GB/TXXXX—202X

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》

的規(guī)定起草。

本文件代替GB/T29375-2012《馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程》，除文字表述、結(jié)構(gòu)

調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：

a）刪除了規(guī)范性引用文件“GB18133-2000”，增加了“GB/T31790、GB/T36833、

GB/T36816、GB/T36846”（見(jiàn)2，2012年版的2）；

b）增加了“試管苗”的定義（見(jiàn)3.8）；

c）更改了布局原則的表述，更改為分條表述（見(jiàn)4.1.1，4.1.2，4.1.3，4.1.4，2012年版

的4.1）；

d）刪除了“定期消毒，按照40%的甲醛和高錳酸鉀2:1的比例，40%的甲醛溶液10mL

倒入5g高錳酸鉀容器內(nèi)（每立方米空間用量），進(jìn)行熏蒸”，更改為“接種室、培養(yǎng)室應(yīng)

保持衛(wèi)生，每周至少消毒一次?？墒褂枚趸?、臭氧密閉熏蒸，或紫外燈照射結(jié)合75%

乙醇噴霧等方式消毒”（見(jiàn)4.3.1，2012年版的4.4.1）；

e）更改了紫外燈的時(shí)間，更改為“30min”（見(jiàn)4.3.3，2012年版的4.4.3）；

f）刪除了若將溫室作為培養(yǎng)室的內(nèi)容（見(jiàn)2012版的4.4.6）；

g）增加了“每天巡查培養(yǎng)苗生長(zhǎng)狀況，發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)清理，并進(jìn)行培養(yǎng)室消毒?！保ㄒ?jiàn)

4.3.6，2012年版的4.4.7）；

h）更改了語(yǔ)句表述，增加了“選擇豐產(chǎn)性好的標(biāo)記單株”；將“幼齡薯”更改為“薯

塊”（見(jiàn)5.1.1，2012年版的5.1.1.1和5.1.1.2）；

i）增加了病毒和類(lèi)病毒的檢測(cè)方法，刪除了“按照GB18133-2000附錄A和B的方法檢

測(cè)”（見(jiàn)5.1.2，2012年版的5.1.2）；

j）刪除了人工打破休眠的具體方法“用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸種5min”及催

芽方法“可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或75%乙醇噴濕進(jìn)行表面消毒，置于25℃黑暗

條件下催芽；或播種于含水量20%滅菌細(xì)沙中發(fā)芽（水中含5mg/L多菌靈）”（見(jiàn)2012年版

的5.1.3.1和5.1.3.3）；

k）更改了病毒檢測(cè)前試管苗轉(zhuǎn)接的長(zhǎng)度及檢測(cè)的表述，更改為“取帶有1~2個(gè)葉片的上

部莖段轉(zhuǎn)入新的器皿中繼續(xù)培養(yǎng)，編號(hào)不變；根據(jù)病毒檢測(cè)要求的取樣量，對(duì)下部莖段繼續(xù)

培養(yǎng)或直接進(jìn)行病毒檢測(cè)，樣品不能粘有培養(yǎng)基。”（見(jiàn)6.1，2012年版的6.1和6.2）；

l）增加了病毒病的檢測(cè)方法，刪除了“按照GB18133-2000附錄A執(zhí)行”（見(jiàn)6.2，2012

年版的6.3）；

m）更改了基礎(chǔ)苗培養(yǎng)條件，更改為“溫度20℃～26℃、相對(duì)濕度50%～70%、光照強(qiáng)

度2000Lx～4500Lx、光照時(shí)數(shù)10h～16h/d”（見(jiàn)8.3，2012年版的8.3）；

n）更改了基礎(chǔ)苗保存條件，更改為“溫度8℃～16℃、相對(duì)濕度50%～70%、光照強(qiáng)

度3000Lx～4500Lx”（見(jiàn)9.2，2012年版的9.2）；

o）更改了常規(guī)擴(kuò)繁培養(yǎng)基量的表述，將“每瓶加入1/5容量的培養(yǎng)基”更改為“厚度2cm

左右”（見(jiàn)10.3，2012年版的10.1.3）；

p）更改了擴(kuò)繁培養(yǎng)條件，更改為“白天20℃～26℃，光照強(qiáng)度2000Lx～4500Lx，

光照時(shí)間14h～16h/d，培養(yǎng)18d～25d”（見(jiàn)10.6，2012年版的10.1.6）；

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GB/TXXXX—202X

q）更改了再次切段繁殖的長(zhǎng)度，將“待長(zhǎng)出7～8片葉片后”更改為“待長(zhǎng)出5～8個(gè)葉

片后”（見(jiàn)10.7，2012年版的10.1.7）；

r）刪除了水培擴(kuò)繁和壯苗擴(kuò)繁的內(nèi)容（見(jiàn)2012年版的10.2和11）；

s）刪除附錄F壯苗培養(yǎng)基配方（見(jiàn)2012年版的附錄F）。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。

本文件由內(nèi)蒙古大學(xué)和中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出。

本文件由全國(guó)蔬菜標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC467）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古大學(xué)、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、定西馬鈴薯研究所、內(nèi)蒙古格瑞得

馬鈴薯種業(yè)集團(tuán)有限公司、張家口市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、重慶市薯類(lèi)脫毒種苗快繁中心、恩施土家

族苗族自治州農(nóng)科院

本文件主要起草人：張若芳、楊麗、孫清華、蒲媛媛、馮志文、吳健、Utpal、杜密茹、

齊建建、吳茜、李進(jìn)福、李冬虎、馬恢、黃振霖、高劍華

本文件及其所代替或廢止的文件的歷次版本發(fā)布情況為：

——替代GB/T29375-2012。

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GB/TXXXX—202X

馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件確立了馬鈴薯莖尖脫毒與組織培養(yǎng)、脫毒試管苗擴(kuò)繁的技術(shù)要求和操作規(guī)程。

本文件適用于馬鈴薯脫毒試管苗的培育和擴(kuò)繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB/T31790馬鈴薯紡錘塊莖類(lèi)病毒檢疫鑒定方法

GB/T36833馬鈴薯X病毒檢疫鑒定方法

GB/T36816馬鈴薯Y病毒檢疫鑒定方法

GB/T36846馬鈴薯M病毒檢疫鑒定方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

莖尖stemtip

有分生組織（0.05mm～0.1mm）及芽原基和正在發(fā)育的葉原基的芽頂端部分（0.1mm～

10mm）。

3.2

葉原基leafprimordium

在莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)的基部形成的突起。

3.3

莖尖分生組織meristem

莖尖部位具有持續(xù)或周期性分裂能力的細(xì)胞群。

3.4

離體培養(yǎng)in-vitropropagation

從植物體分離出符合需要的器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控

制條件下進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。

3.5

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GB/TXXXX—202X

脫毒苗in-vitrovirus-freeplantlet

經(jīng)檢測(cè)不帶馬鈴薯X病毒（PVX）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、馬鈴薯S病毒（PVS）、馬

鈴薯卷葉病毒（PLRV）、馬鈴薯M病毒（PVM）、馬鈴薯A病毒（PVA）、馬鈴薯紡錘塊莖

類(lèi)病毒（PSTVd）等（類(lèi)）病毒的試管苗。

3.6

核心苗coreplantlet

通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的經(jīng)檢測(cè)無(wú)病毒，經(jīng)試種觀察具有原品種典型性狀的脫

毒苗。

3.7

基礎(chǔ)苗basicplantlet

由核心苗繁殖的、經(jīng)檢測(cè)無(wú)病毒的脫毒苗。

3.8

試管苗tissuecultureplantlets

根據(jù)不同生產(chǎn)目的與要求，在試管、玻璃瓶等容器中通過(guò)基質(zhì)培養(yǎng)的脫毒苗。

4脫毒苗生產(chǎn)車(chē)間

4.1布局

4.1.1周?chē)鸁o(wú)污染源，具備隔離條件。

4.1.2生產(chǎn)車(chē)間布局應(yīng)遵循“環(huán)境清潔、便于操作、方便消毒”的原則。

4.1.3入口處宜有風(fēng)淋系統(tǒng)，具備更衣室、清洗室、配制室、滅菌室、貯存室、接種室、培

養(yǎng)室等，各室應(yīng)隔離。

4.1.4培養(yǎng)室具備充足的自然或人工光源。

4.1.5脫毒苗生產(chǎn)車(chē)間布局平面示意圖見(jiàn)圖1。

培接貯滅配清更

養(yǎng)種存菌制洗衣

室室室室室室室

風(fēng)

淋

入口

圖1脫毒苗生產(chǎn)車(chē)間布局平面示意圖

4.2設(shè)備、試劑

脫毒苗生產(chǎn)的組培設(shè)備、試劑參見(jiàn)附錄A。

4.3衛(wèi)生要求

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GB/TXXXX—202X

4.3.1接種室、培養(yǎng)室應(yīng)保持衛(wèi)生，每周至少消毒一次。可使用二氧化氯、臭氧密閉熏蒸，

或紫外燈照射結(jié)合75%乙醇噴霧等方式消毒。

4.3.2接種前接種室應(yīng)過(guò)濾通風(fēng)。

4.3.3使用超凈工作臺(tái)時(shí)，應(yīng)提前30min打開(kāi)紫外燈。接種時(shí)打開(kāi)風(fēng)機(jī)關(guān)閉紫外燈，超凈工

作臺(tái)面及內(nèi)壁用75%乙醇擦拭消毒。

4.3.4鑷子、剪刀、解剖刀、解剖針等工具使用前應(yīng)滅菌，且每次接觸植物材料的部位應(yīng)灼

燒或插入高溫滅菌器中滅菌，冷卻后使用。

4.3.5工作人員應(yīng)穿消毒工作服，洗凈雙手，且在操作過(guò)程中隨時(shí)用75%的乙醇擦拭手和工

作臺(tái)面。

4.3.6每天巡查試管苗生長(zhǎng)狀況，發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)清除，并進(jìn)行培養(yǎng)室消毒。

5莖尖脫毒與培養(yǎng)

5.1脫毒材料的選取

5.1.1田間選擇

現(xiàn)蕾期至開(kāi)花期，選擇具備原品種典型性狀、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)的健康植株做好標(biāo)記，收獲期從

豐產(chǎn)性好的標(biāo)記單株中挑選無(wú)病斑、蟲(chóng)蛀、機(jī)械損傷，符合品種特性的薯塊作為脫毒材料。

也可在苗期選取具備原品種典型性狀的健康植株中、下部短枝莖尖或腋芽作為脫毒材料。

5.1.2病毒檢測(cè)篩選

入選的薯塊或植株，按照GB/T31790-2015中檢測(cè)方法檢測(cè)馬鈴薯紡錘塊莖類(lèi)病毒

（PSTVd）、按照GB/T36833-2018中檢測(cè)方法檢測(cè)馬鈴薯X病毒（PVX）、按照GB/T

36816-2018中檢測(cè)方法檢測(cè)馬鈴薯Y病毒（PVY）、按照GB/T36846-2018中檢測(cè)方法檢測(cè)

馬鈴薯M病毒（PVM），采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)馬鈴薯卷葉病毒

（PLRV）、馬鈴薯A病毒（PVA）和馬鈴薯S病毒（PVS）。篩選無(wú)PSTVd的塊莖或植株

作為莖尖脫毒基礎(chǔ)材料；若檢測(cè)到無(wú)病毒薯塊或植株，可直接進(jìn)行擴(kuò)繁。

5.1.3催芽處理和病毒鈍化

5.1.3.1薯塊可通過(guò)自然出芽或人為干預(yù)打破休眠催芽。

5.1.3.2對(duì)含有S病毒、X病毒的薯塊，新芽長(zhǎng)至2cm～3cm時(shí)置于（37±1）℃培養(yǎng)箱中鈍

化病毒3～4周。

5.2莖尖培養(yǎng)

5.2.1莖尖培養(yǎng)基的制備

5.2.1.1莖尖培養(yǎng)基配方參見(jiàn)附錄B。

5.2.1.2將制備好的莖尖培養(yǎng)基快速分裝于容器中，并封口。

5.2.1.3將分裝好的容器置于滅菌鍋內(nèi)，121℃高壓（1.1kg/cm2）滅菌20min，冷卻，放置

3d～5d，無(wú)污染的培養(yǎng)基備用。

5.2.2材料消毒

取經(jīng)5.1.3處理后薯塊上2cm～3cm的芽，剪去外葉，流水沖洗30min，移入接種室，

在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇浸泡30s，無(wú)菌水沖洗，再用2%次氯酸鈉浸泡7min～10min，

無(wú)菌水沖洗4次～5次。

5.2.3莖尖剝離與接種

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GB/TXXXX—202X

借助40×雙目解剖鏡，剝?nèi)ネ馊~，剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長(zhǎng)點(diǎn)，用解剖刀或

解剖針切取帶1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)（0.1mm～0.3mm），迅速置于莖尖培養(yǎng)基表面，器

皿口用酒精燈滅菌并封口，注明編號(hào)、品種名稱(chēng)、接種時(shí)間。

5.2.4離體培養(yǎng)

5.2.4.1在溫度20℃～25℃、相對(duì)濕度70%、光照強(qiáng)度2000Lx～3000Lx、光照時(shí)數(shù)16h/d

的條件下離體培養(yǎng)。

5.2.4.2定期查看，待形成肉眼可見(jiàn)的莖葉后，轉(zhuǎn)移到MS培養(yǎng)基（配方參見(jiàn)附錄C），培養(yǎng)

成帶4～5個(gè)葉片的幼苗。

6病毒檢測(cè)

6.1將每個(gè)器皿的幼苗，在超凈工作臺(tái)內(nèi)切取帶有1~2個(gè)葉片的上部莖段轉(zhuǎn)入新的器皿中繼

續(xù)培養(yǎng)，編號(hào)不變；根據(jù)病毒檢測(cè)要求的取樣量，對(duì)下部莖段繼續(xù)培養(yǎng)或直接進(jìn)行病毒檢測(cè)，

樣品不能粘有培養(yǎng)基。

6.2檢測(cè)方法采用5.1.2的方法，也可以采用靈敏度更高的檢測(cè)技術(shù)，篩選出不含PVX、PVY、

PVS、PLRV、PVM、PVA病毒的脫毒苗。

7試種觀察

將部分脫毒苗移栽到防蟲(chóng)溫網(wǎng)室，結(jié)出的薯塊種植到田間試種觀察，符合原品種典型性

狀的脫毒苗即為核心苗。

8基礎(chǔ)苗培養(yǎng)

8.1對(duì)核心苗切段擴(kuò)繁。將培養(yǎng)器皿置于超凈工作臺(tái)上，器皿口用75%乙醇擦拭消毒，用鑷

子取出核心苗，按單莖節(jié)切段，每個(gè)切段至少帶1個(gè)葉片。

8.2將剪下切段的腋芽朝上插入MS培養(yǎng)基（配方參見(jiàn)附錄C）或其它脫毒苗擴(kuò)繁培養(yǎng)基上

（配方參見(jiàn)附錄D），器皿口用酒精燈滅菌并封口，注明編號(hào)、品種名稱(chēng)、接種時(shí)間等。

8.3培養(yǎng)條件：溫度20℃～26℃、相對(duì)濕度50%～70%、光照強(qiáng)度2000Lx～4500Lx、光

照時(shí)數(shù)10h～16h/d。

9基礎(chǔ)苗保存

9.1選擇保存培養(yǎng)基（配方參見(jiàn)附錄E）保存基礎(chǔ)苗。

9.2將基礎(chǔ)苗置于溫度8℃～16℃、相對(duì)濕度50%～70%、光照強(qiáng)度3000Lx～4500Lx、

光照時(shí)數(shù)10h～14h/d的條件下使其緩慢生長(zhǎng)，繼代培養(yǎng)出一定數(shù)量的脫毒苗保存。

10擴(kuò)繁

10.1擴(kuò)繁前檢測(cè)基礎(chǔ)苗是否帶病毒（PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM、PVA）和類(lèi)病毒（PSTVd）。

檢測(cè)參照6執(zhí)行。

10.2選擇用MS固體培養(yǎng)基（配方參見(jiàn)附錄C）或擴(kuò)繁培養(yǎng)基（配方參見(jiàn)附錄D）。

10.3將配制好的培養(yǎng)基裝入器皿中，厚度2cm左右，封口；將分裝好的器皿置于滅菌鍋內(nèi)，

121℃高壓（1.1kg/cm2）滅菌20min，冷卻，放置3d～5d。

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10.4檢測(cè)合格的基礎(chǔ)苗切段擴(kuò)繁。將培養(yǎng)器皿置于超凈工作臺(tái)上，器皿口用75%乙醇擦拭

消毒并用酒精燈滅菌，用鑷子取出脫毒苗，按單莖節(jié)切段，每個(gè)切段至少帶1個(gè)葉片。

10.5將剪下切段的腋芽朝上插入培養(yǎng)基，器皿口用酒精燈滅菌并封口，注明編號(hào)、品種名稱(chēng)、

接種時(shí)間等。

10.6培養(yǎng)條件：白天20℃～26℃，夜間16℃～20℃，光照強(qiáng)度2000Lx～4500Lx，光照

時(shí)間14h～16h/d，培養(yǎng)18d～25d。

10.7待長(zhǎng)出5～8個(gè)葉片后可再次切段繼代繁殖。

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AA

附錄A

附錄B（資料性附錄）

附錄C組培設(shè)備、試劑

C.1配制室

C.1.1防酸堿臺(tái)面的試驗(yàn)臺(tái)。

C.1.2冰箱。

C.1.3藥品柜。

C.1.4器械柜。

C.1.5天平。

C.1.6pH計(jì)。

C.1.7純水儀。

C.1.8容量瓶、細(xì)口瓶、廣口瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、移液器、試劑勺等。

C.1.9試管、錐形瓶、培養(yǎng)瓶（盒）、封口膜、線繩或橡皮筋。

C.1.10不銹鋼鍋。

C.1.11電磁爐。

C.2清洗室及滅菌室

C.2.1水槽。

C.2.2控水架。

C.2.3烘箱。

C.2.4高壓滅菌鍋。

C.3接種室

C.3.1超凈工作臺(tái)。

C.3.2空調(diào)。

C.3.3培養(yǎng)基存放架。

C.3.4紫外燈、臭氧發(fā)生器等。

C.3.5酒精燈。

C.3.6鑷子、剪刀、解剖針、解剖刀等。

C.3.740×雙目解剖鏡。

C.4培養(yǎng)室

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C.4.1LED光源培養(yǎng)架（帶時(shí)間控制器）。

C.4.2紫外燈、臭氧發(fā)生器等。

C.4.3空調(diào)。

C.4.4加濕機(jī)。

C.4.5溫、濕度儀。

C.5藥品

C.5.1次氯酸鈉飽和溶液。

C.5.275%乙醇。

C.5.3激動(dòng)素、吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3）、6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、D-泛酸鈣、

萘乙酸（NAA）。

C.5.4卡拉膠、瓊脂或倍立凝。

C.5.5蔗糖、食用白糖。

C.5.6附錄B～附錄E中的所有試劑。

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BB

附錄D

附錄E（資料性附錄）

附錄F莖尖培養(yǎng)基配方

表B.1莖尖培養(yǎng)基配方

質(zhì)量濃度

母液成分化學(xué)試劑

MS（1962）aFAO（1986）bCIPc

硝酸鉀（KNO3）1900mg/L1900mg/L1900mg/L

大

硝酸銨（NH4NO3）1650mg/L1650mg/L1650mg/L

量

氯化鈣（CaCl2?2H2O）440mg/L440mg/L440mg/L

元

硫酸鎂（MgSO4?7H2O）370mg/L500mg/L370mg/L

素

磷酸二氫鉀（KH2PO4）170mg/L170mg/L170mg/L

鐵硫酸亞鐵（FeSO4?7H2O）27.8mg/L27.8mg/L27.8mg/L

鹽乙二胺四乙酸二鈉（Na2?EDTA）37.3mg/L37.3mg/L37.3mg/L

硫酸錳（MnSO4?4H2O）22.3mg/L0.5mg/L22.3mg/L

硼酸（H3BO4）6.2mg/L1.0mg/L6.2mg/L

微

硫酸鋅（ZnSO4?4H2O）8.6mg/L1.0mg/L8.6mg/L

量

碘化鉀（KI）0.83mg/L0.01mg/L0.83mg/L

元

硫酸銅（CuSO4?5H2O）0.025mg/L0.03mg/L0.025mg/L

素

氯化鈷（CoCl2?6HO）0.025mg/L0.025mg/L

鉬酸鈉（Na2MoO4?2H2O）0.25mg/L0.25mg/L

煙酸0.5mg/L1.0mg/L0.5mg/L

肌醇100mg/L100mg/L100mg/L

有

硫酸鹽腺嘌呤80mg/L0.25mg/L

機(jī)

泛酸鈣0.5mg/L2.0mg/L

成

甘氨酸2.0mg/L2.0mg/L

分

鹽酸硫胺素（維生素B1）0.5mg/L1.0mg/L0.5mg/L

鹽酸吡哆醇（維生素B6）0.5mg/L1.0mg/L0.5mg/L

生物素0.2mg/L

激

激動(dòng)素0.04mg/L～1.0mg/L

素

吲哚乙酸1mg/L～3.0mg/L

糖蔗糖30g20g30g

其他瓊脂6g8g6g

a莖尖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基加激素。

b聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織推薦的莖尖培養(yǎng)基配方。

c國(guó)際馬鈴薯中心的莖尖培養(yǎng)基配方。

16

GB/TXXXX—202X

CC

附錄G

附錄H（資料性附錄）

附錄IMS培養(yǎng)基配方

表C.1MS培養(yǎng)基配方

質(zhì)量濃度

母液成分化學(xué)試劑

（mg/L）

硝酸銨（NH4NO3）1650

硝酸鉀（KNO3）1900

大量元素

氯化鈣（CaCI2?2H2O）440

硫酸鎂（MgSO4?7H2O）370

磷酸二氫鉀（KH2PO4）170

碘化鉀（KI）0.83

硼酸（H3BO3）6.2

硫酸錳（MnSO4?4H2O）22.3

微量元素硫酸鋅（ZnSO4?7H2O）8.6

鉬酸鈉（Na2MoO?2H2O）0.25

硫酸銅（CuSO4?5H2O）0.025

氯化鈷（CoCI2?6H2O）0.025

硫酸亞鐵（FeSO4?7H2O）27.8

鐵鹽

乙二胺四乙酸二鈉（Na2·EDTA·2H2O）37.3

肌醇100

煙酸0.5

有機(jī)成分鹽酸吡哆醇（維生素B6）0.5

鹽酸硫胺素（維生素B1）0.1

甘氨酸2.0

注1：MS固體培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+30g/L蔗糖+瓊脂6g/L（卡拉膠4.5g/L），pH值為5.6~5.8。

注2：鐵鹽母液的配制：兩種試劑分別稱(chēng)量并分別加熱溶解，待兩種試劑均溶解后混合，混合后的溶液繼續(xù)加

熱使其充分螯合，冷卻后定容備用。

17

GB/TXXXX—202X

DD

附錄J

附錄K（資料性附錄）

附錄L擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方

表D.1擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方

母液成分化學(xué)試劑質(zhì)量濃度

硝酸鉀（KNO3）1900mg/L

硝酸銨（NH4NO3）1650mg/L

大量元素磷酸二氫鉀（KH2PO4）170mg/L

氯化鈣（CaCI2?2H2O）440mg/L

硫酸鎂（MgSO4?7H2O）370mg/L

硼酸（H3BO3）6.2mg/L

硫酸錳（MnSO4?4H2O）22.3mg/L

鉬酸鈉（Na2MoO?2H2O）0.25mg/L

微量元素硫酸鋅（ZnSO4?7H2O）8.6mg/L

碘化鉀（KI）0.83mg/L

硫酸銅（CuSO4?5H2O）0.025mg/L

氯化鈷（CoCI2?6H2O）0.025mg/L

硫酸亞鐵（FeSO4?7H2O）27.8mg/L

鐵鹽a

乙二胺四乙酸二鈉（Na2·EDTA·2H2O）37.3mg/L

蔗糖25g/L

其他

倍立凝4.5g/L~5g/L

注1：本配方pH值為5.6~5.8。

注2：可用卡拉膠或瓊脂替代倍立凝。

a鐵鹽母液的配制：兩種試劑分別稱(chēng)量并分別加熱溶解，待兩種試劑均溶解后混合，混合后的溶液繼續(xù)加熱使其

充分螯合，冷卻后定容備用。

18

GB/TXXXX—202X

EE

附錄M

附錄N（資料性附錄）

附錄O保存培養(yǎng)基配方

表E.1保存培養(yǎng)基配方

母液成分化學(xué)試劑質(zhì)量濃度

硝酸鉀（KNO3）1900mg/L

硝酸銨（NH4NO3）1650mg/L

大量元素磷酸二氫鉀（KH2PO4）170mg/L

氯化鈣（CaCl2·2H2O）440mg/L

硫酸鎂（MgSO4·7H2O）370mg/L

硼酸（H3BO3）6.2mg/L

硫酸錳（MnSO4·4H2O）22.3mg/L

鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O）0.25mg/L

微量元素硫酸鋅（ZnSO4·4H2O）8.6mg/L

碘化鉀（KI）0.83mg/L

硫酸銅（CuSO4·5H2O）0.025mg/L

氯化鈷（CoCl2·6H2O）0.025mg/L

硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）27.8mg/L

鐵鹽

乙二胺四乙酸二鈉（Na2·EDTA·2H2O）37.3mg/L

鹽酸吡多辛（維生素B6）0.5mg/L

鹽酸硫胺素（維生素B1）0.4mg/L

有機(jī)成分

甘氨酸2.0mg/L

煙酸0.5mg/L

生長(zhǎng)抑制劑6.0mg/L~8.0mg/L

其他倍力凝4.5g/L~5g/L

蔗糖25g/L

注1：本配方pH值為5.6~5.8。

注2：可用卡拉膠或瓊脂替代倍立凝。

______________1_9__________________

GB/TXXXX—202X

F

20

ICS65.020.01

CCSB04

GB

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXX-202X

代替GB/T29375-2012

馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程

Codeofpracticeforin-vitrovirusfreeseedpotatoesplantletsbreeding

（征求意見(jiàn)稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

XXXXXXX發(fā)布

-6-

GB/TXXXX—202X

馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件確立了馬鈴薯莖尖脫毒與組織培養(yǎng)、脫毒試管苗擴(kuò)繁的技術(shù)要求和操作規(guī)程。

本文件適用于馬鈴薯脫毒試管苗的培育和擴(kuò)繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB/T31790馬鈴薯紡錘塊莖類(lèi)病毒檢疫鑒定方法

GB/T36833馬鈴薯X病毒檢疫鑒定方法

GB/T36816馬鈴薯Y病毒檢疫鑒定方法

GB/T36846馬鈴薯M病毒檢疫鑒定方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

莖尖stemtip

有分生組織（0.05mm～0.1mm）及芽原基和正在發(fā)育的葉原基的芽頂端部分（0.1mm～

10mm）。

3.2

葉原基leafprimordium

在莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)的基部形成的突起。

3.3

莖尖分生組織meristem

莖尖部位具有持續(xù)或周期性分裂能力的細(xì)胞群。

3.4

離體培養(yǎng)in-vitropropagation

從植物體分離出符合需要的器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控

制條件下進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。

3.5

9

GB/TXXXX—202X

脫毒苗in-vitrovirus-freeplantlet

經(jīng)檢測(cè)不帶馬鈴薯X病毒（PVX）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、馬鈴薯S病毒（PVS）、馬

鈴薯卷葉病毒（PLRV）、馬鈴薯M病毒（PVM）、馬鈴薯A病毒（PVA）、馬鈴薯紡錘塊莖

類(lèi)病毒（PSTVd）等（類(lèi)）病毒的試管苗。

3.6

核心苗coreplantlet

通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的經(jīng)檢測(cè)無(wú)病毒，經(jīng)試種觀察具有原品種典型性狀的脫

毒苗。

3.7

基礎(chǔ)苗basicplantlet

由核心苗繁殖的、經(jīng)檢測(cè)無(wú)病毒的脫毒苗。

3.