細(xì)胞生物學(xué)研究方法詳解演示文稿第一頁，共一百六十四頁。（優(yōu)選）細(xì)胞生物學(xué)研究方法第二頁，共一百六十四頁。一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（lightmicroscopy)普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）微分干涉顯微鏡（differential-interferencemicroscope）熒光顯微鏡技術(shù)（FluorescenceMicroscopy）激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（LaserConfocalMicroscopy）熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)第三頁，共一百六十四頁。1、普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)顯微鏡結(jié)構(gòu)：①機(jī)械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂鏡筒、調(diào)焦裝置、載物臺（物鏡轉(zhuǎn)換器）②照明部分：反光鏡、聚光鏡③光學(xué)部分：目鏡、物鏡第四頁，共一百六十四頁。

放大倍數(shù)(magnification):最終成像的大小與原物體大小的比值?？偡糯蟊稊?shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)光學(xué)顯微鏡的最大放大倍數(shù)為1,000倍.電子顯微鏡的最大放大倍數(shù)為1,000,000.第五頁，共一百六十四頁。普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)分辨率（即分辨極限,D）是指區(qū)分開兩個質(zhì)點間的最小距離。習(xí)慣說的分辨率高則是指該分辨極限??；人眼的分辨率：100

m，光學(xué)顯微鏡的最大分別率：0.2

m。放大倍數(shù):光學(xué)顯微鏡在用空氣作介質(zhì)時，最大放大倍數(shù)為1000倍，用油鏡時為1400倍。第六頁，共一百六十四頁。分辨率（Limitofresolution）對可見光來說，能清楚分辨出相鄰兩點之間的最小間隔為0.2

m。

＝0.61×0.5m/1.5×1＝0.2

mP50數(shù)值孔徑第七頁，共一百六十四頁。幾種介質(zhì)的折射率第八頁，共一百六十四頁。不同光線的波長第九頁，共一百六十四頁。下列()與顯微鏡能達(dá)到的分辨率無關(guān)。A．光波波長B．物鏡的放大倍數(shù)C．標(biāo)本和透鏡之間的物質(zhì)的折射率D．透鏡的數(shù)值孔徑√第十頁，共一百六十四頁。固定（甲醛等）

↓包埋（石蠟、樹脂等）

↓切片（切片機(jī)）

↓染色觀察石蠟切片

第十一頁，共一百六十四頁。石蠟切片

第十二頁，共一百六十四頁。相差顯微鏡原理：利用光的衍射和干涉特性使相位差變成振幅差，表現(xiàn)為明與暗的對比。兩個特殊構(gòu)件：環(huán)狀光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。相位板（annularphaseplate）：涂有光吸收物質(zhì)和相位推遲物質(zhì)。用途：能觀察無色、透明、活細(xì)胞中的結(jié)構(gòu)。第十三頁，共一百六十四頁。微分干涉顯微鏡HumanCheekEpithelialCells

第十四頁，共一百六十四頁。微分干涉顯微鏡原理：利用兩組平面偏振光的干涉，加強影像的明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影。

第十五頁，共一百六十四頁。應(yīng)用：適于研究活細(xì)胞中較大的細(xì)胞器、顆粒及其運動。計算機(jī)輔助的DIC分辨率比普通光鏡提高了一個數(shù)量級。應(yīng)用這一原理制備的錄像增差顯微鏡（video-enhancemicroscopy）可以觀察微管上顆粒的運動。第十六頁，共一百六十四頁。C.elegans(線蟲)expressingGFP,visualizedunderdifferentialinterferencecontrastmicroscopy(top)andfluorescencemicroscopy(bottom).

第十七頁，共一百六十四頁。熒光顯微鏡技術(shù)

（FluorescenceMicroscopy）第十八頁，共一百六十四頁。EthidiumPEcis-ParinaricacidTexasRedPE-TRConj.PIFITC600nm300nm500nm700nm400nm350632488波長熒光染料第十九頁，共一百六十四頁。第二十頁，共一百六十四頁。第二十一頁，共一百六十四頁。熒光顯微鏡技術(shù)免疫熒光技術(shù)（見本章第2節(jié)）熒光素直接標(biāo)記技術(shù)第二十二頁，共一百六十四頁。熒光素直接標(biāo)記技術(shù)第二十三頁，共一百六十四頁。TheadherentcultureofBPAEcellsfeaturedinthissectionwaslabeledwithMitoTrackerRedCMXRos(mitochondria;yellow),AlexaFluor488(filamentousactin;green),AlexaFluor647(nuclearporecomplexprotein;red),andHoechst33342(nucleus;cyan).

第二十四頁，共一百六十四頁。2008年諾貝爾化學(xué)獎

日本科學(xué)家下村修、美國科學(xué)家馬丁·沙爾菲和美籍華裔科學(xué)家錢永健獲得2008年的諾貝爾化學(xué)獎。這三位科學(xué)家因在發(fā)現(xiàn)和研究綠色熒光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）方面做出貢獻(xiàn)而獲獎。第二十五頁，共一百六十四頁。2008年美國科學(xué)家培育出世界首只能“發(fā)光”的貓

第二十六頁，共一百六十四頁。第二十七頁，共一百六十四頁。第二十八頁，共一百六十四頁。隨著病毒在宿主體內(nèi)不斷擴(kuò)散，就可以通過跟蹤發(fā)出的綠光來觀察病毒的擴(kuò)散途徑

第二十九頁，共一百六十四頁。第三十頁，共一百六十四頁。使用綠色熒光蛋白跟蹤大腦細(xì)胞的活動

第三十一頁，共一百六十四頁。大腦彩虹圖獲得了2007奧林巴斯生物數(shù)字成像大獎

第三十二頁，共一百六十四頁。綠色熒光蛋白

(greenfluorescentprotein)定義：綠色螢光蛋白(greenfluorescentprotein)，簡稱GFP，這種蛋白質(zhì)最早是在水母中發(fā)現(xiàn)，其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)會發(fā)出綠色熒光。在生物學(xué)領(lǐng)域中，綠色螢光蛋白基因常被用作為一個報告基因(reportergene)。第三十三頁，共一百六十四頁。

激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)（ConfocalLaserScanningMicroscope）采用激光束做光源，激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標(biāo)本內(nèi)焦平面上的每一點進(jìn)行掃描，然后激發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測針孔時產(chǎn)生聚焦，聚焦后的光被光電倍增管探測收集，并將信號輸送到計算機(jī)，在彩色顯示器上顯示圖像。第三十四頁，共一百六十四頁。laserconfocalscanningmicroscope,LCSM第三十五頁，共一百六十四頁。優(yōu)點1：圖像清晰第三十六頁，共一百六十四頁。第三十七頁，共一百六十四頁。優(yōu)點2：多重?zé)晒鈽?biāo)記第三十八頁，共一百六十四頁。Golgiapparatus(inred)andthemitoticspindles(ingreen)ofanearlyDrosophila（果蠅）embryoundergoingmitosis.

第三十九頁，共一百六十四頁。cytoskeletonmicrotubules(green),actinfilaments(red),andthenucleus(blue).

第四十頁，共一百六十四頁。優(yōu)點3：觀察三維空間結(jié)構(gòu)在顯微鏡載物臺上加一個微量步進(jìn)馬達(dá)，使載物臺上下移動，改變焦平面，不同層次的光切面圖像經(jīng)計算機(jī)圖像三維重組，就可以無損傷地分析細(xì)胞的三維空間結(jié)構(gòu)。第四十一頁，共一百六十四頁。優(yōu)點3：觀察三維空間結(jié)構(gòu)第四十二頁，共一百六十四頁。優(yōu)點4：活細(xì)胞的動態(tài)觀察第四十三頁，共一百六十四頁。優(yōu)點4：活細(xì)胞的動態(tài)觀察第四十四頁，共一百六十四頁。熒光共振能量轉(zhuǎn)移P54

fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET當(dāng)一個供體熒光分子的熒光光譜與另一個受體熒光分子的激發(fā)光譜相重疊時，供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光,同時供體熒光分子自身的熒光強度衰減。FRET程度與供、受體分子的空間距離緊密相關(guān)，一般小于10nm時即可發(fā)生FRET第四十五頁，共一百六十四頁。GFP的兩個突變體CFP（cyanfluorescentprotein）YFP（yellowfluorescentprotein）第四十六頁，共一百六十四頁。熒光共振能量轉(zhuǎn)移ThedistancebetweenactinmonomersinF-actinis55?,whichiswithinthetypicalrangeforFRET(10–100?).TaggingactinwithCFPandYFPasdonorandacceptor,respectively,allowsustouseFRETtoobservetheequilibriumbetweenF-actinandG-actininlivingcells.第四十七頁，共一百六十四頁。熒光共振能量轉(zhuǎn)移的應(yīng)用

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能分析核酸檢測細(xì)胞器結(jié)構(gòu)功能檢測等第四十八頁，共一百六十四頁。熒光漂白恢復(fù)技術(shù)P55

fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP借助高強度激光照射細(xì)胞某一區(qū)域，造成該區(qū)域熒光分子的光淬滅，周圍的非淬滅熒光分子將以一定速率向受照區(qū)域擴(kuò)散，可通過低強度激光掃描探測此擴(kuò)散速率。

第四十九頁，共一百六十四頁。第五十頁，共一百六十四頁。熒光漂白恢復(fù)技術(shù)

在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用

分析細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)運輸、受體在細(xì)胞膜上的流動和大分子組裝等細(xì)胞生物學(xué)過程。第五十一頁，共一百六十四頁。

是檢測活體中生物大分子納米級距離和納米級距離變化的有力工具，可用于檢測某一細(xì)胞中兩個蛋白質(zhì)分子是否存在直接的相互作用。A)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)B)相差顯微鏡技術(shù)C)微分干涉顯微鏡技術(shù)D)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)√第五十二頁，共一百六十四頁。二、電子顯微鏡

（electronmicroscope）1932年德國學(xué)者M(jìn)axKnolls和ErnstRuska用波長比光短得多的電子作光源,發(fā)明了第一臺電子顯微鏡，大大提高了顯微鏡的分辨率（0.2nm），放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍，用于觀察超微結(jié)構(gòu)。第五十三頁，共一百六十四頁。電子束照明系統(tǒng)：主要由燈絲陰極和陽極組成。陰極電壓通常50~120KV，陽極為0V，兩極的電壓差異稱為加速電壓。電子束的波長與加速電壓的平方根成反比。成像系統(tǒng)：改變電子方向。真空系統(tǒng)：保持電鏡真空，防止空氣中分子會阻撓電子束的發(fā)射而不能成像。記錄系統(tǒng)：第五十四頁，共一百六十四頁。工作原理：電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出二級電子，由探測器收集，信號經(jīng)放大后在熒光屏上顯示出與電子束同步的掃描圖像。第五十五頁，共一百六十四頁。1透射電鏡（TransmissionelectronMicroscopeTEM）電子穿過樣本，觀察超薄切片2掃描電鏡（ScanningelectronMicroscopeSEM）用于觀察固體表面的形貌

電子顯微鏡分類第五十六頁，共一百六十四頁。1透射電鏡第五十七頁，共一百六十四頁。

超薄切片樣品制備第五十八頁，共一百六十四頁。超薄切片技術(shù)電鏡負(fù)染色技術(shù)冷凍蝕刻電鏡技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)

電鏡技術(shù)第五十九頁，共一百六十四頁。超薄切片(uitrathinsection)電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。第六十頁，共一百六十四頁。負(fù)染色(negativeStaining)和投影(shadowcasting)技術(shù)負(fù)染色:用重金屬鹽(如磷鎢酸鈉)對鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色,使整個載網(wǎng)都鋪上一層重金屬鹽,而凸出的樣品則沒有染料.投影技術(shù):又叫噴鍍技術(shù),是一種重要的增強背景和待觀察樣品反差的方法.第六十一頁，共一百六十四頁。冰凍蝕刻(freeze-etching)

冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來觀察膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒和膜表面結(jié)構(gòu)。第六十二頁，共一百六十四頁。快速冷凍深度蝕刻技術(shù)(AYeastCell)第六十三頁，共一百六十四頁。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)第六十四頁，共一百六十四頁。掃描電鏡

掃描電鏡是用極細(xì)的電子束在樣品表面掃描，將產(chǎn)生的二次電子用特制的探測器收集，形成電信號運送到顯像管，在熒光屏上顯示細(xì)胞、組織表面的立體構(gòu)像。第六十五頁，共一百六十四頁。掃描電鏡

第六十六頁，共一百六十四頁。掃描電鏡照片展示注射針頭的掃描電鏡照片第六十七頁，共一百六十四頁。掃描電鏡照片展示不同倍率的果蠅掃描電鏡照片第六十八頁，共一百六十四頁。掃描電鏡照片展示可以用計算機(jī)將黑白照片處理成彩色掃描電鏡照片展示第六十九頁，共一百六十四頁。掃描電鏡照片展示肺細(xì)支氣管粘膜杯狀細(xì)胞和纖毛細(xì)胞掃描電鏡照片掃描電鏡照片展示第七十頁，共一百六十四頁。掃描電鏡照片展示培養(yǎng)細(xì)胞掃描電鏡照片展示第七十一頁，共一百六十四頁。掃描電鏡透射電鏡第七十二頁，共一百六十四頁。三掃描隧道顯微鏡第七十三頁，共一百六十四頁。原理：根據(jù)量子力學(xué)中的隧道效應(yīng)原理制成，可用于研究表面的原子結(jié)構(gòu)和電子結(jié)構(gòu)。特點：可對晶體或非晶體成像，分辨本領(lǐng)高；可實時得到樣品表面三維圖象；可在真空、大氣、液體等多種條件下工作；非破壞性測量；可連續(xù)成像，進(jìn)行動態(tài)觀察。用途：納米生物學(xué)研究領(lǐng)域中的重要工具,在原子水平上揭示樣本表面的結(jié)構(gòu)。第七十四頁，共一百六十四頁。第七十五頁，共一百六十四頁。利用掃描隧道顯微鏡直接獲取細(xì)胞膜、細(xì)胞表面、病毒、生物大分子的結(jié)構(gòu)信息

realimage

第七十六頁，共一百六十四頁。可以利用()直接獲取細(xì)胞膜、細(xì)胞表面、病毒、生物大分子的結(jié)構(gòu)信息。A．掃描隧道顯微鏡B．掃描電鏡C．透射電鏡D．激光掃描共聚焦顯微鏡√第七十七頁，共一百六十四頁。第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法

超高速離心分離技術(shù)細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法特異蛋白抗原的定位與定性細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性放射自顯影技術(shù)定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)第七十八頁，共一百六十四頁。一、超高速離心分離技術(shù)用途：分離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物差速離心：分離密度不同的細(xì)胞組分密度梯度離心：精細(xì)組分或生物大分子的分離第七十九頁，共一百六十四頁。差速離心

Differentialcentrifugation特點：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體。可將細(xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。

第八十頁，共一百六十四頁。密度梯度離心

（densitygradientcentrifugation）

密度梯度離心是將要分離的組分放在已形成密度梯度的惰性物質(zhì)（如蔗糖）溶液的表面，在這種條件下進(jìn)行離心，不同組分以不同的沉降速度沉降，形成不同的沉降帶。

第八十一頁，共一百六十四頁。不同的細(xì)胞器、大分子和病毒的

密度及相應(yīng)的沉降系數(shù)

第八十二頁，共一百六十四頁。2.2密度梯度離心第八十三頁，共一百六十四頁。二、細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、

酶、糖與脂類等的顯示方法

原理：利用一些顯色劑與所檢測物質(zhì)中一些特殊基團(tuán)特異性結(jié)合的特征，通過顯色劑在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來判斷某種物質(zhì)在細(xì)胞中的分布和含量。第八十四頁，共一百六十四頁。FeulgenStainingmethodisspeicificforDNA(onionroottipcell)第八十五頁，共一百六十四頁。糖類顯示：PAS反應(yīng)最常用于顯示細(xì)胞、組織內(nèi)的多糖和蛋白多糖的方法是過碘酸-雪夫反應(yīng)（periodicacidSchiff，PAS反應(yīng))?；驹硎牵禾潜粡娧趸瘎┻^碘酸（HIO4)氧化后，形成2-醛基；后者與Schiff試劑中的無色品紅亞硫酸復(fù)合物結(jié)合，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物，PAS反應(yīng)陽性部位即表示多糖的存在。

第八十六頁，共一百六十四頁。脂類顯示

標(biāo)本可用甲醛固定、冷凍切片、用油紅、蘇丹Ⅲ、蘇內(nèi)Ⅵ、蘇丹黑B、尼羅藍(lán)等脂溶性染料染色

第八十七頁，共一百六十四頁。AKP(堿性磷酸酶)染色第八十八頁，共一百六十四頁。Feulgen反應(yīng)是一種經(jīng)典的細(xì)胞化學(xué)染色方法，常用于細(xì)胞內(nèi)（）。A．蛋白質(zhì)的分布與定位B．脂肪的分布與定位C．DNA的分布與定位D．RNA的分布與定位

√第八十九頁，共一百六十四頁。三、特異蛋白抗原的定位與定性

免疫熒光技術(shù)：

快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限

免疫電鏡技術(shù)：

免疫鐵蛋白技術(shù)

免疫酶標(biāo)技術(shù)

免疫膠體金技術(shù)

√第九十頁，共一百六十四頁。

免疫熒光技術(shù):表面抗原與受體AdhesionReceptorsMetaboliccytokinesstructureenzymes第九十一頁，共一百六十四頁?？乖瓨?biāo)記抗體光原熒光直接免疫熒光法第九十二頁，共一百六十四頁。間接法原理示意圖抗原抗體1標(biāo)記抗體2光原熒光第九十三頁，共一百六十四頁。

間接免疫熒光法第九十四頁，共一百六十四頁。免疫膠體金技術(shù)原理

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸在還原劑作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。第九十五頁，共一百六十四頁。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。膠體金第九十六頁，共一百六十四頁。膠體金應(yīng)用第九十七頁，共一百六十四頁。膠體金應(yīng)用膠體金標(biāo)記技術(shù)由于標(biāo)記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質(zhì)的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應(yīng)用范圍廣，除應(yīng)用于光鏡或電鏡的免疫組化外，更廣泛地應(yīng)用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細(xì)胞術(shù)等。第九十八頁，共一百六十四頁。四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性

光鏡水平的原位雜交技術(shù)

（同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的探針）

電鏡水平的原位雜交技術(shù)

（生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合）

第九十九頁，共一百六十四頁。核酸分子雜交按照堿基互補配對原則，將不同來源的序列互補單鏈的DNA/DNA，RNA/RNA，RNA/DNA，互補配對成雙鏈雜交分子，這一過程叫核酸分子雜交第一百頁，共一百六十四頁。常用核酸分子雜交技術(shù)①Southern印跡雜交；②Northern印跡雜交；③斑點雜交(dotblotting)；④原位雜交(insituhybridization)

第一百零一頁，共一百六十四頁。Blotting：印跡\雜交SouthernBlotting:檢測特定DNA片斷NorthernBlotting:檢測RNAWesternBlotting:檢測蛋白質(zhì)第一百零二頁，共一百六十四頁。斑點雜交將PCR產(chǎn)物點在硝酸纖維素膜或尼膜薄膜上，再用內(nèi)部寡核苷酸探針雜交，觀察有無著色斑點，主要用于PCR產(chǎn)物特異性鑒定及變異分析。

第一百零三頁，共一百六十四頁。原位雜交

（insituhybridization)應(yīng)帶有標(biāo)記的（有放射性同位素、熒光素、生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸片段進(jìn)行雜交，然后可用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位；也可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。第一百零四頁，共一百六十四頁。

熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization,FISH）第一百零五頁，共一百六十四頁。人類染色體端粒DNA的熒光原位雜交照片

第一百零六頁，共一百六十四頁。合成

第一百零七頁，共一百六十四頁。The

isatechniqueusedinmolecularbiologyresearchtostudygeneexpressionbydetectionofRNAinasample.

AsouthernblottingBwesternBlottingCnorthernBlottingDfluorescenceinsituhybridization√第一百零八頁，共一百六十四頁。五、放射自顯影技術(shù)

原理及應(yīng)用：利用同位素的放射自顯影，對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究；實現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動態(tài)和追蹤研究。

步驟：

標(biāo)記前體物摻入細(xì)胞

放射自顯影追蹤第一百零九頁，共一百六十四頁。標(biāo)記物一般常用3H胸腺嘧啶脫氧核苷（3H-TdR）來顯示DNA用3H尿嘧啶核苷（3H-UdR）顯示RNA；用35S標(biāo)記的甲硫氨酸、半胱氨酸，3H或14C標(biāo)記的甲硫氨酸、亮氨酸研究蛋白質(zhì)用3H甘露糖、巖藻糖等研究多糖。

第一百一十頁，共一百六十四頁。分離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物的主要技術(shù)是（）A、超高速離心分離技術(shù)B、insituhybridizationC、層析技術(shù)D、WesternBlotting√第一百一十一頁，共一百六十四頁。六．定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)

細(xì)胞顯微分光光度術(shù)（microspectrophotometry）

利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對特異光譜的吸收，測定這些物質(zhì)（如核酸與蛋白質(zhì)等）在細(xì)胞內(nèi)的含量。 包括：1）紫外光顯微分光光度測定法2）可見光顯微分光光度測定法

流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）第一百一十二頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞術(shù)的基本原理

Flowcytometry第一百一十三頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞術(shù)的基本原理

FlowcytometryInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid第一百一十四頁，共一百六十四頁。第一百一十五頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)

FlowcytometerLasersFluidicsComputersDetectorsLaserPowerSupply第一百一十六頁，共一百六十四頁。BDVantageSEDiVaoption

BeckmanCoulterEpicsAltraHypersortDakoCytomationMoFloBDFACSAria第一百一十七頁，共一百六十四頁。+IncubateAcquire流式細(xì)胞術(shù)的基本原理

Flowcytometry第一百一十八頁，共一百六十四頁。LaserLight488nmFL2PESSCFSCFluidicsElectronicsComputerFL3PerCP,Cy5

FL1FITCFlowcytometer

Lightdetectors第一百一十九頁，共一百六十四頁。PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersFlowCytometryLaser1234Flowcell第一百二十頁，共一百六十四頁。濾光片第一百二十一頁，共一百六十四頁。488nmlaser+-第一百二十二頁，共一百六十四頁。特點1.測量速度快；2.可進(jìn)行多參數(shù)測量；3.既能分析，又能分選。第一百二十三頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用免疫學(xué)血液學(xué)腫瘤學(xué)細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞遺傳學(xué)生物化學(xué)-------第一百二十四頁，共一百六十四頁。第一百二十五頁，共一百六十四頁。檢測1：細(xì)胞大小、顆粒度

第一百二十六頁，共一百六十四頁。分散成單個細(xì)胞，DNA熒光染料充分標(biāo)記后檢測檢測1：DNA含量

第一百二十七頁，共一百六十四頁。DNAstainedwithpropidiumiodideDNAContentG1SPhaseG2/MNotelinearscale!第一百二十八頁，共一百六十四頁。IncreaseinFluorescenceIntensity#ofEventsG1SG2M第一百二十九頁，共一百六十四頁。實體腫瘤DNA倍體(細(xì)胞周期)的分析G2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNAAnalysisDNAcontentCount2N4N第一百三十頁，共一百六十四頁。Cancercellswithabnormal

DNAcontent

第一百三十一頁，共一百六十四頁。細(xì)胞凋亡檢測第一百三十二頁，共一百六十四頁。細(xì)胞標(biāo)志（抗原）檢測

第一百三十三頁，共一百六十四頁。人外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測第一百三十四頁，共一百六十四頁。第一百三十五頁，共一百六十四頁。根據(jù)細(xì)胞標(biāo)志（抗原）檢測細(xì)胞凋亡第一百三十六頁，共一百六十四頁。AnnexinVAssay檢測細(xì)胞凋亡第一百三十七頁，共一百六十四頁。020040060080010000200400600800100002004006008001000CalciumFluxTimeAdditionofstimulusAdditionofstimulusIndo-1ratio第一百三十八頁，共一百六十四頁。AddMIP1

Antibody+CalciumFlux:Whichcellsrespond?第一百三十九頁，共一百六十四頁。Antibody+CalciumFlux:Whichcellsrespond?GR-1FITC7/4PE第一百四十頁，共一百六十四頁。熒光蛋白

第一百四十一頁，共一百六十四頁。細(xì)胞分選

第一百四十二頁，共一百六十四頁。細(xì)胞分選

第一百四十三頁，共一百六十四頁。舉例1：X、Y-精子分選第一百四十四頁，共一百六十四頁。第一百四十五頁，共一百六十四頁。X、Y-精子分選第一百四十六頁，共一百六十四頁。性別控制第一百四十七頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞術(shù)小結(jié)

（flowcytometry，F(xiàn)CM)1）是一種可以對高速流動的細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測量和分選的新型技術(shù)，是近代細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、分子免疫學(xué)和單克隆技術(shù)、激光技術(shù)、電子計算機(jī)術(shù)等學(xué)科高度發(fā)展的綜合結(jié)晶。在免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)等學(xué)科及臨床研究方面得到廣泛應(yīng)用。

第一百四十八頁，共一百六十四頁。2）特點：1.測量速度快；2.可進(jìn)行多參數(shù)測量；3.既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是精確的分選技術(shù)。3）用途：略

第一百四十九頁，共一百六十四頁。流式細(xì)胞術(shù)不可以用于（）A、測定細(xì)胞的大小和特定細(xì)胞類群的數(shù)量B、分選出特定的細(xì)胞類群C、檢測細(xì)胞中DNA、RNA或某種蛋白的含量D、觀察分析細(xì)胞的三維空間結(jié)構(gòu)√第一百五十頁，共一百六十四頁。第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)

細(xì)胞的培養(yǎng)

細(xì)胞工程

第一百五十一頁，共一百六十四頁。原代培養(yǎng)（primaryculturecell）傳代培養(yǎng)（sub-culturecell）動物細(xì)胞培養(yǎng)第一百五十二頁，共一百六十四頁。動物細(xì)胞工程單克隆