大珠母貝人工繁殖技術(shù)規(guī)范2010-03-22發(fā)布2010-07-01實施DB44/T740—2010本標準由廣東省海洋與漁業(yè)局提出。本標準由中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所質(zhì)量與標準化技術(shù)研究中心歸口。本標準起草單位：廣東海洋大學，廣東紹河珍珠有限公司，廣東岸華集團有限公司。本標準主要起草人：黃海立、鄧陳茂、符韶、謝紹河、梁飛龍、童銀洪、劉永、謝永新、謝仁政。1DB44/T740—2010大珠母貝人工繁殖技術(shù)規(guī)范本標準規(guī)定了大珠母貝[Pinctadamax?ma(Jameson)]人工繁殖的環(huán)境條件、育苗設(shè)施、親貝的選擇、培育、催產(chǎn)、人工授精、孵化、胚體選優(yōu)和幼蟲培育技術(shù)。本標準適用于大珠母貝的人工繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標準NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)NY/T394綠色食品肥料使用準則DB44/T326-2006馬氏珠母貝養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范親貝培育技術(shù)DB44/T327-2006馬氏珠母貝養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范人工繁殖技術(shù)DB44/T329-2006馬氏珠母貝養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范母貝養(yǎng)成技術(shù)3定義和術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本標準。在胚胎發(fā)育的沉降期內(nèi)，去掉上層海水以降低劣質(zhì)胚體比例和水體中多余的精子、親貝的排泄物等雜質(zhì)，達到凈化水質(zhì)，保留優(yōu)質(zhì)胚體的過程。在胚胎發(fā)育的轉(zhuǎn)動期或早期浮游期內(nèi)，收集和利用上浮的優(yōu)質(zhì)胚體，淘汰中下層劣質(zhì)胚體，以降低劣質(zhì)胚體比例的過程。4育苗場和海區(qū)環(huán)境條件4.1育苗場環(huán)境條件按DB44/T327-2006第4章的規(guī)定進行。4.2海區(qū)環(huán)境條件及水質(zhì)按DB44/T329-2006第4章的規(guī)定進行。5育苗設(shè)施按照DB44/T327-2006第5章的規(guī)定進行。6親貝的選擇和培育2DB44/T740—20106.1親貝的選擇6.1.1親貝的來源來自水質(zhì)條件符合GB11607規(guī)定的原產(chǎn)地天然海區(qū)，自然繁殖并生長達到親貝規(guī)格的性成熟且經(jīng)檢驗合格的大珠母貝親體，或在持有生產(chǎn)許可證，且水質(zhì)符合NY5052的規(guī)定的珍珠貝良種場，由人工繁殖的大珠母貝苗培育達到親貝規(guī)格的性成熟的親體。6.1.2親貝的質(zhì)量要求選擇年齡規(guī)格為：2齡～5齡，殼高20cm以上、體重1000g以上；殼外觀：貝殼完整，邊緣生長線明顯，體色呈黃褐色，外緣鱗片粗壯、生長旺盛；殼內(nèi)觀：珍珠質(zhì)呈銀白色光澤，晶瑩透亮，光潔度好且靠外緣部分的珍珠質(zhì)呈銀白色或金黃色帶，無病蟲害鑿穿所遺留的黑斑或瘢痕；軟體部：豐滿，肌肉富有彈性，覆蓋于內(nèi)臟團表面的白色營養(yǎng)層較厚且韌性好，在繁殖季節(jié)，性腺豐滿的健康母貝。6.2親貝海區(qū)培育6.2.1隔離防疫優(yōu)選的備用親貝隔離吊養(yǎng)，避免受其它貝的病害感染與傳播，盡可能實現(xiàn)無病害培育。6.2.2強化催熟培育備用親貝培育的日常管理按照DB44/T329-2006的6.4的規(guī)定進行，但吊養(yǎng)密度為1只/籠、籠距大于1m、行距大于3m,吊養(yǎng)水層4m～6m。清洗、換籠、除害的間隔時間減半，每7d～10d檢查性腺發(fā)育情況。6.3親貝水泥池強化培育在季節(jié)、氣候、海況條件不良、親貝性腺不易成熟的情況下，采取室內(nèi)水泥池強化培育。6.3.1親貝培育池一般為長方形水泥池，底面積為20m2~30m2,蓄水深度為1.5m,有調(diào)節(jié)光照強度和防雨設(shè)施。6.3.2培育用水水質(zhì)應(yīng)符合NY5052的規(guī)定，經(jīng)砂濾，培育過程的相關(guān)水因子控制范圍為：水溫25℃~30℃,鹽度為28～35,pH值為7.8～8.3。6.3.3餌料生物培養(yǎng)用人工接種施肥的方法培育單胞藻類。培育用水可用有效氯濃度為8×10?~15×10?黑暗處理10h后，用硫代硫酸鈉中和，再施用單胞藻類專用肥料進行接種培育。使用肥料應(yīng)符合NY/T394的規(guī)定。6.3.4強化催熟管理6.3.4.1控制培育密度及增氧培育密度應(yīng)控制在2個/m3~3個/m3,同時必須進行充氣增氧，以保證培育水體溶解氧5mg/L以上。6.3.4.2水質(zhì)管理每天早上吸污，日換水1/3～1/2或進行微流水培育。出現(xiàn)親貝死亡時，要進行清底和更換新水。餌料以單胞藻類為主，兼投活酵母，雞蛋黃及螺旋藻粉。但活酵母、雞蛋黃和螺旋藻粉須用孔徑為64μm的篩絹過濾后再投喂。單胞藻的次投喂量以培育池可見明顯藻色(3×10?cells/ml～5×10?cells/ml)為宜，具體視親貝的攝食及排便情況而定，一天多次投喂。活酵母、雞蛋黃和螺旋藻粉次投喂量最好控制在1mg/L以內(nèi)。6.3.4.4水因子監(jiān)測與調(diào)控每天測試水溫一次至二次，若水溫低于25℃時加熱升溫，最好將水溫逐漸升高至29℃。氣候、海況變化時，應(yīng)測試鹽度和pH值，若超出最適合值時，應(yīng)采取相應(yīng)措施維持水質(zhì)穩(wěn)定。6.3.4.5檢查觀察應(yīng)每天檢查有無死貝并及時清除死貝，3d～5d抽樣檢查觀察親貝的體質(zhì)狀況和性腺的發(fā)育情況。37催產(chǎn)和人工授精7.1誘導催產(chǎn)7.1.1溫度刺激法參照DB44/T327-2006的7.1.1進行刺激處理后，雌、雄比例按4:1～6:1進入產(chǎn)卵池或孵化池常溫海水中待排放精卵和受精。7.1.2溫度結(jié)合化學藥品刺激法參照DB44/T327-2006的7.1.2進行刺激處理后，雌、雄比例按4:1～6:1進入產(chǎn)卵池或孵化池常溫海水中待排放精卵和受精。7.1.3陰干結(jié)合藻液、溫度刺激法先把親貝陰干1h～2h,再置于陽光下暴曬20min,后置于10×10?cell～20×10?cell的藻液中濾食20min～30min,雌、雄比例按4:1～6:1進入產(chǎn)卵池或孵化池常溫海水中待排放精卵和受精。7.2人工授精將親貝去掉右殼、外套膜、鰓等部分使生殖腺裸露，用消毒脫脂棉擦去體液和海水。7.2.1精、卵成熟度的檢查解剖后用吸管插進生殖腺將精卵吸出，卵子能在水中快速分散，精液呈乳態(tài)云霧狀。在顯微鏡下，卵子大部分呈圓形，大小均勻，卵核圓而透亮，細胞質(zhì)濃，卵黃顆粒多，細胞核和細胞質(zhì)界限明顯；精子經(jīng)氨水含量6×10??~8×10?的海水激活后，其活動力很強。7.2.2吸取精、卵在容器中裝好過濾海水，用吸管分別吸取雌、雄親貝的卵子、精子于容器中。7.2.3雌雄比例雌、雄個體比例為4:1～6:1。7.2.4精卵混合在受精缸或水族箱中配置氨水含量為6×10??~8×10?的海水。精、卵用篩絹過濾，先倒入卵子，過5min～10min后倒入精液，充分攪拌后，進入孵化池常溫海水中孵化。7.2.5受精環(huán)境水溫為26℃~30℃,鹽度28～32。受精率應(yīng)在80%以上。8孵化與胚體選優(yōu)在胚胎發(fā)育的沉降期時間內(nèi)，每隔30min～50min進行一次，共洗卵二次至三次。8.2胚體選優(yōu)胚胎發(fā)育5h后進入轉(zhuǎn)動期后期，收集上浮的優(yōu)質(zhì)胚體進行暫養(yǎng)。8.3胚體暫養(yǎng)在孵化池暫養(yǎng)，密度為50個/ml～100個/ml,暫養(yǎng)12h后，胚體發(fā)育至面盤幼蟲。9.1分苗下池幼蟲發(fā)育至直線鉸合幼蟲期初期后分苗下池，密度為0.8個/ml～2個/ml。9.2添水和換水4DB44/T740—2010按照DB44/T327-2006的9.2規(guī)定進行。9.3.1餌料種類9.3.1.1面盤幼蟲期：光合細菌、干酵母、湛江等鞭金藻、球等鞭金藻、綠色巴夫藻、亞心形扁藻等。9.3.1.2殼頂幼蟲期、眼點幼蟲期：面盤幼蟲期餌料種類增加角毛藻。9.3.1.3附著幼苗：殼頂幼蟲期餌料種類增加天然單胞藻。9.3.2投餌量早期幼蟲階段，單胞藻供應(yīng)不足，可以每天投放0.3g/m3的干酵母；光合細菌菌液曝氣后作為添加餌料投喂。球等鞭金藻、綠色巴夫藻和角毛藻投餌量可參考湛江等鞭金藻，天然單胞藻投餌量可參考亞心形扁藻。大珠母貝幼蟲不同發(fā)育階段的餌料量見表1。表1大珠母貝幼蟲不同發(fā)育階段的餌料量參考表發(fā)育階段日投餌量，cells/mL亞心形扁藻湛江等鞭金藻面盤幼蟲期300～500200～500殼頂初期500～1000600～1000殼頂中期1000～1500600～1000殼頂后期1500～2000600～1000附著和幼苗2000～30001000～3000幼苗至收苗3000～5000-9.4充氣用空氣壓縮機或魚泵連續(xù)或間斷充氣，投餌后必須充氣，溶解氧保持4.30mg/L以上。9.5采苗9.5.1附苗器種類9.5.1.1塑料薄板黑色或紅色，規(guī)格為18cm×20cm、18cm×22cm、20cm×20cm,穿連成串，每串10片～13片，片與片之間間隔10cm～15cm。9.5.1.2膠絲網(wǎng)布采用膠絲網(wǎng)布裁剪成110cm×25cm,一端中間綁吊繩，另一端兩角綁墜子。采用遮光率95%的太陽遮光網(wǎng)裁剪成110cm×3cm,擰成繩子，一端綁墜子。9.5.2附苗器消