FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)：解鎖食管癌發(fā)生發(fā)展與預(yù)后的分子密碼一、引言1.1研究背景與意義食管癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年約有50萬(wàn)新增食管癌病例，死亡人數(shù)高達(dá)40萬(wàn)，其發(fā)病率和死亡率在各類惡性腫瘤中位居前列。在中國(guó)，食管癌同樣是高發(fā)疾病，每年新增病例數(shù)約占全球的50%，尤其在河南、河北、山西等地區(qū)，發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)。由于食管癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，此時(shí)腫瘤往往已發(fā)生轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除率低，對(duì)放化療的敏感性也較差，導(dǎo)致患者的5年生存率僅為20%-30%左右。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，涉及眾多基因的異常表達(dá)和相互作用。因此，深入研究食管癌相關(guān)基因的表達(dá)變化及其臨床意義，對(duì)于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制、尋找早期診斷標(biāo)志物和有效的治療靶點(diǎn)具有重要意義。脆性組氨酸三聯(lián)體（FragileHistidineTriad，F(xiàn)HIT）基因是一種重要的抑癌基因，定位于人類染色體3p14.2，該區(qū)域在多種腫瘤中頻繁發(fā)生缺失和突變。研究表明，F(xiàn)HIT基因的失活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其機(jī)制可能涉及細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)等多個(gè)方面。在食管癌中，已有研究報(bào)道FHIT基因表達(dá)缺失或下調(diào)，且與腫瘤的病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān)，但具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。Livin是凋亡抑制蛋白（InhibitorofApoptosisProtein，IAP）家族的成員之一，特異性表達(dá)于胚胎組織及多種人類實(shí)體瘤細(xì)胞中。Livin通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。在食管癌中，Livin的高表達(dá)已被證實(shí)與腫瘤的侵襲性、不良預(yù)后相關(guān)，有望成為食管癌診斷和治療的新靶點(diǎn)。然而，Livin在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體調(diào)控機(jī)制以及與其他基因的相互作用關(guān)系尚不完全明確。Bad（Bcl-2associateddeathpromoter）基因是Bcl-2家族的促凋亡成員，通過(guò)與抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL等結(jié)合形成異二聚體，從而解除Bcl-2、Bcl-XL等對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在多種腫瘤中，Bad基因的表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。在食管癌中，關(guān)于Bad基因表達(dá)及其臨床意義的研究相對(duì)較少，其在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制亟待進(jìn)一步探討。綜上所述，F(xiàn)HIT、Livin和Bad基因在食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)這三個(gè)基因在食管癌組織中的表達(dá)情況，分析其與食管癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，探討它們?cè)谑彻馨┌l(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，為食管癌的早期診斷、靶向治療及預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)和潛在的分子靶點(diǎn)。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，對(duì)食管癌相關(guān)基因的研究開(kāi)展較早且較為深入。早期就有研究關(guān)注到FHIT基因在食管癌中的異常表達(dá)，通過(guò)對(duì)大量食管癌組織樣本的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)FHIT基因的缺失或低表達(dá)在食管癌中具有較高的發(fā)生率，且與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，F(xiàn)HIT基因可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，影響細(xì)胞的增殖和死亡平衡，從而在食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。例如，有研究發(fā)現(xiàn)FHIT基因能夠與某些凋亡相關(guān)蛋白相互作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，當(dāng)FHIT基因表達(dá)缺失時(shí)，細(xì)胞凋亡受到抑制，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的異常增殖。對(duì)于Livin基因，國(guó)外研究也取得了不少成果。研究表明，Livin在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于正常食管組織，其高表達(dá)與食管癌的侵襲性生長(zhǎng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型研究發(fā)現(xiàn)，Livin可以通過(guò)抑制caspase家族蛋白酶的活性，阻斷細(xì)胞凋亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和凋亡誘導(dǎo)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。此外，一些研究還嘗試以Livin為靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)針對(duì)食管癌的靶向治療藥物，如利用RNA干擾技術(shù)抑制Livin基因的表達(dá)，觀察到腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力明顯受到抑制，為食管癌的治療提供了新的思路和方法。關(guān)于Bad基因，國(guó)外相關(guān)研究主要集中在其在腫瘤細(xì)胞凋亡調(diào)控中的作用機(jī)制方面。研究發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤細(xì)胞中，Bad基因的表達(dá)水平和活性受到多種信號(hào)通路的精細(xì)調(diào)控，如PI3K-Akt信號(hào)通路等。當(dāng)PI3K-Akt信號(hào)通路被激活時(shí)，Akt可以磷酸化Bad，使其與14-3-3蛋白結(jié)合并滯留在細(xì)胞質(zhì)中，從而失去促凋亡活性，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受到抑制，腫瘤細(xì)胞得以存活和增殖。然而，在食管癌中，Bad基因的具體表達(dá)模式、與其他基因的相互作用關(guān)系以及在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制等方面的研究相對(duì)較少，仍有待進(jìn)一步深入探討。在國(guó)內(nèi)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和普及，對(duì)食管癌相關(guān)基因的研究也日益增多。眾多研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)免疫組織化學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù)，對(duì)FHIT、Livin和Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了它們與食管癌臨床病理特征之間的關(guān)系。大量研究結(jié)果表明，F(xiàn)HIT基因在食管癌組織中的表達(dá)缺失或下調(diào)與腫瘤的病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度等密切相關(guān)，低表達(dá)的FHIT基因往往預(yù)示著食管癌患者的預(yù)后較差。例如，有國(guó)內(nèi)研究報(bào)道，在食管癌患者中，隨著腫瘤病理分期的升高，F(xiàn)HIT基因的表達(dá)水平逐漸降低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者FHIT基因表達(dá)缺失率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。對(duì)于Livin基因，國(guó)內(nèi)研究同樣證實(shí)了其在食管癌組織中的高表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后之間的相關(guān)性。并且，一些研究還深入探討了Livin基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)某些轉(zhuǎn)錄因子和微小RNA可能參與了Livin基因表達(dá)的調(diào)控過(guò)程。此外，國(guó)內(nèi)也有研究嘗試將Livin基因作為食管癌診斷和治療的生物標(biāo)志物，通過(guò)檢測(cè)血清中Livin蛋白的水平，發(fā)現(xiàn)其在食管癌患者中的陽(yáng)性率明顯高于健康人群，具有一定的診斷價(jià)值。在Bad基因的研究方面，國(guó)內(nèi)學(xué)者主要圍繞其在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制展開(kāi)研究。一些研究發(fā)現(xiàn)，Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)水平低于正常食管組織，且其低表達(dá)與食管癌的臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)。進(jìn)一步的研究表明，Bad基因可能通過(guò)與Bcl-2家族其他成員相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，從而影響食管癌的發(fā)生發(fā)展。然而，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于Bad基因在食管癌中的研究仍處于初步階段，對(duì)于其具體的作用機(jī)制以及與其他基因的協(xié)同作用等方面的研究還不夠深入和全面。盡管國(guó)內(nèi)外在FHIT、Livin和Bad基因與食管癌的研究方面已經(jīng)取得了一定的成果，但仍存在一些不足之處和研究空白。目前對(duì)于這三個(gè)基因在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制尚未完全明確，它們之間以及與其他相關(guān)基因之間的相互作用關(guān)系還需要進(jìn)一步深入研究。在臨床應(yīng)用方面，雖然這些基因作為食管癌診斷和預(yù)后評(píng)估標(biāo)志物的潛力已經(jīng)得到了一定的關(guān)注，但如何將其準(zhǔn)確地應(yīng)用于臨床實(shí)踐，提高食管癌的早期診斷率和預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性，仍需要開(kāi)展更多的大規(guī)模臨床研究加以驗(yàn)證。此外，以這些基因?yàn)榘悬c(diǎn)的食管癌靶向治療研究雖然取得了一些進(jìn)展，但仍面臨著諸多挑戰(zhàn)，如藥物的特異性、有效性和安全性等問(wèn)題，需要進(jìn)一步探索和優(yōu)化治療方案。本研究旨在通過(guò)更深入的實(shí)驗(yàn)和分析，填補(bǔ)現(xiàn)有研究的部分空白，為食管癌的防治提供更有力的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在通過(guò)檢測(cè)FHIT、Livin和Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)情況，深入分析它們與食管癌臨床病理特征（如腫瘤的TNM分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）及患者預(yù)后的關(guān)系，探討這三個(gè)基因在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，為食管癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療及預(yù)后評(píng)估提供更為可靠的理論依據(jù)和潛在的分子靶點(diǎn)。本研究具有以下創(chuàng)新點(diǎn)：在研究樣本方面，收集了大量具有完整臨床病理資料的食管癌組織及配對(duì)的癌旁正常組織樣本，能夠更全面、準(zhǔn)確地反映基因表達(dá)在食管癌患者中的真實(shí)情況，減少研究結(jié)果的偏差和局限性。在檢測(cè)方法上，采用了多種先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法相結(jié)合，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot和免疫組化等，從mRNA和蛋白質(zhì)水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行雙重驗(yàn)證，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在研究思路上，首次對(duì)FHIT、Livin和Bad三個(gè)基因在食管癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行聯(lián)合分析，探討它們之間的相互作用關(guān)系及其對(duì)食管癌發(fā)生發(fā)展的協(xié)同影響，彌補(bǔ)了以往單一基因研究的不足，為揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角和研究思路。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1食管癌概述食管癌是一種原發(fā)于食管的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多種因素的相互作用。食管黏膜上皮細(xì)胞在長(zhǎng)期受到不良刺激后，如化學(xué)物質(zhì)（如亞硝胺類化合物）、物理因素（如長(zhǎng)期進(jìn)食過(guò)燙食物、粗糙食物等）、生物因素（如某些病毒感染）以及遺傳因素等，細(xì)胞的基因表達(dá)和調(diào)控發(fā)生異常，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控、分化異常，進(jìn)而逐漸發(fā)展為癌細(xì)胞。隨著癌細(xì)胞的不斷增殖和侵襲，腫瘤逐漸形成并侵犯食管壁及周圍組織，嚴(yán)重影響食管的正常生理功能。食管癌在全球范圍內(nèi)均有發(fā)病，但具有明顯的地域分布差異。在我國(guó)，食管癌的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，尤其是河南、河北、山西等地區(qū)，是食管癌的高發(fā)區(qū)域。這些地區(qū)的高發(fā)原因可能與當(dāng)?shù)氐娘嬍沉?xí)慣（如喜愛(ài)食用腌制食品、熱食等）、生活環(huán)境（如土壤中某些微量元素的缺乏或過(guò)量）以及遺傳易感性等因素密切相關(guān)。在性別方面，男性的發(fā)病率普遍高于女性，男女發(fā)病比例約為1.3-3:1。從年齡分布來(lái)看，食管癌多發(fā)生于40歲以上的中老年人，且隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，60-64歲年齡組發(fā)病率最高。食管癌主要有兩種常見(jiàn)的病理類型，即食管鱗狀細(xì)胞癌和食管腺癌。食管鱗狀細(xì)胞癌是最為常見(jiàn)的類型，在我國(guó)約占食管癌病例的90%以上，其發(fā)生多與吸煙、飲酒、長(zhǎng)期食用含亞硝胺類食物等因素有關(guān)；食管腺癌的發(fā)病率近年來(lái)呈逐漸上升趨勢(shì)，在西方國(guó)家較為常見(jiàn)，其發(fā)病與胃食管反流病、Barrett食管等密切相關(guān)。不同病理類型的食管癌在生物學(xué)行為、治療反應(yīng)和預(yù)后等方面存在一定差異，因此準(zhǔn)確的病理診斷對(duì)于制定合理的治療方案至關(guān)重要。早期食管癌患者的癥狀往往不明顯，可能僅在吞咽粗硬食物時(shí)偶有不適，如胸骨后出現(xiàn)燒灼樣、針刺樣或牽拉摩擦樣疼痛，食物通過(guò)時(shí)感覺(jué)緩慢，并有停滯感或異物感，這些癥狀通常較為輕微且間歇性發(fā)作，容易被患者忽視。隨著病情的進(jìn)展，進(jìn)入中晚期后，食管癌的典型癥狀為進(jìn)行性吞咽困難，患者先是難以咽下固體食物，隨后半流質(zhì)食物也逐漸難以吞咽，最后甚至連液體也無(wú)法咽下。此外，患者還可能出現(xiàn)消瘦、貧血、乏力等全身癥狀，以及腫瘤侵犯周圍組織或器官引起的相應(yīng)癥狀，如侵犯氣管可導(dǎo)致咳嗽、呼吸困難，侵犯喉返神經(jīng)可引起聲音嘶啞等。目前，食管癌的診斷主要依靠多種檢查手段的綜合應(yīng)用。食管吞稀鋇X線雙重對(duì)比造影是一種常用的初步檢查方法，早期食管癌在造影檢查中可表現(xiàn)為食管黏膜皺襞紊亂、粗糙或有中斷現(xiàn)象，中晚期則可見(jiàn)食管腔內(nèi)充盈缺損、龕影、管壁僵硬等典型表現(xiàn)。內(nèi)鏡檢查是診斷食管癌的重要方法，包括普通胃鏡和食管鏡檢查，能夠直接觀察食管黏膜的病變情況，并可對(duì)可疑病變部位進(jìn)行活檢，獲取組織標(biāo)本進(jìn)行病理診斷，病理診斷是確診食管癌的金標(biāo)準(zhǔn)。此外，胸部CT、MRI等影像學(xué)檢查有助于了解腫瘤的侵犯范圍、與周圍組織的關(guān)系以及有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等情況，對(duì)于食管癌的臨床分期和治療方案的選擇具有重要指導(dǎo)意義。正電子發(fā)射斷層顯像（PET-CT）在檢測(cè)食管癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和評(píng)估腫瘤的代謝活性方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可用于發(fā)現(xiàn)一些隱匿性轉(zhuǎn)移灶，為制定全面的治療策略提供更準(zhǔn)確的信息。2.2FHIT基因FHIT基因全稱為脆性組氨酸三聯(lián)體基因（FragileHistidineTriad），是一種重要的候選抑癌基因，其在維持細(xì)胞正常生理功能和抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。FHIT基因定位于人類染色體3p14.2區(qū)域，該區(qū)域在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中頻繁出現(xiàn)缺失和突變，提示FHIT基因與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。FHIT基因全長(zhǎng)約1.1Mb，包含10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子。其編碼的蛋白質(zhì)由147個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為16kD。FHIT蛋白具有二腺苷三磷酸水解酶（Ap3Aase）活性，能夠特異性地水解二腺苷三磷酸（Ap3A）生成腺苷一磷酸（AMP）和腺苷二磷酸（ADP）。這種水解活性在細(xì)胞的能量代謝、信號(hào)傳導(dǎo)以及細(xì)胞周期調(diào)控等過(guò)程中具有重要意義。正常生理狀態(tài)下，F(xiàn)HIT基因通過(guò)多種途徑參與維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分化。一方面，F(xiàn)HIT蛋白能夠通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)分子相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞有序地進(jìn)行增殖和分化。例如，F(xiàn)HIT蛋白可以與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）及其調(diào)節(jié)亞基細(xì)胞周期蛋白（Cyclin）相互作用，抑制CDK的活性，從而使細(xì)胞周期阻滯在G1期，阻止細(xì)胞過(guò)度增殖。另一方面，F(xiàn)HIT基因還能夠通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)清除體內(nèi)受損或異常的細(xì)胞，維持組織和器官的正常結(jié)構(gòu)和功能。當(dāng)細(xì)胞受到外界有害因素（如DNA損傷、氧化應(yīng)激等）刺激時(shí)，F(xiàn)HIT蛋白的表達(dá)水平會(huì)升高，進(jìn)而激活一系列細(xì)胞凋亡相關(guān)的信號(hào)通路，如線粒體凋亡途徑和死亡受體凋亡途徑，促使細(xì)胞發(fā)生凋亡，防止細(xì)胞癌變。在食管癌中，大量研究表明FHIT基因存在表達(dá)異常的情況。通過(guò)對(duì)食管癌組織標(biāo)本的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT基因的表達(dá)缺失或下調(diào)在食管癌中具有較高的發(fā)生率。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT基因表達(dá)異常與食管癌的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。在食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，由于染色體3p14.2區(qū)域的缺失、基因突變以及啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化等原因，導(dǎo)致FHIT基因的表達(dá)受到抑制。FHIT基因表達(dá)缺失或下調(diào)后，其正常的抑癌功能喪失，使得細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，細(xì)胞過(guò)度增殖，同時(shí)細(xì)胞凋亡受阻，受損或異常的細(xì)胞無(wú)法及時(shí)被清除，從而為腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供了條件。此外，F(xiàn)HIT基因表達(dá)異常還可能通過(guò)影響其他相關(guān)基因的表達(dá)和信號(hào)通路的活性，間接促進(jìn)食管癌的發(fā)生發(fā)展。例如，有研究發(fā)現(xiàn)FHIT基因表達(dá)缺失時(shí)，一些與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因（如基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員等）的表達(dá)會(huì)上調(diào)，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。綜上所述，F(xiàn)HIT基因在食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的抑制作用，其表達(dá)異常可能是食管癌發(fā)病的重要分子機(jī)制之一。深入研究FHIT基因在食管癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)以及提高食管癌患者的治療效果和預(yù)后具有重要的理論和臨床意義。2.3Livin基因Livin基因是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的重要成員，在細(xì)胞凋亡調(diào)控和腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色。人類Livin基因定位于染色體20q13.3區(qū)域，其基因全長(zhǎng)約46kb，包含7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子。獨(dú)特的基因結(jié)構(gòu)使得Livin基因在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，因剪接方式的不同產(chǎn)生兩種mRNA亞型，即Livinα和Livinβ。Livinα的cDNA全長(zhǎng)897bp，編碼由298個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量約為33kD；Livinβ的cDNA全長(zhǎng)843bp，編碼280個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量約30kD。二者的差異主要體現(xiàn)在第6外顯子5’端54bp的基因序列，這一差異導(dǎo)致它們編碼的蛋白質(zhì)在氨基酸組成上相差18個(gè)氨基酸。盡管兩種亞型結(jié)構(gòu)存在細(xì)微差別，但都含有一個(gè)由約70個(gè)氨基酸組成的特征性BIR結(jié)構(gòu)域以及一個(gè)環(huán)指結(jié)構(gòu)域。其中，BIR結(jié)構(gòu)域是Livin發(fā)揮抗凋亡作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，它能夠與Caspase蛋白特異性結(jié)合，從而阻斷細(xì)胞凋亡信號(hào)通路。Livin基因的抗凋亡機(jī)制主要通過(guò)抑制Caspase家族蛋白酶的活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中，Caspase家族成員起著核心作用，它們通過(guò)一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。Livin可以直接與Caspase-3、Caspase-7結(jié)合，抑制這兩種蛋白酶的活性，從而阻斷細(xì)胞凋亡的下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使細(xì)胞凋亡過(guò)程無(wú)法順利進(jìn)行。此外，Livin還能夠與酶原形式或激活形式的Caspase-9結(jié)合，抑制由Apaf-1、細(xì)胞色素C及dATP誘導(dǎo)的Caspase-9的激活作用，進(jìn)而阻止細(xì)胞凋亡的起始。還有研究表明，Livin有效的抗凋亡作用并非僅僅是對(duì)Caspase-9的直接抑制，而是通過(guò)對(duì)抗2.4Bad基因Bad基因，全稱Bcl-2associateddeathpromoter，是Bcl-2家族中重要的促凋亡成員，在細(xì)胞凋亡調(diào)控和腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Bad基因定位于人類染色體11q13區(qū)域，其基因結(jié)構(gòu)包含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。Bad基因編碼的蛋白質(zhì)由211個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為23kD。Bad蛋白含有3個(gè)BH結(jié)構(gòu)域，即BH1、BH2和BH3結(jié)構(gòu)域。其中，BH3結(jié)構(gòu)域是Bad蛋白發(fā)揮促凋亡作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，它能夠與抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL等的BH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合，形成異二聚體，從而解除Bcl-2、Bcl-XL等對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用，激活細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡調(diào)控過(guò)程中，Bad基因的表達(dá)和活性受到多種因素的精細(xì)調(diào)控。當(dāng)細(xì)胞受到外界凋亡誘導(dǎo)信號(hào)刺激時(shí)，如化療藥物、射線、生長(zhǎng)因子缺乏等，細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路被激活，導(dǎo)致Bad蛋白的磷酸化狀態(tài)發(fā)生改變。在正常情況下，Bad蛋白處于非磷酸化狀態(tài)，能夠與抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL等結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。然而，當(dāng)細(xì)胞受到生存信號(hào)刺激時(shí)，如生長(zhǎng)因子與細(xì)胞表面受體結(jié)合，激活PI3K-Akt信號(hào)通路。活化的Akt可以磷酸化Bad蛋白的絲氨酸殘基（如Ser112、Ser136和Ser155）。磷酸化后的Bad蛋白與14-3-3蛋白結(jié)合，被轉(zhuǎn)運(yùn)并滯留在細(xì)胞質(zhì)中，無(wú)法進(jìn)入線粒體與Bcl-2、Bcl-XL等抗凋亡蛋白結(jié)合，從而失去促凋亡活性，細(xì)胞凋亡受到抑制，腫瘤細(xì)胞得以存活和增殖。此外，Bad基因的表達(dá)還受到轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。一些轉(zhuǎn)錄因子，如p53、E2F等，能夠結(jié)合到Bad基因的啟動(dòng)子區(qū)域，調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性。當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等應(yīng)激信號(hào)時(shí)，p53蛋白被激活，它可以結(jié)合到Bad基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)Bad基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加Bad蛋白的表達(dá)水平，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在食管癌中，已有研究表明Bad基因的表達(dá)水平和活性發(fā)生異常改變，與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)食管癌組織標(biāo)本的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)水平明顯低于正常食管組織。進(jìn)一步的研究分析發(fā)現(xiàn)，Bad基因的低表達(dá)與食管癌的臨床病理特征密切相關(guān)。在腫瘤分期方面，隨著食管癌TNM分期的升高，Bad基因的表達(dá)水平逐漸降低，提示Bad基因的低表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。在組織分化程度方面，低分化的食管癌組織中Bad基因的表達(dá)水平顯著低于高分化和中分化的組織，表明Bad基因表達(dá)的降低與食管癌的惡性程度增加有關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者組織中Bad基因的表達(dá)水平明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，說(shuō)明Bad基因的低表達(dá)可能與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)相關(guān)。此外，臨床隨訪研究發(fā)現(xiàn)，Bad基因低表達(dá)的食管癌患者預(yù)后較差，其5年生存率明顯低于Bad基因高表達(dá)的患者。這表明Bad基因不僅參與了食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，還可以作為評(píng)估食管癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一。綜上所述，Bad基因作為Bcl-2家族的促凋亡成員，在食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用。其表達(dá)水平和活性的異常改變可能通過(guò)影響細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖，進(jìn)而推動(dòng)食管癌的發(fā)生發(fā)展。深入研究Bad基因在食管癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)以及改善食管癌患者的預(yù)后具有重要的理論和臨床意義。三、研究設(shè)計(jì)3.1研究對(duì)象本研究的樣本來(lái)源于[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治并進(jìn)行手術(shù)治療的食管癌患者。共收集到[X]例食管癌組織標(biāo)本及與之配對(duì)的癌旁正常組織標(biāo)本（癌旁組織取自距離腫瘤邊緣至少5cm處）。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)（第[X]版），將患者分為不同的TNM分期組，其中Ⅰ期[X1]例，Ⅱ期[X2]例，Ⅲ期[X3]例，Ⅳ期[X4]例。按照組織分化程度進(jìn)行分組，高分化[X5]例，中分化[X6]例，低分化[X7]例。依據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組[X8]例和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組[X9]例?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)術(shù)后病理確診為食管癌；年齡在18-75歲之間；患者及家屬簽署知情同意書(shū)，自愿參與本研究；術(shù)前未接受過(guò)放療、化療、免疫治療及其他抗腫瘤治療。患者排除標(biāo)準(zhǔn)如下：合并其他惡性腫瘤；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；患有精神疾病或認(rèn)知障礙，無(wú)法配合研究；妊娠或哺乳期女性。3.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器本實(shí)驗(yàn)所需的主要試劑包括：TRIzol試劑（Invitrogen公司），用于提取組織中的總RNA；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa公司），包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTP等，用于將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（Roche公司），含有SYBRGreen染料、Taq酶、dNTP等，用于進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，檢測(cè)基因的mRNA表達(dá)水平。免疫組化相關(guān)試劑有：10%中性福爾馬林溶液，用于組織固定；二甲苯、無(wú)水乙醇、95%乙醇、75%乙醇，用于組織脫水和脫蠟；檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）或EDTA緩沖液（pH8.0），用于抗原修復(fù)；3%過(guò)氧化氫溶液，用于封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；正常山羊血清，用于封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)；DAB顯色試劑盒（中杉金橋公司），用于免疫組化顯色。蛋白質(zhì)提取試劑如RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），用于提取組織中的總蛋白；BCA蛋白定量試劑盒（碧云天公司），用于測(cè)定蛋白濃度。主要抗體包括：兔抗人FHIT單克隆抗體（Abcam公司）、兔抗人Livin多克隆抗體（CellSignalingTechnology公司）、兔抗人Bad多克隆抗體（SantaCruz公司），這些一抗用于特異性識(shí)別相應(yīng)的目標(biāo)蛋白；山羊抗兔IgG-HRP二抗（JacksonImmunoResearch公司），與一抗結(jié)合后，通過(guò)HRP催化DAB顯色，從而檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)。主要儀器設(shè)備有：高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司），用于細(xì)胞和組織的離心分離，轉(zhuǎn)速可達(dá)15000rpm以上；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（ABI7500型），具有高靈敏度和準(zhǔn)確性，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，從而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行定量分析；恒溫培養(yǎng)箱（ThermoScientific公司），可精確控制溫度，用于細(xì)胞培養(yǎng)和抗體孵育等實(shí)驗(yàn)步驟；電泳儀（Bio-Rad公司），能夠提供穩(wěn)定的電場(chǎng)，用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳分離；凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad公司），可對(duì)電泳后的凝膠進(jìn)行成像和分析，檢測(cè)蛋白質(zhì)和核酸的條帶；顯微鏡（Olympus公司），用于觀察組織切片和細(xì)胞形態(tài)，配備有拍照功能，可記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。此外，還用到了移液器（Gilson公司）、PCR管、96孔板、EP管等耗材。3.3實(shí)驗(yàn)方法3.3.1免疫組織化學(xué)檢測(cè)將收集的食管癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本，經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定24小時(shí)后，進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟，制成4μm厚的石蠟切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇（100%、95%、80%、70%）水化后，用蒸餾水沖洗5分鐘，2次。為暴露抗原決定簇，將切片放入盛有檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）的高壓鍋中進(jìn)行抗原修復(fù)，加熱至高壓鍋上汽后持續(xù)3分鐘，然后自然冷卻。冷卻后取出切片，用PBS緩沖液（pH7.4）沖洗5分鐘，3次。為阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，向切片上滴加3%過(guò)氧化氫溶液，室溫孵育10分鐘，隨后用PBS緩沖液沖洗5分鐘，3次。接著滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，以減少非特異性背景染色。甩去多余液體，不洗，直接滴加適當(dāng)稀釋的兔抗人FHIT單克隆抗體、兔抗人Livin多克隆抗體和兔抗人Bad多克隆抗體，4℃冰箱過(guò)夜。第二天取出切片，用PBS緩沖液沖洗5分鐘，3次。滴加生物素化的山羊抗兔IgG-HRP二抗，37℃孵育40分鐘。再次用PBS緩沖液沖洗5分鐘，3次。使用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。隨后用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核2分鐘，鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗10-15分鐘進(jìn)行返藍(lán)。最后切片經(jīng)梯度乙醇（70%、80%、95%、100%）脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。結(jié)果判定方面，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片。FHIT、Livin和Bad蛋白陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物均位于細(xì)胞漿中，陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。綜合考慮切片中陽(yáng)性細(xì)胞占所觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比以及顯色程度進(jìn)行判斷。陽(yáng)性細(xì)胞百分比分為4級(jí)：1-5％為0分；6-25％為1分；26-50％為2分；≥51％為3分。根據(jù)顯色程度判定陽(yáng)性強(qiáng)度：基本不著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分相乘，得出最后得分。0-1分為陰性(-)；2-3分為弱陽(yáng)性(+)；4-6分為中等陽(yáng)性(++)；6分以上為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。3.3.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)使用TRIzol試劑提取食管癌組織及癌旁正常組織中的總RNA。具體步驟如下：取適量組織樣本，加入1mlTRIzol試劑，用組織勻漿器充分勻漿。室溫放置5分鐘，使細(xì)胞充分裂解。每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入0.2ml氯仿，蓋緊管蓋，手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒，15-30℃孵育2-3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘，此時(shí)混合液體分為下層紅色酚氯仿相、中間層以及無(wú)色水相上層，RNA全部被分配于水相中。將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中，加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15-30℃孵育10分鐘，4℃下12000rpm離心10分鐘，RNA沉淀在管底部與側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。移去上清液，每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH?O配制）清洗RNA沉淀，混勻后4℃下7000rpm離心5分鐘。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。最后加入適量無(wú)RNA酶的水，用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。采用紫外吸收法測(cè)定RNA的濃度與純度。先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零，取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm與280nm處的吸收值。A260下讀值為1表示40μgRNA/ml，樣品RNA濃度(μg/ml)計(jì)算公式為：A260×稀釋倍數(shù)×40μg/ml。RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍在1.8-2.1之間表明RNA質(zhì)量較好。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)體系如下：2μl逆轉(zhuǎn)錄buffer，0.2μl上游引物，0.2μl下游引物，0.1μldNTP，0.5μl逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV，5μlDEPC水，2μlRNA模版，總體積10μl。輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV之前先70℃干浴3分鐘，取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl，37℃水浴60分鐘。取出后立即95℃干浴3分鐘，得到的逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液，保存于-80℃待用。根據(jù)GenBank中FHIT、Livin、Bad基因及內(nèi)參基因β-actin的mRNA序列，使用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，引物由[引物合成公司名稱]合成。引物序列如下：基因上游引物(5'-3')下游引物(5'-3')FHIT[具體序列1][具體序列2]Livin[具體序列3][具體序列4]Bad[具體序列5][具體序列6]β-actin[具體序列7][具體序列8]以cDNA為模板，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系為：10μlSYBRGreen1染料，0.5μl上游引物，0.5μl下游引物，0.5μldNTP，1μlTaq酶，5μlcDNA模板，32.5μlddH?O，總體積50μl。輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。反應(yīng)條件為：93℃預(yù)變性2分鐘，然后93℃變性1分鐘，55℃退火2分鐘，共40個(gè)循環(huán)。數(shù)據(jù)分析時(shí)，采用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。其中，ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(內(nèi)參基因)，ΔΔCt=ΔCt(實(shí)驗(yàn)組)-ΔCt(對(duì)照組)。以癌旁正常組織為對(duì)照，分析食管癌組織中FHIT、Livin和Bad基因mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差不齊，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析方面，采用Spearman秩相關(guān)分析方法分析FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)之間以及它們與食管癌臨床病理特征之間的相關(guān)性。生存分析采用Kaplan-Meier法，并通過(guò)Log-rank檢驗(yàn)比較不同基因表達(dá)水平組患者的生存差異。所有檢驗(yàn)均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1FHIT、Livin和Bad基因在食管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)[X]例食管癌組織及與之配對(duì)的癌旁正常組織中FHIT、Livin和Bad基因的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT蛋白在正常食管組織中呈高表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要位于食管黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，染色呈棕黃色或棕褐色，陽(yáng)性率為[X1]%（[X1]/[X]）。而在食管癌組織中，F(xiàn)HIT蛋白表達(dá)明顯降低，陽(yáng)性率僅為[X2]%（[X2]/[X]），且染色強(qiáng)度減弱，部分癌細(xì)胞中甚至未見(jiàn)明顯的FHIT蛋白表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，F(xiàn)HIT蛋白在食管癌組織與正常食管組織中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Livin蛋白在正常食管組織中幾乎不表達(dá)或僅有微弱表達(dá)，陽(yáng)性率為[X3]%（[X3]/[X]）。在食管癌組織中，Livin蛋白呈高表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，染色呈棕黃色或棕褐色，陽(yáng)性率高達(dá)[X4]%（[X4]/[X]）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，Livin蛋白在食管癌組織與正常食管組織中的表達(dá)差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Bad蛋白在正常食管組織中呈高表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要位于食管黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，染色呈棕黃色或棕褐色，陽(yáng)性率為[X5]%（[X5]/[X]）。在食管癌組織中，Bad蛋白表達(dá)顯著降低，陽(yáng)性率為[X6]%（[X6]/[X]），染色強(qiáng)度也明顯減弱。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，Bad蛋白在食管癌組織與正常食管組織中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了免疫組織化學(xué)的檢測(cè)結(jié)果。以β-actin為內(nèi)參基因，計(jì)算FHIT、Livin和Bad基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，食管癌組織中FHIT基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X7]±[X8]，明顯低于正常食管組織中的[X9]±[X10]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Livin基因mRNA在食管癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X11]±[X12]，顯著高于正常食管組織中的[X13]±[X14]，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Bad基因mRNA在食管癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X15]±[X16]，明顯低于正常食管組織中的[X17]±[X18]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和圖1。表1：FHIT、Livin和Bad基因在食管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)情況（x±s）基因食管癌組織（n=[X]）正常食管組織（n=[X]）t值P值FHITmRNA[X7]±[X8][X9]±[X10][t1][P1]LivinmRNA[X11]±[X12][X13]±[X14][t2][P2]BadmRNA[X15]±[X16][X17]±[X18][t3][P3]圖1：FHIT、Livin和Bad基因在食管癌組織及正常食管組織中的mRNA相對(duì)表達(dá)量（*P<0.05，**P<0.01）4.2FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)與食管癌患者臨床病理特征的關(guān)系為進(jìn)一步探究FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)與食管癌患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，將食管癌患者按照年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)進(jìn)行分組，分析不同組間基因表達(dá)的差異，具體結(jié)果見(jiàn)表2。表2：FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)與食管癌患者臨床病理特征的關(guān)系（例數(shù)，%）臨床病理特征例數(shù)FHIT陽(yáng)性表達(dá)（n，%）Livin陽(yáng)性表達(dá)（n，%）Bad陽(yáng)性表達(dá)（n，%）\chi^2值（FHIT）P值（FHIT）\chi^2值（Livin）P值（Livin）\chi^2值（Bad）P值（Bad）年齡（歲）≥60[X10][X11]（[X12]%）[X13]（[X14]%）[X15]（[X16]%）[x1][p1][x2][p2][x3][p3]<60[X17][X18]（[X19]%）[X20]（[X21]%）[X22]（[X23]%）性別男[X24][X25]（[X26]%）[X27]（[X28]%）[X29]（[X30]%）[x4][p4][x5][p5][x6][p6]女[X31][X32]（[X33]%）[X34]（[X35]%）[X36]（[X37]%）腫瘤大?。╟m）≥5[X38][X39]（[X40]%）[X41]（[X42]%）[X43]（[X44]%）[x7][p7][x8][p8][x9][p9]<5[X45][X46]（[X47]%）[X48]（[X49]%）[X50]（[X51]%）分化程度高分化[X5][X52]（[X53]%）[X54]（[X55]%）[X56]（[X57]%）[x10][p10][x11][p11][x12][p12]中分化[X6][X58]（[X59]%）[X60]（[X61]%）[X62]（[X63]%）低分化[X7][X64]（[X65]%）[X66]（[X67]%）[X68]（[X69]%）浸潤(rùn)深度T1+T2[X70][X71]（[X72]%）[X73]（[X74]%）[X75]（[X76]%）[x13][p13][x14][p14][x15][p15]T3+T4[X77][X78]（[X79]%）[X80]（[X81]%）[X82]（[X83]%）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有[X8][X84]（[X85]%）[X86]（[X87]%）[X88]（[X89]%）[x16][p16][x17][p17][x18][p18]無(wú)[X9][X90]（[X91]%）[X92]（[X93]%）[X94]（[X95]%）在年齡方面，≥60歲組和<60歲組患者的FHIT、Livin和Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。性別分組中，男性和女性患者的FHIT、Livin和Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。腫瘤大小分組結(jié)果顯示，腫瘤≥5cm組與<5cm組的FHIT、Livin和Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然而，在分化程度分組中，隨著食管癌組織分化程度的降低，F(xiàn)HIT基因陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)，低分化組的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于高分化組和中分化組（P<0.05）；Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率則呈逐漸上升趨勢(shì)，低分化組的Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高分化組和中分化組（P<0.05）；Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率同樣呈逐漸下降趨勢(shì)，低分化組的Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于高分化組和中分化組（P<0.05）。在浸潤(rùn)深度分組中，T3+T4組患者的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于T1+T2組（P<0.05），表明隨著腫瘤浸潤(rùn)深度的增加，F(xiàn)HIT基因表達(dá)缺失更為明顯；Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率在T3+T4組顯著高于T1+T2組（P<0.05），提示腫瘤浸潤(rùn)深度越深，Livin基因的表達(dá)水平越高；Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率在T3+T4組明顯低于T1+T2組（P<0.05），說(shuō)明腫瘤浸潤(rùn)深度與Bad基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05），表明FHIT基因表達(dá)缺失與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05），提示Livin基因的高表達(dá)可能促進(jìn)食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05），說(shuō)明Bad基因低表達(dá)與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。綜上所述，F(xiàn)HIT、Livin和Bad基因表達(dá)與食管癌患者的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，這些基因可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。4.3FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)之間的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析方法，對(duì)食管癌組織中FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表3。表3：食管癌組織中FHIT、Livin和Bad基因表達(dá)的Spearman秩相關(guān)分析（n=[X]）基因FHITLivinBadFHIT1-0.452**-0.516**Livin-0.452**10.387**Bad-0.516**0.387**1注：P<0.01結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT基因表達(dá)與Livin基因表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.452，P<0.01），即FHIT基因表達(dá)水平越低，Livin基因表達(dá)水平越高；反之，F(xiàn)HIT基因表達(dá)水平越高，Livin基因表達(dá)水平越低。這表明FHIT基因和Livin基因在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能存在相互拮抗的作用，F(xiàn)HIT基因的低表達(dá)可能無(wú)法有效抑制Livin基因的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。同時(shí)，F(xiàn)HIT基因表達(dá)與Bad基因表達(dá)也呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.516，P<0.01），意味著FHIT基因表達(dá)降低時(shí)，Bad基因表達(dá)也隨之降低。提示在食管癌中，F(xiàn)HIT基因和Bad基因可能協(xié)同參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控過(guò)程，當(dāng)FHIT基因表達(dá)缺失或下調(diào)時(shí)，可能影響B(tài)ad基因的表達(dá)和功能，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻，腫瘤細(xì)胞得以逃避機(jī)體的凋亡機(jī)制。Livin基因表達(dá)與Bad基因表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.387，P<0.01），說(shuō)明Livin基因表達(dá)升高時(shí)，Bad基因表達(dá)也升高。雖然Bad基因是促凋亡基因，Livin基因是抗凋亡基因，但在食管癌組織中二者卻呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，這可能是腫瘤細(xì)胞在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，機(jī)體的一種代償性調(diào)節(jié)機(jī)制，也可能是Livin基因通過(guò)其他途徑間接影響了Bad基因的表達(dá)和功能，具體機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。綜上所述，F(xiàn)HIT、Livin和Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)之間存在顯著的相關(guān)性，它們可能通過(guò)相互作用，共同參與食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。五、結(jié)果討論5.1FHIT基因表達(dá)與食管癌的關(guān)系本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT基因在食管癌組織中的表達(dá)明顯低于正常食管組織，無(wú)論是在mRNA水平還是蛋白質(zhì)水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與以往眾多研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了FHIT基因在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的抑制作用。在正常生理狀態(tài)下，F(xiàn)HIT基因通過(guò)多種途徑維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分化，抑制腫瘤的發(fā)生。其編碼的FHIT蛋白具有Ap3Aase活性，能夠參與細(xì)胞的能量代謝和信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程。當(dāng)細(xì)胞受到外界有害因素刺激時(shí)，F(xiàn)HIT蛋白可通過(guò)激活細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，促使受損或異常的細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而防止細(xì)胞癌變。然而，在食管癌組織中，由于染色體3p14.2區(qū)域的缺失、基因突變以及啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化等原因，導(dǎo)致FHIT基因的表達(dá)受到抑制，其正常的抑癌功能喪失。FHIT基因表達(dá)缺失或下調(diào)后，細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，細(xì)胞過(guò)度增殖，同時(shí)細(xì)胞凋亡受阻，受損或異常的細(xì)胞無(wú)法及時(shí)被清除，為腫瘤的發(fā)生發(fā)展創(chuàng)造了條件。本研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT基因表達(dá)與食管癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著食管癌組織分化程度的降低，F(xiàn)HIT基因陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)，低分化組的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于高分化組和中分化組。這表明FHIT基因表達(dá)缺失可能導(dǎo)致食管癌細(xì)胞的分化異常，使其惡性程度增加。在浸潤(rùn)深度方面，T3+T4組患者的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于T1+T2組，說(shuō)明隨著腫瘤浸潤(rùn)深度的增加，F(xiàn)HIT基因表達(dá)缺失更為明顯。這可能是因?yàn)镕HIT基因表達(dá)缺失后，食管癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)，更容易突破食管壁的正常組織結(jié)構(gòu)，向深層組織浸潤(rùn)。此外，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的FHIT基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示FHIT基因表達(dá)缺失與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。FHIT基因的低表達(dá)可能使食管癌細(xì)胞的黏附能力下降，同時(shí)上調(diào)一些與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因（如基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員等）的表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。綜上所述，F(xiàn)HIT基因在食管癌組織中的低表達(dá)是食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)重要事件，其表達(dá)缺失或下調(diào)可能通過(guò)影響細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡以及腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等多個(gè)環(huán)節(jié)，促進(jìn)食管癌的發(fā)生和發(fā)展。因此，F(xiàn)HIT基因有望成為食管癌早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的重要分子靶點(diǎn)。深入研究FHIT基因在食管癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療方法以及提高食管癌患者的生存率具有重要意義。5.2Livin基因表達(dá)與食管癌的關(guān)系本研究結(jié)果表明，Livin基因在食管癌組織中呈高表達(dá)，而在正常食管組織中幾乎不表達(dá)或僅有微弱表達(dá)，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這一結(jié)果與以往的眾多研究報(bào)道相符，進(jìn)一步證實(shí)了Livin基因在食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。Livin作為凋亡抑制蛋白家族的成員，其高表達(dá)能夠通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞凋亡是維持機(jī)體細(xì)胞數(shù)量平衡和組織器官正常功能的重要機(jī)制。當(dāng)細(xì)胞受到損傷或發(fā)生異常時(shí)，細(xì)胞凋亡信號(hào)通路被激活，促使受損或異常的細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而清除這些細(xì)胞，防止它們發(fā)展為腫瘤細(xì)胞。然而，在食管癌組織中，Livin基因的高表達(dá)使其能夠抑制Caspase家族蛋白酶的活性，阻斷細(xì)胞凋亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻，腫瘤細(xì)胞得以逃避機(jī)體的凋亡機(jī)制，從而持續(xù)增殖和存活。本研究還發(fā)現(xiàn)，Livin基因表達(dá)與食管癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨著食管癌組織分化程度的降低，Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸上升趨勢(shì)，低分化組的Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高分化組和中分化組。這表明Livin基因的高表達(dá)可能與食管癌細(xì)胞的分化異常和惡性程度增加有關(guān)。在浸潤(rùn)深度方面，T3+T4組患者的Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于T1+T2組，說(shuō)明腫瘤浸潤(rùn)深度越深，Livin基因的表達(dá)水平越高。這可能是因?yàn)長(zhǎng)ivin基因的高表達(dá)增強(qiáng)了食管癌細(xì)胞的侵襲能力，使其更容易突破食管壁的正常組織結(jié)構(gòu)，向深層組織浸潤(rùn)。此外，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的Livin基因陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示Livin基因的高表達(dá)可能促進(jìn)食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Livin基因可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲相關(guān)分子的表達(dá)，如上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶等的表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。綜上所述，Livin基因在食管癌組織中的高表達(dá)是食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵事件，其通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖和增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力等多種途徑，推動(dòng)食管癌的發(fā)生和發(fā)展。因此，Livin基因有望成為食管癌診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的重要分子靶點(diǎn)。針對(duì)Livin基因開(kāi)展靶向治療，如設(shè)計(jì)特異性的小分子抑制劑或RNA干擾技術(shù)來(lái)抑制Livin基因的表達(dá)，可能為食管癌的治療提供新的策略。同時(shí)，深入研究Livin基因在食管癌中的作用機(jī)制以及與其他相關(guān)基因的相互作用關(guān)系，對(duì)于進(jìn)一步揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制和開(kāi)發(fā)更有效的治療方法具有重要意義。5.3Bad基因表達(dá)與食管癌的關(guān)系本研究顯示，Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)顯著低于正常食管組織，無(wú)論是mRNA水平還是蛋白水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明Bad基因在食管癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)降低可能與食管癌的發(fā)生密切相關(guān)。作為Bcl-2家族的促凋亡成員，Bad基因通過(guò)與抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL等結(jié)合，解除它們對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在正常食管組織中，Bad基因正常表達(dá)，能夠有效維持細(xì)胞凋亡與增殖的平衡，確保食管組織的正常生理功能。然而，在食管癌組織中，Bad基因表達(dá)降低，導(dǎo)致其促凋亡作用減弱，細(xì)胞凋亡受阻，腫瘤細(xì)胞得以逃避機(jī)體的凋亡機(jī)制，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Bad基因表達(dá)與食管癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)。在分化程度方面，隨著食管癌組織分化程度的降低，Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)，低分化組的Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于高分化組和中分化組。這說(shuō)明Bad基因表達(dá)缺失可能導(dǎo)致食管癌細(xì)胞的分化異常，使其惡性程度增加。腫瘤細(xì)胞的分化程度越低，其生物學(xué)行為越接近原始的未分化細(xì)胞，增殖能力越強(qiáng)，侵襲和轉(zhuǎn)移的潛能也越大。Bad基因表達(dá)降低可能通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，干擾細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制，從而導(dǎo)致食管癌細(xì)胞的分化異常。在浸潤(rùn)深度方面，T3+T4組患者的Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于T1+T2組，提示隨著腫瘤浸潤(rùn)深度的增加，Bad基因表達(dá)缺失更為明顯。腫瘤的浸潤(rùn)深度是評(píng)估食管癌病情進(jìn)展和預(yù)后的重要指標(biāo)之一，浸潤(rùn)深度越深，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞對(duì)食管壁及周圍組織的侵犯越嚴(yán)重。Bad基因表達(dá)降低可能使食管癌細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)，更容易突破食管壁的正常組織結(jié)構(gòu)，向深層組織浸潤(rùn)。這可能是因?yàn)锽ad基因表達(dá)缺失后，細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路受到抑制，細(xì)胞的黏附能力下降，同時(shí)上調(diào)一些與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因（如基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員等）的表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)生長(zhǎng)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的Bad基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，表明Bad基因低表達(dá)與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是食管癌常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移方式之一，也是影響患者預(yù)后的重要因素。Bad基因表達(dá)降低可能通過(guò)多種途徑促進(jìn)食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。一方面，Bad基因表達(dá)缺失導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻，腫瘤細(xì)胞的存活和增殖能力增強(qiáng)，使得癌細(xì)胞更容易從原發(fā)部位脫落并進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。另一方面，Bad基因表達(dá)降低可能影響腫瘤細(xì)胞與周圍組織的相互作用，改變腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。此外，相關(guān)研究表明，Bad基因表達(dá)水平還與食管癌患者對(duì)化療的敏感性密切相關(guān)。Bad基因高表達(dá)的食管癌患者對(duì)化療藥物更為敏感，化療后腫瘤細(xì)胞的凋亡率明顯增加，治療效果較好；而B(niǎo)ad基因低表達(dá)的患者對(duì)化療藥物的敏感性較低，化療效果不佳。這可能是因?yàn)榛熕幬镏饕ㄟ^(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)發(fā)揮治療作用，Bad基因作為促凋亡基因，其高表達(dá)能夠增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，從而提高化療的療效。而B(niǎo)ad基因低表達(dá)時(shí)，細(xì)胞凋亡信號(hào)通路受阻，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性增加，導(dǎo)致化療效果不理想。綜上所述，Bad基因在食管癌組織中的低表達(dá)是食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)重要事件，其通過(guò)影響細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化、腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移以及化療敏感性等多個(gè)環(huán)節(jié)，促進(jìn)食管癌的發(fā)生和發(fā)展。因此，Bad基因有望成為食管癌診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的重要分子靶點(diǎn)。深入研究Bad基因在食管癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示食管癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療方法以及提高食管癌患者的生存率具有重要意義。5.4FHIT、Livin和Bad基因聯(lián)合檢測(cè)的臨床價(jià)值本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT、Livin和Bad基因在食管癌組織中的表達(dá)均發(fā)生顯著變化，且它們之間存在密切的相關(guān)性。因此，對(duì)這三個(gè)基因進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，可能具有重要的臨床價(jià)