ICS65.020.20CCSB05DB4419DB4419/T15—20242024-10-10發(fā)布2024-11-01實(shí)施東莞市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB4419/T15—2024前言 III1范圍 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)與定義 4培養(yǎng)基 4.1初代培養(yǎng)基 34.2增殖培養(yǎng)基 34.3愈傷組織分化培養(yǎng)基 34.4體細(xì)胞胚成苗培養(yǎng)基 34.5壯苗培養(yǎng)基 34.6生根培養(yǎng)基 35組培苗快繁流程 5.1培養(yǎng)基配制 35.2培養(yǎng)基滅菌 35.3接種工具滅菌 35.4環(huán)境消毒 5.5無(wú)菌操作 5.6外植體選擇 45.7外植體消毒 45.8初代培養(yǎng) 5.8.1以鱗莖盤(pán)為外植體誘導(dǎo)不定芽 5.8.2以鱗片為外植體誘導(dǎo)胚性愈傷組織 5.8.3以子房和花梗為外植體誘導(dǎo)不定芽 5.9增殖培養(yǎng) 5.9.1不定芽增殖培養(yǎng) 5.9.2愈傷組織增殖培養(yǎng) 5.9.3愈傷組織分化培養(yǎng) 5.9.4愈傷組織體細(xì)胞胚的誘導(dǎo) 5.10體細(xì)胞胚的培養(yǎng) 55.11壯苗培養(yǎng) 55.12生根培養(yǎng) 55.13煉苗 55.14移栽 56組培苗質(zhì)量及分級(jí) 6.1質(zhì)量要求 IIDB4419/T15—20246.2分級(jí)...........................................................................................................................................................6DB4419/T15—2024III本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由東莞市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本文件由東莞市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：廣東圣茵花卉園藝有限公司、中國(guó)科學(xué)院華南植物園。本文件起草人：張文心、曾晶玨、曹雪瑩、曾宋君、周世明、吳坤林、裴潔、房林。本文件為首次發(fā)布。DB4419/T15—20241朱頂紅種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了朱頂紅種苗組培快繁的術(shù)語(yǔ)和定義、培養(yǎng)基、組培苗快繁流程、組培苗質(zhì)量及分級(jí)。本文件適用于朱頂紅種苗的組培快繁。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第591號(hào)3術(shù)語(yǔ)與定義下列術(shù)語(yǔ)與定義適用于本文件。3.1朱頂紅hippeastrum生種和園藝品種，其鱗莖膨大成卵狀球形，由鱗莖盤(pán)和鱗片組成；葉帶狀，互生成兩側(cè)排列；花莖中空，從鱗莖一側(cè)或兩側(cè)抽生；傘形花序兩朵至多朵著生于花莖頂端；花漏斗形，單瓣或重瓣，單瓣花花瓣和雄蕊都為6枚，雌蕊1枚，可育；重瓣花為雌雄蕊退化而成，多不可育，花瓣顏色多變，部分品種帶有香味；子房3室，蒴果球形；種子成熟后為黑色扁平翅狀。3.2植物組織培養(yǎng)的簡(jiǎn)稱，將植物的器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等材料，在人工配制的培養(yǎng)基上和特定環(huán)境條件下離體培養(yǎng)，獲得再生完整植株的過(guò)程。3.3培養(yǎng)基medium在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，根據(jù)不同植物營(yíng)養(yǎng)需求、人工配制的、包含培養(yǎng)材料生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、供培養(yǎng)材料生長(zhǎng)的基質(zhì)。2DB4419/T15—20243.4將消毒后的外植體或干凈培養(yǎng)材料在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過(guò)程。3.5無(wú)菌條件下將表面消毒的外植體切割成適合大小，接入經(jīng)滅菌處理的培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時(shí)間一般為3～5周。為最大限度保持母本特性，宜以直接誘導(dǎo)不定芽為主。3.6經(jīng)誘導(dǎo)形成的不定芽不斷轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。增值周期根據(jù)培養(yǎng)植物材料生長(zhǎng)情況而定，一般為3周～6周。初代要培養(yǎng)以后培養(yǎng)代數(shù)宜控制在12～30代，增值系數(shù)宜控制在2.5～4.0。3.7從增值培養(yǎng)或壯苗培養(yǎng)的不定芽中切取生長(zhǎng)健壯、葉色正常、葉片舒展的不定芽，接種在生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)周期一般為3周～4周。幼苗基部長(zhǎng)出3條～5條1cm～2cm長(zhǎng)的不定根即可進(jìn)行移栽。3.8組培苗按照5.13、5.14的練苗和移栽方法將組培苗移入溫室中煉苗并隨后種植于配有專用基質(zhì)的穴盤(pán)中。3.9MS培養(yǎng)基3.106-芐氨基腺嘌呤（6-BA）6-benzylaminopurin3.11NAA：萘乙酸naphthylaceticacid3.12DB4419/T15—202434培養(yǎng)基4.1初代培養(yǎng)基4.2增殖培養(yǎng)基4.3愈傷組織分化培養(yǎng)基4.4體細(xì)胞胚成苗培養(yǎng)基4.5壯苗培養(yǎng)基4.6生根培養(yǎng)基5組培苗快繁流程5.1培養(yǎng)基配制按培養(yǎng)基的配方及所需的數(shù)量，將所需的各類物質(zhì)分別加入蒸餾水中，攪拌溶化后定容至所需的體5.2培養(yǎng)基滅菌5.3接種工具滅菌DB4419/T15—20244鑷子、手術(shù)刀柄、接種盤(pán)等接種工具使用前，采用濕熱滅菌法，滅菌鍋壓力0.11Mpa、溫度121℃,滅菌時(shí)間18min～20min。使用過(guò)程中，鑷子與手術(shù)刀片可采用酒精燈灼燒或用接種專用消毒器滅菌。5.4環(huán)境消毒培養(yǎng)室和接種室每周定期用二氧化氯消毒劑或臭氧殺菌，接種前接種臺(tái)用紫外線燈照射30min后再用濃度為75%的酒精噴霧殺菌。5.5無(wú)菌操作操作人員接種時(shí)應(yīng)佩戴乳膠手套，并用70%～75%酒精涂擦。5.6外植體選擇選擇具有典型性狀的健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的植株，采切鱗莖或花序作為建立組培快繁體系的外植體，采切前適當(dāng)控水控肥，在室外采種時(shí)，應(yīng)選擇晴朗天氣，確保外植體干爽。5.7外植體消毒用棉花球蘸取75%酒精，擦去表面塵土，鱗莖去除根、葉，剝除外部1～3層鱗片，放入無(wú)菌錐形瓶中。先倒入75%酒精使之沒(méi)過(guò)外植體表面1cm左右，輕搖錐形瓶，除去外植體表面氣泡，消毒30s后倒使外植體與試劑充分接觸；最后用無(wú)菌水沖洗5次～6次。升汞安全管理方法按照《危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例》執(zhí)行。5.8初代培養(yǎng)5.8.1以鱗莖盤(pán)為外植體誘導(dǎo)不定芽將已消毒的鱗莖置于無(wú)菌墊盤(pán)上，從中間橫切，保留中下部位，再根據(jù)鱗莖大小按需切成帶有鱗莖盤(pán)的小塊接種到初代培養(yǎng)基（見(jiàn)4.1.15.8.2以鱗片為外植體誘導(dǎo)胚性愈傷組織將已消毒的鱗莖置于無(wú)菌墊盤(pán)上，從中間橫切，保留中下部位，將鱗片切成5mm×6mm的切塊，將鱗片切塊凹面向下放置在初代培養(yǎng)基（見(jiàn)4.1.2）上，培養(yǎng)條件為：溫度25℃±2℃,5.8.3以子房和花梗為外植體誘導(dǎo)不定芽將已消毒的花蕾置于無(wú)菌墊盤(pán)上，將花梗和子房橫切成2mm～3mm的薄片，平鋪在初代培養(yǎng)基（見(jiàn)4.1.3）上，進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為25℃±2℃,暗培養(yǎng)48h后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度15005.9增殖培養(yǎng)5.9.1不定芽增殖培養(yǎng)DB4419/T15—20245將誘導(dǎo)培養(yǎng)形成不定芽的培養(yǎng)材料切分成小叢芽，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基（見(jiàn)4.2.1）中繼續(xù)培養(yǎng)。若培養(yǎng)材料已形成鱗莖，則視鱗莖大小將其縱切成2份～4份，再接種到增殖培養(yǎng)基中，增殖周期一般為30d~5.9.2愈傷組織增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)培養(yǎng)形成的愈傷組織切分成3mm～5mm的小塊，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基（見(jiàn)4.2.2）中進(jìn)行培養(yǎng)。5.9.3愈傷組織分化培養(yǎng)5.9.4愈傷組織體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)5.10體細(xì)胞胚的培養(yǎng)5.11壯苗培養(yǎng)5.12生根培養(yǎng)將帶有2片～3片葉的不定芽按大小分開(kāi)，分別接種到生根培養(yǎng)基（見(jiàn)4.6）中，每瓶接種15株～205.13煉苗將具有2條～3條不定根、鱗莖直徑0.5cm～1.0cm的組培瓶苗移入煉苗室，煉苗室要求環(huán)境清潔、5.14移栽煉苗后，取出組培苗，用清水洗凈表面的培養(yǎng)基后，放入1000倍多菌靈浸泡1min～2min，撈出瀝干水分，分級(jí)移栽于穴盤(pán)或育苗篩中。采用泥炭和珍珠巖體積比為3:1的濕潤(rùn)混合基質(zhì)，種植時(shí)盡量避免折斷根系，將根部舒展鋪于基質(zhì)上，填充基質(zhì)至高于根系2cm～3cm處