PAGE\*Arabic2PAGE瘦肉精的檢測(cè)法分析概述目錄TOC\o"1-3"\h\u24408瘦肉精的檢測(cè)法分析概述 2187661酶聯(lián)免疫吸附法 216962高效液相色譜法 2248953液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè) 3197264紫外檢測(cè)器 3154345光電二極管陣列檢測(cè)器 41酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA）就是用酶標(biāo)記抗原或者抗體，從而檢測(cè)出對(duì)應(yīng)抗原或者抗體的免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)。因抗原抗體結(jié)合的特異性，ELISA法特異性好，靈敏度較高、通量大，檢測(cè)效率較高。包被在酶標(biāo)板內(nèi)的抗原將和樣品內(nèi)抗原一起爭奪酶標(biāo)抗體，實(shí)驗(yàn)時(shí)添加底物，經(jīng)顯色反應(yīng)，酶標(biāo)孔內(nèi)會(huì)發(fā)生顏色改變，最后，添加終止液，15min后結(jié)束反應(yīng)，根據(jù)顏色的變化來進(jìn)行定性的判斷，用酶標(biāo)儀或者分光光度計(jì)定量判斷。因ELISA原理特異性強(qiáng)，方法建立時(shí)所用抗原、抗體均具有很強(qiáng)的活性，其結(jié)果是易受酶作用，對(duì)溫度和孵育條件都有很高要求，結(jié)合ELISA法，移液槍在整個(gè)過程中，對(duì)于操作者的技術(shù)操作提出了更高的要求，稍有不諳或運(yùn)用不規(guī)范，都有可能導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)，易產(chǎn)生假陽性[4]。CONGYang[5]等用小鼠抗體構(gòu)建了OSELISA反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，用克倫特羅聯(lián)合牛血清白蛋白免疫小鼠，獲得抗體庫并分離篩選抗體，檢測(cè)限8ng/mL。許多科研工作者都在不斷地改進(jìn)已有的ELISA方法，單克隆抗體的制備，通過免疫技術(shù)的優(yōu)化，分離并篩選獲得特異抗體，改善假陽性現(xiàn)象等，精確度及靈敏度均得到改善，但現(xiàn)行ELISA法仍適合大批量試樣初篩。2高效液相色譜法高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）因其具有準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，為國內(nèi)指定克倫特羅殘留量半確證性檢驗(yàn)手段之一，它對(duì)豬尿的預(yù)處理與豬肉有所不同，豬尿可以直接上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，豬肉首先要做勻漿，再提取、洗脫和其他操作均由上機(jī)測(cè)定完成，采用外標(biāo)法定量。HPLC具有更高的檢測(cè)準(zhǔn)確度、精確度高，假陽性較少，是一種比較可靠地檢測(cè)瘦肉精的方法，檢測(cè)全過程僅需4h，對(duì)幾乎全部豬肉制品均可應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行分析，該方法可與質(zhì)譜及其它體系結(jié)合使用，結(jié)果更精確。劉纓等用固相萃取?液質(zhì)聯(lián)用法[6]，采用多壁碳納米管和改性材料作為吸附劑，建立了一種新的識(shí)別檢測(cè)法。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，此法不但節(jié)省時(shí)間，而且使用方便，且準(zhǔn)確度較高，基質(zhì)干擾試驗(yàn)采用加標(biāo)的方法，回收率為87.5%~97.8%，更適用于豬尿液前處理。程江闖[7]等人建立QuEChERS-超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法，分離分析在10min之內(nèi)完成，0.5、1.0及5.0μg/kg加入水平回收率分別為62.4%~116.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差位在1.1%~20.0%之間，檢出限在0.5μg/kg之間，完成牛羊肉36種瘦肉精殘留量測(cè)定。劉迪[8]等人建立了超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法，克倫特羅的檢出限和定量限分別為0.05和0.20μg/kg，同時(shí)，對(duì)豬肉進(jìn)行傳統(tǒng)型與新型“瘦肉精”分析方法的檢測(cè)。吳劍平[9]等人建立豬尿鹽酸賽庚啶殘留分散液相微萃取技術(shù)（DLLME）/超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)檢測(cè)法，方法檢出限0.05μg/L，本發(fā)明準(zhǔn)確度和精密度高。孫曉亮等[10]對(duì)液相色譜分離條件的研究、MS/MS檢測(cè)參數(shù)的優(yōu)化和樣品的前處理過程，建立了超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法，檢出限為0.1μg/L，定量限為0.3μg/L。李丹妮[11]等人建立了QuEChERS預(yù)處理與超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜相結(jié)合，同時(shí)測(cè)定豬組織賽庚啶與可樂定殘留的方法，方法檢出限0.5μg·kg-1。科研工作者采用高效液相色譜法對(duì)瘦肉精進(jìn)行預(yù)處理、檢測(cè)參數(shù)及分離條件的優(yōu)化等，提高了檢測(cè)速率，因而使得檢測(cè)結(jié)果更精確，更敏感。3液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定（HPLC-MS）肉樣瘦肉精，樣品的預(yù)處理是必要的。豬肉維持冷凍狀態(tài)后再進(jìn)行分析，切碎勻質(zhì)，取出等分試樣萃取純化。加入醋酸緩沖溶液及β-葡萄糖苷酶，勻化2.3mL等分樣品，經(jīng)酶水解，調(diào)整試樣酸堿度并離心，SPE柱再經(jīng)甲醇，水活化處理，取上層清液過柱，分別用水2mL,2mL乙酸鹽緩沖溶液進(jìn)行清洗，并用真空進(jìn)行烘干。最后，使用甲醇做最后的清洗，二氯甲烷及氨洗脫，洗出液揮發(fā)至干燥，甲酸水溶液溶，過濾膜完成后，上機(jī)進(jìn)行測(cè)定。張絜青[12]等用此法測(cè)定豬肉中CLB含量，結(jié)果該方法檢出限在0.01μg/kg之間，回收率在78.5%~98.6%之間。4紫外檢測(cè)器紫外吸收探測(cè)器（HPLC-UV）是根據(jù)朗伯-比耳定律設(shè)計(jì)的，基于被測(cè)組分吸收紫外光或者可見光，以及吸收強(qiáng)度正比于組分濃度等特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了探測(cè)。本實(shí)用新型適用范圍廣，靈敏度高、具有線性范圍大，對(duì)流動(dòng)相溫度，流速變化不靈敏，適用于梯度洗脫。但有僅能用來探測(cè)紫外吸收光，溶劑應(yīng)選擇不吸收紫外光的材料，紫外光未透過之溶劑無法偵測(cè)到。KUNPING[13]等人采用HPLC-UV法快速篩選豬肉樣品中SAL、CLB和RAC，線性范圍在0.2~50μg/L之間，相關(guān)系數(shù)R2為0.99，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<3%、檢出限<0.05μg/L。5光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器（HPLC-DAD）是一種分析性能較高的檢測(cè)器，它是由1024個(gè)光電二極管陣列構(gòu)成，每只光電二極管的寬度只有50μm，每個(gè)探測(cè)到一個(gè)窄段波長。檢測(cè)器內(nèi)光源發(fā)射紫外或者可見光經(jīng)過HPLC流通池，該流動(dòng)相中各成分被特征吸收，再穿過狹縫，進(jìn)單色器分光，最終獲得各成分吸收信號(hào)，經(jīng)過計(jì)算機(jī)的迅速處理，獲取三維立體譜圖。金雁[14]等應(yīng)用HPLC-DAD檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定CLB、SAL、OTC、TE，結(jié)果表明，CL