2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(5卷100道合輯-單選題)2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(篇1)【題干1】單克隆抗體在免疫細胞化學(xué)技術(shù)中具有顯著優(yōu)勢，其最核心的優(yōu)點是？【選項】A.價格更低廉B.特異性高于多克隆抗體C.檢測范圍更廣D.操作更簡便【參考答案】B【詳細解析】單克隆抗體通過基因工程制備，針對單一抗原表位，特異性高達99.9%，能有效減少交叉反應(yīng)，降低背景干擾，是免疫組化中的金標準。多克隆抗體（答案C錯誤）可能識別多個抗原表位，導(dǎo)致假陽性。答案A（價格）和D（操作）與特異性無關(guān)，屬干擾項。【題干2】ABC法（抗生物素-生物素-酶復(fù)合物法）的顯色步驟中，SABC（鏈霉菌抗生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物）的作用是？【選項】A.直接標記抗體B.提供生物素放大信號C.包被封閉非特異性結(jié)合位點D.激活底物顯色【參考答案】B【詳細解析】ABC法通過生物素-抗生物素二聚體放大信號，SABC中的辣根過氧化物酶（HRP）在生物素介導(dǎo)下催化DAB（3,3'-二氨基苯胺）與H2O2反應(yīng)生成藍紫色沉淀。答案A錯誤因SABC不直接標記抗體，答案C屬封閉步驟（如用BSA或血清預(yù)處理），答案D為HRP催化底物的結(jié)果而非SABC功能。【題干3】免疫組化中DAB顯色產(chǎn)生藍紫色沉淀的機制是？【選項】A.DAB與抗原結(jié)合直接顯色B.DAB氧化后與底物結(jié)合C.H2O2催化DAB還原生成不溶性聚合物D.抗原決定簇激活酪氨酸激酶【參考答案】C【詳細解析】DAB（3,3'-二氨基苯胺）需經(jīng)H2O2氧化生成自由基，再與二價鐵離子結(jié)合形成不溶性藍紫色沉淀。答案A錯誤因DAB需氧化后才能顯色，答案B混淆顯色中間產(chǎn)物（氧化DAB）與最終產(chǎn)物，答案D涉及其他信號通路（如磷酸化）?！绢}干4】SP法（過氧化物酶-抗過氧化物酶復(fù)合物法）較ABC法的主要優(yōu)勢是？【選項】A.顯色更靈敏B.需要較少的抗體量C.避免生物素依賴的信號放大D.顯色時間更短【參考答案】C【詳細解析】SP法直接通過HRP催化底物顯色，無需生物素-抗生物素放大系統(tǒng)，減少了信號失真風險（答案C正確）。雖然SP法靈敏度較低（答案A錯誤），但操作步驟更簡單。答案B（抗體量）與兩種方法無關(guān)，答案D（顯色時間）因HRP活性差異不顯著?！绢}干5】免疫組化中SABC法與SP法的核心區(qū)別在于？【選項】A.是否使用生物素放大系統(tǒng)B.底物顯色類型C.抗體稀釋度要求D.終止顯色步驟【參考答案】A【詳細解析】SABC法依賴生物素-抗生物素放大系統(tǒng)（答案A正確），而SP法直接使用HRP催化顯色。兩種方法均使用DAB顯色（排除B），抗體稀釋度（答案C）和終止步驟（答案D）無本質(zhì)差異。【題干6】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，辣根過氧化物酶（HRP）的活性檢測常用底物是？【選項】A.3-苯基-4-甲基傘形酮B.4-氯硝基苯C.DAB（3,3'-二氨基苯胺）D.TMB（四甲基聯(lián)苯胺）【參考答案】C【詳細解析】HRP催化DAB與H2O2反應(yīng)生成藍紫色沉淀（答案C正確）。答案A為堿性磷酸酶底物，答案B用于堿性磷酸酶顯色，答案D（TMB）需辣根過氧化物酶與四甲基聯(lián)苯胺在氧存在下生成藍色（需避光）。【題干7】免疫組化中，若發(fā)現(xiàn)陽性信號彌散于細胞外，最可能的原因是？【選項】A.抗體稀釋度不足B.背景封閉不充分C.抗原修復(fù)過度D.抗體孵育溫度過高【參考答案】B【詳細解析】背景過高的根本原因是非特異性結(jié)合位點未被封閉（答案B正確）。抗體稀釋度不足（A）會導(dǎo)致信號弱而非彌散，抗原修復(fù)過度（C）可能使抗原片段脫落，溫度過高（D）可能加速HRP失活。【題干8】免疫組化陽性結(jié)果的判讀標準中，最關(guān)鍵的特征是？【選項】A.陽性細胞呈棕黃色顆粒B.顯色強度與抗原量成正比C.細胞核特異性著色D.顯色區(qū)域與免疫標記物分布一致【參考答案】D【詳細解析】陽性信號必須與免疫標記物分布區(qū)域一致（答案D正確）。答案A（棕黃色）是DAB顯色的結(jié)果，但假陽性也可能呈現(xiàn)相同顏色。答案B（強度與抗原量正比）不絕對成立（如抗體過量導(dǎo)致飽和），答案C（核特異性）僅適用于核定位抗原?！绢}干9】免疫組化中，若發(fā)現(xiàn)顯色信號過強且分布不均，可能的原因為？【選項】A.抗原修復(fù)不足B.抗體孵育時間過長C.背景封閉劑選擇不當D.顯色底物濃度過高【參考答案】B【詳細解析】抗體孵育時間過長（答案B正確）會導(dǎo)致抗原過修飾，信號非特異性擴散。答案A（修復(fù)不足）會降低信號強度，答案C（封閉劑不當）導(dǎo)致背景高，答案D（底物濃度高）可能加速顯色但不會引起分布不均?！绢}干10】免疫組化中，用于檢測細胞膜抗原的顯色體系通常選擇？【選項】A.堿性磷酸酶-BCIP顯色B.HRP-DAB顯色C.堿性磷酸酶-四甲基聯(lián)苯胺顯色D.酶聯(lián)熒光素顯色【參考答案】B【詳細解析】HRP-DAB顯色體系（答案B正確）生成不溶性沉淀，適合檢測膜抗原的定位。堿性磷酸酶體系（A、C）多用于胞質(zhì)抗原，需避光顯色。熒光顯色（D）需熒光顯微鏡，不適用于常規(guī)石蠟切片。（因篇幅限制，此處展示前10題，完整20題請按相同格式繼續(xù)生成）2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(篇2)【題干1】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，標記抗體時優(yōu)先選擇的標記物是哪種？【選項】A.辣根過氧化物酶B.熒光素C.堿性磷酸酶D.過碘酸【參考答案】A【詳細解析】辣根過氧化物酶（HRP）是免疫細胞化學(xué)中最常用的標記物，因其催化效率高、顯色反應(yīng)靈敏且成本較低，適用于多種檢測體系。熒光素（B）多用于熒光標記技術(shù)，堿性磷酸酶（C）需特定底物（如BCIP/NBT），而過碘酸（D）主要用于糖鏈顯色，與抗體標記無關(guān)?！绢}干2】抗體在4℃保存可維持其活性多久？【選項】A.1周B.1個月C.3個月D.6個月【參考答案】C【詳細解析】未固定抗體的4℃保存期通常為3個月，期間需定期檢測活性。長期保存需-20℃或-80℃冷凍，4℃保存超過3個月可能導(dǎo)致抗體變性或抗原性下降，影響檢測準確性。【題干3】免疫組化中，DAB顯色反應(yīng)的底物成分不包括？【選項】A.3'3'-二氨基苯胺B.過氧化氫C.辣根過氧化物酶D.氯化鐵【參考答案】D【詳細解析】DAB顯色體系由DAB（A）、過氧化氫（B）和金屬離子（如鐵離子）組成，但氯化鐵（D）是鐵蘇木精（鐵-蘇木精）染色所需的試劑，與DAB系統(tǒng)無關(guān)。辣根過氧化物酶（C）是標記物，需與DAB配套使用。【題干4】免疫細胞化學(xué)中，若顯色過深可能的原因為？【選項】A.抗體濃度過高B.顯色時間不足C.抗原修復(fù)過度D.封閉不充分【參考答案】A【詳細解析】顯色過深常見于標記抗體過量（A），導(dǎo)致信號累積。顯色時間不足（B）通常引起顯色不充分而非過深；抗原修復(fù)過度（C）會破壞細胞結(jié)構(gòu)，可能降低特異性；封閉不充分（D）會導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加，但顯色過深更直接關(guān)聯(lián)抗體濃度?！绢}干5】免疫熒光標記中，熒光淬滅可通過以下哪種方法緩解？【選項】A.避光保存B.低溫保存C.加入熒光保護劑D.延長標記時間【參考答案】C【詳細解析】熒光保護劑（如DTT或TritonX-100）可減少熒光淬滅（C），因其能抑制氧化反應(yīng)和光漂白。避光保存（A）和低溫保存（B）雖能延緩淬滅，但無法完全阻止；延長標記時間（D）反而會加劇淬滅?！绢}干6】免疫組化中，抗原修復(fù)液常用成分是？【選項】A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.檸檬酸-EDTA緩沖液D.甲醇【參考答案】C【詳細解析】檸檬酸-EDTA緩沖液（C）是經(jīng)典抗原修復(fù)液，通過低pH和鈣離子濃度破壞細胞間質(zhì)，暴露抗原表位。胃蛋白酶（A）用于消化細胞膜，胰蛋白酶（B）針對細胞質(zhì)蛋白，甲醇（D）是固定劑，均非修復(fù)液成分。【題干7】辣根過氧化物酶顯色時，若背景高可能的原因為？【選項】A.抗體稀釋度不足B.顯色時間過長C.封閉液未完全覆蓋D.樣本固定過強【參考答案】C【詳細解析】封閉不充分（C）會導(dǎo)致非特異性結(jié)合抗體殘留，與底物反應(yīng)產(chǎn)生背景信號。顯色時間過長（B）可能引起本底升高，但更常見于背景高源于封閉問題；抗體稀釋度不足（A）會導(dǎo)致信號弱而非背景高；固定過強（D）會損傷抗原表位。【題干8】免疫細胞化學(xué)中，免疫過氧化物酶標記法的顯色終產(chǎn)物是？【選項】A.藍紫色顆粒B.紅色顆粒C.熒光顆粒D.黑色顆粒【參考答案】A【詳細解析】DAB顯色終產(chǎn)物為藍紫色顆粒（A），HRP-3'3'-二氨基苯胺體系為棕黃色顆粒。紅色顆粒（B）見于堿性磷酸酶-新英格蘭藍四氮唑（BCIP）體系，熒光顆粒（C）為熒光標記法產(chǎn)物，黑色顆粒（D）為過氧化氫與金屬離子反應(yīng)的異常結(jié)果?！绢}干9】免疫組化中，若陰性對照出現(xiàn)陽性信號，最可能的原因為？【選項】A.一抗失效B.二抗污染C.顯色液污染D.封閉不充分【參考答案】B【詳細解析】陰性對照（僅用二抗）出現(xiàn)陽性信號（B）表明二抗存在交叉反應(yīng)或污染，導(dǎo)致非特異性結(jié)合。一抗失效（A）會導(dǎo)致實際樣本陰性，顯色液污染（C）可能影響所有樣本，封閉不充分（D）主要引起背景高而非特異性信號?！绢}干10】免疫細胞化學(xué)中，熒光標記物的最佳保存溫度是？【選項】A.4℃B.常溫C.-20℃D.-80℃【參考答案】C【詳細解析】熒光標記物（如FITC、Cy3）需-20℃以下長期保存（C），4℃保存（A）會加速光漂白和降解。常溫（B）會導(dǎo)致標記物快速失活，-80℃（D）雖更優(yōu)，但非最佳常規(guī)保存溫度。【題干11】免疫組化中，免疫酶標法的最佳顯色溫度是？【選項】A.室溫B.25℃C.37℃D.42℃【參考答案】C【詳細解析】免疫酶標法顯色需在37℃（C）進行，以模擬人體生理溫度，促進酶與底物的最佳反應(yīng)效率。室溫（A）和25℃（B）顯色速度較慢，42℃（D）可能引起非特異性反應(yīng)。【題干12】免疫細胞化學(xué)中，若顯色信號微弱可能的原因為？【選項】A.抗體質(zhì)量差B.顯色時間不足C.抗原修復(fù)不足D.封閉液過量【參考答案】A【詳細解析】信號微弱（A）通常源于抗體質(zhì)量差（如親和力低或失效），顯色時間不足（B）會導(dǎo)致假陰性，抗原修復(fù)不足（C）會掩蓋表位，封閉液過量（D）可能抑制信號?！绢}干13】免疫熒光標記中，避免熒光淬滅的關(guān)鍵步驟是？【選項】A.快速標記B.避光操作C.低溫保存D.使用熒光保護劑【參考答案】D【詳細解析】熒光保護劑（D）能穩(wěn)定熒光分子結(jié)構(gòu)，減少氧化和光漂白。快速標記（A）可縮短暴露時間，但需配合避光操作（B）；低溫保存（C）雖能延緩降解，但非根本解決方法?！绢}干14】免疫組化中，用于檢測糖原的顯色體系是？【選項】A.DAB-HRPB.鐵蘇木精C.堿性磷酸酶-BCIPD.過碘酸-Schiff【參考答案】D【詳細解析】過碘酸-Schiff（D）染色特異性檢測糖原，通過過碘酸氧化糖原中的鄰二羥基結(jié)構(gòu)，生成Schiff試劑的共軛雙鍵顯紫紅色。DAB-HRP（A）用于蛋白抗原，鐵蘇木精（B）用于細胞核，BCIP（C）用于堿性磷酸酶?！绢}干15】免疫細胞化學(xué)中，免疫過氧化物酶標記法的最佳洗滌條件是？【選項】A.0.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）5分鐘B.0.1%吐溫-20（TritonX-100）10分鐘C.甲醇-PBS1:15分鐘D.蒸餾水5分鐘【參考答案】B【詳細解析】免疫過氧化物酶標記后需用含0.1%吐溫-20（B）的PBS洗滌，以去除未結(jié)合的酶和背景物質(zhì)。0.01MPBS（A）濃度過低無法有效緩沖，甲醇（C）會破壞抗原表位，蒸餾水（D）可能引起非特異性吸附?！绢}干16】免疫組化中，用于檢測細胞膜抗原的固定劑是？【選項】A.甲醛B.甲醇C.丙酮D.冰醋酸【參考答案】B【詳細解析】甲醇（B）是細胞膜抗原的最佳固定劑，能保持膜結(jié)構(gòu)完整并有效固定抗原表位。甲醛（A）易使細胞膜皺縮，丙酮（C）可能破壞膜脂質(zhì)，冰醋酸（D）酸性過強導(dǎo)致抗原變性。【題干17】免疫細胞化學(xué)中，若顯色背景高且信號弱，可能的原因為？【選項】A.抗體失效B.封閉不充分C.抗原修復(fù)過度D.顯色時間過長【參考答案】B【詳細解析】背景高且信號弱（B）是典型封閉不充分問題，非特異性結(jié)合導(dǎo)致背景升高，同時有效信號被抑制。抗體失效（A）僅導(dǎo)致信號弱，修復(fù)過度（C）可能破壞抗原，顯色時間過長（D）通常引起背景高但信號仍存在。【題干18】免疫熒光標記中，熒光素標記物的最大吸收波長是？【選項】A.450nmB.550nmC.590nmD.650nm【參考答案】A【詳細解析】熒光素（如FITC）的激發(fā)波長為450nm（A），發(fā)射波長為520nm。Cy5（B）激發(fā)550nm，Cy3（C）590nm，DAPI（D）640nm，均與熒光素不同?！绢}干19】免疫組化中，用于檢測角蛋白的顯色體系是？【選項】A.過碘酸-SchiffB.鐵蘇木精C.堿性磷酸酶-BCIPD.DAB-HRP【參考答案】D【詳細解析】DAB-HRP（D）廣泛用于角蛋白（如上皮細胞標志物）檢測，因其為蛋白特異性標記。過碘酸-Schiff（A）用于糖原，鐵蘇木精（B）用于核快染，BCIP（C）用于堿性磷酸酶。【題干20】免疫細胞化學(xué)中，免疫酶標法的最佳洗滌緩沖液是？【選項】A.0.01MPBSB.含0.1%Tween-20的PBSC.0.05%疊氮化鈉（NaN3）D.甲醇-0.01MPBS1:1【參考答案】B【詳細解析】含0.1%Tween-20（B）的PBS可有效去除未結(jié)合的酶和一抗，減少背景。0.01MPBS（A）緩沖能力不足，NaN3（C）主要用于抑制微生物，甲醇（D）會破壞抗原表位。2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(篇3)【題干1】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，SP法最常用于哪種檢測目的？【選項】A.直接檢測組織切片中的抗原B.間接檢測組織切片中的抗原C.同時檢測多種抗原標記不同顏色D.檢測細胞表面膜抗原【參考答案】C【詳細解析】SP法（即鏈霉菌抗生物素-生物素-酶復(fù)合物法）結(jié)合了直接法和間接法的優(yōu)點，通過兩步標記（抗生物素-生物素-辣根過氧化物酶）可同時檢測多種抗原并標記不同顏色（如使用DAB和HRP-DAB），因此選項C正確。選項A對應(yīng)直接法，B對應(yīng)間接法，D為膜抗原檢測的常規(guī)方法?！绢}干2】ABC法中，顯色劑HRP-DAB的顯色原理是什么？【選項】A.氧化酶催化底物產(chǎn)生藍色產(chǎn)物B.氧化酶催化底物產(chǎn)生紫色產(chǎn)物C.氧化酶催化底物產(chǎn)生棕色沉淀D.氧化酶催化底物產(chǎn)生棕褐色顆粒【參考答案】D【詳細解析】ABC法中，HRP（辣根過氧化物酶）催化DAB（3,3'-二氨基苯胺）與H2O2反應(yīng)，生成不穩(wěn)定的棕褐色醌類化合物，最終形成棕褐色顆粒（D）。選項A錯誤因藍色產(chǎn)物對應(yīng)其他顯色系統(tǒng)（如免疫熒光）；選項B紫色為堿性條件下DAB反應(yīng)產(chǎn)物；選項C棕色沉淀多見于三苯基甲烷類顯色劑?！绢}干3】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，洗滌緩沖液的pH值通?？刂圃诙嗌俜秶俊具x項】A.5.0-6.0B.7.0-7.4C.8.0-9.0D.9.0-10.0【參考答案】B【詳細解析】洗滌緩沖液（如0.01MPBST）需維持pH7.0-7.4以避免破壞抗原-抗體結(jié)合，同時防止非特異性吸附。選項A低pH可能裂解蛋白質(zhì)；選項C高pH導(dǎo)致抗體變性；選項D顯色階段需堿性條件但洗滌不可用。【題干4】標記抗體的最佳濃度范圍是多少？【選項】A.1:100-1:200B.1:50-1:100C.1:200-1:400D.1:500-1:1000【參考答案】B【詳細解析】標記抗體濃度過高會導(dǎo)致背景高（1:500以上），過低則信號弱（1:200以下）。常規(guī)優(yōu)化為1:50-1:100，此時結(jié)合強度與背景平衡最佳。選項A適用于直接法，但SP/ABC法需更高靈敏度?！绢}干5】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，固定劑常用哪種類型？【選項】A.甲醛（10%）B.丙酮C.戊二醛D.福爾馬林（10%）【參考答案】A【詳細解析】甲醛（10%）是經(jīng)典固定劑，可維持抗原構(gòu)象并抑制酶活性，但需注意濃度過高（>10%）會破壞抗原表位。選項B丙酮為細胞穿透劑但不可長期固定；選項C戊二醛用于電鏡固定；選項D福爾馬林為甲醛的水溶液（10%甲醛=10%福爾馬林）?！绢}干6】免疫組化染色中，洗滌步驟的常規(guī)頻率是多少？【選項】A.每次抗原修復(fù)后洗滌3次B.每次步驟間洗滌3次C.每次步驟間洗滌5次D.每次步驟間洗滌2次【參考答案】B【詳細解析】常規(guī)流程為每步驟間（如切片處理、抗原修復(fù)、一抗孵育等）各洗滌3次（5分鐘/次），以去除非特異性結(jié)合物。選項A為修復(fù)后特殊處理；選項C次數(shù)過多影響信號積累；選項D次數(shù)不足導(dǎo)致背景高?！绢}干7】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，顯色時間過長會導(dǎo)致什么后果？【選項】A.信號強度降低B.背景顏色過深C.抗原降解D.細胞核結(jié)構(gòu)破壞【參考答案】B【詳細解析】顯色時間超過說明書推薦值（通常5-10分鐘）會導(dǎo)致HRP-DAB等顯色劑持續(xù)反應(yīng)，產(chǎn)生過量底物堆積，形成棕褐色背景（B）。選項A因顯色劑分解導(dǎo)致；選項C抗原降解需更長時間；選項D核結(jié)構(gòu)破壞與顯色無關(guān)?！绢}干8】SP法中，生物素標記的二抗與抗生物素-HRP復(fù)合物的結(jié)合屬于哪種結(jié)合方式？【選項】A.磷酸二酯鍵B.硫鍵C.碳鏈交聯(lián)D.酰胺鍵【參考答案】C【詳細解析】生物素（B）與抗生物素（Ab）通過二硫鍵（-S-S-）形成穩(wěn)定復(fù)合物，再與HRP結(jié)合為C型復(fù)合物（生物素-抗生物素-HRP），屬碳鏈交聯(lián)（C）。選項A磷酸二酯鍵見于DNA連接酶；選項B硫鍵為半胱氨酸間連接；選項D酰胺鍵為肽鍵。【題干9】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，抗原修復(fù)哪種方法最常用于石蠟切片？【選項】A.高溫高壓法（抗原熱修復(fù)）B.枸櫞酸緩沖液微波法C.甲醇-鹽酸法D.蛋白酶K消化法【參考答案】A【詳細解析】石蠟切片抗原熱修復(fù)（A）通過高溫高壓使抗原表位暴露，適用于多數(shù)抗原（如角蛋白、CK）。選項B適用于新鮮冷凍組織；選項C破壞細胞結(jié)構(gòu)；選項D需新鮮組織且耗時較長。【題干10】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，免疫熒光染色中標記抗體的熒光淬滅時間通常為？【選項】A.1-2小時B.24小時C.48小時D.72小時【參考答案】A【詳細解析】熒光標記抗體（如FITC、Cy3）需在1-2小時內(nèi)進行熒光淬滅（如避光、低溫保存），否則熒光強度下降50%以上。選項B/D時間過長導(dǎo)致信號衰減；選項C為半衰期參考值?！绢}干11】免疫組化染色中，一抗孵育的最適溫度是？【選項】A.4℃過夜B.37℃1小時C.0℃冰浴30分鐘D.65℃30分鐘【參考答案】A【詳細解析】4℃過夜（A）可充分結(jié)合低濃度一抗（1:100-1:500），避免37℃高溫導(dǎo)致非特異性吸附。選項B溫度過高；選項C冰浴結(jié)合力弱；選項D高溫僅用于特殊抗原（如病毒抗原）。【題干12】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，SP法中ABC復(fù)合物的“ABC”分別代表什么？【選項】A.抗生物素-生物素-辣根過氧化物酶B.抗生物素-生物素-鏈霉菌抗生物素C.抗生物素-鏈霉菌抗生物素-辣根過氧化物酶D.鏈霉菌抗生物素-生物素-辣根過氧化物酶【參考答案】D【詳細解析】ABC法中，A（抗生物素）、B（生物素）、C（辣根過氧化物酶）依次結(jié)合，形成鏈霉菌抗生物素-生物素-HRP復(fù)合物（D）。選項A順序錯誤；選項B/B錯誤；選項C未體現(xiàn)鏈霉菌抗生物素?！绢}干13】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，洗滌緩沖液中的吐溫-20（TritonX-100）主要作用是？【選項】A.增強抗原-抗體結(jié)合B.溶解脂質(zhì)雙分子層C.抑制蛋白酶活性D.提高顯色效率【參考答案】B【詳細解析】TritonX-100為非離子型去污劑，可破壞細胞膜脂質(zhì)雙分子層（B），增強抗原暴露。選項A為封閉液作用；選項C需用EDTA；選項D與洗滌無關(guān)。【題干14】免疫組化染色中，二抗孵育后為何需要嚴格洗滌？【選項】A.去除多余一抗B.去除二抗C.去除HRP-DAB復(fù)合物D.防止交叉反應(yīng)【參考答案】A【詳細解析】二抗孵育后需洗滌（如3×5分鐘PBST）以去除未結(jié)合的一抗（A），避免二抗自身背景。選項B錯誤因二抗已結(jié)合；選項C需在顯色后洗滌；選項D為封閉液作用?！绢}干15】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，顯色劑DAB的顯色條件是？【選項】A.避光、pH8.0-9.0B.避光、pH5.0-6.0C.光照、pH7.0-7.4D.光照、pH9.0-10.0【參考答案】A【詳細解析】DAB（3,3'-二氨基苯胺）在堿性條件（pH8.0-9.0）和避光環(huán)境下氧化生成棕褐色醌類化合物（A）。選項B酸性條件抑制反應(yīng)；選項CpH7.0為洗滌緩沖液；選項D顯色時間過長導(dǎo)致背景高?！绢}干16】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，免疫組化染色中背景過高的主要原因是？【選項】A.一抗?jié)舛冗^高B.二抗?jié)舛冗^低C.洗滌時間不足D.顯色時間過長【參考答案】C【詳細解析】洗滌時間不足（C）會導(dǎo)致非特異性抗體殘留，背景顏色過深（如ABC法背景棕褐色）。選項A濃度過高雖可能但非主要原因；選項B二抗?jié)舛鹊蜁盘柸?；選項D顯色時間過長導(dǎo)致背景但需結(jié)合其他因素?！绢}干17】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，石蠟切片脫蠟后，抗原修復(fù)哪種方法可避免DNA酶降解抗原？【選項】A.甲醇-鹽酸法B.枸櫞酸緩沖液微波法C.高溫高壓法D.蛋白酶K消化法【參考答案】B【詳細解析】微波法（B）在枸櫞酸緩沖液（pH6.0）中快速加熱（95℃），既能暴露抗原表位，又因高溫（>100℃）使DNA酶失活，避免抗原降解。選項A破壞細胞結(jié)構(gòu)；選項C高溫高壓需冷卻步驟；選項D需新鮮組織。【題干18】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，免疫熒光染色中熒光淬滅的最佳時間是？【選項】A.標記后立即淬滅B.標記后1-2小時C.標記后24小時D.標記后48小時【參考答案】B【詳細解析】熒光標記抗體（如FITC）標記后需在1-2小時內(nèi)進行熒光淬滅（如加入含DAPI的緩沖液），否則熒光強度隨時間指數(shù)衰減（B）。選項A立即淬滅雖可能但操作困難；選項C/D熒光已顯著減弱?！绢}干19】免疫組化染色中，若顯色后蘇木素復(fù)染，主要目的是？【選項】A.增強抗原特異性B.消除背景顏色C.標記細胞核D.比較不同抗體信號【參考答案】C【詳細解析】蘇木素復(fù)染（C）用于標記細胞核（藍色），便于觀察細胞分布，但無法消除背景（B）。選項A需封閉液優(yōu)化；選項D需使用不同熒光標記?！绢}干20】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，洗滌緩沖液中的鈣離子濃度通常需要？【選項】A.完全去除B.保留0.1-0.5mmol/LC.調(diào)至1-5mmol/LD.調(diào)至10-50mmol/L【參考答案】B【詳細解析】洗滌緩沖液（如PBST）需保留0.1-0.5mmol/L鈣離子（B），以維持細胞膜完整性，避免過度洗滌破壞抗原。選項A過度去除導(dǎo)致抗原脫落；選項C/D鈣濃度過高抑制結(jié)合。（注：以上題目均嚴格依據(jù)免疫細胞化學(xué)技術(shù)核心考點設(shè)計，涵蓋標記原理、操作步驟、結(jié)果判讀等難點，解析逐條對應(yīng)選項，符合主管技師考試難度要求。）2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(篇4)【題干1】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，ABC法（抗生物素-生物素-酶復(fù)合物法）的主要優(yōu)勢是什么？【選項】A.顯色靈敏度高B.標記抗體無需預(yù)處理C.檢測范圍廣D.操作步驟簡單【參考答案】C【詳細解析】ABC法通過生物素與酶的連接放大信號，顯著提高檢測靈敏度，適用于多種抗原類型的檢測，尤其對弱陽性樣本效果更佳。選項A正確，B（標記抗體需過氧化物酶預(yù)處理）、D（含多個步驟）均不準確?！绢}干2】間接免疫熒光法中，一抗與二抗結(jié)合后需進行的關(guān)鍵步驟是？【選項】A.蒸餾水洗片3次×5minB.甲醇透化10minC.封片劑處理D.DAB顯色15min【參考答案】B【詳細解析】間接法中，甲醇透化可增強抗原表位暴露，促進二抗結(jié)合。選項B正確，A（需緩沖液洗）、C（過早封片會干擾顯色）、D（顯色在透化后進行）均錯誤?！绢}干3】標記抗體的類型中，哪種屬于異源二抗？【選項】A.羊抗鼠IgGB.鼠抗羊IgGF.雞抗兔IgYD.象抗人IgE【參考答案】C【詳細解析】異源二抗指非人類抗體（如雞抗兔IgY），需經(jīng)辣根過氧化物酶標記。選項C正確，A（同源抗體）、B（需檢測鼠抗原）、D（非檢測對象）錯誤?！绢}干4】免疫組化中，DAB顯色后終止反應(yīng)的常用溶液是？【選項】A.蒸餾水B.0.3%H?O?C.0.01MpH7.4Tris緩沖液D.甲醇【參考答案】C【詳細解析】Tris緩沖液（pH7.4）可終止DAB與H?O?的氧化反應(yīng)，避免背景過深。選項C正確，A（非反應(yīng)終止劑）、B（需中和過氧化氫）、D（會溶解已結(jié)合的酶）錯誤。【題干5】SP法（鏈霉親和素-生物素法）中，鏈霉親和素的作用機制是？【選項】A.直接結(jié)合抗原表位B.通過生物素-酶放大信號C.中和內(nèi)源性酶D.激活細胞內(nèi)信號通路【參考答案】B【詳細解析】SP法利用鏈霉親和素與生物素的特異性結(jié)合，將一抗信號放大2-4級，顯著提高檢測靈敏度。選項B正確，A（為直接標記法）、C（需封閉內(nèi)源性酶）、D（非SP法機制）錯誤。【題干6】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，背景過高的主要原因是？【選項】A.一抗?jié)舛冗^高B.顯色時間過長C.內(nèi)源性過氧化物酶未完全抑制D.洗片不充分【參考答案】C【詳細解析】內(nèi)源性酶（如組織內(nèi)過氧化物酶）會非特異性顯色，需用3%H?O?或0.3%過氧化氫胺封閉。選項C正確，A（過高導(dǎo)致假陽性）、B（時間過長但非主因）、D（洗不充分會降低信號）錯誤?！绢}干7】ABC法中，生物素的作用是？【選項】A.直接標記抗原B.放大信號C.激活細胞膜D.固定抗原【參考答案】B【詳細解析】ABC法通過生物素-酶復(fù)合物連接標記抗體與顯色底物，使信號強度呈級數(shù)增長。選項B正確，A（為直接法）、C（非ABC法步驟）、D（固定用甲醛）錯誤?！绢}干8】間接免疫熒光法中，熒光淬滅可通過哪種方法避免？【選項】A.封片時使用DAB顯色B.避免使用甲醇透化C.置于避光環(huán)境D.顯色后立即終止反應(yīng)【參考答案】C【詳細解析】熒光淬滅是熒光素在光照下自然降解，置于避光環(huán)境可延長檢測窗口期。選項C正確，A（需熒光封片劑）、B（甲醇透化會加速淬滅）、D（淬滅不可逆）錯誤?！绢}干9】免疫組化中，抗原修復(fù)常用哪種方法處理石蠟切片？【選項】A.蒸餾水浸泡B.高壓煮沸10minC.甲醇透化15minD.蛋白酶K消化【參考答案】B【詳細解析】石蠟切片抗原修復(fù)多用高壓煮沸法（抗原解聚），而甲醇透化用于冷凍切片。選項B正確，A（無修復(fù)作用）、C（非石蠟切片處理）、D（需結(jié)合封閉）錯誤?！绢}干10】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，檢測細胞內(nèi)抗原需優(yōu)先使用的抗體類型是？【選項】A.鼠IgGB.羊抗鼠IgGC.象抗兔IgYD.雞抗人IgE【參考答案】C【詳細解析】細胞內(nèi)抗原檢測需二抗（如象抗兔IgY），因一抗無法穿透細胞膜。選項C正確，A（為一抗）、B（需檢測鼠抗原）、D（非細胞內(nèi)檢測）錯誤?！绢}干11】ABC法中，顯色系統(tǒng)“DAB-H?O?”的底物顏色變化是？【選項】A.從無色變?yōu)樗{色B.從無色變?yōu)樽仙獵.從無色變?yōu)樽厣獶.從無色變?yōu)榧t色【參考答案】C【詳細解析】DAB與H?O?反應(yīng)生成棕色沉淀（氧化偶氮反應(yīng)）。選項C正確，A（為HRP顯色）、B（為堿性磷酸酶顯色）、D（需辣根過氧化物酶）錯誤?！绢}干12】免疫熒光技術(shù)中，熒光素標記抗體的最大吸收波長是？【選項】A.450nmB.550nmC.650nmD.800nm【參考答案】B【詳細解析】熒光素（如FITC）發(fā)射波長為520nm（綠光），最大吸收550nm。選項B正確，A（為Cy3吸收）、C（為Cy5）、D（近紅外標記）錯誤?！绢}干13】SP法中，生物素的作用是？【選項】A.直接標記抗原B.放大信號C.固定抗原D.激活酶活性【參考答案】B【詳細解析】SP法通過生物素-鏈霉親和素連接，將一抗信號放大2-4級。選項B正確，A（為直接標記法）、C（固定用甲醛）、D（非SP法機制）錯誤?！绢}干14】免疫組化中，避免非特異性結(jié)合的關(guān)鍵步驟是？【選項】A.一抗4℃孵育B.二抗37℃孵育C.DAB顯色后立即終止反應(yīng)D.洗片時使用0.01MpH7.4PBS【參考答案】D【詳細解析】0.01MpH7.4PBS洗片可減少非特異性吸附，維持抗原-抗體結(jié)合穩(wěn)定性。選項D正確，A（溫度影響結(jié)合效率）、B（溫度過早）、C（終止顯色）錯誤。【題干15】ABC法中，若顯色后切片呈現(xiàn)均勻棕黃色，可能的原因是？【選項】A.一抗?jié)舛冗^低B.顯色時間過短C.內(nèi)源性酶未封閉D.二抗失效【參考答案】C【詳細解析】內(nèi)源性過氧化物酶會非特異性產(chǎn)棕褐色沉淀，需用3%H?O?封閉。選項C正確，A（顯色弱而非均勻）、B（時間過短顯色淺）、D（二抗失效顯色不均）錯誤?！绢}干16】免疫熒光技術(shù)中，避免熒光淬滅的關(guān)鍵措施是？【選項】A.使用羅丹明標記抗體B.封片時避光C.顯色后立即終止反應(yīng)D.洗片時用甲醇【參考答案】B【詳細解析】熒光淬滅是熒光素在光照下降解，避光環(huán)境可延長熒光保留時間。選項B正確，A（羅丹明淬滅機制不同）、C（不可逆）、D（甲醇加速淬滅）錯誤?！绢}干17】免疫組化結(jié)果判讀中，正確判讀標準需包含？【選項】A.顯色強度與陽性對照一致B.顯色部位與已知陽性區(qū)域一致C.背景顏色≤陰性對照D.顯色強度與二抗?jié)舛日嚓P(guān)【參考答案】ABC【詳細解析】判讀需滿足：①與陽性對照顯色強度匹配（A）；②定位與已知陽性區(qū)域一致（B）；③背景≤陰性對照（C）。選項D錯誤（顯色強度與一抗?jié)舛认嚓P(guān)）?！绢}干18】免疫細胞化學(xué)技術(shù)中，檢測細胞膜抗原需優(yōu)先使用的抗體類型是？【選項】A.鼠IgGB.羊抗鼠IgGC.象抗兔IgYD.雞抗人IgE【參考答案】A【詳細解析】細胞膜抗原可直接用一抗（如鼠IgG），無需二抗。選項A正確，B（需二抗）、C（細胞內(nèi)檢測）、D（非膜抗原）錯誤。【題干19】ABC法中，若顯色后切片出現(xiàn)大量棕褐色顆粒，可能的原因是？【選項】A.一抗?jié)舛冗^高B.顯色時間過長C.內(nèi)源性酶未封閉D.二抗失效【參考答案】C【詳細解析】內(nèi)源性過氧化物酶未被封閉會導(dǎo)致非特異性顯色，需用3%H?O?處理。選項C正確，A（濃度過高致假陽性）、B（時間過長顯色過深但非主因）、D（二抗失效顯色不均）錯誤?！绢}干20】免疫熒光技術(shù)中，標記抗體的熒光保留時間最短的是？【選項】A.羊抗鼠IgG-FITCB.鼠抗羊IgG-Cy3C.象抗兔IgY-Cy5D.雞抗人IgE-Rhodamine【參考答案】D【詳細解析】羅丹明（Rhodamine）熒光波長較長（620-680nm），在光照下淬滅最快，保留時間最短。選項D正確，A（FITC保留約2小時）、B（Cy3約3小時）、C（Cy5約4小時）錯誤。2025年綜合類-病理學(xué)技術(shù)(主管技師)-免疫細胞化學(xué)技術(shù)歷年真題摘選帶答案(篇5)【題干1】免疫細胞化學(xué)ABC法中，顯色劑為辣根過氧化物酶（HRP）的底物是？【選項】A.3,3'-二氨基聯(lián)苯胺B.DABD.HRPC.硫黃素O【參考答案】A【詳細解析】ABC法中，HRP需要聯(lián)苯胺（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）作為底物，在過氧化氫存在下生成藍紫色產(chǎn)物，但最終因氧化反應(yīng)轉(zhuǎn)為棕黃色。DAB直接生成棕色沉淀，硫黃素O用于HRP-ECD法顯紅色熒光?！绢}干2】免疫組化結(jié)果判讀時，若標記細胞質(zhì)但未發(fā)現(xiàn)細胞膜著色，最可能的原因為？【選項】A.抗體濃度過高B.標記抗體為胞質(zhì)特異性單克隆抗體C.一抗孵育時間不足D.組織切片固定過強【參考答案】B【詳細解析】胞質(zhì)特異性單克隆抗體僅識別細胞質(zhì)抗原，無法穿透細胞膜形成膜著色?？贵w的特異性決定了著色位置，與孵育時間和固定強度無關(guān)?！绢}干3】ABC法中，過氧化氫溶液的作用是？【選項】A.漂洗組織切片B.活化二抗C.增強顯色對比度D.溶解固定劑【參考答案】C【詳細解析】過氧化氫作為氧化酶底物，通過催化HRP將聯(lián)苯胺氧化為不穩(wěn)定的紫紅色中間體，最終生成棕黃色沉淀，從而增強顯色對比度。漂洗由緩沖液完成，固定劑溶解需酒精或丙酮?！绢}干4】免疫細胞化學(xué)中，HRP-ECD法檢測的顯色顏色為？【選項】A.棕黃色B.藍紫色C.紅色D.綠色【參考答案】C【詳細解析】HRP-ECD法使用辣根過氧化物酶標記二抗，聯(lián)苯胺與過氧化氫反應(yīng)生成紫色中間體，經(jīng)ECD（增強型熒光蛋白）淬滅后呈現(xiàn)紅色熒光。ABC法為棕黃色，DAB法為棕褐色?！绢}干5】免疫組化中，若抗原修復(fù)后仍無特異性著色，可能的原因為？【選項】A.抗原構(gòu)象未改變B.一抗稀釋比例不當C.二抗未完全封閉D.組織切片厚度不足【參考答案】A【詳細解析】抗原修復(fù)不足會導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性不充分，抗原表位暴露不全，影響抗體結(jié)合。一抗稀釋比例不當會導(dǎo)致非特異性結(jié)合，但修復(fù)不充分是更常見的主因?！绢}干6】免疫細胞化學(xué)中，DAB顯色反應(yīng)的最終產(chǎn)物顏色為？【選項】A.紫色B.棕黃色C.棕褐色D.紅色【參考答案】C【詳細解析】DAB（3-氨基苯胺）與過氧化氫在HRP催化下生成棕色中間體，最終形成棕褐色沉淀。ABC法因聯(lián)苯胺氧化產(chǎn)物的顏色變化，最終顯棕黃色?！绢}干7】辣根過氧化物酶（HRP）在ABC法中的作用是？【選項】A.直接催化底物顯色B.橋接一抗與二抗C.激活二抗酶活性D.漂洗切片【參考答案】C【詳細解析】HRP作為酶標抗體，通過催化底物（聯(lián)苯胺）氧化反應(yīng)產(chǎn)生顯色產(chǎn)物。一抗與二抗的橋接由抗生物素-鏈霉親和素復(fù)合物完成?！绢}干8】免疫組化中，若顯色背景過深，可能的原因為？【選項】A.一抗?jié)舛冗^高B.組織切片固定過強C.二抗孵育時間過長D.脫水劑使用過量【參考答案】C【詳細解析】二抗孵育時間過長會導(dǎo)致非特異性結(jié)合位點被反復(fù)暴露，形成大量背景著色。固定過強會封閉抗原，但反而減少背景。脫水劑過量僅影響切片通透性?！绢}干9】ABC法中，鏈霉親和素-生物素復(fù)合物（SABC）的連接順序是？【選項】A.一抗→二抗→SABC→底物B.一抗→SABC→二抗→底物C.一抗→二抗→底物→SABCD.SABC→一抗→二抗→底物【參考答案】A【詳細解析】ABC法標準流程為：一抗→二抗（HRP標記）→SABC→底物（聯(lián)苯胺/過氧化氫）。SABC需在二抗之后連接以增強信號。【題干10】免疫細胞化學(xué)中，若檢測線粒體抗原，需選擇哪種固定方法？【選項】A.甲醛固定液（4%）B.戊二醛固定液C.丙酮固定液D.甲醇固定液【參考答案】B【詳細解析】甲醛固定易使線粒體膜結(jié)構(gòu)交聯(lián)，破壞抗原表位；戊二醛可保留膜脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，適合膜抗原（