觀賞鳳梨組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范2012-06-04發(fā)布2012-09-15實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的規(guī)定進(jìn)行編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣州市農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：謝向堅(jiān)、連槿、宋占平、謝修志、郭楨、洪震濤、聶建榮、朱孟麗、鐘雯。1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了觀賞鳳梨組培苗生產(chǎn)中的基本設(shè)施本標(biāo)準(zhǔn)適用于擎天屬(果子蔓屬)(Guzmania)、鶯歌屬(麗穗鳳梨屬)(Vriesea)、蜻蜓屬(光萼荷屬)(Aechmea)、鐵蘭屬(Tillandsia)、姬鳳梨屬(Cryptanthus)和鳳梨屬(Ananas)六類觀賞下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法也稱分生苗、克隆苗、試管苗，是利用植物細(xì)胞全能性原理，在無菌條件下將離體的組織或器官將已經(jīng)成功誘導(dǎo)已具有形態(tài)發(fā)生能力的培養(yǎng)物(芽、苗、愈傷組織、原球莖或胚狀體等)重新切割、分離，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的過程。是初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴(kuò)繁培養(yǎng)過程。增殖篩苗消毒采用物理或化學(xué)的方法，殺滅或清除物體或傳播媒介上的病原(有害)微生物，使達(dá)無菌化的處理。在植物組織培養(yǎng)中用化學(xué)消毒劑對(duì)外植體進(jìn)行處理達(dá)到相對(duì)無菌的狀態(tài)。2指殺滅或清除物體、空氣等傳播媒介上所有微生物，使達(dá)無菌狀態(tài)的處理。植物組織培養(yǎng)中常用方法有：灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌、過濾滅菌、紫外線滅菌或其它物理、化學(xué)方法對(duì)物體或空濕熱滅菌用高壓蒸汽滅菌器(在壓力1.1kg/cm2、溫度121℃、時(shí)間15min～30min)進(jìn)行滅菌。干熱滅菌利用干燥箱，在160℃~180℃溫度下烘烤2h,可殺死一切微生物，包括芽胞菌。用次氯酸鈉、二氯異氰尿酸鈉、漂白粉、酒精、氯化汞、抗生素等化學(xué)試劑進(jìn)行消毒或滅菌。紫外線消毒熏蒸消毒用臭氧發(fā)生器、甲醛蒸汽進(jìn)行密閉熏蒸，適用于空間、表面消毒。灼燒滅菌利用火焰直接把微生物燒死。一般用酒精燈火焰培養(yǎng)基在植物組織培養(yǎng)過程中，由人工配制的提供培養(yǎng)材料生長所必需的營養(yǎng)元素和某些生理活性物質(zhì)3將經(jīng)過表面消毒的外植體，在無菌條件下放入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基上的過程。品種引種、栽培品種引種、栽培選擇優(yōu)良母株采摘外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)繼代、增殖培養(yǎng)繼代、增殖培養(yǎng)組培苗煉苗、移栽組培苗大棚培養(yǎng)組培苗包裝、銷售大棚管理室內(nèi)管理大棚管理銷售根據(jù)市場和生產(chǎn)需要，引種、收集來源清晰、性狀穩(wěn)定的鳳梨品種，在溫室(大棚)內(nèi)種植，溫室(大棚)最好有防蟲網(wǎng)，加強(qiáng)肥水管理、殺(抑)菌劑處理，及溫濕度光照控制，確保植株健壯，組培工廠應(yīng)選擇在安靜、清潔、無環(huán)境污染源、也不易污染環(huán)境的地方。4培養(yǎng)基培養(yǎng)基配制滅菌煉苗出瓶洗滌清洗移栽培養(yǎng)基配制室→滅菌室→接種室→培養(yǎng)室一大棚洗滌室——大棚組培生產(chǎn)車間由培養(yǎng)基配制室、洗滌室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室等組成；潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間需設(shè)置緩沖間。根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，設(shè)計(jì)組培生產(chǎn)車間，做到布局合理，方便操作。按組培生產(chǎn)流程先后，順次安排生產(chǎn)，主要包括培養(yǎng)器皿清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和高壓滅菌、外植體表面滅其中培養(yǎng)室是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)、試管苗發(fā)生、發(fā)育及生長的場所，培養(yǎng)室內(nèi)放置培養(yǎng)架。料生長最重要的因子是溫度，一般保持在20℃~28℃左右，具加熱和降溫裝置，如空調(diào)機(jī)。相對(duì)濕度以保持在50%～70%為好；控制光照時(shí)間可安裝定時(shí)開關(guān)，一般需要每天光照10h～16h,也有的需要連續(xù)照明或暗培養(yǎng)?，F(xiàn)代組培室大多設(shè)計(jì)為采用人工光照，保證5.3生產(chǎn)設(shè)備、材料抽濕機(jī)，規(guī)模較大的有條件的可配置培養(yǎng)基分裝機(jī)(線)、(半)自動(dòng)洗瓶機(jī)、空氣自凈器等。組培苗移栽溫室(大棚),可調(diào)控溫度范圍20℃~28℃,相對(duì)濕度70%～90%、活動(dòng)遮光網(wǎng)。培養(yǎng)瓶、常用玻璃器皿(燒杯、試劑瓶、量筒、容量瓶等)、手術(shù)刀、剪刀、鑷子、酒精燈，以及其他常用消耗品等常用化學(xué)試劑包括組培苗生產(chǎn)所用基本培養(yǎng)基所需的無機(jī)鹽類、有機(jī)物類、植物生長物質(zhì)、消毒6組培苗生產(chǎn)技術(shù)56.1培養(yǎng)用具的洗滌培養(yǎng)瓶一般先用洗衣粉洗刷、再用自來水沖洗干凈。被細(xì)菌污染的培養(yǎng)瓶應(yīng)用含0.2%有效氯消毒液浸泡30min,被霉菌污染的培養(yǎng)瓶，需先整瓶進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，趁熱倒掉培養(yǎng)基，再進(jìn)行清洗。6.2培養(yǎng)基配制把各大類成分先配成母液，然后按需要加入各類物質(zhì)，混合后倒入煮培養(yǎng)基的鍋中，加入少量的蒸餾水，加熱至固化劑(卡拉膠、瓊脂等)完全溶解后，用蒸餾水定容至所需的體積，用1mol/L的HCl完成滅菌工序(按6.3.1濕熱滅菌)。母液+水+固化劑+糖→定容→調(diào)節(jié)pH值→加熱溶解分裝→封口→滅菌→冷卻培養(yǎng)瓶→洗滌→干燥培養(yǎng)基配制流程圖見圖3?！T導(dǎo)培養(yǎng)基。MS+6-BA0.5mg/L～3mg/L+NAA0.05mg/L～1mg/L+抗壞血酸200mg/L+3%蔗糖+0.5%～0.7%瓊脂(或0.45%～0.6%卡拉膠),pH值為5.8±0.2?！^代增殖培養(yǎng)基·姬鳳梨屬：MS+BA0.5·蜻蜓鳳梨屬：1/2MS+IBA0.2mg/L～6.3消毒、滅菌技術(shù)6.3.1濕熱滅菌：一般用于培養(yǎng)基、水、器械、污染容器等的滅菌。6.3.2干熱滅菌：一般用于主要用于玻璃器皿、瓷器、金屬工6.3.3化學(xué)消毒與滅菌：一般用于外植體、超凈臺(tái)表面、接種室、培養(yǎng)室地面、污染材料用具等消毒。6.3.4紫外線消毒：一般用于緩沖室、接種室、凈化工作臺(tái)、培養(yǎng)室等的空間、表面消毒。6.3.5熏蒸消毒：一般用于緩沖室、接種室、培養(yǎng)室等的空間6.3.6灼燒滅菌：一般用于金屬接種工具、培養(yǎng)瓶口等滅菌。6.4.1用于防止微生物進(jìn)入動(dòng)植物組織或其它無菌范圍的操作技術(shù)稱為無菌操作。組織培養(yǎng)中的外植體消毒、接種，繼代增殖培養(yǎng)、生根壯苗培養(yǎng)的轉(zhuǎn)瓶均需按無菌操作技術(shù)進(jìn)行操作。66.4.2操作間消毒：每次操作前把培養(yǎng)基、工具等在接種室擺放整齊，超凈工作臺(tái)臺(tái)面用75%酒精擦拭，然后打開超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，打開紫外燈照射消毒30min。6.4.3準(zhǔn)備：進(jìn)入操作間前，操作人員要洗手、穿白大褂、換鞋、戴帽、戴口罩，接種母瓶用75%酒6.4.4操作：操作人操作前用酒精棉球擦拭雙手，接種工具用酒精燈灼燒或電熱滅菌器滅菌，打開母瓶瓶蓋，用鑷子將需要接轉(zhuǎn)的材料取出后放在已滅菌的墊盤(紙)上，用鑷子和手術(shù)刀(剪刀)將材料進(jìn)行適當(dāng)?shù)那懈睿儆描囎訉⑶懈詈玫牟牧喜逯驳叫碌呐囵B(yǎng)基每次操作完畢后及時(shí)蓋上瓶蓋，接種工具每轉(zhuǎn)接一瓶母瓶均需重新灼燒，同時(shí)更換墊盤(紙)?！僮鲬?yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長，以免退火，冷卻后才能夾取接——操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但動(dòng)作不能太大、太快，以防空氣流動(dòng)，——不得在已滅菌的墊盤(紙)上方(前)打開瓶蓋，帶菌的材料、器皿、手等也不要在已滅菌的墊盤(紙)上方經(jīng)過?！荒苡檬种苯咏佑|已消毒器皿的工作部分及接種材料，工作臺(tái)面上用品要布局合理?！孔娱_口后要盡量保持約45℃斜位。——操作期間不能說話、走動(dòng)和咳嗽等?！臃N完畢，需清理工作臺(tái)，打開紫外燈消毒30min。選擇具有品種典型性狀，生長健壯、形態(tài)正常、花色正常、花序大小正常、無畸變、健康無病蟲6.5.1.2外植體消毒材料取回后，小心剝?nèi)ネ鈱尤~片，盛放于超凈工作臺(tái)上的無菌容器(燒杯、玻璃瓶等)盛放，先用75%酒精清洗10s～30s,無菌水沖洗1～2次，再用0.1%HgCl2浸泡3min～10min,必要時(shí)加入2~3滴吐溫-20(或吐溫-80),浸泡時(shí)要不斷搖動(dòng)容器，無菌水沖洗5次～10次，根據(jù)材料老嫩及污染程溫度26℃±2℃,先暗培養(yǎng)5d～15d,然后光照強(qiáng)度為10001x～15001x,光照時(shí)間10h/d。外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)30d～60d后，可誘導(dǎo)腋芽或莖尖的萌發(fā)與膨大，并在基部產(chǎn)生愈傷組織，繼代時(shí)須將愈6.5.2.1培養(yǎng)條件：溫度26℃±2℃,光照強(qiáng)度，10001x～15001x,光照時(shí)間12h/d。76.5.2.2方法6.5.2.2.1將誘導(dǎo)培養(yǎng)或增殖培養(yǎng)形成的叢生芽，切割為3～5塊不帶愈傷組織的叢芽切塊，轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶5～8塊。6.5.2.2.2繼代增殖培養(yǎng)基的激素含量、比例需根據(jù)鳳梨品種、繼代次數(shù)及生長情況而定，一般初始幾次繼代增殖可用較高的激素濃度，但繼代增殖4次～5次后應(yīng)逐漸降低激素濃度，繼代增殖8次～10次后，如果叢生芽較多、較弱，可轉(zhuǎn)至無激素的培養(yǎng)基復(fù)壯，再轉(zhuǎn)至含激素培養(yǎng)基增殖。6.5.2.2.3增殖培養(yǎng)周期需根據(jù)培養(yǎng)的品種及試管苗生長情況而定，一般培養(yǎng)周期為30d～60d;6.5.2.2.4繼代增殖培養(yǎng)代數(shù)控制在15代以內(nèi)，增殖系數(shù)控制在2.5～5.0。6.5.3.1培養(yǎng)條件：溫度26℃±2℃,光照強(qiáng)度，10001x～20001x,光照時(shí)間14h/d。6.5.3.2方法將增殖的叢生芽切割為單芽，接種到壯苗、生根培養(yǎng)基中，每瓶10苗，培養(yǎng)30d～60d,待長出根系后即可出瓶假植，也可將叢芽切為帶4～6個(gè)芽的芽塊，每瓶4～6塊，壯苗后直接出瓶移植。移栽大棚遮光70%～90%,溫度20℃~28℃,相對(duì)濕度大于80%。組培苗長出新根后，放置在光線充足的環(huán)境下(光強(qiáng)約30001x～50001x)煉苗3d～7d,小心從瓶內(nèi)取出試管苗，用清水清洗干凈附著的培養(yǎng)基，清洗時(shí)盡量減少對(duì)根系和葉片的傷害，之后直接移栽，或用0.1%～0.2%的高錳酸鉀或多菌靈等殺菌劑溶液浸洗，然后用清水清洗后移栽在含泥炭、珍珠巖、砂(10:1:1)等混合基質(zhì)的育苗盤(30cm×50cm)或105孔穴盤中。栽后用噴霧器淋透水。6.6.3篩苗(穴盤苗)栽培管理剛移栽的小苗需遮光90%、保濕，20d后光照可適當(dāng)提高，基質(zhì)水分保持干濕交潛，當(dāng)小苗開始長出新根、新葉后，可噴施鳳梨專用葉面肥，葉面肥N、P、K比例為2:1:1,濃度0.1%,培育2個(gè)月~又稱二次移苗，當(dāng)鳳梨組培苗移栽成活生長至狀況進(jìn)行分級(jí)，按等級(jí)重新移栽至50孔或72孔穴盤內(nèi)，建議采用反滲透過濾水，以及鳳梨專用肥進(jìn)行8——嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的成分、濃度，特別是激素濃度水平；——嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的消毒溫度及時(shí)間；——嚴(yán)格控制污染，及時(shí)清理污染材料、瓶苗；——嚴(yán)格控制繼代增殖代數(shù)及增殖率。6.7.3嚴(yán)格去劣嚴(yán)格去除各階段的變異組培苗(劣變苗),包括矮化、葉片變異(葉片細(xì)長、肥厚、直立、變寬、變色、畸形等)等。6.7.4嚴(yán)格管理制定生產(chǎn)管理制度，操作規(guī)程：——母株、外植體編號(hào)規(guī)則，品種描述、照片；——生產(chǎn)批號(hào)編號(hào)規(guī)則；——生產(chǎn)記錄，品種(母株)、接種時(shí)間、培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)接時(shí)間、代數(shù)；——崗位責(zé)任；——銷售記錄；——環(huán)境衛(wèi)生、洗滌、消毒；——儀器、設(shè)備操作；——接種、無菌操作；——煉苗、移栽。6.7.5