《用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南》編制說明一、標(biāo)準(zhǔn)制定背景及任務(wù)來源（一）標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性和意義鑒于國家發(fā)布的《新型冠狀病毒疫苗非臨床有效性研究和評價技術(shù)要點(diǎn)》及《生物制品非臨床安全性評價指導(dǎo)原則》中明確提出可使用hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠作為實驗動物，但目前尚無針對該類小鼠質(zhì)量評判的具體標(biāo)準(zhǔn)。這導(dǎo)致實驗中轉(zhuǎn)基因小鼠的質(zhì)量參差不齊，進(jìn)而影響實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和一致性，給疫苗非臨床評價結(jié)果的可靠性與科學(xué)性帶來了挑戰(zhàn)。本標(biāo)準(zhǔn)旨在制定hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化使用指南，以明確其質(zhì)量控制要求和操作流程，從源頭上減少實驗用動物質(zhì)量不均所引發(fā)的問題。通過制定統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，既能規(guī)范轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建及使用的全流程，又能提升藥效學(xué)和安全性評價數(shù)據(jù)的科學(xué)性與可比性，從而為季銨鹽檢測機(jī)構(gòu)提供方法依據(jù)，為藥品審評中心簡化數(shù)據(jù)審查流程提供支持。此外，這一標(biāo)準(zhǔn)的建立將推動新型冠狀病毒疫苗非臨床研究進(jìn)程的規(guī)范化，促進(jìn)動物模型構(gòu)建和應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化，為相關(guān)基礎(chǔ)研究和藥物與生物制品開發(fā)提供重要支撐。（二）任務(wù)來源本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省毒理學(xué)會提出。由湖北省毒理學(xué)會歸口。由四川大學(xué)華西醫(yī)院、武漢大學(xué)、中國科學(xué)院武漢病毒研究所、成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司、江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司起草，項目名稱為《用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南》。二、主要工作過程（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制小組《用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南》在正式編制前進(jìn)行了詳細(xì)周密的準(zhǔn)備工作。編制工作于2024年正式啟動，由相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜医M成標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，明確標(biāo)準(zhǔn)制定的目標(biāo)、技術(shù)路線與分工機(jī)制。（二）標(biāo)準(zhǔn)起草小組分工1.起草單位四川大學(xué)華西醫(yī)院、武漢大學(xué)、中國科學(xué)院武漢病毒研究所、成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司、江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司。2.主要起草人（三）查詢國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)材料2024年4月至5月，標(biāo)準(zhǔn)編制組成員根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)綱要查詢和收集了國內(nèi)外關(guān)于新型冠狀病毒、疫苗研發(fā)、hACE2小鼠模型、轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建與檢測等相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)資料、法規(guī)文件及科研成果，并對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，如GB14922、GB14925、GB/T35892、《新型冠狀病毒預(yù)防用疫苗非臨床有效性研究與評價技術(shù)要點(diǎn)（試行）》等，進(jìn)行了系統(tǒng)的比對與借鑒。在此基礎(chǔ)上，確立了標(biāo)準(zhǔn)制定的指導(dǎo)思想，制定了研究的技術(shù)路線，形成了開題報告和標(biāo)準(zhǔn)草案。（四）確定標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)路線、制定原則2024年5月至6月，主要起草人組織召開了標(biāo)準(zhǔn)開題論證會。會上，標(biāo)準(zhǔn)編制組介紹了國內(nèi)外相關(guān)分析方法的研究現(xiàn)狀、標(biāo)準(zhǔn)制定的技術(shù)路線與技術(shù)難點(diǎn)，以及擬開展的主要工作內(nèi)容等。（五）編寫標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿2024年10月至12月，標(biāo)準(zhǔn)編制組完成了《用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南》標(biāo)準(zhǔn)草案及編制說明的撰寫，之后多輪內(nèi)部討論和修改，形成征求意見稿。（六）定向征求意見2025年2月至7月，標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿在武漢市武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院會議室進(jìn)行多次討論，會議形式為線上線下結(jié)合，共提出意見29條；其中采納24條，部分采納或不采納5條。根據(jù)征求的意見對標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明進(jìn)行了修改完善，形成了標(biāo)準(zhǔn)文本及編制說明的預(yù)審稿，無重大意見。三、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)（一）科學(xué)性原則科學(xué)性是標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本要求。在《用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南》的編寫過程中，標(biāo)準(zhǔn)編制組充分參考了現(xiàn)有科研成果、實驗數(shù)據(jù)，特別借鑒了K18-hACE2KI小鼠等典型模型的構(gòu)建與應(yīng)用研究成果，確保標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)依據(jù)嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)、可靠。（二）規(guī)范性原則依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草制定。（三）適用性原則本標(biāo)準(zhǔn)適用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價使用的hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建，以及采用該小鼠進(jìn)行新型冠狀病毒疫苗有效性和安全性評價的操作。四、標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容確定本標(biāo)準(zhǔn)主要包括：用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價的hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的背景資料、構(gòu)建與鑒定的方法和通用要求；疫苗有效性和安全性評價的hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的選擇原則與要求；hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建和非臨床評價過程中的重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)容。五、國內(nèi)國際相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)情況標(biāo)準(zhǔn)廣泛參考了國家藥品監(jiān)督管理局、國家衛(wèi)生健康委、國際生物制品評價機(jī)構(gòu)（如WHO、ICH、FDA等）發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)文件，并結(jié)合我國當(dāng)前新型冠狀病毒疫苗非臨床研究的實際情況制定，具有較強(qiáng)的可比性和國際適應(yīng)性。六、與有關(guān)現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)的制定依據(jù)并嚴(yán)格遵循國家相關(guān)法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)要求，在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容上與GB14922、GB14925、GB/T35892等基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保持一致，具有良好的銜接性和延展性。七、作為推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，是指導(dǎo)全國開展用于新型冠病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用的標(biāo)準(zhǔn)性文件，不具有強(qiáng)制性，可根據(jù)調(diào)查實際情況決定是否采用。八、標(biāo)準(zhǔn)在編制過程中意見分歧情況本標(biāo)準(zhǔn)在編制過程中無重大意見分歧。征求意見稿形成后，將征求意見匯總在此。九、廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議本標(biāo)準(zhǔn)不涉及對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的廢止。十、其他應(yīng)予說明的事項無。參考文獻(xiàn)ZhangZ,ZhouL,LiuQ,etal.ThelethalK18-hACE2knock-inmousemodelmimickingtheseverepneumoniaofCOVID-19ispracticableforantiviraldevelopment.EmergMicrobesInfect.2024Dec,13(1):2353302.doi:10.1080/22221751.2024.2353302.Epub2024May26.OladunniFS,ParkJG,PinoPA,etal.LethalityofSARS-CoV-2infectioninK18humanangiotensin-convertingenzyme2transgenicmice.NatCommun.2020Nov30,11(1):6122.doi:10.1038/s41467-020-19891-7.RathnasingheR,StrohmeierS,AmanatF,etal.ComparisonoftransgenicandadenovirushACE2mousemodelsforSARS-CoV-2infection[J].EmergMicrobesInfect,2020,9(1):2433-5.MittalA,ManjunathK,RanjanRK,etal.COVID-19pandemic:Insightsintostructure,function,andhACE2receptorrecognitionbySARS-CoV-2.PLoSPathog.2020Aug21;16(8):e1008762.doi:10.1371/journal.ppat.1008762.朱孟敏,劉玲玲,牛博文,等.人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)BAC轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備及鑒定[J].中國實驗動物學(xué)報,2022,30(2):230-8.秦川,劉先菊,沈潔,等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2在SARS-CoV感染中的功能(第1部分)—血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2基因剔除小鼠的建立[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2005,15(6):327-9.專家意見匯總表征求意見匯總處理表2025年3月1日填寫標(biāo)準(zhǔn)名稱：用于新型冠狀病毒疫苗非臨床評價hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠的規(guī)范化構(gòu)建及使用指南負(fù)責(zé)起草單位：四川大學(xué)華西醫(yī)院承辦人：陳宇發(fā)函件數(shù)：8回函件數(shù)：8表1專家名單匯總序號提出單位姓名職稱表2專家意見匯總序號提出章節(jié)專家意見提出專家是否采納1題目建議修訂，轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建及使用指南（著重對轉(zhuǎn)基因的管理以及構(gòu)建后的使用，包括安全性、風(fēng)險評估，減少安評和有效性評價相關(guān)內(nèi)容）。劉家發(fā)采納2正文2.1.啟動子至少有三種，如有哪些，給出指導(dǎo)意見。（HFH4,CAG，K18,中檢院的小鼠用的啟動子等）。2.2.肺臟特異性表達(dá)：需要詳細(xì)寫，其他靶器官？給出資料2.3.安全性：增加生物安全性（包含子代的生物安全性），風(fēng)險評估，逃逸后對環(huán)境的影響（基因逃逸與生態(tài)干擾：轉(zhuǎn)基因小鼠若意外逃逸，可能與野生種群雜交，導(dǎo)致基因污染；病毒重組風(fēng)險：轉(zhuǎn)基因動物組織中的潛在病毒可能在移植或環(huán)境釋放后活化，與其他病毒發(fā)生重組，產(chǎn)生新病原體）。2.4.構(gòu)建后檢測。2.4.1.增加產(chǎn)子數(shù)量，給出統(tǒng)計意義的范圍。2.4.2.增加測序、蛋白檢測。2.4.3.必須要包含的鑒定方式：PCR基因型鑒定，其他方法可視情況自行選擇。2.4.4.動物感染指標(biāo)：臨床癥狀，靶器官（不止肺部，應(yīng)有其他器官，器官分布），病理改變（病程），病毒載量，易感染。2.4.5.動物生理一定是有改變？是否有相關(guān)數(shù)據(jù)，做安評就有缺陷性。劉家發(fā)汪暉樊柏林張玲何開勇王旭吳佳楊文祥采納3引用文獻(xiàn)3.增加引用文獻(xiàn)：完善如規(guī)范的引用。3.1.標(biāo)準(zhǔn)順序3.2.6.4.1,6.4.2等如果部分應(yīng)用年代號要全，不會有變化的可以不需要年代號。如GB14952（實驗動物環(huán)境及設(shè)施）。劉家發(fā)汪暉樊柏林張玲何開勇王旭吳佳楊文祥采納4附件4.1.增加如何構(gòu)建內(nèi)容，如何構(gòu)建以及應(yīng)用，舉例說明。4.2.附件編號應(yīng)按照以下編號，B.1，B.2。4.3.附件B，分為資料性附錄，和規(guī)范性附錄。4.4.補(bǔ)充缺失的血常規(guī)、血生化等內(nèi)容。4.5.4審核補(bǔ)充基本生理指標(biāo)。劉家發(fā)汪暉樊柏林張玲何開勇王旭吳佳楊文祥采納5其他問題5.1.安全性評價