第七章寄生蟲(chóng)病診斷第一節(jié)病原學(xué)診斷方法一、糞便蟲(chóng)卵檢查法1.直接涂片法

directsmearmethod2.漂浮集卵法

flotationmethod3.沉淀集卵法

sedimentationmethod4.麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法

MacMastermethod5.毛蚴孵化法是診斷日本血吸蟲(chóng)及東畢吸蟲(chóng)的方法之一。6.糞便培養(yǎng)與幼蟲(chóng)分離法圓線蟲(chóng)目所屬線蟲(chóng)種類很多，其蟲(chóng)卵在形態(tài)上非常相似，很難區(qū)別。有時(shí)為了區(qū)別這些線蟲(chóng)的種類，常將含有蟲(chóng)卵的糞便加以培養(yǎng)，待其中蟲(chóng)卵發(fā)育成為幼蟲(chóng)時(shí)再檢查，根據(jù)幼蟲(chóng)形態(tài)上的差異，加以鑒別。最常用的方法是在培養(yǎng)皿底部加草紙或?yàn)V紙1張，而后將欲培養(yǎng)的糞便加水調(diào)成硬糊狀，塑成半球形，放于皿內(nèi)的紙上，并使半球形糞球的頂部略高出平皿邊沿，使加蓋時(shí)與皿蓋相接觸。將此皿置25℃溫箱中，注意保持皿內(nèi)濕度（應(yīng)使底部的墊紙保持潮濕狀態(tài)）。經(jīng)7天后，多數(shù)蟲(chóng)卵即可發(fā)育成第三期幼蟲(chóng)，并集中于皿蓋上的水滴中。將幼蟲(chóng)吸出置載玻片上，放顯微鏡下檢查。有些寄生蟲(chóng)（如網(wǎng)尾科線蟲(chóng)），其蟲(chóng)卵在新排出的糞便中已孵化為幼蟲(chóng)；類圓屬線蟲(chóng)蟲(chóng)卵隨糞便排出后，在外界溫度較高時(shí)，經(jīng)5-12

h即孵出幼蟲(chóng)。為了提高檢出率，常將幼蟲(chóng)從糞便中分離出來(lái)進(jìn)行檢查。常用的方法為漏斗幼蟲(chóng)分離法亦稱貝爾曼法(Baermann'stechnique)7.測(cè)微技術(shù)各種蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)，大小通常較為恒定。蟲(chóng)卵或幼蟲(chóng)的大小可作為確定某一蟲(chóng)卵或幼蟲(chóng)的依據(jù)。蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)的測(cè)量需用測(cè)微器。長(zhǎng)1mm的直線等分為100小格,每小格等于10μm10倍物鏡，標(biāo)定后每小格是多少？1μm二、體表蟲(chóng)體檢查法寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲(chóng)主要有蜱、螨、虱等。對(duì)于它們的檢查，可采用肉眼觀察和顯微鏡觀察相結(jié)合的方法。蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體較大，通過(guò)肉眼觀察即可發(fā)現(xiàn)。螨和虱有些個(gè)體較小，常需刮取皮屑，于顯微鏡下尋找蟲(chóng)體或卵。三、生殖道蟲(chóng)體檢查寄生于生殖道的蟲(chóng)體主要有牛胎兒三毛滴蟲(chóng)和馬媾疫錐蟲(chóng)牛胎兒毛滴蟲(chóng)存在于病母牛的陰道或子宮的分泌物，流產(chǎn)胎兒的羊水、羊膜或其第四胃內(nèi)容物中，也存在于公牛的包皮鞘內(nèi)，應(yīng)采集以上各處的病料尋找蟲(chóng)體。由于蟲(chóng)體的檢定常以見(jiàn)到運(yùn)動(dòng)活潑的蟲(chóng)體為準(zhǔn)，故在采集病料時(shí)必須盡可能地避免污染，以免其它鞭毛蟲(chóng)混入病料造成誤診。采集用的器皿和沖洗液等應(yīng)加熱使接近體溫，否則蟲(chóng)體驟然遇冷會(huì)失去活動(dòng)力或死亡。沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖洗液中不含金屬離子，減少金屬離子對(duì)蟲(chóng)體的影響。病料采集后應(yīng)盡快地進(jìn)行檢查。由母畜采集病料，是取陰道分泌的透明粘液，以直接自陰道內(nèi)采取為良好，建議用一根長(zhǎng)45厘米，直徑1.0厘米的玻璃管，在距一端的12厘米處，彎成150°角，而后消毒備用。使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，少量陰道粘液即可吸入管內(nèi)。取出玻管，兩端塞以棉球，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查。收集公牛包皮沖洗液，應(yīng)先準(zhǔn)備100-150毫升加溫到30-35℃的生理鹽水，用針筒注入包皮腔。用手指將包皮口捏緊，用另一手按摩包皮后部，而后放松手指，將液體收集于廣口瓶中待查。流產(chǎn)胎兒，可取其第四胃內(nèi)容物，胸水或腹水檢查。檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料，立即放于載玻片上，并防止材料干燥。對(duì)濃稠的陰道粘液，檢查前最好以生理鹽水稀釋2-3倍，羊水或包皮洗滌物最好先以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀5分鐘，而后以沉淀物制片檢查。未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲(chóng)體，在顯微鏡下可見(jiàn)其長(zhǎng)度略大于一般的白細(xì)胞，能清楚地見(jiàn)到波動(dòng)膜，有時(shí)尚可見(jiàn)到鞭毛，在蟲(chóng)體內(nèi)部可見(jiàn)含有一個(gè)圓形或橢圓形的有強(qiáng)折光性的核。波動(dòng)膜常作為本蟲(chóng)與其它一些非致病性鞭毛蟲(chóng)和纖毛蟲(chóng)在形態(tài)上相區(qū)別的依據(jù)。也可將標(biāo)本固定，用姬氏染液或蘇木素染色后檢查。馬媾疫錐蟲(chóng)在末梢血液中很少出現(xiàn)，因此血液學(xué)檢查在馬媾疫診斷上的用處不大。檢查材料主要應(yīng)采取浮腫部皮膚或丘疹的抽出液，尿道及陰道的粘膜刮取物，特別在粘膜刮取物中最易發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體。采取病料時(shí)，浮腫液和皮膚丘疹液用消毒的注射器抽取，為了防止吸入血液發(fā)生凝固，可于注射器內(nèi)先吸入適量的抗凝劑（2%檸檬酸鈉生理鹽水）。馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙在其粘膜有炎癥的部位刮取，刮時(shí)應(yīng)稍用力，使刮取物微帶血液，則其中容易檢到錐蟲(chóng)。采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插入龜頭窩中，徐徐用力以牽出陰莖，用消毒的長(zhǎng)柄銳匙插入尿道內(nèi)，刮取病料。以上所采的病料，均可加適量的生理鹽水，置載玻片上，覆以蓋玻片，制成壓滴標(biāo)本檢查；也可制成抹片，用姬氏液染色后檢查。也可用滅菌紗布，以生理鹽水浸濕，用敷料鉗夾持，插入公馬尿道或母馬陰道，擦洗后，取出紗布，洗入無(wú)菌生理鹽水中，將鹽水離心沉淀，取沉淀物檢查，方法同上。四、血液和組織內(nèi)蟲(chóng)體檢查法1.鮮血壓滴標(biāo)本檢查2.涂片染色標(biāo)本檢查3.蟲(chóng)體濃集法涂片法雖然可以查到血液中的原蟲(chóng)，但血液中的蟲(chóng)體較少時(shí)，則不易查出蟲(chóng)體。為此常先進(jìn)行集蟲(chóng)，再制片檢查。其操作過(guò)程是采病畜抗凝血6-7毫升，以每分鐘500轉(zhuǎn)的速度離心5分鐘，使其中大部分紅細(xì)胞沉降。而后將含有少量紅細(xì)胞，白細(xì)胞和蟲(chóng)體的上層血漿移入另一離心管中，補(bǔ)加一些生理鹽水，以每分鐘2500轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色檢查。此法適用于伊氏錐蟲(chóng)病和梨形蟲(chóng)病。其原理是錐蟲(chóng)和感染有梨形蟲(chóng)的紅細(xì)胞較正常紅細(xì)胞的比重為輕，所以在第一次沉淀時(shí)，正常紅細(xì)胞下降，而錐蟲(chóng)和感染有梨形蟲(chóng)的紅細(xì)胞尚懸浮在血漿中。第二次離心沉淀時(shí)，則將其濃集于管底。對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲(chóng)體濃集法。方法是采血于離心管中。加入5%醋酸溶液以溶血。待溶血完成后，離心并吸取沉淀檢查。4.組織內(nèi)蟲(chóng)體檢查法有些原蟲(chóng)可以在動(dòng)物身體的不同組織內(nèi)寄生。一般在死后剖檢時(shí)，取一小塊組織，以其切面在載玻片上做成抹片、觸片，或?qū)⑿K組織固定后制成組織切片，染色檢查。抹片或觸片可用瑞氏染色法或姬氏染液染色。泰勒蟲(chóng)感染的病畜常呈現(xiàn)局部體表淋巴結(jié)腫大。取淋巴結(jié)穿刺物，進(jìn)行顯微鏡檢查以尋找病原體，對(duì)本病的早期診斷很有幫助。其方法是，首先將病畜保定，用右手將腫大的淋巴結(jié)稍向上方推移，并用左手固定淋巴結(jié)。局部剪毛，消毒，以10毫升注射器和較粗的針頭刺入淋巴結(jié)，抽取淋巴組織；拔出針頭，將針頭內(nèi)容物推擠到載玻片上，涂成抹片，固定，染色，鏡檢，可以找到柯赫氏藍(lán)體。家畜患弓形蟲(chóng)病時(shí)，除死后可在一些組織中找到包囊和速殖子外，生前診斷可取腹水，檢查其中滋養(yǎng)體的存在。收集腹水，豬只可采取側(cè)臥保定，穿刺部在白線下側(cè)臍的后方（公畜）或前方（母畜）1-2厘米處。穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入，深度約2-4厘米，針頭刺入腹腔后會(huì)感到阻力驟減，而后有腹水流出。取得的腹水可在載玻片上抹片，以瑞氏液或姬氏液染色后檢查。肌肉中旋毛蟲(chóng)的檢查，是肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)的重要項(xiàng)目，世界各國(guó)使用的方法大同小異。傳統(tǒng)的方法為鏡檢法，但目前多用消化法。鏡檢法為取膈肌肉樣0.5~1g，剪成3×10mm的小塊，用厚玻片壓緊，放顯微鏡下檢查。消化法為取100g肉樣，攪碎或剪碎，放入3L的燒瓶?jī)?nèi)。加入10g胃蛋白酶和2L自來(lái)水。然后加入16ml鹽酸（25%），放入1磁力攪拌棒。置于可加熱的磁力攪拌器上，設(shè)溫于44~46℃。30min后,將消化液用180μm的濾篩濾入一2L的分離漏斗,靜置30min,放出40ml液體于一50ml的量筒內(nèi),靜置10min,吸去30ml上清夜。加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液體到入一帶有格線的平皿內(nèi)，用20-50倍顯微鏡觀察。五、動(dòng)物接種法伊氏錐蟲(chóng)

試驗(yàn)動(dòng)物可用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬。其中尤以小鼠最適用。接種材料用可疑病畜的抗凝血液，血液采取后應(yīng)在2-4小時(shí)內(nèi)接種完畢。接種量0.5-1.0毫升，可接種于腹腔或皮下。接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲(chóng)較多時(shí)，小鼠在接種后1-3日即可在其外周血液中查到錐蟲(chóng)，當(dāng)病料內(nèi)含蟲(chóng)量少時(shí)，發(fā)病時(shí)間可能延長(zhǎng)，因此接種后至少觀察一個(gè)月。也可于接種的第3天采接種小鼠的血液0.5~1.0毫升，接種于另一只小鼠，如此盲傳3代，即可在接種小鼠外周血內(nèi)發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)體。2.馬媾疫

馬媾疫錐蟲(chóng)不能接種于多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但可將病畜的陰道或尿道刮取物與無(wú)菌生理鹽水混合，接種于公家兔的睪丸實(shí)質(zhì)中，每個(gè)睪丸的接種量為0.2毫升。如有馬媾疫錐蟲(chóng)存在，經(jīng)1-2周后，即可見(jiàn)家兔的陰囊、陰莖、睪丸以及耳、唇周圍的皮膚發(fā)生水腫，并可在水腫液內(nèi)檢出蟲(chóng)體。

3.胎兒毛滴蟲(chóng)取病牛陰道分泌物或包皮沖洗液為病料，接種于妊娠豚鼠的腹腔內(nèi)，在接種后1-20天可以使妊娠豚鼠發(fā)生流產(chǎn)，在其流產(chǎn)胎兒的消化道和胎盤里可查出大量的毛滴蟲(chóng)。4.弓形蟲(chóng)弓形蟲(chóng)是多宿主病原原蟲(chóng)，多種家畜和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均具有易感性，但小鼠對(duì)之特別敏感，常常僅數(shù)十個(gè)蟲(chóng)體即可使小鼠感染發(fā)病。一般取急性死亡的可疑動(dòng)物的肺、淋巴結(jié)、脾、肝或腦組織，以1:5的比例加入生理鹽水，制成乳劑，并加少量青霉素和鏈霉素以控制細(xì)菌感染。吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病。病鼠被毛粗亂，食欲消失，腹部膨大，有大量腹水，病程4-5天，最后死亡。抽取病鼠或病死鼠的腹水作涂片，染色檢查，可見(jiàn)大量游離的滋養(yǎng)體。六、動(dòng)物剖檢法1.全身剖檢法在動(dòng)物死亡（或捕殺）后，首先制作血片，染色檢查，觀察血液中有無(wú)寄生蟲(chóng)，而后仔細(xì)檢查體表，觀察有無(wú)體表寄生蟲(chóng)。而后剝皮，觀察皮下組織中有無(wú)蟲(chóng)體寄生。將各內(nèi)部臟器依次取出，先收集胸水，腹水，沉淀后觀察其中有無(wú)寄生蟲(chóng)。而后取出全部消化器官及其所附的肝、胰等腺體。取出呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)、心臟和大的動(dòng)脈和靜脈血管，分別進(jìn)行檢查。

消化系統(tǒng)

先將附著其上的肝、胰取下，再將食道、胃（反芻獸應(yīng)將四個(gè)胃分開(kāi)）、小腸、大腸、盲腸分別結(jié)扎后分離。

呼吸器官用剪刀將鼻、喉、氣管、支氣管切開(kāi)，尋找蟲(chóng)體。用小刀刮氣管粘膜，刮下物在解剖鏡下檢查。肺組織按肝臟處理方法。泌尿器官切開(kāi)腎，先對(duì)腎盂作肉眼檢查，再刮取腎盂粘膜檢查。最后將腎實(shí)質(zhì)切成薄片，壓于兩玻片間，在放大鏡或解剖鏡下檢查。剪開(kāi)輸尿管，膀胱和尿道，檢查其粘膜，并注意粘膜下有無(wú)包囊。收集尿液，用反復(fù)沉淀法處理。

生殖器官切開(kāi)并刮取粘膜，壓片檢查。懷疑為馬媾疫和牛胎兒毛滴蟲(chóng)病時(shí)，應(yīng)涂片染色后油鏡檢查。

腦先肉眼檢查有無(wú)多頭蚴，再切成薄片，壓片檢查眼結(jié)膜