福建省pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.核酸雜交B.核酸復(fù)制C.核酸轉(zhuǎn)錄D.核酸反轉(zhuǎn)錄答案：B2.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始DNA合成的3'-OH末端B.提供起始DNA合成的5'-OH末端C.提供起始RNA合成的3'-OH末端D.提供起始RNA合成的5'-OH末端答案：A3.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.RNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性內(nèi)切酶答案：C4.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A5.進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，退火溫度主要取決于（）A.模板DNA的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度和GC含量C.反應(yīng)體系中的酶量D.反應(yīng)體系中的dNTP濃度答案：B6.在PCR產(chǎn)物分析中，瓊脂糖凝膠電泳的作用是（）A.擴(kuò)增DNAB.合成引物C.分離不同大小的DNA片段D.檢測(cè)DNA序列答案：C7.以下關(guān)于PCR污染的說(shuō)法，正確的是（）A.只有氣溶膠污染一種類型B.不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果C.可以通過(guò)嚴(yán)格的操作規(guī)范來(lái)避免D.主要是由設(shè)備故障引起的答案：C8.對(duì)于一個(gè)新設(shè)計(jì)的PCR引物，首先需要進(jìn)行的驗(yàn)證是（）A.特異性驗(yàn)證B.靈敏度驗(yàn)證C.穩(wěn)定性驗(yàn)證D.擴(kuò)增效率驗(yàn)證答案：A9.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.作為合成DNA的原料C.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.激活酶活性答案：B10.在PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)中，進(jìn)行樣本處理的區(qū)域是（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用包括（）A.基因診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.遺傳疾病檢測(cè)答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.反應(yīng)體系中的離子濃度答案：ABCD3.以下哪些是PCR反應(yīng)體系的組成成分（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTP答案：ABCD4.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒C.使用帶濾芯的槍頭D.單向操作流程答案：ABCD5.對(duì)于PCR產(chǎn)物的鑒定方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.酶切分析答案：ABCD6.PCR引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.長(zhǎng)度合適（一般18-25bp）B.GC含量適中（40%-60%）C.避免引物自身互補(bǔ)D.引物之間不能互補(bǔ)答案：ABCD7.在PCR實(shí)驗(yàn)中，以下哪些情況可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果（）A.污染B.引物二聚體形成C.非特異性擴(kuò)增D.反應(yīng)體系中酶量過(guò)多答案：ABC8.PCR反應(yīng)的循環(huán)參數(shù)主要包括（）A.變性溫度和時(shí)間B.退火溫度和時(shí)間C.延伸溫度和時(shí)間D.循環(huán)次數(shù)答案：ABCD9.以下關(guān)于TaqDNA聚合酶的特性，正確的有（）A.熱穩(wěn)定性高B.缺乏3'-5'外切酶活性C.催化合成DNA的方向?yàn)?'→3'D.最適反應(yīng)溫度為72℃左右答案：ABCD10.在PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理中，需要進(jìn)行的工作包括（）A.人員培訓(xùn)與考核B.儀器設(shè)備的校準(zhǔn)與維護(hù)C.試劑的質(zhì)量控制D.實(shí)驗(yàn)記錄的管理答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的濃度越高，PCR反應(yīng)的效果越好。（）答案：錯(cuò)誤3.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤4.在PCR反應(yīng)中，模板DNA可以是雙鏈也可以是單鏈。（）答案：正確5.PCR產(chǎn)物的大小只與模板DNA的大小有關(guān)。（）答案：錯(cuò)誤6.只要有PCR儀就可以進(jìn)行準(zhǔn)確的PCR實(shí)驗(yàn)。（）答案：錯(cuò)誤7.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA片段越大，遷移速度越快。（）答案：錯(cuò)誤8.一個(gè)良好的PCR引物不需要考慮其在基因組中的特異性。（）答案：錯(cuò)誤9.PCR反應(yīng)體系中的緩沖液成分對(duì)反應(yīng)結(jié)果沒有影響。（）答案：錯(cuò)誤10.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，不同區(qū)域的工作人員可以隨意走動(dòng)。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)基本步驟包括變性（90-95℃，使模板DNA雙鏈解開）、退火（根據(jù)引物的長(zhǎng)度和GC含量設(shè)定合適溫度，使引物與模板結(jié)合）、延伸（72℃左右，TaqDNA聚合酶催化合成新的DNA鏈），經(jīng)過(guò)多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)DNA的大量擴(kuò)增。2.如何減少PCR反應(yīng)中的非特異性擴(kuò)增？答案：可通過(guò)提高引物特異性、優(yōu)化退火溫度、提高模板純度、調(diào)整反應(yīng)體系中的離子濃度等方法減少非特異性擴(kuò)增。3.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)及各分區(qū)的功能。答案：一般分為試劑準(zhǔn)備區(qū)（準(zhǔn)備試劑，防止污染）、樣本制備區(qū)（處理樣本）、擴(kuò)增區(qū)（進(jìn)行DNA擴(kuò)增）、產(chǎn)物分析區(qū)（分析擴(kuò)增產(chǎn)物）。各分區(qū)應(yīng)嚴(yán)格單向操作，防止污染。4.簡(jiǎn)述PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素。答案：要考慮引物長(zhǎng)度（18-25bp）、GC含量（40%-60%）、避免自身互補(bǔ)、引物間不能互補(bǔ)、在基因組中的特異性等因素。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用及意義。答案：PCR技術(shù)可特異性擴(kuò)增新冠病毒核酸片段，快速檢測(cè)患者是否感染。其意義在于能早期診斷，及時(shí)隔離患者，對(duì)控制疫情傳播起到關(guān)鍵作用。2.闡述PCR污染的來(lái)源及防控措施的重要性。答案：污染來(lái)源包括氣溶膠、試劑交叉污染等。防控措施重要性在于避免假陽(yáng)性結(jié)果，確保檢測(cè)準(zhǔn)確性，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。3.如何提高