備案號：30703—2011桑蠶原原種及檢驗(yàn)規(guī)程2010-12-20發(fā)布2011-03-01實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》規(guī)定進(jìn)行編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省蠶業(yè)技術(shù)推廣中心提出。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣東省蠶業(yè)技術(shù)推廣中心、廣東省絲綢紡織集團(tuán)有限公司、廣東天勤蠶業(yè)有限責(zé)任公司、茂名市蠶業(yè)技術(shù)推廣中心、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院蠶絲科學(xué)系、廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：余愛群、胡智明、林忠芬、李惠華、黃星光、邱國祥、張桂玲、鐘蘇苑、劉吉平、陳列輝、張化成、宋怡、陳欽藏。本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了桑蠶原原種質(zhì)量指標(biāo)和檢驗(yàn)技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于廣東省的桑蠶原原種。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T19178桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程GB19179桑蠶原種NY/T327桑蠶一代雜交種檢驗(yàn)規(guī)程DB44/T253桑蠶一代雜交種3術(shù)語和定義GB/T19178桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程、GB19179桑蠶原種、NY/T327桑蠶一代雜交種檢驗(yàn)規(guī)程與DB44/T253桑蠶一代雜交種確立的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。為了便于使用，以下列出了部分術(shù)語和供生產(chǎn)原原種和品種繼代用的蠶種，叫原原母種，以一只雌蛾所產(chǎn)的蠶卵為單位，將孵化的蟻蠶作為一個飼育區(qū)進(jìn)行飼養(yǎng)，稱為蛾區(qū)育，又叫單蛾育。4質(zhì)量要求4.1計量單位以張為單位，同一蠶連紙上框制14個蛾圈為1張。4.2質(zhì)量指標(biāo)外觀要求見表1。2卵質(zhì)要求見表1。每張原原種應(yīng)含有品種名稱、批號、制種日期、出庫/浸酸日期、生產(chǎn)單位、聯(lián)系地址、電話、生批母蛾微粒子病蛾率<0.20%,單張原原種母蛾無微粒子病。標(biāo)簽卵質(zhì)%產(chǎn)附良卵量，粒良卵%%<無齊好固有色≥≥注：產(chǎn)附好是指產(chǎn)附平整、無重疊、附著力強(qiáng)。微粒子病卵率0.00。見附錄A(規(guī)范性附錄)。5.1.2.2卵色5.1.2.3折凈率5.1.3卵質(zhì)5.1.3.1良卵量5.1.3.3實(shí)用孵化率5.1.3.4純度35.2檢驗(yàn)規(guī)則以批為檢驗(yàn)單位。外觀、卵質(zhì)、微粒子病卵率實(shí)行抽樣檢驗(yàn)，微粒子病蛾率實(shí)行集團(tuán)磨蛾全檢。5.3抽樣方法5.3.1抽樣時間在蠶種解除滯育整理后進(jìn)行抽樣。5.3.2抽樣方法與數(shù)量隨機(jī)抽取20張作為外觀與單蛾良卵量檢驗(yàn)用。檢驗(yàn)完后再隨機(jī)抽取10張在相同位置(1～14蛾圈號隨機(jī)確定1個號)抽取1個蛾圈，共10個蛾圈作為檢驗(yàn)用樣本，其中6個蛾圈用于檢驗(yàn)單張良卵量、良卵率和實(shí)用孵化率，4個蛾圈用于檢驗(yàn)純度。將上述抽樣余下的10張樣本逐張逐蛾圈挑取死卵、不受精卵、內(nèi)圈卵等蠶卵10?！?0粒，每張原原種挑取的蠶卵混合為1個樣本共10個樣本用于檢驗(yàn)微粒子病卵率。5.3.3樣品保存抽樣后置5℃或15℃、相對濕度75%～80%的專用場所保存。5.4檢驗(yàn)流程檢驗(yàn)流程見圖1。檢驗(yàn)流程見圖1。隨機(jī)抽取20張樣本蠶種從20張中抽取10張卵質(zhì)檢驗(yàn)每張抽取1個蛾圈共10個樣本每張?zhí)羧?包樣卵共10個樣本從10蛾圈中取6個樣本取4個蛾圈的1/4拼接成4個新峨圈圖1抽樣檢驗(yàn)流程圖45.5標(biāo)簽每批抽取20張蠶種樣本檢驗(yàn)有無標(biāo)簽及是否符合要求。5.6.1產(chǎn)附逐張觀察樣本是否符合品種固有特性，產(chǎn)附平整、無重疊、附著力強(qiáng)判為好。5.6.2卵色逐張點(diǎn)數(shù)蛾圈貼補(bǔ)數(shù)，按式(1)計算折凈率。5.7卵質(zhì)檢驗(yàn)從20張樣本中選取最少卵量的3個蛾圈點(diǎn)5.7.1.2單張良卵量隨機(jī)抽取6個樣本蛾圈進(jìn)行逐圈點(diǎn)數(shù)良卵粒數(shù)，按式(2)計算單張良卵量。取調(diào)查單張良卵量后的6個樣本蛾圈進(jìn)行逐圈點(diǎn)數(shù)總卵粒數(shù)，良卵粒數(shù)取5.7.1.2中的L,按式(3)計算良卵率。5每日上午調(diào)查各蛾圈的孵化數(shù)量，取其中連續(xù)2日最大孵化數(shù)量作為實(shí)用孵化數(shù)，按式(4)計算實(shí)用孵將4個樣本蛾圈逐圈分成4份，每蛾圈取1/4拼成4個新的蛾圈，用肉眼觀察拼接蛾是否符合品種固有特性，純度是否達(dá)到100%。必要時取上述1個新拼接蛾圈進(jìn)行簡易催青，收蟻、飼養(yǎng)調(diào)查純度。飼養(yǎng)過程不淘汰弱小蠶，根據(jù)幼蟲或繭的形態(tài)性狀判斷符合品種固有特性個體。按式(5)對10個樣本卵進(jìn)行簡易催青或高溫多濕條件催青，待樣本卵孵化后第3天進(jìn)行檢驗(yàn)。其方法是將每個樣本卵蟻、卵殼及死卵置于乳缽1個乳孔中，加入4滴～6滴1%～2%的氫氧化鉀溶液充分磨碎、攪勻，制取鏡檢標(biāo)本2套共4點(diǎn)，由2人用600倍～800倍顯微鏡進(jìn)行對檢，每點(diǎn)觀察5個視野以上，如微粒子病蛾率實(shí)行集團(tuán)磨蛾全檢，詳見附錄B(規(guī)范性附錄)。6良卵率、實(shí)用孵化率、純度、微粒子病蛾率、微粒子病卵率有一項(xiàng)不符合表1規(guī)定要求。應(yīng)淘汰整當(dāng)0<微粒子病蛾率<0.20%時，應(yīng)淘汰檢出微粒子孢子集團(tuán)對應(yīng)的蠶種。應(yīng)淘汰卵色、產(chǎn)附不符合品種特性對應(yīng)的蛾圈7(規(guī)范性附錄)生產(chǎn)單位應(yīng)具備專用的桑園、蠶室、制種室、可控溫A.2.2生產(chǎn)技術(shù)要求選擇綜合條件好的蛾圈收蟻，收蟻區(qū)數(shù)與計劃飼養(yǎng)區(qū)數(shù)比例為1.15:1,區(qū)選除率≥5%,個體選除發(fā)生微粒子病、混雜、發(fā)育嚴(yán)重不齊、蠶病暴發(fā)及嚴(yán)重藥物中毒，五齡期生命率春期<90%,或秋期<85%的飼養(yǎng)區(qū)應(yīng)整區(qū)淘汰。體型、體色、斑紋、眠性不符合品種特性的，應(yīng)作整區(qū)或個體淘汰。對貫徹區(qū)選重于個選的原則。把整齊度好，繭形、繭色、縮皺等符<20%,五齡蟲蛹統(tǒng)一生命率春≥85%、秋≥80%,死籠繭率春≤4%、秋≤7%,繭層量、繭層率符合規(guī)定要求，全繭量在批平均值上下浮動0.20g的飼育區(qū)為合格留種區(qū)。區(qū)選除率≥10%,但不合格區(qū)選除率≥40%時，應(yīng)淘汰該批種繭。在留種區(qū)內(nèi)選除質(zhì)量性狀不符合品種特性個體，繭質(zhì)指標(biāo)按去兩頭，留中間原全繭量控制在批平均值上下開差±0.15g,繭層量控制在批平均值上下開差±0.08g。個體區(qū)內(nèi)淘汰不合格個體≥40%時，應(yīng)淘汰該區(qū)種繭。8制種實(shí)行異蛾區(qū)交配，繁制全過程嚴(yán)格防止混雜。將選留飼養(yǎng)區(qū)分成3～5個小組，同小組合并后，同品種異小組間交配。產(chǎn)卵于14蛾圈框制蠶連紙上。A.2.4蠶種人工孵化蠶種冷藏保護(hù)方式宜選用固有色冷藏浸酸法和即時浸酸法，蠶種進(jìn)出庫時應(yīng)進(jìn)行解剖胚子，并做好相關(guān)資料記錄。固有色冷藏浸酸法冷藏天數(shù)根據(jù)入庫前蠶種保護(hù)有效積溫而定，冷藏時間≤120天，浸酸后再入冷庫抑制蠶種應(yīng)選擇安全胚胎發(fā)育階段進(jìn)行，冷藏時間≤10天；即時浸酸法在滯育卵胚胎發(fā)育到胚帶形成期進(jìn)行，浸酸前可用5℃冷藏抑制蠶種≤2天，浸酸后再入冷庫抑制蠶種同冷藏浸酸法。A.2.5微粒子病預(yù)知檢查繁育過程中預(yù)知檢查發(fā)現(xiàn)有微粒子病的飼養(yǎng)區(qū)作整區(qū)淘汰，微粒子病發(fā)病區(qū)≥5%整批不能制種。A.3資料歸檔繁育過程中要詳細(xì)、及時、系統(tǒng)地記錄各階段調(diào)查數(shù)據(jù)并整理歸檔。9(規(guī)范性附錄)B.1裝盒以批為單位1張蠶種為1集團(tuán)1編號，每1集團(tuán)14烘蛾溫度60℃~70℃。送檢前應(yīng)填寫母蛾送檢單1式2份，1份隨樣品送檢驗(yàn)部門，1份存查。冷藏浸酸種B.3.2樣品驗(yàn)收檢驗(yàn)部門接收樣品時應(yīng)檢查樣品送檢單內(nèi)容與樣品是否一致，樣品是否適合檢驗(yàn)。如有異常情況，做好記錄。將驗(yàn)收后的母蛾樣本集中存放，防止發(fā)霉腐爛及蟻、蟲、鼠害和受潮、損壞或丟失。B.4檢驗(yàn)程序取樣編號→拆盒投蛾→注液磨碎→靜置過濾→離心沉淀→點(diǎn)板制片→顯微鏡檢做好標(biāo)記。如發(fā)現(xiàn)有散落或混亂的蛾盒和空盒與裝蛾不規(guī)范的蛾盒，記錄其編號，該集團(tuán)檢驗(yàn)終止。用加入0.2%～0.4%的氫氧化鈉溶液約70mL于盛有母蛾的磨蛾管中，將磨先加水使每管濾液的液位相近，然后將離心管按順序放入離心機(jī)內(nèi)，以2000r/min～4000r/min,將離心管內(nèi)沉淀物攪勻，蘸沉淀物分別點(diǎn)于兩塊載玻片上，每一載玻片點(diǎn)2點(diǎn)，加蓋玻片后送鏡檢員用600倍～800倍的顯微鏡進(jìn)行鏡檢。