DB42副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的敏感性檢測(cè)2021-05-12發(fā)布湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 2 2 3 3 4本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問，可咨詢湖北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳，聯(lián)系電話郵箱hbsnab@126.com；本文件的有關(guān)修改意見建議請(qǐng)反饋至華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技-動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，聯(lián)系電8115，郵箱：haohaihong@mail.hzau.ed1副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的敏感性檢測(cè)本文件規(guī)定了副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的體外敏感性檢本文件適用于檢測(cè)和判斷獸醫(yī)臨床分離的副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的敏感性，合理應(yīng)用替米考星GB/T34750副豬嗜血桿菌檢測(cè)4儀器和設(shè)備冰箱：2℃~4℃和-20℃。1%輔酶I(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD):準(zhǔn)確稱取0.01gNAD，用滅菌去離子水溶解并定容至25.9胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取胰蛋白胨大豆肉湯6g,加188mL去離子水，搖勻，121℃高壓滅菌15min,冷至45℃左右時(shí)加入10mL無(wú)支原體胎牛血清和2mL1%NAD,配制成200mL副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的敏感性試驗(yàn)方法：瓊脂稀釋法(參見本文件7.2)和微量肉湯稀釋法(參見本文件7.3)。操作時(shí)任選其一即可。和2mL替米考星倍比稀釋液(參見本文件7.2.2),渦旋混勻，傾入培養(yǎng)皿，制備成替米考星TSA平板，晾干后置于-4℃?zhèn)溆?。在生物安全柜中，吸?mL菌懸液(濃度為1×10?CFU/mL)至細(xì)菌多位點(diǎn)接種儀中；將接種儀的點(diǎn)養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～32h。3D-F三排加另一株菌的菌懸液。G排每孔加200μLTSB肉湯，作為陰性對(duì)照；H排每孔加100μL菌液和確定無(wú)菌無(wú)藥孔中無(wú)菌生長(zhǎng)，無(wú)藥含菌對(duì)照孔中菌株生長(zhǎng)。以孔內(nèi)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。當(dāng)出現(xiàn)單一跳孔時(shí)，需記錄抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物濃度；當(dāng)出現(xiàn)考星的最小抑菌濃度（MIC）的質(zhì)控范圍為8μg/mL～32μg/mL。每次藥敏試驗(yàn)需保證質(zhì)控藥對(duì)質(zhì)控菌的9結(jié)果判定副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的敏感性和耐藥性折點(diǎn)宜為1μg/mL和16μg/mL。當(dāng)體外敏感性實(shí)驗(yàn)測(cè)定的替米考星對(duì)臨床副豬嗜血桿4(資料性)微量肉湯稀釋法96微孔板加樣操作示意圖圖A.1給出了微量肉湯稀釋法中，在96微孔板中倍比稀釋替米考星和添加菌懸液的操作方法。123456789Ab藥物100μ.c)菌液①100