152023-10-30發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定I山藥根尖染色體制片和核型分析技術(shù)規(guī)程DB15/T2788向日葵根尖染色體制片和核型分析技術(shù)規(guī)程3.1著絲粒centromere3.2核型karyotype3.33.4染色體核型分析chromosome1剪取0.5cm～1cm的根尖材料自來水沖洗后，置于8-羥基喹啉預(yù)處理液中14℃處理5.3固定將預(yù)處理的根尖蒸餾水沖洗后放入卡諾固定液中4℃固定24h。將固定后的根尖蒸餾水沖洗后置于0.075mol/L氯化鉀溶液中，室溫處理35.5解離將低滲處理后的根尖蒸餾水沖洗后置于0.25mol/L的鹽酸溶液min后用乙酸-乙酸鈉緩沖液浸泡4min，用3%纖維素酶和0.1%果膠酶酶解液37℃水浴18min。5.6后低滲5.7染色壓片將處理后的根尖置于干凈的載玻片，滴改良卡寶品紅染液5.8鏡檢及圖像采集取30個(gè)以上中期分裂相進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)。選擇背景清晰、染色體形態(tài)清晰的5個(gè)細(xì)胞進(jìn)行染色體長6.2測量6.3Excel計(jì)算按染色體形態(tài)大小和著絲粒位置進(jìn)行染色體配對(duì)，方26.5核型模式圖繪制分析方法按照DB15/T2788的規(guī)定。使用VideoTesT-Karyo染色體分析軟件進(jìn)行染色體核型圖的制作，運(yùn)用MicrosoftofficeExcel制作核型模式3A.1染色體長度測量步驟選擇染色體形態(tài)清晰的5個(gè)細(xì)胞進(jìn)行染色體長度的測色體配對(duì)。使用軟件中“圖像測量”菜單里“直線”或“曲線”測量工具測量染色體長臂、短臂及隨此進(jìn)行同源染色體的配對(duì)。對(duì)每個(gè)細(xì)胞配對(duì)后計(jì)算每對(duì)同源染色體的長臂、短臂平均值，得到這個(gè)細(xì)由該材料的長短臂值，計(jì)算染色體總長并做記錄，由此進(jìn)行染色體各指標(biāo)的測量使用奧特光學(xué)顯微圖像處理系統(tǒng)OPTPr照ARANO的方法，即核型不對(duì)稱系數(shù)=長臂總長/全組染色體總長。相對(duì)長度指數(shù)(indexofrelaA.2染色體參數(shù)計(jì)算按染色體形態(tài)大小和著絲粒位置進(jìn)行染色體配對(duì)，對(duì)長度和臂比等核型參數(shù)。使用VideoTesT-Karyo染色體分析軟MicrosoftofficeExcel制A.3試劑及配置方法），4改良卡寶品紅染液：10mL染色液母液加45%乙酸90mL，最后加山梨醇1.8g，室