DB42Determinationofenzymeactivityofzearalenone-degrad湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 2 2 2 2 2 3 4 5 6本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件起草單位：湖北大學(xué)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物玉米赤霉烯酮降解酶活力的測(cè)定尚沒(méi)有相關(guān)國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，本文件的實(shí)施解決了玉米赤霉烯酮素脫毒技術(shù)的發(fā)展，對(duì)推動(dòng)玉米赤霉烯酮降解酶本文件通過(guò)紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器兩種方法來(lái)檢測(cè)玉米赤霉烯酮降解酶的酶活力，兩種方法的都具備，更具有普遍性，更容易被廣大企事業(yè)單位接1玉米赤霉烯酮降解酶活力的測(cè)定本文件規(guī)定了玉米赤霉烯酮降解酶（zearalenone-degradingenzyme，英文縮寫(xiě)：ZHD本文件適用于玉米赤霉烯酮降解酶產(chǎn)品，最低檢出量為0.2U/g(U/mL)。3.1玉米赤霉烯酮降解酶活力單位/ZHD活力單位（U）在37℃、pH值為5.5的條件下，每分鐘從濃度為10μg/mL的玉米赤霉烯酮溶液中降解1μg玉米赤霉烯酮所需的酶量為一個(gè)玉米赤霉烯酮降解酶活力單位通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)反應(yīng)前和反應(yīng)后殘留的ZEN含量，可以計(jì)算得出玉米赤霉烯酮降解酶ZHD活力單5.2甲醇（CH3OH色譜純。5.3乙腈（CH3CN色譜純。）：2）：）：大約18mL0.2mol/L檸檬酸溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，用pH計(jì)測(cè)定使緩沖液pH為5.5。本文件通過(guò)測(cè)定ZEN的殘留量來(lái)計(jì)算ZHD活力單位，ZEN的殘留量測(cè)定分為高效液相色譜紫外檢測(cè)法7.2試樣酶液的制備固態(tài)試樣應(yīng)粉碎或充分碾碎，過(guò)0.25mm孔徑篩。稱(chēng)取適量試樣兩份，精確至0.1mg，分別置于2004000r/min離心5min，取上清液再用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶移取適量樣品，用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液（見(jiàn)5.11）進(jìn)行稀釋、定容，稀釋后的待測(cè)酶液中7.3高效液相色譜紫外檢測(cè)法）；3取5支1.5mL的塑料小管，用色譜純甲醇將ZEN標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋得到濃度為2μg/mL、4μg/mL、6），）；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)274nm，發(fā)射波長(zhǎng)440nm；4），試樣中ZHD活力單位以XD表示，單位為酶活），XD=······················XD——試樣稀釋液中ZHD活力單位，單位為酶活力單位每毫升（U/mL1——最后反應(yīng)體系體積1mL；）；5試樣ZHD活力單位以X表示，單位為酶活力單位每克（U/g）或者酶活力單位每毫升（U/mL按式X=XD×n·········································X——試樣中ZHD活力單位，單位為酶活力單位每毫