備案號(hào)：38763-2013水中菌落總數(shù)復(fù)合酶底物檢測(cè)方法2013-08-24發(fā)布2013-11-24實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省城鎮(zhèn)供水協(xié)會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省分析測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(GD/TC22)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：中山市供水有限公司、中山市住房和城鄉(xiāng)建設(shè)局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：凌永平、孫東衛(wèi)、陳颯、黃靜美、陳冬賢、趙丹清、曾銀東。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。菌落總數(shù)復(fù)合酶底物法是指水樣在一定條件下培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)菌群組分解復(fù)合酶底物培養(yǎng)基上的物用SimPlate?100mL瓶裝無菌培養(yǎng)基?？蛇x購?fù)惿虡I(yè)化產(chǎn)品，貯存于4℃-8℃冰箱中。3.2樣品盤：含有84個(gè)孔穴。3.4培養(yǎng)箱：36℃±1℃。3.6紫外燈：6W,365nm。采樣必須在無菌操作下進(jìn)行，采樣時(shí)應(yīng)直接采集，不得用水樣涮洗已滅菌的采樣瓶，并避免手指和其他物品對(duì)瓶口的沾污。河流、湖泊等地表水可直接用無菌瓶采集。在橋上等地方采樣時(shí)，可用適工2當(dāng)?shù)娜萜?如水桶、直立式采水器或帶有墜子的采樣瓶)系著繩子投入水中采集。采樣后立即貼上標(biāo)簽，每件樣品必須標(biāo)記清楚(如樣品名稱、來源、數(shù)量、采樣地點(diǎn)、采樣人及采樣時(shí)間等)。樣品應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室，如果路途遙遠(yuǎn)，可將樣品保存在1℃~4℃環(huán)境中，并盡量保證樣品在8h內(nèi)檢測(cè)。如果樣品不能在8h內(nèi)檢測(cè)，將樣品在1℃~4℃保存，并在24h內(nèi)檢測(cè)。5.1用無菌水稀釋培養(yǎng)基至刻度，搖勻并完全溶解，制成液體培養(yǎng)基。5.2用無菌吸管分別將1mL水樣和9mL液體培養(yǎng)基加入到SimPlate樣品盤中心，蓋上樣品盤蓋子，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)樣品盤將液體分配到每個(gè)孔中，同時(shí)用1mL無菌水代替樣品作空白對(duì)照，若空白對(duì)照上檢出5.3然后慢慢將盤子豎起90°~120°,將多余的液體吸到樣品盤中的海綿上。5.4把樣品盤緩慢倒置，放入36℃±1℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h。5.5如懷疑樣品結(jié)果超過上限值(738MPN/mL),則應(yīng)以無菌操作方法用無菌水逐級(jí)稀釋樣品，并按5.2-5.4進(jìn)行操作。6.1將培養(yǎng)48h后的樣品盤取出，打開盤蓋，置于6W,365nm紫外燈下13cm處觀察。觀察時(shí)佩戴防紫外線的護(hù)目鏡。樣品盤中的84個(gè)孔，無論熒光強(qiáng)弱，只要顯熒光，即計(jì)入結(jié)果，但海綿條顯熒6.2數(shù)出顯熒光的孔數(shù)，對(duì)照表A.1查出孔數(shù)對(duì)應(yīng)的每毫升樣品中的菌落總數(shù)(MPN/mL)。如果樣品進(jìn)行了稀釋，讀取結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。結(jié)果以每毫升水中所含菌落總數(shù)表示(MPN/mL)。用無菌吸管分別將1mL無菌水和9mL液體培養(yǎng)基加入到樣品盤中心，蓋上樣品盤樣品盤將液體分配到每個(gè)孔中，其他操作步驟同5.3和5.4,結(jié)果和報(bào)告同6。如無熒光產(chǎn)生則為陰性?？蛇x用市售的菌落總數(shù)質(zhì)控標(biāo)樣，按其標(biāo)準(zhǔn)證書要求進(jìn)行配制標(biāo)準(zhǔn)樣品。操作步驟按5.2-5.4,結(jié)(規(guī)范性附錄)菌落總數(shù)MPN檢索表表A.1菌落總數(shù)MPN檢索表(95%置信區(qū)間)陽性下限陽性下限0123424681235678946783廣東省地方