mRNA檢測(cè)分型不分型PCR-熒光探針?lè)ㄉ虾Ｍ妇翱迫A羅氏科蒂亞PCR-反向點(diǎn)雜交法原理基因芯片技術(shù)原理亞能生物PCR-反向點(diǎn)雜交法技術(shù)特點(diǎn)高靈敏度-PCR高特異性-核酸分子雜交高通量-膜上固定多種探針能實(shí)現(xiàn)HPV分型檢測(cè)亞能和凱普HPV基因分型產(chǎn)品對(duì)比亞能PCR+反向點(diǎn)雜交PCR+膜雜交法(實(shí)質(zhì)為PCR+反向點(diǎn)雜交)宮頸脫落細(xì)胞，疣體組織，病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞●23型●無(wú)HPV44,低危型●21型●無(wú)HPV73,83,MM4(82)而73、82型為IARC認(rèn)定的15種常見高危型之一●提取試劑只含裂解液一種成分●提取試劑分溶液I,Ⅱ,Ⅲ,提取步驟復(fù)雜PCR反應(yīng)液已分裝PCR反應(yīng)液未分裝，需人工配制反應(yīng)液全自動(dòng)核酸分子雜交手工雜交結(jié)果判讀●顯色斑點(diǎn)大，邊界清晰●判讀結(jié)果方便快捷●膜條小，顯色斑點(diǎn)小●判讀結(jié)果時(shí)需與對(duì)照卡進(jìn)行比對(duì)●有真正意義的內(nèi)部質(zhì)控●無(wú)真正意義的內(nèi)部質(zhì)控膜條尺寸：12mm×78mm膜條尺寸：22mm×22mm亞能產(chǎn)品與凱普HPV分型產(chǎn)品的比較優(yōu)勢(shì)有配套的全自動(dòng)核酸分子雜交儀檢測(cè)HPV型別多：23型有真正意義的內(nèi)部質(zhì)控可檢測(cè)更多類型的標(biāo)本，有文獻(xiàn)支持靈敏度、特異性、重復(fù)性好PCR擴(kuò)增體系預(yù)分裝顯色斑點(diǎn)大而清晰，易于進(jìn)行結(jié)果判讀HPV檢測(cè)mRNA檢測(cè)分型不分型PCR-熒光探針?lè)≒CR-熒光探針?lè)迫A羅氏科蒂亞流式熒光雜交法代表廠家：上海透景高危型人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒7種低危型(6,11,40,42,44,53,54)(無(wú)注冊(cè)證)進(jìn)口專用儀器(美國(guó)Luminex多功能流式點(diǎn)陣分析儀)流式熒光雜交法·流式熒光雜交法是將PCR產(chǎn)物和微球雜交液進(jìn)行混合，并經(jīng)過(guò)雜交，熒光素標(biāo)記，Luminex流式分析儀閱讀得到相應(yīng)微球雜交液中包含多種熒光編碼微球，每種編碼微球的表面都共價(jià)交聯(lián)有與探針特異性識(shí)別并結(jié)合相應(yīng)的靶序列，產(chǎn)物-熒光素的復(fù)合物，經(jīng)Luminex流式分析儀閱讀，可以獲得每種復(fù)合物的微球編碼及對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)強(qiáng)弱，得出檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)原理N見激光閱讀DNA提取加入PCR產(chǎn)物雜交，48℃,30minLuminex100M多功能流式點(diǎn)陣儀/Forms/Root/Chinese/JiShuZCshowaspxShowidQEoWjHIVEWVtJJDNXbKURBKUZdRQdX請(qǐng)問(wèn)HPV分型可否定量?如果可以定量以什么為標(biāo)準(zhǔn)?是否有標(biāo)準(zhǔn)品。貴試劑是否與其他試劑或測(cè)序結(jié)果做比對(duì)?謝謝透景HPVDNA分型試..腫瘤2008年5月第28卷第5期TumorVol.28,No.5,May,2008流式熒光雜交法檢測(cè)高危型人乳頭瘤病毒的臨床價(jià)值廖光東',劉彬2,陳鳳2,劉新伏2,崔劍峰2,王秀榮2,陳汶2,羅子國(guó)',喬友林2(1.重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院電鏡室，重慶400016;2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所流行病學(xué)室，北京[摘要]目的：探索流式熒光雜交法檢測(cè)高危型人乳頭瘤病毒的臨床價(jià)值。方法：收集山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)婦女的宮頸流式熒光雜交法檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為77.78%、93.59%和92.42%,陰、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為98.13%和49.30%。該人群中高危型HPV的感染率為11.7%,非瘤樣病變和子宮頸上皮內(nèi)流式熒光雜交法檢測(cè)宮頸人乳頭狀瘤病毒多重感染的臨床意義陳慶云卞美璐張小燕歐華馬莉【摘要】目的探討流式熒光雜交法檢測(cè)宮頸人乳頭狀瘤病毒(HPV)多重感染的臨床意義。方法對(duì)宮頸癌機(jī)會(huì)性篩查人群301例，組織病理學(xué)診斷≥宮頸上皮內(nèi)瘤變2級(jí)(CIN2)者48例作為病例組，組織病理學(xué)診斷為正?；蜓装Y者253例作為對(duì)照組。應(yīng)用流式熒光雜交法進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并進(jìn)行HPV多重感染分析。結(jié)果流式熒光雜交法檢測(cè)出≥CIN2宮頸病變的靈敏度、特異度分別為80.49%、80.00%。HPV多重感染總的陽(yáng)流式熒光雜交法技術(shù)總結(jié)·原理：普通PCR技術(shù)，核酸分子雜交技術(shù)和項(xiàng)目基因芯片法流式熒光雜交法DNA提取—PCR—雜交—化學(xué)顯色—判讀結(jié)果DNA提取-PCR一雜交一熒光標(biāo)記一激光判讀檢測(cè)23種HPV基因型(18種高危型和5種低危型)檢測(cè)26種HPV基因型(19種高危型和7種低危型，注冊(cè)證只批檢19高危)離心機(jī)、PCR儀、普通雜交儀離心機(jī)、PCR儀、Luminex多功能流式點(diǎn)陣分析儀宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、石蠟切片、液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞高較低高較低6小時(shí)5小時(shí)室溫下放置時(shí)間長(zhǎng)(12小時(shí))室溫下放置時(shí)間短(1小時(shí))已配制并預(yù)分裝分成引物混合液，PCR預(yù)混液，聚合酶三部分，需人工配制亞能產(chǎn)品與上海透景產(chǎn)品的比較優(yōu)勢(shì)靈敏度，特異度更高通用儀器設(shè)備可檢測(cè)更多來(lái)源的標(biāo)本標(biāo)本保存時(shí)間更長(zhǎng)PCR反應(yīng)液預(yù)分裝亞能生物亞能生物與港龍HPV基因分型對(duì)比亞能生物基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)檢測(cè)HPV型別18種高危，5種低危16種高危，10種低危離心機(jī)、普通PCR儀、普通雜交儀離心機(jī)、普通PCR儀、HPV分型基因芯片檢測(cè)閱讀系統(tǒng)宮頸脫落細(xì)胞、液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本、疣體組織、石蠟切片標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞高(1×103拷貝/毫升)低(1×10?拷貝/毫升)PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)液已分裝，減少操作人員工作量，避免污染PCR反應(yīng)液未分裝，增加操作人員工作量，帶來(lái)污染風(fēng)險(xiǎn)雜交方式單管密封雜交，避免污染在96微孔板中雜交，敞開環(huán)境，易污染。結(jié)果判讀可直接用肉眼判讀結(jié)果，無(wú)需專用設(shè)備必須用配套的基因芯片檢測(cè)閱讀系統(tǒng)來(lái)判讀結(jié)果分型基本原理：利用對(duì)抗體捕獲信號(hào)的放大和化學(xué)發(fā)光信號(hào)的檢測(cè)13種高危HPV基因型，不能提示具體的基因型捕獲判讀吸取變性劑于對(duì)照和樣本管中旋渦振蕩10秒準(zhǔn)備HPV探針混合物將已變性的樣本混勻，吸取75ul于"雜交微孔板"中20-25℃孵育10分鐘65℃孵育60分鐘HC2操作步驟-抗體捕獲及酶標(biāo)將雜交產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至"捕獲微孔板"相應(yīng)的小孔中于"捕獲"微孔板相應(yīng)的小孔中20-25℃孵育30-45分鐘HC2操作步驟-洗板及化學(xué)顯色2(化學(xué)顯色底物)于"捕獲"微孔板相應(yīng)的小孔中20-25℃孵育15-30分鐘DigenemicroplateluminometHC2如何進(jìn)行結(jié)果判讀?每次實(shí)驗(yàn)必須同時(shí)做3份陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的結(jié)果必須為10-250RLU(相對(duì)光單位)。變異系數(shù)(%CV)應(yīng)該≤25%,如果>25%,那么去掉偏離平均值最遠(yuǎn)的一個(gè)陰性對(duì)照，用剩下的兩個(gè)陰性對(duì)照計(jì)算平均值以及變異系數(shù)。%CV必須≤25%,否則，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，必須重做，無(wú)法給病人出報(bào)告應(yīng)該≤15%,如果>15%,那么去掉偏離平均值最遠(yuǎn)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，用剩下的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算平均值以及變異系數(shù)。%CV必須≤15%,否則，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，必須重做，無(wú)法給病人出報(bào)告如巢<2.0或>15,本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，必須重做。4.如果符合以上的標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果是可靠的。此時(shí)的Cutoff值(陽(yáng)性標(biāo)本評(píng)判的標(biāo)準(zhǔn))就是MμRc陰性對(duì)照平均值Cutoff值=318,所有標(biāo)本的相對(duì)光單位(RLU)應(yīng)該轉(zhuǎn)換為與Cutoff值的比值，比值大于1為陽(yáng)性，比值小于1則為陰性對(duì)照HPV基因型最小值最大值283份陰性對(duì)照，3份高危HPV標(biāo)準(zhǔn)品，2份質(zhì)控，共需額外消耗8人份試劑!Thehc2High-RiskHPVDNATestMusingHybridCapture2(hc2)technologyisanucleicacidhybridizationassaywithsignalamplificationusingmicroplatechemiluminescenceforthequalitativedetectionofthirteenhigh-risktypesofhumanpapillomavirus(HPV)DNAincervicalspecimens.批準(zhǔn)的說(shuō)明書中內(nèi)容截圖亞能生物HC2技術(shù)總結(jié)原理：采用核酸分子雜交，抗體捕獲(吸附雜交體),化學(xué)顯色不分型不能檢測(cè)HPV多重感染不定量有交叉雜交反應(yīng)手動(dòng)操作很多，步驟繁瑣每次實(shí)驗(yàn)要額外消耗8人份試劑，試劑成本高需基因雜交信號(hào)放大系統(tǒng)，設(shè)備成本高項(xiàng)目基因芯片(亞能)PCR+反向點(diǎn)雜交+化學(xué)顯色分子雜交+抗體捕獲+化學(xué)顯色分型，確定具體的基因型不能分型，僅提示是否有HPV感染檢測(cè)HPV種類檢測(cè)23種HPV基因型，18種高危，5種低危檢測(cè)13種高危型宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本高(1000copies/mL)低(100000copies/mL)無(wú)有離心機(jī)、普通PCR儀、普通雜交儀(價(jià)格低廉)基因雜交信號(hào)放大系統(tǒng)(價(jià)格昂貴)量96個(gè)或更多每次實(shí)驗(yàn)需額外消耗8人份試劑，試劑成本高亞能HPV產(chǎn)品與HC2的比較優(yōu)勢(shì)能分型檢測(cè)23種HPV基因型可檢測(cè)更多來(lái)源的標(biāo)本無(wú)交叉雜交反應(yīng)，特異性高通用儀器設(shè)備，如PCR儀和雜交儀檢測(cè)成本低定性檢測(cè)14種高危型亞能生物分型不分型學(xué)在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，整個(gè)PCR過(guò)程?；赥aqman探針1.每產(chǎn)生一條DNA鏈，就切斷一條探針2.每切斷一條探針，就產(chǎn)生一個(gè)單位信號(hào)3.信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合探針的DNA分子數(shù)成正比亞能與PCR-熒光探針?lè)▽?duì)比PCR+反向點(diǎn)雜交+化學(xué)顯色PCR+熒光標(biāo)記+發(fā)光、讀數(shù)6小時(shí)3小時(shí)宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本普通PCR儀、普通雜交儀(價(jià)格低廉)熒光定量PCR儀(價(jià)格昂貴)2/8/10/13型等分型，確定具體的基因型不分型，僅提示是否有HPV感染能檢測(cè)多重感染檢測(cè)不能檢測(cè)多重感染檢測(cè)亞能產(chǎn)品與PCR-熒光探針?lè)ǖ谋容^優(yōu)勢(shì)能分型檢測(cè)23種HPV基因型能檢測(cè)HPV多重感染可檢測(cè)更多來(lái)源的標(biāo)本特異性更高亞能生物HPV基因分型與羅氏對(duì)比羅氏原理PCR-反向點(diǎn)雜交法PCR-熒光探針?lè)▋x器設(shè)備離心機(jī)、PCR儀、雜交儀。價(jià)格低廉，適合各級(jí)實(shí)驗(yàn)室使用價(jià)格昂貴檢測(cè)HPV型別數(shù)量23種14種能否分型能標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、石蠟切片宮頸脫落細(xì)胞HPV檢測(cè)mRNA檢測(cè)分型不分型上海透景科華科蒂亞酶切信號(hào)放大法■產(chǎn)品名稱(中文):高危型人乳頭瘤狀病毒DNA檢測(cè)試劑盒(酶切信號(hào)放大法)產(chǎn)品名稱(英文):CervistaHPVHR探針針對(duì)特定目標(biāo)針對(duì)特定目標(biāo)f4片段⑤⑤