毛細(xì)管電泳第1頁，共29頁。二、經(jīng)典電泳分析

利用電泳現(xiàn)象對(duì)某些化學(xué)或生物物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法和技術(shù)叫電泳法或電泳技術(shù)。按形狀分類：U型管電泳、柱狀電泳、板電泳按載體分類：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳缺點(diǎn)：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析相比。第2頁，共29頁。三、高效毛細(xì)管電泳分析技術(shù)上的重要改進(jìn)：采用了0.05mm內(nèi)徑的毛細(xì)管采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓特點(diǎn)：A、分離效率高：

104理論塔板數(shù)，接近GC空心管，無固定液，H=B/u；流型不同B、

分離速度快：優(yōu)于LC，接近GCC、進(jìn)樣量少：nL第3頁，共29頁。電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下遷移電滲：溶劑在電場(chǎng)作用下的單向流動(dòng)正溶質(zhì)離子所受的力：電場(chǎng)力+電滲力負(fù)溶質(zhì)離子所受的力：電場(chǎng)力

電滲力中性分子所受的力：電滲力四、分離過程第4頁，共29頁。電滲流速度是電泳流速度的5-7倍，混合物中所有的組份隨電滲流朝一個(gè)方向遷移。流出順序：①正離子②中性粒子③負(fù)離子第5頁，共29頁。電泳過程中不但可以按類分離,除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場(chǎng)力大小不一樣也同時(shí)被相互分離。第6頁，共29頁。

毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC）毛細(xì)管離子分析五、主要分離模式第7頁，共29頁。1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZE帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。最基本、應(yīng)用廣的分離模式正溶質(zhì)離子所受的力：電場(chǎng)力+電滲力負(fù)溶質(zhì)離子所受的力：電場(chǎng)力

電滲力中性分子所受的力：電滲力流出順序：①正離子②中性粒子③負(fù)離子第8頁，共29頁。2、毛細(xì)管凝膠電泳

CGE將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠,類似分子篩的作用——試樣分子按大小分離。蛋白質(zhì)、DNA等的m/z與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，DAN排序的重要手段無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。第9頁，共29頁。（1）緩沖液中加入表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束(假固定相)。3、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC，MEKC）（2）電泳流和電滲流的方向相反，且ν電滲流>ν電泳，電場(chǎng)力的作用下負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng)；第10頁，共29頁。（5）色譜與電泳分離模式的結(jié)合。（3）中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長；（4）可用來分離中性物質(zhì)。3、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC，MEKC）第11頁，共29頁。4、毛細(xì)管電色譜CEC

在毛細(xì)管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流為流動(dòng)相，試樣組分在兩相間的分配為分離機(jī)理的電動(dòng)色譜過程固定相：依HPLC理論和經(jīng)驗(yàn)選擇，反相應(yīng)用多緩沖液：水溶液或有機(jī)溶液。常用甲醇-水、乙睛-水等第12頁，共29頁。六、高效毛細(xì)管電泳儀器第13頁，共29頁。第14頁，共29頁。1.高壓電源（1）0～30kV穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源（2）電場(chǎng)強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)（3）電源極性易轉(zhuǎn)換第15頁，共29頁。要求：電絕緣、紫外/可見光透明且富有彈性材料：石英（各項(xiàng)性能好）、玻璃規(guī)格：內(nèi)徑20~75um，外徑350~400um；長度<=1m2.毛細(xì)管柱第16頁，共29頁。3.緩沖液池要求化學(xué)惰性機(jī)械穩(wěn)定性好——玻璃瓶第17頁，共29頁。4.檢測(cè)器

類型檢測(cè)限/mol特點(diǎn)紫外-可見10-13～10-15加二極管陣列，光譜信息熒光10-15～10-17靈敏度高，樣品需衍生激光誘導(dǎo)熒光10-18～10-20靈敏度極高，樣品需衍生電導(dǎo)10-18～10-19離子靈敏，需專用的裝置要求：具有極高靈敏度，可柱上或柱端檢測(cè)第18頁，共29頁。第19頁，共29頁。5、進(jìn)樣方式進(jìn)樣量：毛細(xì)管長度的1%-2%；納升級(jí)、非常小1.流體力學(xué)進(jìn)樣方式進(jìn)樣端加壓、出口端抽真空、虹吸進(jìn)樣2.電動(dòng)進(jìn)樣方式毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓3.擴(kuò)散進(jìn)樣試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。第20頁，共29頁。1、離子分析七、應(yīng)用第21頁，共29頁。第22頁，共29頁。2、藥物分析第23頁，共29頁。采用MEKC模式，鑒定違禁藥物；效果優(yōu)于HPLG法第24頁，共29頁。3、氨基酸分析第25頁，共29頁。4、蛋白質(zhì)分析第26頁，共29頁。5、核酸分析及DNA排序第27頁，共29頁。烏司他丁還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠，分子量烏司他丁溶液還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠，分子量肝素鈉乳膏鑒別（瓊