生物酶脫墨劑2011-03-21發(fā)布2011-05-01實施本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由廣東省質(zhì)量技術監(jiān)督局歸口。本標準起草單位：廣東省輕工業(yè)協(xié)會、深圳市綠微康生物工程有限公司、華南理工大學。本標準主要起草人：王劍英、楊大行、詹懷宇、張清輝、劉杰、游茂生、付時雨、陳新泉、王宏。本標準規(guī)定了生物酶脫墨劑的要求、試驗方法、檢下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T23535脂肪酶制劑QB2583纖維素酶制劑定義為1g固體產(chǎn)品(或1mL液體產(chǎn)品),在一定溫度(50℃±2℃)和pH值(8.0±0.1)下，每15min5.1.1固體：有特殊發(fā)酵氣味的顆?；蚍勰罟?固體酶分解油墨活力°,(u/g或u/mL)纖維素酶活力，(u/g或u/mL)一一一按QB/T1803-1993第6章規(guī)定進行。按QB/T1803—1993第7章規(guī)定進行。7.2.1組批：以同一次投料、同一工藝條件生產(chǎn)的同一品種產(chǎn)品為一批。每批產(chǎn)品應由企業(yè)質(zhì)量檢驗37.2.3抽樣：隨機抽取總質(zhì)量不少于300g或300mL的樣品，一式兩份，分別用于檢驗和備樣。7.3.1型式檢驗為第5章所有的項目和標志。有下列情況之一時，應進行型式檢驗：b)工藝、配方或材料有重大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時；7.3.2在出廠檢驗合格的產(chǎn)品中抽取總質(zhì)量不少于1kg或1L的樣品進行。d)生產(chǎn)日期(批號);f)符合GB/T191規(guī)定的包裝儲運圖產(chǎn)品運輸、裝卸時應輕裝輕卸，嚴禁拋擲、碰撞及日曬雨淋。運輸工具應清8.4.1產(chǎn)品應貯存在陰涼、通風干燥的倉庫內(nèi)，且應離地10cm以上，防4(規(guī)范性附錄)生物酶脫墨劑中的生物酶可將甘油酯(油、脂)水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用標準的A.2儀器設備a)乳化容器：體積為500mL。b)均質(zhì)機：轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)/分。A.3試劑A.3.10.04mol/L巴比妥鈉-鹽酸緩沖液(pH8.0)A液：0.04mol/L巴比妥鈉，稱取巴比妥鈉8.25g,用蒸餾水定容至1L;A.3.2橄欖油A.3.34%聚乙烯醇(PVA)溶液稱取聚乙烯醇40g(聚合度1750+50),加1L、0.05mol/L、pH8.0巴比妥鈉-鹽酸緩沖液，水浴煮沸至完全溶解，冷卻，必要時過濾，溶解過程中蒸發(fā)的水分要用蒸餾水補充，定容1000mL。A.3.50.01mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液稱取0.40gA.R的氫氧化鈉(NaOH)溶液，溶于新制備的冷卻蒸餾水中并定容至1L,置冰箱。取分析純鄰苯二甲酸氫鉀(A.R)少量于稱量瓶中，105℃烘干至恒重(約2h),然后稱取4份，每份各0.600g,分別放入4個100mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻線，溶解后，分別取10mL至4個250mL的三角瓶中，各取加入40mL蒸餾水，搖允后，加三滴1%酚酞，用待標定的氫氧化鈉(NaOH)溶液滴定至微紅，即為50.2042——與1.00mL氫氧化鈉標準溶液[C(NaOH)=1.000mol/L]相當?shù)囊钥吮硎镜泥彵蕉姿釟溻浫?%PVA(A.4.3)溶液100mL,加入橄欖油50mL,在5℃~10℃冰箱放置(1～2)h,然后用均質(zhì)機(外包冰塊)乳化，一次乳化3min,每次乳化間隔時間為5min,共4次12min,立即可用，如不馬上使用，要立即放入冰箱(乳化液在冰箱保存，僅限當天使用!!,每次使用前必須乳化3min。A.4.2樣品溶液的制備固體：稱取固狀樣品1g,精密稱定，用50mLpH為8.0的巴比妥鈉-鹽酸緩沖浸提，搖10min,定容至100mL,再浸提30min,每隔10min搖一次，靜置取上清液(此樣品稀釋倍數(shù)為100倍)。液體：精密吸取1mL,用pH8.0巴比妥鈉-鹽酸緩定容至100mL。取此樣品測定，滴定消耗氫氧化鈉量在4.5mL～5.5mL范圍內(nèi)，若超出，則再進行稀釋，直到樣品滴定消耗堿量4.5mL～6.5mL范圍內(nèi)。A.4.3測定(NaOH滴定法)5.0mL橄欖油乳化液，1.0mL酶液。以上除酶液以外的組成液置于50(±0.5)水浴鍋預熱5min,然后精確加入1mL酶液，精確計時，緩慢振蕩(80次/分鐘),保溫15min,立即加入95%酒精20mL,取出，先測試空白溶液的pH值，用0.01mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液滴定樣品至空白溶液的pH一樣。反應后的樣品應在30min內(nèi)完成滴定。A.4.4計算 v——滴定樣品時消耗標準NaOH溶液的體積，單位為毫升(mL);同時做三份平行，結(jié)果取平均值，所得結(jié)果表示至整數(shù)。平行試驗相對誤差不得6(規(guī)范性附錄)纖維素酶在一定溫度和PH條件下，將纖維素底物(羧甲基纖維素鈉)水解，釋放出還原糖。在堿性、煮沸條件下，3,5-二硝基水楊酸(DNS試劑)與還原糖發(fā)生顯色反應，其顏色的深淺與還原糖(以葡萄糖計)含量成正比。通過540nm測其吸光度，可得到產(chǎn)生還原糖的量，計算出纖維素酶的CMCA-DNSB.2試劑和溶液試驗用水為符合GB/T6682—2008要求的三化學純在25℃,2%水溶液，粘度800mPa.s~1200mPa.s(每批羧甲基纖維素鈉使用前用標準醇加分別取一定量磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，用去離子水溶解成0.1稱取2Gcmc-Na,精確至1mg,緩緩加入緩沖液約200mL并加熱至80℃~90℃,邊加熱邊磁力攪拌，到(8.00±0.05),最后定容到300mL,攪拌均勻，貯存于冰箱中備用。稱取3,5-二硝基水楊酸(10.0±0.1)g,置于約600mL水中，逐漸加入氫氧化中(磁力)攪拌溶解后，再次加入酒石酸鉀鈉200g、苯酚(重蒸)2g和無水亞硫酸鈉5g,待全部溶解并澄清后，冷卻至室溫，用水定容至1000mL,過濾。貯存于棕色試劑瓶中，于暗處放置稱取于(103±2)℃下烘干至恒重的無水葡萄糖1g,精確至0.1mg,用水定容至100mL。分別吸取葡萄糖標準貯備溶液0.00、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL于10mL容量瓶中，7按表B.1規(guī)定的量，分別吸取葡萄糖標準使用溶液(B.2.5)、緩沖液(B.2.2)和DNS試劑(B.2.4)于各管中(每管號平行做3個樣),混勻。將標準管同時置于沸水浴中，反應10min,取出，迅速冷卻至室溫，用水定容至2mL,塞蓋，混勻。繪制標準曲線，獲得線性回歸方程，線性回歸系數(shù)應在0.9990以上時方可使用(否則須重做)。吸取量mL0123456稱取固定酶樣1g,精確至0.1mg(或吸取液體酶樣1.0mL,精確至0.01mL),用水溶解準確稀釋定容(使試樣液與空白液吸光度之差恰好落在0.33～0.35范圍內(nèi)),混勻放置10min,待測?！∷闹?5mL刻度具塞試管(一支空白管，三支樣品管)?！獙⑺闹г嚬芡瑫r置于(50±0.1)℃水浴中，準確計時，反應30min,取出?！杆?、準確地向各管中加入DNS試劑3.0m——以空白管(對照液)調(diào)儀器零點，在分光光度計波長540nm下，用10mm比色杯，分別測量三支樣品管中樣液的吸光度，取平均值。通過查標準曲線或用線性