重組蛋白表達(dá)與純化|蛋白表達(dá)不同標(biāo)簽的優(yōu)勢(shì)及用途在重組蛋白表達(dá)與純化的日常工作中，“加標(biāo)簽”幾乎已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)步驟。其主要目的是確保蛋白能夠順利表達(dá)、容易檢測(cè)并高效純化。然而，標(biāo)簽的選擇對(duì)于重組蛋白的成功表達(dá)至關(guān)重要。如果選擇不當(dāng)，可能會(huì)影響表達(dá)量或純化效率，甚至可能導(dǎo)致蛋白的結(jié)構(gòu)異?；蚬δ軉适АＲ虼?，標(biāo)簽的設(shè)計(jì)決非“隨便加一個(gè)”。本文將系統(tǒng)總結(jié)我們?cè)诓煌闹亟M蛋白表達(dá)系統(tǒng)中積累的經(jīng)驗(yàn)與實(shí)踐，提供一些實(shí)用的標(biāo)簽搭配建議，為您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供有價(jià)值的參考。His標(biāo)簽(6xHis)His標(biāo)簽是最常用的親和純化標(biāo)簽之一，通常由6個(gè)連續(xù)的組氨酸殘基構(gòu)成，分子量?。s0.8kDa），對(duì)目的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能影響較小。其主要優(yōu)勢(shì)在于能夠通過(guò)Ni2?或Co2?親和層析柱進(jìn)行高效純化，操作簡(jiǎn)便，且成本較低。GST標(biāo)簽(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)GST標(biāo)簽（谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶）是一種常用于重組蛋白純化和相互作用研究的親和標(biāo)簽。該標(biāo)簽由約26kDa的GST蛋白組成，能夠與谷胱甘肽（GSH）結(jié)合，通過(guò)谷胱甘肽親和層析柱實(shí)現(xiàn)高效純化。GST標(biāo)簽不僅有助于提高蛋白的溶解性，減少包涵體的形成，還可以用于蛋白-蛋白相互作用研究。盡管標(biāo)簽較大，可能對(duì)目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生一定影響，但它在蛋白純化、免疫沉淀及功能分析等方面具有廣泛的應(yīng)用。去除GST標(biāo)簽時(shí)，通常需要使用酶切或親和素洗脫方法，以恢復(fù)目標(biāo)蛋白的天然功能。GST標(biāo)簽通過(guò)提高蛋白溶解性和簡(jiǎn)化純化過(guò)程，尤其適用于難溶解或易聚集的蛋白。GST標(biāo)簽純化原理Flag標(biāo)簽FLAG標(biāo)簽是一個(gè)小型的八肽序列（DYKDDDDK），常用于免疫沉淀和WesternBlot等檢測(cè)方法。它與抗FLAG抗體具有高特異性，廣泛用于蛋白檢測(cè)和分析。FLAG標(biāo)簽由于其小巧且高特異性，幾乎不影響目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，適合用于高靈敏度的免疫檢測(cè)和純化。Flag標(biāo)簽結(jié)構(gòu)MBP標(biāo)簽MBP標(biāo)簽（Maltose-BindingProteinTag）是一種由42kDa的麥芽糖結(jié)合蛋白組成的標(biāo)簽，廣泛應(yīng)用于蛋白純化和蛋白-蛋白相互作用研究。它通過(guò)與麥芽糖親和素結(jié)合，能夠高效純化目標(biāo)蛋白，并顯著提高目標(biāo)蛋白的溶解性，減少包涵體的形成，特別適用于表達(dá)難溶解或易聚集的蛋白。此外，MBP標(biāo)簽還可用于功能性實(shí)驗(yàn)，但由于其較大的分子量，去標(biāo)簽過(guò)程通常需要特定的酶切。MBP標(biāo)簽?zāi)軌蝻@著提高目標(biāo)蛋白的溶解性，減少包涵體形成，并通過(guò)與麥芽糖親和素的結(jié)合實(shí)現(xiàn)高效純化，適合難溶解蛋白。MBP標(biāo)簽純化原理HA標(biāo)簽HA標(biāo)簽是由9個(gè)氨基酸（YPYDVPDYA）組成的小型標(biāo)簽，廣泛應(yīng)用于蛋白純化、免疫檢測(cè)和蛋白-蛋白相互作用研究。由于其小巧且具有高特異性，HA標(biāo)簽對(duì)目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能影響較小，適合用于保持蛋白活性的實(shí)驗(yàn)。通過(guò)與抗HA抗體的結(jié)合，能夠?qū)崿F(xiàn)高效的蛋白純化和靈敏的檢測(cè)，且去標(biāo)簽過(guò)程簡(jiǎn)單。HA標(biāo)簽小巧且特異性強(qiáng)，幾乎不影響目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，適合高靈敏度的免疫檢測(cè)和純化。HA標(biāo)簽結(jié)構(gòu)Strep-tagII標(biāo)簽Strep-tagII是一個(gè)由8個(gè)氨基酸組成的小型標(biāo)簽，能夠與鏈霉親和素（Streptavidin）或其衍生物StrepTactin特異性結(jié)合，廣泛應(yīng)用于蛋白純化、免疫沉淀和蛋白-蛋白相互作用研究。該標(biāo)簽小巧且不干擾目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)與功能，適合于高效純化和靈敏的蛋白檢測(cè)。其去標(biāo)簽過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，無(wú)需酶切，僅通過(guò)優(yōu)化洗脫條件即可去除。Strep-tagII標(biāo)簽小巧且具有高特異性，能夠與鏈霉親和素高效結(jié)合，適用于蛋白純化和免疫沉淀。它對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)影響較小，去標(biāo)簽過(guò)程簡(jiǎn)便。Strep-tagII標(biāo)簽結(jié)構(gòu)SUMO標(biāo)簽SUMO標(biāo)簽是一種約11kDa的小型泛素樣修飾物，廣泛應(yīng)用于重組蛋白的表達(dá)和純化。它有助于提高目標(biāo)蛋白的溶解度，促進(jìn)正確折疊，并減少包涵體的形成。SUMO標(biāo)簽可以通過(guò)SUMO蛋白酶（如SENP）去除，恢復(fù)目標(biāo)蛋白的天然結(jié)構(gòu)和功能。該標(biāo)簽特別適用于需要正確折疊的復(fù)雜蛋白，廣泛用于蛋白純化、蛋白折疊研究及蛋白-蛋白相互作用分析。SUMO標(biāo)簽通過(guò)促進(jìn)目標(biāo)蛋白的正確折疊和提高溶解度，減少了包涵體的形成，特別適用于復(fù)雜或大分子的蛋白。SUMO標(biāo)簽結(jié)構(gòu)選擇合適的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求來(lái)決定。以下是常見(jiàn)標(biāo)簽的特點(diǎn)，幫你一眼看清：His-tag：小巧、便宜，適合常規(guī)使用。GST-tag：提高蛋白溶解性，適用于Pull-down實(shí)驗(yàn)。Flag-tag：抗體識(shí)別靈敏，背景低，適合免疫檢測(cè)。MBP-t