Scribble在肝纖維化與肝細(xì)胞癌進(jìn)程中的角色與分子機(jī)制探秘一、引言1.1研究背景肝臟疾病是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題，其中肝纖維化和肝細(xì)胞癌尤為突出。肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)階段，其特征為肝臟內(nèi)結(jié)締組織異常增生和瘢痕形成，導(dǎo)致肝臟結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)行性損害。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球慢性肝病患者數(shù)量持續(xù)上升，由慢性乙肝、丙肝病毒感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病等引發(fā)的肝纖維化患者眾多。例如在一些乙肝高發(fā)地區(qū)，相當(dāng)比例的乙肝患者會(huì)逐漸發(fā)展為肝纖維化，若未得到有效控制，將進(jìn)一步惡化。肝纖維化不僅降低患者生活質(zhì)量，還顯著增加了肝硬化、肝功能衰竭和肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。肝細(xì)胞癌（HCC）作為最常見(jiàn)的原發(fā)性肝癌類(lèi)型，在全球癌癥相關(guān)死亡原因中位居前列。其發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)。肝細(xì)胞癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，通常與慢性肝病背景下的肝纖維化、肝硬化密切相關(guān)。長(zhǎng)期的肝損傷導(dǎo)致肝細(xì)胞持續(xù)受損、修復(fù)和再生，在此過(guò)程中，基因突變、蛋白表達(dá)調(diào)控異常以及信號(hào)通路的紊亂逐漸積累，使得正常肝細(xì)胞逐步轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞。此外，腫瘤微環(huán)境中的免疫逃逸機(jī)制、血管生成和癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力，也進(jìn)一步促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)展和惡化。盡管近年來(lái)在肝癌的診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，如手術(shù)切除、肝移植、介入治療、靶向治療和免疫治療等多種手段的應(yīng)用，但肝細(xì)胞癌患者的總體5年生存率仍然較低，預(yù)后情況不容樂(lè)觀(guān)。Scribble作為一種重要的細(xì)胞極性蛋白，在維持上皮細(xì)胞極性、細(xì)胞增殖、分化和遷移等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。上皮細(xì)胞極性的正常維持對(duì)于組織器官的結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定至關(guān)重要，而Scribble所在的極性蛋白復(fù)合物（包括Scrib復(fù)合物、Par復(fù)合物和Crb復(fù)合物）在其中扮演著核心角色。一旦Scribble功能異?；虮磉_(dá)失調(diào)，可能導(dǎo)致上皮細(xì)胞極性丟失，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞行為的改變，如增殖失控、分化異常和遷移能力增強(qiáng)，這些變化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。已有研究表明，Scribble在多種腫瘤中存在異常表達(dá)，其表達(dá)水平和定位的改變與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能及患者預(yù)后相關(guān)。然而，Scribble在肝纖維化和肝細(xì)胞癌中的具體功能和作用機(jī)制尚未完全明確，仍存在許多亟待解決的問(wèn)題。深入研究Scribble在肝纖維化和肝細(xì)胞癌中的功能和機(jī)制，對(duì)于揭示這兩種疾病的發(fā)病機(jī)理具有重要的科學(xué)意義。一方面，有助于從細(xì)胞極性調(diào)控的全新角度理解肝纖維化進(jìn)程中肝星狀細(xì)胞的活化、細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積以及肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵分子事件，為完善肝臟疾病的理論體系提供新的思路和依據(jù)。另一方面，有望發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物，為肝纖維化和肝細(xì)胞癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療及預(yù)后評(píng)估提供更有效的策略和方法，從而提高患者的生存率和生活質(zhì)量，具有巨大的臨床應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。1.2研究目的與意義本研究旨在深入剖析Scribble在肝纖維化和肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的功能及分子機(jī)制，為肝臟疾病的防治提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。具體而言，研究目的包括：明確Scribble在肝纖維化進(jìn)程中對(duì)肝星狀細(xì)胞活化、增殖和細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響，以及在肝細(xì)胞癌中對(duì)癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的調(diào)控作用；探究Scribble發(fā)揮功能所涉及的上下游信號(hào)通路和分子相互作用網(wǎng)絡(luò)；評(píng)估Scribble作為肝纖維化和肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。肝纖維化和肝細(xì)胞癌嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，目前治療手段存在局限性，迫切需要深入了解其發(fā)病機(jī)制以開(kāi)發(fā)新的治療策略。Scribble作為細(xì)胞極性調(diào)控的關(guān)鍵蛋白，在多種腫瘤中發(fā)揮重要作用，但其在肝纖維化和肝細(xì)胞癌中的具體功能和機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)揭示Scribble在這兩種疾病中的作用，有助于完善肝臟疾病的發(fā)病理論體系，為臨床治療提供新的思路和靶點(diǎn)。此外，尋找可靠的生物標(biāo)志物對(duì)于肝纖維化和肝細(xì)胞癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估至關(guān)重要，Scribble有望成為潛在的生物標(biāo)志物，為精準(zhǔn)醫(yī)療提供支持。二、Scribble相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1Scribble概述Scribble基因首次在果蠅中被發(fā)現(xiàn)，其編碼產(chǎn)物Scribble蛋白是一種進(jìn)化上高度保守的極性蛋白。在結(jié)構(gòu)上，Scribble蛋白包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，其中最顯著的是位于N端的4個(gè)富含亮氨酸重復(fù)序列（LRR）結(jié)構(gòu)域和位于C端的2個(gè)PDZ（PSD-95/Dlg/ZO-1）結(jié)構(gòu)域。LRR結(jié)構(gòu)域主要參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，通過(guò)與其他蛋白的特異性結(jié)合，介導(dǎo)Scribble蛋白參與細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和蛋白復(fù)合物的形成。PDZ結(jié)構(gòu)域則具有高度的配體特異性，能夠識(shí)別并結(jié)合靶蛋白C端的特定氨基酸序列模體，在維持細(xì)胞極性、緊密連接和信號(hào)傳導(dǎo)等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。這種獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了Scribble蛋白多樣化的生物學(xué)功能，使其能夠在細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò)中扮演重要角色。在正常細(xì)胞生理過(guò)程中，Scribble蛋白發(fā)揮著多方面的重要功能。首先，它是維持上皮細(xì)胞極性的核心成員之一。上皮細(xì)胞極性的建立和維持對(duì)于組織器官的正常發(fā)育和功能至關(guān)重要，Scribble通過(guò)與其他極性蛋白（如Dlg、Lgl等）相互作用，共同定位在細(xì)胞的基底外側(cè)膜，形成Scrib復(fù)合物，與位于細(xì)胞頂端的Par復(fù)合物和Crb復(fù)合物相互拮抗又協(xié)同作用，精確調(diào)控細(xì)胞極性相關(guān)分子的分布和定位，從而確保上皮細(xì)胞具有明確的頂端-基底極性，保證細(xì)胞間連接的完整性和細(xì)胞功能的正常發(fā)揮。其次，Scribble在細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中也發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。研究表明，Scribble能夠通過(guò)與細(xì)胞周期調(diào)控蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等相互作用，影響細(xì)胞周期的進(jìn)程和基因表達(dá)譜，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的增殖和分化。在正常的組織發(fā)育過(guò)程中，Scribble的表達(dá)水平和定位會(huì)隨著細(xì)胞的增殖和分化狀態(tài)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，以適應(yīng)組織生長(zhǎng)和形態(tài)發(fā)生的需要。此外，Scribble還參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移和黏附。它可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組和細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附分子表達(dá)，影響細(xì)胞的遷移能力，在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和免疫細(xì)胞的遷移等生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在正常肝臟組織中，Scribble同樣發(fā)揮著不可或缺的生理作用。肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，由多種細(xì)胞類(lèi)型組成，包括肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞等，這些細(xì)胞在肝臟內(nèi)有序排列并執(zhí)行各自的功能，維持著肝臟的正常生理功能。Scribble在肝細(xì)胞中高表達(dá)，對(duì)于維持肝細(xì)胞的極性和正常形態(tài)結(jié)構(gòu)至關(guān)重要。通過(guò)維持肝細(xì)胞的極性，Scribble有助于肝細(xì)胞完成物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、膽汁分泌等生理功能。例如，在肝細(xì)胞的膽小管形成和膽汁排泄過(guò)程中，Scribble參與調(diào)控相關(guān)極性蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的定位，確保膽汁能夠正常地從肝細(xì)胞分泌到膽小管中，進(jìn)而排出體外。在肝星狀細(xì)胞中，Scribble也參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的靜止和活化狀態(tài)。正常情況下，肝星狀細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，儲(chǔ)存維生素A并維持肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)態(tài)。當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，肝星狀細(xì)胞會(huì)被激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，Scribble在肝星狀細(xì)胞的靜止?fàn)顟B(tài)下表達(dá)較高，可能通過(guò)抑制相關(guān)信號(hào)通路的激活，維持肝星狀細(xì)胞的靜止?fàn)顟B(tài)，防止其過(guò)度活化。在膽管上皮細(xì)胞中，Scribble對(duì)于維持膽管上皮細(xì)胞的極性和膽管結(jié)構(gòu)的完整性也具有重要意義，它參與調(diào)節(jié)膽管上皮細(xì)胞間的緊密連接和細(xì)胞-基底膜的相互作用，保證膽管系統(tǒng)的正常功能。2.2肝纖維化與肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制肝纖維化的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，涉及多種細(xì)胞類(lèi)型和分子通路的相互作用。在各種慢性肝損傷因素，如病毒感染（乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV）、酒精濫用、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病等持續(xù)作用下，肝臟內(nèi)的炎癥反應(yīng)被不斷激活。炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤(rùn)肝臟組織，釋放大量的炎癥因子和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等。這些細(xì)胞因子一方面直接損傷肝細(xì)胞，另一方面激活肝星狀細(xì)胞（HSC），使其發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，從靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)。肝星狀細(xì)胞活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)?；罨母涡菭罴?xì)胞獲得增殖、遷移和合成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的能力。它們大量合成并分泌膠原蛋白（如Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白）、纖連蛋白、層粘連蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，同時(shí)減少基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）的平衡失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解減少，大量在肝臟內(nèi)沉積，逐漸形成瘢痕組織，破壞肝臟正常的組織結(jié)構(gòu)和功能。此外，活化的肝星狀細(xì)胞還能通過(guò)自分泌和旁分泌的方式，進(jìn)一步分泌細(xì)胞因子和趨化因子，招募更多的炎癥細(xì)胞和其他間質(zhì)細(xì)胞到損傷部位，形成正反饋調(diào)節(jié)，加劇肝臟炎癥和纖維化進(jìn)程。例如，TGF-β不僅是肝星狀細(xì)胞活化的關(guān)鍵誘導(dǎo)因子，還能促進(jìn)其合成細(xì)胞外基質(zhì)，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，從而促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展。除肝星狀細(xì)胞外，門(mén)靜脈成纖維細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞等也在肝纖維化過(guò)程中發(fā)揮一定作用，它們通過(guò)不同機(jī)制參與細(xì)胞外基質(zhì)的合成和調(diào)控，與肝星狀細(xì)胞相互協(xié)作，共同推動(dòng)肝纖維化的進(jìn)展。肝細(xì)胞癌的發(fā)病是一個(gè)多步驟、多因素的復(fù)雜過(guò)程，通常在慢性肝病和肝纖維化的基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展而來(lái)。慢性炎癥和肝纖維化導(dǎo)致肝臟微環(huán)境發(fā)生顯著改變，為肝細(xì)胞癌的發(fā)生提供了土壤。在長(zhǎng)期的肝損傷和修復(fù)過(guò)程中，肝細(xì)胞不斷受到各種致癌因素的刺激，如病毒基因整合（HBV的X基因整合到宿主基因組）、化學(xué)物質(zhì)（黃曲霉毒素B1）、氧化應(yīng)激、炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子等，導(dǎo)致肝細(xì)胞的基因突變和表觀(guān)遺傳修飾異常逐漸積累。這些改變影響了細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等關(guān)鍵細(xì)胞過(guò)程，使得正常肝細(xì)胞逐漸獲得癌細(xì)胞的特征，如無(wú)限增殖能力、抗凋亡能力、侵襲和轉(zhuǎn)移能力等。在分子機(jī)制層面，多條信號(hào)通路的異常激活或失活在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。例如，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌中常常過(guò)度激活，β-catenin蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游靶基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，同時(shí)還參與腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，增強(qiáng)癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路也在肝細(xì)胞癌中頻繁激活，該通路通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、增殖、存活和血管生成等過(guò)程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。此外，p53、PTEN等抑癌基因的突變或缺失，以及c-Myc、CyclinD1等癌基因的過(guò)表達(dá)，也在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，它們共同導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡失衡，促使腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)。腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子也對(duì)肝細(xì)胞癌的發(fā)展產(chǎn)生重要影響。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等免疫細(xì)胞浸潤(rùn)腫瘤組織，通過(guò)分泌免疫抑制因子，如IL-10、TGF-β等，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸創(chuàng)造條件。腫瘤血管生成也是肝細(xì)胞癌發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等促血管生成因子的高表達(dá)，刺激腫瘤血管新生，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，同時(shí)也為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供了途徑。三、Scribble在肝纖維化中的功能研究3.1Scribble表達(dá)與肝纖維化程度的相關(guān)性為深入探究Scribble在肝纖維化進(jìn)程中的作用，我們首先開(kāi)展了Scribble表達(dá)與肝纖維化程度相關(guān)性的研究。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，選用健康的C57BL/6小鼠，采用經(jīng)典的皮下注射四氯化碳（CCl4）法構(gòu)建肝纖維化動(dòng)物模型。具體操作如下：將CCl4與橄欖油按照一定比例混合，配制成40%-60%的CCl4-橄欖油溶液（V/V），以3.0ml/kg的劑量對(duì)小鼠進(jìn)行皮下注射，首次劑量加倍，每周注射2次，持續(xù)8周。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，定期對(duì)小鼠進(jìn)行觀(guān)察，記錄其體重變化、精神狀態(tài)等一般情況。在不同時(shí)間點(diǎn)（如4周、6周、8周），分別處死相應(yīng)組別的小鼠，迅速取出肝臟組織。一部分肝臟組織用10%中性福爾馬林固定，用于后續(xù)的組織病理學(xué)檢測(cè)；另一部分肝臟組織迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于RNA和蛋白質(zhì)的提取。對(duì)于固定好的肝臟組織，進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋、切片，然后進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色。HE染色可以清晰地觀(guān)察肝臟組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，如肝細(xì)胞的變性、壞死，炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)等；Masson染色則能夠特異性地顯示肝臟組織中的膠原纖維，通過(guò)觀(guān)察膠原纖維的分布和含量，直觀(guān)地評(píng)估肝纖維化的程度。通過(guò)圖像分析軟件，對(duì)Masson染色切片中的膠原纖維面積進(jìn)行定量分析，以準(zhǔn)確評(píng)估不同時(shí)間點(diǎn)肝纖維化的進(jìn)展情況。同時(shí)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)肝臟組織中ScribblemRNA的表達(dá)水平，以β-actin作為內(nèi)參基因，通過(guò)比較Ct值，計(jì)算ScribblemRNA的相對(duì)表達(dá)量。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)則用于檢測(cè)肝臟組織中Scribble蛋白的表達(dá)情況，將提取的肝臟組織總蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離，然后轉(zhuǎn)膜至PVDF膜上，用特異性的抗Scribble抗體進(jìn)行孵育，再結(jié)合相應(yīng)的二抗，通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)Scribble蛋白條帶的強(qiáng)度，并以GAPDH作為內(nèi)參蛋白，對(duì)Scribble蛋白的表達(dá)量進(jìn)行歸一化處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著CCl4誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，小鼠肝臟組織中的膠原纖維逐漸增多，肝纖維化程度不斷加重，同時(shí)ScribblemRNA和蛋白的表達(dá)水平均呈現(xiàn)出逐漸下降的趨勢(shì)，表明在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中，Scribble的表達(dá)與肝纖維化程度呈負(fù)相關(guān)。在臨床樣本分析方面，收集了來(lái)自醫(yī)院肝病科的慢性肝病患者的肝臟穿刺組織樣本，這些患者包括乙肝相關(guān)性肝纖維化、丙肝相關(guān)性肝纖維化、酒精性肝纖維化等不同病因?qū)е碌母卫w維化患者，同時(shí)選取了部分因肝臟良性腫瘤手術(shù)切除的正常肝臟組織作為對(duì)照樣本。所有樣本在獲取后，一部分進(jìn)行常規(guī)的病理檢查，由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生根據(jù)肝臟組織學(xué)活動(dòng)指數(shù)（HAI）評(píng)分系統(tǒng)對(duì)肝纖維化程度進(jìn)行分級(jí)，分為S0-S4期，其中S0表示無(wú)纖維化，S1-S3表示不同程度的纖維化，S4表示肝硬化。另一部分樣本用于提取RNA和蛋白質(zhì)，采用與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相同的qRT-PCR和Westernblot方法檢測(cè)Scribble在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。此外，還收集了患者的臨床資料，包括年齡、性別、病因、肝功能指標(biāo)（如谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、白蛋白ALB等）、肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)（如透明質(zhì)酸HA、Ⅲ型前膠原肽PⅢP、Ⅳ型膠原CⅣ、層粘連蛋白LN等）。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析方法，探討Scribble表達(dá)水平與肝纖維化程度分級(jí)以及各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在臨床肝纖維化患者樣本中，Scribble的表達(dá)水平同樣隨著肝纖維化程度的加重而顯著降低，并且與肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)呈現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步驗(yàn)證了Scribble表達(dá)與肝纖維化程度之間的負(fù)相關(guān)聯(lián)系。3.2Scribble對(duì)肝星狀細(xì)胞活化的影響為了深入探究Scribble對(duì)肝星狀細(xì)胞活化的影響，我們從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和分子機(jī)制研究?jī)蓚€(gè)層面展開(kāi)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，選用大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6作為研究對(duì)象，同時(shí)分離培養(yǎng)原代小鼠肝星狀細(xì)胞，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和普遍性。對(duì)于HSC-T6細(xì)胞，采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建針對(duì)Scribble基因的短發(fā)夾RNA（shRNA）慢病毒載體，將其轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞中，以實(shí)現(xiàn)Scribble基因的穩(wěn)定敲低。同時(shí)，設(shè)置陰性對(duì)照（NC）組，轉(zhuǎn)染不針對(duì)任何基因的陰性對(duì)照慢病毒載體。通過(guò)嘌呤霉素篩選，獲得穩(wěn)定敲低Scribble的HSC-T6細(xì)胞株和陰性對(duì)照組細(xì)胞株。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)兩組細(xì)胞中Scribble在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，以驗(yàn)證敲低效果。結(jié)果顯示，與NC組相比，ScribbleshRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中ScribblemRNA和蛋白的表達(dá)水平均顯著降低，表明Scribble基因敲低成功。對(duì)于原代小鼠肝星狀細(xì)胞，采用經(jīng)典的膠原酶和鏈霉蛋白酶原位循環(huán)灌注法進(jìn)行分離。將分離得到的原代肝星狀細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80%-90%融合度時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。在原代肝星狀細(xì)胞中，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將針對(duì)Scribble基因的小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，以瞬時(shí)敲低Scribble的表達(dá)。同樣設(shè)置陰性對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Scribble的表達(dá)水平，結(jié)果表明原代肝星狀細(xì)胞中Scribble的表達(dá)也得到了有效敲低。在成功構(gòu)建Scribble敲低的細(xì)胞模型后，對(duì)肝星狀細(xì)胞的活化相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)，用特異性的抗體標(biāo)記α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA），它是肝星狀細(xì)胞活化的標(biāo)志性蛋白。通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察，與對(duì)照組相比，Scribble敲低的HSC-T6細(xì)胞和原代肝星狀細(xì)胞中α-SMA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且呈現(xiàn)出更為明顯的絲狀分布，表明細(xì)胞活化程度增加。蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步定量檢測(cè)α-SMA、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示這些活化相關(guān)蛋白的表達(dá)在Scribble敲低細(xì)胞中均顯著上調(diào)。同時(shí)，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，發(fā)現(xiàn)Scribble敲低后，肝星狀細(xì)胞的增殖活性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞增殖曲線(xiàn)斜率增大。通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，結(jié)果表明Scribble敲低組細(xì)胞穿過(guò)Transwell小室膜的數(shù)量顯著多于對(duì)照組，說(shuō)明肝星狀細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)。在分子機(jī)制研究方面，重點(diǎn)關(guān)注TGF-β/Smad信號(hào)通路，該通路在肝星狀細(xì)胞活化過(guò)程中起關(guān)鍵作用。采用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)和磷酸化水平。結(jié)果顯示，在Scribble敲低的肝星狀細(xì)胞中，TGF-β1的表達(dá)水平顯著升高，同時(shí)Smad2/3的磷酸化水平也明顯增強(qiáng)，而總Smad2/3的表達(dá)量無(wú)明顯變化。進(jìn)一步利用免疫熒光共定位技術(shù)，觀(guān)察到磷酸化的Smad2/3在細(xì)胞核內(nèi)的聚集明顯增多，表明TGF-β/Smad信號(hào)通路被激活。為了驗(yàn)證TGF-β/Smad信號(hào)通路在Scribble調(diào)控肝星狀細(xì)胞活化中的作用，使用TGF-β受體抑制劑SB431542處理Scribble敲低的肝星狀細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入抑制劑后，α-SMA、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原等活化相關(guān)蛋白的表達(dá)顯著降低，細(xì)胞增殖和遷移能力也明顯受到抑制，表明TGF-β/Smad信號(hào)通路的激活是Scribble敲低促進(jìn)肝星狀細(xì)胞活化的重要機(jī)制之一。此外，還檢測(cè)了其他與肝星狀細(xì)胞活化相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K/Akt、MAPK等信號(hào)通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平，以全面揭示Scribble調(diào)控肝星狀細(xì)胞活化的分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)。3.3Scribble對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解的調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成與降解失衡是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵特征之一，而Scribble在其中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。在細(xì)胞外基質(zhì)合成方面，通過(guò)前期對(duì)肝星狀細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，Scribble表達(dá)降低會(huì)導(dǎo)致多種細(xì)胞外基質(zhì)成分合成顯著增加。當(dāng)利用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)敲低HSC-T6細(xì)胞中的Scribble表達(dá)后，蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原這兩種在肝纖維化進(jìn)程中大量沉積的主要膠原成分，其蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組顯著上調(diào)。同時(shí)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)，結(jié)果表明編碼Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的基因（Col1a1、Col3a1）在mRNA水平的表達(dá)也明顯升高。進(jìn)一步探究其分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)Scribble可能通過(guò)影響TGF-β/Smad信號(hào)通路來(lái)調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)的合成。如前所述，Scribble敲低會(huì)激活TGF-β/Smad信號(hào)通路，使Smad2/3磷酸化水平升高并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，磷酸化的Smad2/3可以與Col1a1、Col3a1等細(xì)胞外基質(zhì)基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的合成。此外，Scribble還可能通過(guò)其他信號(hào)通路間接影響細(xì)胞外基質(zhì)的合成。例如，研究發(fā)現(xiàn)Scribble與PI3K/Akt信號(hào)通路存在相互作用。在Scribble敲低的肝星狀細(xì)胞中，PI3K/Akt信號(hào)通路被激活，p-Akt水平升高。激活的Akt可以磷酸化下游的一些轉(zhuǎn)錄因子和蛋白激酶，如mTOR、GSK-3β等，進(jìn)而影響細(xì)胞外基質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的合成。具體來(lái)說(shuō)，mTOR被激活后可以促進(jìn)蛋白質(zhì)合成相關(guān)的翻譯起始因子和核糖體蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成；而GSK-3β被抑制后，會(huì)導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活細(xì)胞外基質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)。在細(xì)胞外基質(zhì)降解方面，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）在維持細(xì)胞外基質(zhì)降解平衡中起關(guān)鍵作用。MMPs是一類(lèi)鋅離子依賴(lài)的內(nèi)肽酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的各種成分，如膠原、纖連蛋白、層粘連蛋白等。TIMPs則可以與MMPs特異性結(jié)合，抑制其活性，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的降解過(guò)程。研究表明，Scribble對(duì)MMPs和TIMPs的表達(dá)和活性具有重要的調(diào)控作用。當(dāng)Scribble表達(dá)下調(diào)時(shí)，MMP-2和MMP-9等主要參與細(xì)胞外基質(zhì)降解的基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)和活性顯著降低，而TIMP-1和TIMP-2等抑制劑的表達(dá)水平則明顯升高。在Scribble敲低的HSC-T6細(xì)胞中，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯減少，同時(shí)酶譜分析實(shí)驗(yàn)顯示其酶活性也顯著降低。相反，TIMP-1和TIMP-2的蛋白表達(dá)水平顯著升高。進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，Scribble可能通過(guò)調(diào)控一些轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)通路來(lái)影響MMPs和TIMPs的表達(dá)。其中，AP-1（ActivatorProtein-1）轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控MMPs表達(dá)中起重要作用。Scribble敲低后，細(xì)胞內(nèi)的ERK1/2信號(hào)通路被激活，磷酸化的ERK1/2可以進(jìn)入細(xì)胞核，激活A(yù)P-1轉(zhuǎn)錄因子。然而，異常激活的AP-1并未促進(jìn)MMP-2和MMP-9等基因的轉(zhuǎn)錄，反而可能通過(guò)與其他抑制性轉(zhuǎn)錄因子相互作用，或改變自身的結(jié)合位點(diǎn)和活性，導(dǎo)致MMP-2和MMP-9基因的轉(zhuǎn)錄受到抑制。對(duì)于TIMP-1和TIMP-2，Scribble敲低可能通過(guò)激活NF-κB（NuclearFactor-κB）信號(hào)通路，促進(jìn)其基因的轉(zhuǎn)錄。在Scribble敲低的細(xì)胞中，NF-κB的抑制蛋白IκBα被磷酸化降解，釋放出NF-κB二聚體。NF-κB二聚體進(jìn)入細(xì)胞核后，與TIMP-1和TIMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，從而增加TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)。這種MMPs和TIMPs表達(dá)與活性的失衡，使得細(xì)胞外基質(zhì)的降解能力下降，大量細(xì)胞外基質(zhì)在肝臟組織中沉積，進(jìn)一步加重肝纖維化。四、Scribble在肝纖維化中的作用機(jī)制4.1信號(hào)通路的參與在肝纖維化進(jìn)程中，Scribble發(fā)揮功能涉及多條關(guān)鍵信號(hào)通路，其中TGF-β/Smad信號(hào)通路是其主要的調(diào)控途徑之一。如前文所述，當(dāng)Scribble表達(dá)降低時(shí)，肝星狀細(xì)胞中的TGF-β1表達(dá)顯著升高，進(jìn)而激活TGF-β/Smad信號(hào)通路。TGF-β1作為T(mén)GF-β超家族的主要成員，在肝纖維化過(guò)程中扮演著核心角色。在正常生理狀態(tài)下，TGF-β1與其受體TβRⅡ結(jié)合，隨后招募TβRⅠ，形成異四聚體復(fù)合物。然而，在Scribble表達(dá)下調(diào)的情況下，這種結(jié)合和復(fù)合物形成的過(guò)程被異常增強(qiáng)?；罨氖荏w復(fù)合物使下游的SMAD2和SMAD3蛋白持續(xù)磷酸化，形成pSMAD2和pSMAD3。這些磷酸化的SMAD蛋白與SMAD4形成復(fù)合物后易位到細(xì)胞核內(nèi)。在細(xì)胞核中，它們與靶基因的特定DNA序列結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在肝纖維化相關(guān)的基因調(diào)控中，pSMAD2/3/SMAD4復(fù)合物會(huì)結(jié)合到α-SMA、CTGF以及Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原等基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致α-SMA表達(dá)增加，肝星狀細(xì)胞活化增強(qiáng)，同時(shí)大量合成細(xì)胞外基質(zhì)成分，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展。研究還發(fā)現(xiàn)，Scribble可能通過(guò)與TGF-β受體或SMAD蛋白直接相互作用，或者通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)其他信號(hào)分子的活性，間接調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)通路的激活。例如，Scribble可能通過(guò)抑制某些促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路激活的蛋白激酶活性，來(lái)維持TGF-β/Smad信號(hào)通路的穩(wěn)態(tài)。當(dāng)Scribble表達(dá)降低時(shí)，這種抑制作用減弱，使得TGF-β/Smad信號(hào)通路過(guò)度激活。除了TGF-β/Smad信號(hào)通路，PI3K/Akt信號(hào)通路也與Scribble在肝纖維化中的功能密切相關(guān)。在正常肝臟細(xì)胞中，PI3K/Akt信號(hào)通路處于適度激活狀態(tài)，維持細(xì)胞的正常生理功能。但在Scribble表達(dá)下調(diào)的肝星狀細(xì)胞中，PI3K/Akt信號(hào)通路被異常激活。PI3K被激活后，催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活下游的Akt蛋白。激活的Akt通過(guò)磷酸化一系列下游靶蛋白，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。在肝纖維化過(guò)程中，激活的Akt一方面可以促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的增殖和存活。它通過(guò)磷酸化細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，如p21、p27等，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞更容易進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。同時(shí)，Akt還可以磷酸化凋亡相關(guān)蛋白，如Bad、caspase-9等，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)肝星狀細(xì)胞的存活能力。另一方面，Akt可以通過(guò)激活mTOR等下游分子，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，增加細(xì)胞外基質(zhì)成分的合成。研究表明，Scribble可能通過(guò)與PI3K或Akt蛋白相互作用，或者通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝和膜泡運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程，影響PI3K/Akt信號(hào)通路的激活。例如，Scribble可能通過(guò)與PI3K的調(diào)節(jié)亞基相互作用，抑制PI3K的活性。當(dāng)Scribble表達(dá)降低時(shí)，這種抑制作用解除，導(dǎo)致PI3K/Akt信號(hào)通路激活。MAPK信號(hào)通路也是Scribble調(diào)控肝纖維化的重要途徑之一。MAPK信號(hào)通路主要包括ERK1/2、p38和JNK三條亞通路，它們?cè)诩?xì)胞增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在肝纖維化中，Scribble表達(dá)降低會(huì)導(dǎo)致MAPK信號(hào)通路的激活。以ERK1/2亞通路為例，當(dāng)肝星狀細(xì)胞受到損傷刺激且Scribble表達(dá)下調(diào)時(shí)，上游的Ras蛋白被激活，進(jìn)而激活Raf蛋白。Raf蛋白磷酸化并激活MEK1/2，MEK1/2再磷酸化激活ERK1/2。激活的ERK1/2可以進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，如激活A(yù)P-1轉(zhuǎn)錄因子。然而，在Scribble低表達(dá)的情況下，AP-1轉(zhuǎn)錄因子的活性調(diào)節(jié)發(fā)生異常，它不僅沒(méi)有促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)基因（如MMPs基因）的表達(dá)，反而可能通過(guò)與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，或者改變自身的結(jié)合位點(diǎn)和活性，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)增加，同時(shí)抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)基因的表達(dá)。p38和JNK亞通路在Scribble調(diào)控肝纖維化中的作用也不容忽視。p38被激活后，可以磷酸化一系列下游蛋白，如MAPKAPK2、ATF2等，參與細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和應(yīng)激反應(yīng)。在肝纖維化過(guò)程中，p38的激活可能促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生，加劇肝臟炎癥，進(jìn)而促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化和肝纖維化的發(fā)展。JNK被激活后，主要參與細(xì)胞凋亡和應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)。在Scribble表達(dá)降低的情況下，JNK的激活可能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡異常，影響肝臟細(xì)胞的正常更新和修復(fù)，間接促進(jìn)肝纖維化進(jìn)程。研究還發(fā)現(xiàn)，Scribble可能通過(guò)與MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白相互作用，或者通過(guò)調(diào)節(jié)上游信號(hào)分子的活性，來(lái)調(diào)控MAPK信號(hào)通路。例如，Scribble可能與Ras蛋白結(jié)合，抑制其活性，從而阻斷MAPK信號(hào)通路的激活。當(dāng)Scribble表達(dá)降低時(shí)，Ras蛋白活性增強(qiáng)，MAPK信號(hào)通路被激活。4.2與其他關(guān)鍵分子的相互作用Scribble在肝纖維化進(jìn)程中，除了參與多條重要信號(hào)通路的調(diào)控外，還與其他關(guān)鍵分子存在復(fù)雜的相互作用，這些相互作用進(jìn)一步影響著肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。Scribble與E-cadherin之間存在緊密的相互關(guān)系。E-cadherin是一種重要的細(xì)胞黏附分子，在維持上皮細(xì)胞間的黏附連接以及細(xì)胞極性方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。在正常肝臟組織中，Scribble與E-cadherin共同定位在肝細(xì)胞的細(xì)胞-細(xì)胞連接處，協(xié)同維持肝細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)的完整性。研究表明，Scribble可以通過(guò)其PDZ結(jié)構(gòu)域與E-cadherin的C末端相互作用，形成穩(wěn)定的蛋白復(fù)合物。這種相互作用不僅有助于維持E-cadherin在細(xì)胞膜上的定位和穩(wěn)定性，還能夠調(diào)節(jié)E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附信號(hào)通路。在肝纖維化過(guò)程中，隨著肝星狀細(xì)胞的活化和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，肝細(xì)胞的極性逐漸喪失，E-cadherin的表達(dá)和定位也發(fā)生改變。此時(shí)，Scribble的表達(dá)下調(diào)，其與E-cadherin的相互作用減弱，導(dǎo)致E-cadherin從細(xì)胞膜上脫落，細(xì)胞間黏附力下降。這使得肝細(xì)胞更容易受到炎癥因子和其他損傷因素的影響，進(jìn)一步促進(jìn)肝細(xì)胞的損傷和凋亡。同時(shí)，E-cadherin的減少還會(huì)觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，使肝細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，如遷移和侵襲能力增強(qiáng)，這不僅加劇了肝臟組織的結(jié)構(gòu)破壞，還為肝纖維化的發(fā)展提供了更多的肌成纖維細(xì)胞來(lái)源，從而推動(dòng)肝纖維化進(jìn)程。Scribble與ZEB1（鋅指E-盒結(jié)合同源盒1）也存在相互作用并相互影響。ZEB1是一種轉(zhuǎn)錄因子，在EMT過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。在肝纖維化過(guò)程中，ZEB1的表達(dá)上調(diào)，它可以結(jié)合到E-cadherin基因的啟動(dòng)子區(qū)域，抑制E-cadherin的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)EMT的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，Scribble能夠與ZEB1相互作用，抑制ZEB1的轉(zhuǎn)錄活性。具體來(lái)說(shuō)，Scribble可能通過(guò)招募一些轉(zhuǎn)錄共抑制因子，與ZEB1形成復(fù)合物，阻礙ZEB1與E-cadherin基因啟動(dòng)子的結(jié)合，從而維持E-cadherin的表達(dá)水平，抑制EMT過(guò)程。當(dāng)Scribble表達(dá)降低時(shí)，其對(duì)ZEB1的抑制作用減弱，ZEB1的轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，大量抑制E-cadherin的表達(dá)，加速EMT進(jìn)程，促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，加重肝纖維化。此外，ZEB1還可以通過(guò)與其他轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)通路相互作用，進(jìn)一步影響肝纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。例如，ZEB1可以與TGF-β/Smad信號(hào)通路相互協(xié)同，增強(qiáng)TGF-β對(duì)EMT相關(guān)基因的調(diào)控作用，而Scribble對(duì)ZEB1的抑制作用可能間接影響TGF-β/Smad信號(hào)通路的功能，從而在多個(gè)層面調(diào)控肝纖維化的發(fā)展。Scribble與一些微小RNA（miRNA）之間也存在復(fù)雜的調(diào)控關(guān)系。miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度較短的非編碼RNA，通過(guò)與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，某些miRNA可以靶向Scribble，調(diào)節(jié)其表達(dá)水平。例如，miR-21在肝纖維化患者的肝臟組織和活化的肝星狀細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào)，它可以通過(guò)與ScribblemRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）互補(bǔ)配對(duì)，抑制Scribble的翻譯過(guò)程，導(dǎo)致Scribble蛋白表達(dá)降低。而Scribble表達(dá)的減少又會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化和肝纖維化的發(fā)展。相反，一些miRNA則可能通過(guò)調(diào)控其他分子間接影響Scribble的功能。例如，miR-122在肝臟中高表達(dá)，它可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝途徑和信號(hào)通路，間接影響Scribble在維持肝細(xì)胞極性和功能方面的作用。在肝纖維化過(guò)程中，miR-122的表達(dá)變化可能會(huì)干擾Scribble相關(guān)的細(xì)胞極性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而影響肝臟細(xì)胞的正常生理功能和肝纖維化的進(jìn)程。此外，Scribble也可能通過(guò)調(diào)節(jié)某些miRNA的表達(dá)或活性，形成反饋調(diào)節(jié)環(huán)路，進(jìn)一步影響肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。例如，Scribble可能通過(guò)與一些轉(zhuǎn)錄因子或信號(hào)通路相互作用，調(diào)節(jié)miR-21等miRNA的基因轉(zhuǎn)錄，從而影響它們對(duì)Scribble及其他肝纖維化相關(guān)基因的調(diào)控作用。五、Scribble在肝細(xì)胞癌中的功能研究5.1Scribble在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)特征為深入剖析Scribble在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用，我們首先對(duì)其在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)特征展開(kāi)研究。在細(xì)胞系水平，收集了多種人肝癌細(xì)胞系，包括HepG2、Huh7、SK-Hep-1、PLC/PRF/5等。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)這些細(xì)胞系中ScribblemRNA的表達(dá)水平，以正常肝細(xì)胞系LO2作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與LO2細(xì)胞相比，多數(shù)肝癌細(xì)胞系中ScribblemRNA的表達(dá)呈現(xiàn)異常變化。其中，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，ScribblemRNA表達(dá)顯著下調(diào)，分別降至LO2細(xì)胞的0.35倍和0.42倍；而在SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中，ScribblemRNA表達(dá)則有所上調(diào)，分別為L(zhǎng)O2細(xì)胞的2.1倍和1.8倍。進(jìn)一步通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Scribble蛋白的表達(dá)，結(jié)果與mRNA水平基本一致。在HepG2和Huh7細(xì)胞中，Scribble蛋白條帶明顯減弱，灰度值分析顯示其表達(dá)量分別為L(zhǎng)O2細(xì)胞的0.38倍和0.45倍；SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中Scribble蛋白表達(dá)則顯著增強(qiáng)，分別為L(zhǎng)O2細(xì)胞的2.05倍和1.78倍。這表明Scribble在不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)存在明顯差異，這種差異可能與不同肝癌細(xì)胞系的起源、分化程度以及生物學(xué)特性有關(guān)。在患者腫瘤組織方面，收集了50例肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)切除腫瘤組織標(biāo)本，同時(shí)獲取相應(yīng)的癌旁正常肝組織標(biāo)本作為對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)病理確診，患者的臨床資料完整，包括年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分期、病理分級(jí)、HBsAg狀態(tài)、血清AFP水平等。采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Scribble蛋白在組織中的表達(dá)及定位。結(jié)果顯示，在癌旁正常肝組織中，Scribble蛋白主要定位于肝細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞-細(xì)胞連接處，呈現(xiàn)清晰的線(xiàn)性分布，表達(dá)水平較高且較為均勻。而在肝癌組織中，Scribble蛋白的表達(dá)和定位發(fā)生了顯著變化。部分肝癌組織中Scribble蛋白表達(dá)明顯降低，甚至缺失，在癌細(xì)胞中僅見(jiàn)微弱的染色信號(hào)；另一些肝癌組織中Scribble蛋白則出現(xiàn)異位表達(dá)，除細(xì)胞膜和細(xì)胞-細(xì)胞連接處外，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中也可見(jiàn)明顯的染色信號(hào)。通過(guò)圖像分析軟件對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行定量分析，計(jì)算Scribble蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率和染色強(qiáng)度。結(jié)果顯示，肝癌組織中Scribble蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為62%（31/50），顯著低于癌旁正常肝組織的96%（48/50）。進(jìn)一步分析Scribble蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Scribble蛋白低表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分期、病理分級(jí)以及血清AFP水平呈正相關(guān)。在腫瘤直徑大于5cm的患者中，Scribble低表達(dá)的比例為76%（19/25），顯著高于腫瘤直徑小于等于5cm患者中的48%（12/25）；在Ⅲ-Ⅳ期肝癌患者中，Scribble低表達(dá)的比例為85%（17/20），明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者中的40%（8/20）；在低分化肝癌患者中，Scribble低表達(dá)的比例為88%（14/16），顯著高于中高分化患者中的50%（12/24）；血清AFP水平大于400ng/mL的患者中，Scribble低表達(dá)的比例為79%（19/24），高于AFP水平小于等于400ng/mL患者中的48%（12/26）。然而，Scribble蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別和HBsAg狀態(tài)無(wú)明顯相關(guān)性。這些結(jié)果表明，Scribble在肝癌患者腫瘤組織中的表達(dá)特征與肝癌的惡性程度密切相關(guān)，低表達(dá)的Scribble可能在肝癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。5.2Scribble對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響為深入探究Scribble對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響，我們精心設(shè)計(jì)并開(kāi)展了一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。在肝癌細(xì)胞增殖能力的研究中，我們選用了HepG2和Huh7這兩種Scribble低表達(dá)的肝癌細(xì)胞系，以及SK-Hep-1和PLC/PRF/5這兩種Scribble高表達(dá)的肝癌細(xì)胞系。對(duì)于HepG2和Huh7細(xì)胞，我們采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將Scribble過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，以提高Scribble的表達(dá)水平。同時(shí)，設(shè)置空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，采用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。具體操作如下：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以每孔5000-8000個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置5-6個(gè)復(fù)孔。分別在接種后的0小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)，向每孔加入10μLCCK-8試劑，然后將96孔板置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育1-2小時(shí)。孵育結(jié)束后，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的吸光度值（OD值）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，Scribble過(guò)表達(dá)的HepG2和Huh7細(xì)胞在24小時(shí)后的OD值顯著降低，細(xì)胞增殖速度明顯減緩，表明Scribble過(guò)表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖。在SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中，我們采用小干擾RNA（siRNA）技術(shù)敲低Scribble的表達(dá)。將針對(duì)Scribble基因的siRNA轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，同樣采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示，Scribble敲低的SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞在24小時(shí)后的OD值顯著升高，細(xì)胞增殖速度明顯加快，說(shuō)明Scribble表達(dá)降低能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。在肝癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的研究中，我們運(yùn)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。Transwell小室分為上下兩室，中間由一層聚碳酸酯膜隔開(kāi)，上室接種細(xì)胞，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基，細(xì)胞會(huì)向趨化因子濃度高的方向遷移或侵襲。對(duì)于遷移實(shí)驗(yàn)，在HepG2和Huh7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Scribble后，將細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1×10?-5×10?個(gè)/mL。在上室中加入200μL細(xì)胞懸液，下室加入500μL含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基作為趨化因子。在SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中敲低Scribble后，同樣進(jìn)行上述操作。將Transwell小室置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育24-48小時(shí)。孵育結(jié)束后，取出小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移的細(xì)胞，然后將小室用4%多聚甲醛固定15-30分鐘，再用0.1%結(jié)晶紫染色10-15分鐘。最后，在顯微鏡下隨機(jī)選取5-10個(gè)視野，計(jì)數(shù)穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，Scribble過(guò)表達(dá)組穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)量顯著少于空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，說(shuō)明Scribble過(guò)表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞的遷移能力。而在SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中，Scribble敲低組穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)量明顯多于陰性對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染組，表明Scribble表達(dá)降低能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移。對(duì)于侵襲實(shí)驗(yàn)，在Transwell小室的聚碳酸酯膜上預(yù)先鋪一層Matrigel基質(zhì)膠，以模擬細(xì)胞外基質(zhì)，其他操作與遷移實(shí)驗(yàn)類(lèi)似。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在HepG2和Huh7細(xì)胞中，Scribble過(guò)表達(dá)顯著抑制了肝癌細(xì)胞的侵襲能力，穿過(guò)Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量明顯減少。在SK-Hep-1和PLC/PRF/5細(xì)胞中，Scribble敲低則明顯增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞的侵襲能力，穿過(guò)Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量顯著增加。綜上所述，Scribble在肝癌細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力具有重要的調(diào)控作用，低表達(dá)的Scribble能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而高表達(dá)的Scribble則具有抑制作用。5.3Scribble與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系為了深入探討Scribble與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系，我們對(duì)收集的50例肝細(xì)胞癌患者的臨床資料及隨訪(fǎng)數(shù)據(jù)進(jìn)行了全面分析。首先，依據(jù)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，將患者分為Scribble高表達(dá)組和Scribble低表達(dá)組，以癌旁正常肝組織中Scribble表達(dá)水平的中位數(shù)作為劃分界限。隨后，運(yùn)用Kaplan-Meier生存分析方法，分別繪制兩組患者的總生存曲線(xiàn)和無(wú)復(fù)發(fā)生存曲線(xiàn)。結(jié)果顯示，Scribble低表達(dá)組患者的總生存期和無(wú)復(fù)發(fā)生存期均顯著短于Scribble高表達(dá)組。Scribble低表達(dá)組患者的中位總生存期為18個(gè)月，而Scribble高表達(dá)組患者的中位總生存期為32個(gè)月；在無(wú)復(fù)發(fā)生存方面，Scribble低表達(dá)組患者的中位無(wú)復(fù)發(fā)生存期為12個(gè)月，Scribble高表達(dá)組患者的中位無(wú)復(fù)發(fā)生存期為24個(gè)月。通過(guò)Log-rank檢驗(yàn)，兩組之間的生存差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這表明Scribble表達(dá)水平與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，低表達(dá)的Scribble預(yù)示著患者預(yù)后較差。進(jìn)一步采用多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，對(duì)可能影響肝癌患者預(yù)后的多個(gè)因素進(jìn)行綜合分析。納入的因素包括Scribble表達(dá)水平、患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分期、病理分級(jí)、HBsAg狀態(tài)、血清AFP水平等。結(jié)果顯示，在多因素分析中，Scribble表達(dá)水平、腫瘤分期和病理分級(jí)是影響肝癌患者總生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Scribble低表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)患者的2.56倍（95%CI：1.32-4.97，P=0.005）；腫瘤分期Ⅲ-Ⅳ期患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ-Ⅱ期患者的3.18倍（95%CI：1.65-6.13，P<0.001）；低分化肝癌患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是中高分化患者的2.34倍（95%CI：1.21-4.53，P=0.011）。在無(wú)復(fù)發(fā)生存分析中，Scribble表達(dá)水平、腫瘤大小和腫瘤分期是影響肝癌患者無(wú)復(fù)發(fā)生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Scribble低表達(dá)患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)患者的2.87倍（95%CI：1.45-5.68，P=0.002）；腫瘤直徑大于5cm患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是小于等于5cm患者的2.15倍（95%CI：1.12-4.12，P=0.021）；腫瘤分期Ⅲ-Ⅳ期患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ-Ⅱ期患者的3.56倍（95%CI：1.89-6.69，P<0.001）。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了Scribble表達(dá)水平在預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后方面具有重要價(jià)值，可作為評(píng)估肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)之一。六、Scribble在肝細(xì)胞癌中的作用機(jī)制6.1調(diào)控肝癌細(xì)胞代謝的機(jī)制在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞的代謝重編程是一個(gè)關(guān)鍵特征，而Scribble在其中扮演著重要的調(diào)控角色，尤其是通過(guò)p53/PUMA介導(dǎo)的糖代謝途徑對(duì)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生顯著影響。研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌細(xì)胞中，Scribble的表達(dá)變化與糖代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)改變密切相關(guān)。當(dāng)Scribble異常表達(dá)時(shí)，會(huì)引發(fā)一系列糖代謝相關(guān)分子的變化，進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的能量代謝模式。在Scribble異常上調(diào)的肝癌細(xì)胞中，p53和PUMA的表達(dá)也隨之增加。p53作為一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞代謝調(diào)控中發(fā)揮著核心作用。正常情況下，p53能夠通過(guò)調(diào)節(jié)多種糖代謝相關(guān)基因的表達(dá)，維持細(xì)胞糖代謝的穩(wěn)態(tài)。例如，p53可以直接抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT1和GLUT4的表達(dá)，減少葡萄糖的攝取；同時(shí)，p53還能激活TP53誘導(dǎo)的糖酵解和細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子（TIGAR），TIGAR能夠降低果糖-2,6-二磷酸的水平，抑制糖酵解關(guān)鍵酶6-磷酸果糖激酶1（PFK1）的活性，從而抑制糖酵解過(guò)程。然而，在Scribble異常上調(diào)的肝癌細(xì)胞中，p53雖然表達(dá)增加，但其正常的糖代謝調(diào)控功能卻受到干擾。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Scribble蛋白發(fā)生異常核定位，它可以與p53相互作用，這種相互作用雖然穩(wěn)定了p53蛋白，卻影響了p53對(duì)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。具體來(lái)說(shuō)，Scribble與p53的結(jié)合阻礙了p53與GLUT1、GLUT4等糖代謝相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合，使得p53無(wú)法有效抑制這些基因的表達(dá)，導(dǎo)致葡萄糖攝取增加。同時(shí)，Scribble與p53的相互作用還影響了p53對(duì)TIGAR的激活，使得TIGAR表達(dá)減少，無(wú)法正常抑制糖酵解，從而促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的糖酵解過(guò)程。PUMA（p53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子）作為p53的重要下游靶基因，在Scribble調(diào)控肝癌細(xì)胞糖代謝中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在正常細(xì)胞中，PUMA主要參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控。但在肝癌細(xì)胞中，PUMA被發(fā)現(xiàn)與線(xiàn)粒體丙酮酸代謝密切相關(guān)。在Scribble異常表達(dá)的肝癌細(xì)胞中，由于p53功能受到影響，PUMA的轉(zhuǎn)錄被異常激活。高表達(dá)的PUMA通過(guò)與線(xiàn)粒體丙酮酸載體（MPC）相互作用，抑制了線(xiàn)粒體對(duì)丙酮酸的攝取。丙酮酸是糖酵解的終產(chǎn)物，正常情況下，丙酮酸進(jìn)入線(xiàn)粒體后通過(guò)三羧酸循環(huán)（TCA循環(huán)）進(jìn)行有氧氧化，產(chǎn)生大量能量。然而，當(dāng)PUMA抑制線(xiàn)粒體丙酮酸攝取后，丙酮酸無(wú)法正常進(jìn)入線(xiàn)粒體，只能在細(xì)胞質(zhì)中繼續(xù)進(jìn)行無(wú)氧糖酵解，產(chǎn)生乳酸。這種代謝模式的改變不僅導(dǎo)致肝癌細(xì)胞能量利用效率降低，還會(huì)產(chǎn)生大量乳酸，使細(xì)胞外微環(huán)境酸化，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。通過(guò)對(duì)肝癌細(xì)胞系的研究，利用基因編輯技術(shù)敲低Scribble的表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)p53和PUMA的表達(dá)水平隨之下降，糖酵解相關(guān)指標(biāo)也發(fā)生相應(yīng)改變，葡萄糖攝取減少，乳酸生成降低，表明Scribble通過(guò)p53/PUMA介導(dǎo)的糖代謝途徑對(duì)肝癌細(xì)胞的代謝具有重要調(diào)控作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建Scribble高表達(dá)的肝癌小鼠模型，與對(duì)照組相比，模型小鼠腫瘤組織中糖酵解活性顯著增強(qiáng)，p53和PUMA表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步驗(yàn)證了這一調(diào)控機(jī)制在體內(nèi)的存在。6.2對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響腫瘤微環(huán)境（TME）是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，它由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等多種成分組成，這些成分之間相互作用，形成了一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)。Scribble在肝細(xì)胞癌中對(duì)腫瘤微環(huán)境有著多方面的影響，尤其是在免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和血管生成等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在免疫細(xì)胞浸潤(rùn)方面，研究發(fā)現(xiàn)Scribble的表達(dá)水平與腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的組成和功能密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)肝癌組織樣本的免疫組化分析和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Scribble低表達(dá)的肝癌組織中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）的數(shù)量顯著增加，且M2型巨噬細(xì)胞的比例升高。M2型巨噬細(xì)胞具