152024-07-31發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定h)增加了瓶裝液體菌種檢驗(yàn)要求（見(jiàn)6i)更改了菌種罐液體菌種裝罐和滅菌要求（見(jiàn)6.2.3.1，2016版6.2.3.1——2016年首次發(fā)布為DB15/T1I香菇菌種制作技術(shù)規(guī)程3.13.2通過(guò)生產(chǎn)試驗(yàn)驗(yàn)證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，豐產(chǎn)性好、抗性強(qiáng)的香菇菌株或品種，生長(zhǎng)在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽3.3試管和培養(yǎng)皿為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱(chēng)為一級(jí)種、試3.413.53.63.7在液體培養(yǎng)基中，通過(guò)搖瓶震蕩培養(yǎng)或深層發(fā)酵技總體要求交通運(yùn)輸便利，地勢(shì)較高，通風(fēng)良好，有充4.2廠(chǎng)房冷卻室、接種室，培養(yǎng)室都要有凈化設(shè)施。菌種生產(chǎn)廠(chǎng)房條件符合NY/T174.3生產(chǎn)設(shè)備超凈工作臺(tái)或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、液體菌種灌（30L～250L）、冰箱、顯微鏡等設(shè)馬鈴薯200g加水1200ml煮沸20min，濾液定容至1000ml，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨麥粒100g加水1200ml煮沸20min，濾液定容至1000ml，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨52試管選用18mm×180mm或者20mm×200mm；培養(yǎng)皿選用直徑7cm～9cm玻璃培養(yǎng)皿或一次性塑分裝培養(yǎng)基至試管1/4處，用棉塞或硅膠塞子封閉試管口，每5支試管為1把，牛皮紙包棉塞，橡皮培養(yǎng)基裝入300ml～500ml三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅菌。培養(yǎng)皿用報(bào)紙包好，放入滅菌鍋。121℃~122℃（0.11MPa～0.12MPa）恒溫滅菌25min。5.4檢測(cè)抽取3%～5%滅菌后的試管和培養(yǎng)皿，在28℃下培養(yǎng)48h，無(wú)微生物長(zhǎng)出為滅菌合5.5接種超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)紫外燈照射30min后吹風(fēng)，之后用75%酒精進(jìn)行表面消毒。接菌過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)將3mm～5mm菌塊接種在培養(yǎng)皿或試管培養(yǎng)基的中部。培養(yǎng)皿用石臘膜密封。5.6培養(yǎng)在通風(fēng)避光、22℃~26℃下培養(yǎng)。糧食培養(yǎng)基：谷粒、麥?；蛴衩琢?9%，檸過(guò)磷酸鈣%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH6.0檸條粉60%，玉米芯20%，麩子18%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值3豆秸粉60%，玉米芯20%，麩子18%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值硬雜木屑87%，麥麩12%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6硬雜木屑84%，麩皮12%，高粱殼3%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.1.5cm深度為8cm～12cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基500g～600g。塑料袋用無(wú)棉蓋體套環(huán)每批接種應(yīng)為單一品種，如中途換品種時(shí)采用75%酒精對(duì)超凈工作臺(tái)或接種箱及接種工具進(jìn)行表面通風(fēng)避光、22℃~27℃下培養(yǎng)。原種和栽培種0℃~4℃下貯存，貯存期不超過(guò)50d。6.2液體菌種生產(chǎn)采用150ml～500ml三角瓶，培養(yǎng)基添加至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅在121℃~122℃（0.11MPa～0.12MPa）保持25min。4取3mm～5mm大小母種10～15塊接r/min～160r/min下振蕩培養(yǎng)6d～10接種后第3天對(duì)三角瓶逐個(gè)進(jìn)行純度檢驗(yàn)，及時(shí)清理未活或污染的140r/min～180r/min，灌格執(zhí)行無(wú)菌操作，每袋接種10ml～15無(wú)無(wú)