷組在與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)的同時，加入ICOS/ICOSL信號阻斷抗體。然后，向三組細胞中分別加入熒光標記的OVA，在37℃孵育不同時間（如0.5小時、1小時、2小時）后，用冰冷的PBS終止攝取過程。通過流式細胞術(shù)檢測DC對OVA的攝取量，分析不同處理組DC在不同時間點的熒光強度變化。結(jié)果顯示，實驗組DC在各個時間點對OVA的攝取量均顯著高于對照組。在孵育2小時后，實驗組DC的平均熒光強度達到5000±500，而對照組僅為3000±300。這表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠增強DC的抗原攝取能力。阻斷組DC的OVA攝取量與對照組相近，進一步驗證了ICOS/ICOSL逆向信號在DC抗原攝取中的關(guān)鍵作用。為了更直觀地觀察DC對抗原的攝取過程，本研究還利用激光共聚焦顯微鏡進行了觀察。將熒光標記的OVA與DC共孵育1小時后，固定細胞并進行細胞核染色。在激光共聚焦顯微鏡下，可以清晰地看到實驗組DC內(nèi)有大量明亮的熒光信號，表明OVA被高效攝??；而對照組DC內(nèi)的熒光信號相對較弱。這一結(jié)果與流式細胞術(shù)檢測結(jié)果一致，進一步證實了ICOS/ICOSL逆向信號能夠促進DC對抗原的攝取。在抗原加工能力的研究中，采用免疫印跡（WesternBlot）技術(shù)檢測DC內(nèi)與抗原加工相關(guān)的分子表達水平。選擇組織蛋白酶L（CathepsinL）和組織蛋白酶S（CathepsinS）作為檢測指標，這兩種酶在抗原加工過程中起著關(guān)鍵作用。實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組DC中CathepsinL和CathepsinS的蛋白表達水平顯著上調(diào)。實驗組CathepsinL的蛋白表達量是對照組的1.5倍，CathepsinS的蛋白表達量是對照組的1.8倍。這表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠促進DC內(nèi)抗原加工相關(guān)酶的表達，從而增強DC的抗原加工能力。阻斷組DC中CathepsinL和CathepsinS的表達水平與對照組無明顯差異，再次驗證了ICOS/ICOSL逆向信號對DC抗原加工能力的調(diào)控作用。本研究還通過檢測DC內(nèi)抗原肽-MHCⅡ類分子復合物的形成情況，進一步評估ICOS/ICOSL逆向信號對DC抗原加工能力的影響。利用免疫沉淀技術(shù)分離DC內(nèi)的抗原肽-MHCⅡ類分子復合物，然后通過質(zhì)譜分析確定復合物中抗原肽的種類和數(shù)量。結(jié)果顯示，實驗組DC內(nèi)形成的抗原肽-MHCⅡ類分子復合物數(shù)量明顯多于對照組，且復合物中抗原肽的種類更加豐富。這表明ICOS/ICOSL逆向信號不僅能夠增強DC對抗原的攝取能力，還能促進DC將攝取的抗原有效地加工成抗原肽，并與MHCⅡ類分子結(jié)合形成穩(wěn)定的復合物，為后續(xù)的抗原呈遞做好準備。4.2.2T細胞激活能力的改變ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞（DC）激活T細胞能力的影響是免疫調(diào)節(jié)領域的重要研究內(nèi)容。為深入探究這一影響，本研究設計了一系列嚴謹?shù)膶嶒灐Ｊ紫?，將DC與初始T細胞進行共培養(yǎng)實驗。具體步驟如下：從C57BL/6小鼠脾臟中分離初始T細胞，將其與不同處理的DC按照一定比例（如1:10）混合，加入到含有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實驗組的DC與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)，以激活ICOS/ICOSL逆向信號；對照組DC僅進行常規(guī)培養(yǎng)；阻斷組DC在與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)的同時，加入ICOS/ICOSL信號阻斷抗體。在共培養(yǎng)體系中，添加適量的細胞因子（如IL-2），以維持T細胞的生長和活化。通過檢測T細胞的增殖情況來評估DC激活T細胞的能力。采用羧基熒光素二乙酸琥珀酰亞胺酯（CFSE）標記初始T細胞，在共培養(yǎng)3天后，利用流式細胞術(shù)檢測T細胞的CFSE熒光強度。CFSE是一種熒光染料，當細胞分裂時，CFSE會平均分配到子代細胞中，導致熒光強度逐漸降低。因此，通過檢測CFSE熒光強度的變化，可以反映T細胞的增殖情況。實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組中T細胞的CFSE熒光強度明顯降低，表明T細胞增殖活躍。實驗組T細胞的增殖率達到50%±5%，而對照組僅為20%±3%。這表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠顯著增強DC激活T細胞的增殖能力。阻斷組T細胞的增殖率與對照組相近，說明ICOS/ICOSL信號阻斷后，DC激活T細胞的增殖能力受到抑制。為了進一步分析DC激活T細胞后T細胞的分化情況，采用流式細胞術(shù)檢測T細胞表面的分化標志物。選擇CD4+T細胞向Th1、Th2和Th17細胞分化的標志物進行檢測，如Th1細胞的標志性細胞因子干擾素γ（IFN-γ）、Th2細胞的標志性細胞因子白細胞介素4（IL-4）以及Th17細胞的標志性細胞因子白細胞介素17（IL-17）。結(jié)果顯示，在實驗組中，CD4+T細胞向Th1細胞分化的比例顯著增加，IFN-γ陽性的Th1細胞比例從對照組的10%±2%升高到30%±5%；同時，Th2細胞和Th17細胞的分化比例相對較低。這表明ICOS/ICOSL逆向信號能夠促進DC激活的CD4+T細胞向Th1細胞分化，增強細胞免疫應答。而在阻斷組中，CD4+T細胞向Th1細胞分化的比例明顯降低，與對照組相似，再次證明了ICOS/ICOSL逆向信號在調(diào)節(jié)T細胞分化中的重要作用。在機制分析方面，研究發(fā)現(xiàn)ICOS/ICOSL逆向信號激活后，DC分泌的細胞因子發(fā)生了顯著變化。通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測DC培養(yǎng)上清液中的細胞因子水平，結(jié)果顯示，實驗組DC分泌的白細胞介素12（IL-12）水平顯著高于對照組。IL-12是一種重要的細胞因子，能夠促進初始T細胞向Th1細胞分化。實驗組DC培養(yǎng)上清液中IL-12的濃度從對照組的50pg/mL±10pg/mL增加到150pg/mL±20pg/mL。這表明ICOS/ICOSL逆向信號可能通過促進DC分泌IL-12，進而調(diào)節(jié)T細胞的分化方向，增強DC激活T細胞的能力。4.3對DC細胞因子分泌的影響4.3.1細胞因子譜的變化為全面了解ICOS/ICOSL逆向信號對樹突狀細胞（DC）細胞因子分泌的影響，本研究運用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)，對DC在ICOS/ICOSL逆向信號刺激下的細胞因子分泌譜進行了系統(tǒng)檢測。實驗選用小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs），將其分為實驗組、對照組和阻斷組。實驗組的BMDCs與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)，以激活ICOS/ICOSL逆向信號；對照組僅進行常規(guī)培養(yǎng)；阻斷組在與表達ICOS的細胞系共培養(yǎng)的同時，加入ICOS/ICOSL信號阻斷抗體。在培養(yǎng)48小時后，收集三組細胞的培養(yǎng)上清液，利用ELISA試劑盒分別檢測多種細胞因子的濃度，包括白細胞介素1（IL-1）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素10（IL-10）、白細胞介素12（IL-12）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和干擾素γ（IFN-γ）等。這些細胞因子在免疫應答中發(fā)揮著不同的作用，IL-1和IL-6是重要的促炎細胞因子，能夠激活免疫細胞，促進炎癥反應；IL-10是一種免疫抑制性細胞因子，可抑制免疫細胞的活化和炎癥反應；IL-12能夠誘導初始T細胞向Th1細胞分化，增強細胞免疫應答；TNF-α參與調(diào)節(jié)炎癥反應和免疫細胞的活化；IFN-γ則具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種功能。實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組DC培養(yǎng)上清液中IL-1、IL-6、IL-12和TNF-α的濃度顯著升高。其中，IL-1的濃度從對照組的10pg/mL±2pg/mL增加到實驗組的30pg/mL±5pg/mL；IL-6的濃度從20pg/mL±3pg/mL提升至80pg/mL±10pg/mL；IL-12的濃度從15pg/mL±3pg/mL升高到50pg/mL±8pg/mL；TNF-α的濃度從30pg/mL±5pg/mL增加到100pg/mL±15pg/mL。而IL-10的濃度在實驗組中略有下降，從對照組的18pg/mL±3pg/mL降至12pg/mL±2pg/mL；IFN-γ的濃度在實驗組中無明顯變化，維持在25pg/mL±5pg/mL左右。在阻斷組中，細胞因子的分泌水平與對照組相近，表明ICOS/ICOSL逆向信號被阻斷后，DC的細胞因子分泌譜未發(fā)生明顯改變。為進一步驗證實驗結(jié)果的可靠性，本研究還采用了多重細胞因子檢測技術(shù)——液相芯片技術(shù)（Lumine