團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/HTCMA083－2022河南道地藥材紅花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程Henandao-diherbs-TechnicalSpecificationforti2022-11-01發(fā)布2023-01-01實施河南省中藥材協(xié)會發(fā)布 紅花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語與定義 4設(shè)施設(shè)備 25組織培養(yǎng) 26溫室馴化 I本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會、民政部的《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定》、河南省中藥材協(xié)會的《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法（試行）》及其它團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理的規(guī)定起草。本文件的全部技術(shù)內(nèi)容為推薦性。本文件由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所提出。本文件由河南省中藥材協(xié)會、河南省農(nóng)學(xué)會中藥材專業(yè)委員會歸口。本文件由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所起草。本文件起草人員：梁慧珍、蘇小雨、孫瑤、許蘭杰、譚政委、楊青、余永亮、李春明、楊紅旗、李磊、安素妨、魯?shù)さぁ⒍?。本文件知識產(chǎn)權(quán)屬于河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所，負(fù)責(zé)解釋并組織實施。1紅花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅花組織培養(yǎng)育苗的術(shù)語和定義、設(shè)施設(shè)備、組織培養(yǎng)和溫室馴化。本標(biāo)準(zhǔn)適用于組織培養(yǎng)育苗的術(shù)語和定義、設(shè)施設(shè)備、組織培養(yǎng)和溫室馴化。2規(guī)范性引用文件下列文件所包含的條款，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1道地藥材道地藥材是優(yōu)質(zhì)藥材的專用名詞，是指歷史悠久、品種優(yōu)良、產(chǎn)量較大、加工炮制規(guī)范、療效突出，帶有明顯地域特點的中藥材。3.2紅花紅花（CarthamustinctoriusL.）為菊科經(jīng)濟(jì)植物。3.3組織培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的紅花幼嫩胚根等作外植體在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術(shù)。3.4愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)在組織培養(yǎng)過程中，最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。3.5誘導(dǎo)分化培養(yǎng)將初代培養(yǎng)獲得的愈傷組織，通過分離切割接種在分化苗培養(yǎng)基培養(yǎng)中，從而獲得無菌幼苗的培養(yǎng)階段。4設(shè)施設(shè)備4.1組織培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備4.1.1基本要求組織培養(yǎng)室包括洗滌室、滅菌室、培養(yǎng)基配制室、緩沖室、無菌接種室和無菌培養(yǎng)室等。4.1.2洗滌室設(shè)備配備自動或半自動洗瓶機(jī)、水槽、收納箱、量瓶架等。4.1.3滅菌室設(shè)備配備高壓蒸汽滅菌鍋、器械消毒器、紫外線燈、烘干箱、微孔過濾器等。4.1.4培養(yǎng)基配制室設(shè)備配備萬分之一電子天平、酸度計、微波爐、冰箱等。4.1.5緩沖室設(shè)備配備衣帽柜、風(fēng)淋裝置等。4.1.6無菌接種室設(shè)備配備超凈工作臺、器械消毒器、酒精燈等。4.1.7無菌培養(yǎng)室設(shè)備配備培養(yǎng)架、紫外燈、臭氧發(fā)生器、空氣加濕器、除濕機(jī)、時控裝置等。4.2溫室馴化設(shè)施設(shè)備配備溫濕度調(diào)節(jié)裝置、光照控制裝置、灌溉設(shè)備、栽培床、穴盤等。5組織培養(yǎng)5.1外植體制備與滅菌5.1.1外植體制備挑選若干顆粒完整、飽滿的紅花種子，在室溫下用潔凈自來水浸泡24h。5.1.2外植體滅菌在超凈工作臺內(nèi)，種子吸水充足后用無菌水沖洗2~3遍，將種子放入提前滅菌的組培空瓶中，先用75%乙醇消毒30s，無菌水沖洗3~5遍；再用0.1%HgCl2消毒處理20min，無菌水沖洗3~5遍。將處理好的種子用濾紙吸干表面水分，放入MS基本培養(yǎng)基中室溫催芽。5.1.3外植體取材選取紅花萌發(fā)后生長健壯、無病的胚根，截取長度為0.5cm～1cm的芽段。5.2培養(yǎng)基成分愈傷組織誘導(dǎo)與誘導(dǎo)分化所需培養(yǎng)基成分見附錄A，培養(yǎng)基pH5.8。5.3外植體的接種將經(jīng)過滅菌的芽段置于超凈工作臺內(nèi)，無菌接種。5.4愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)外植體接種于300mL～650mL培養(yǎng)瓶中，每瓶分裝培養(yǎng)基高度1.0cm～1.5cm，每10mL培養(yǎng)基接種1個芽段，置于無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)3周。培養(yǎng)室設(shè)置在溫度為23～25℃,光照強(qiáng)度為3000～5000lx，光照時間16h/d。5.5愈傷組織分化培養(yǎng)在超凈工作臺中切取5.4培養(yǎng)的愈傷組織，轉(zhuǎn)接至分化苗培養(yǎng)基培養(yǎng)。5.6生根培養(yǎng)將培養(yǎng)出的分化苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)。在溫度為23～25℃,光照強(qiáng)度為3000~5000lx，光照時間16h/d，的條件下培養(yǎng)，獲得根芽齊全的紅花無菌幼苗。6溫室馴化6.1幼苗鍛煉將根芽齊全的無菌幼苗帶瓶轉(zhuǎn)移至溫室中，日光鍛煉5d～7d，然后開瓶鍛煉3d～5d，注意及時加水保濕。將空氣濕度保持在75%～85%之間，遮光率為40%，環(huán)境溫度控制在23～25℃。6.2穴盤育苗將鍛煉好的幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，用自來水沖洗根部15min，洗凈根系附著的培養(yǎng)基，置于適宜濃度的農(nóng)用殺菌劑中，浸泡處理，然后定植于營養(yǎng)土基質(zhì)的穴盤中，噴水保濕。（資料性）培養(yǎng)基成分紅花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分見表A.