微生物的消毒和滅菌技術(shù)

一、微生物消毒和滅菌的概念

消毒：是指殺死病原微生物、但不一定能殺死細(xì)菌芽花的方法。通常用化學(xué)的方法來達(dá)到

消毒的作用.用于用于消毒的化學(xué)藥物叫做消毒劑.

滅菌：是指把物體上所有的微生物（包括細(xì)菌芽施在內(nèi)全部殺死的方法，通常用物理方法

來達(dá)到滅菌的目的。滅菌方法分為物理滅菌法和化學(xué)滅菌法.防腐：是指防止或抑制微生物生

長繁殖的方法。用于防腐的化學(xué)藥物叫做防腐劑.

無菌：不含活菌的意思，是滅菌的結(jié)果.防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的操作技術(shù)稱為無菌操

作

二、微生物的消毒方法

常用的消毒方法有物理法和化學(xué)法.物理法就是用物理方法殺滅或清除病原微生物和其他

有害生物，主要有熱消毒法、紫外線消毒法、電離輻射法、微波法等.最常用的物理消毒方法

是熱消毒法和紫外線消毒法。

熱消毒法（煮沸法：是最簡(jiǎn)單有效的消毒方法，不需要特殊設(shè)備即可進(jìn)行.殺滅繁殖型細(xì)

菌與病毒效果好，對(duì)芽胞作用較小。煮沸時(shí)間一般為10?30分鐘。金屬器械、棉織品、食

具、玻璃制品等可用煮沸消毒。但毛皮、呢絨和塑料制品等不能煮沸消毒.熱消毒法不適用于

茅胞污染的消毒

紫外線消毒法就是利用紫外線照射使微生物誘變致死，達(dá)到將被服中的有害微生物除掉

的目的。消毒用紫外線燈管有15W、20W、30W等規(guī)則。瓦數(shù)代表燈管在25~401時(shí)紫外

線輸出能量。燈管壽命一般為3000~4000小時(shí)，超過此時(shí)限效果不可靠.紫外線對(duì)一般細(xì)

菌、病毒均有殺滅作用。革蘭陰性菌最敏感，其次為革蘭陽生菌.但結(jié)核桿菌卻有較強(qiáng)抵

抗力。一般紫外線消毒對(duì)細(xì)菌芽胞無效。

紫外線廣泛用于室內(nèi)空氣消毒，如手術(shù)室、燒傷病房、傳染病房、實(shí)臉室等.燈管距地

面約2.0?2。5m高。每10?15cm2面積可設(shè)30W燈管一個(gè)，最好每照射2小時(shí)后，間歇

1小時(shí)后再照，以免臭氧濃度過高。燈管用鋁制燈罩作反向或側(cè)向照射，可用于有人在的條件

下消毒空氣。

對(duì)污染表面消毒時(shí)，燈管距表面不超過1m,燈管周圍1.5~2cm處為消毒有效范圍.消

毒時(shí)間為1~2小時(shí)。

輻射消毒有非電離輻射與電離輻射二種。前者有紫外線，紅外線和微波，后者包括丙種射

線的高能電子束（陰極射線O紅外線和微波主要依靠產(chǎn)熱殺菌。電離輻射設(shè)備昂貴，對(duì)物品

及人體有一定傷害，故使用較少。目前應(yīng)用最多為紫外線，可引起細(xì)胞成份、特別是核

酸、原漿蛋白和酸發(fā)生變化，導(dǎo)致微生物死亡。紫外線波長范圍2100?3280A,殺滅微生

物的波長為2000~3000A,以2500~2650A作用最強(qiáng)c對(duì)紫外線耐受力以真菌匏子最強(qiáng)，細(xì)

菌芽胞次之，細(xì)菌繁殖體最弱，僅少數(shù)例外。紫外線穿透力差，3000A以下者不能透過2mm

厚的普通玻璃?？諝庵袎m埃及相對(duì)濕度可降低其殺菌效果。對(duì)水的穿透力隨深度和濁度而

降低。但因使用方便，對(duì)藥品無損傷，故廣泛用于空氣及一般物品表面消毒.照射人體能發(fā)生皮

膚紅斑，紫外線眼炎和臭氧中毒等.故使用時(shí)人應(yīng)避開或用相應(yīng)的保護(hù)措施.日光曝曬亦依

靠其中的紫外線，但由于大氣層中的散射和吸收

使用，僅39%可達(dá)地面，故僅適用于耐力低的微生物，且須較長時(shí)間曝曬。超聲波消毒超

聲波是一種特殊的聲波，能貫穿固體和液體，可以在固體、液體和氣體中傳播。超聲波消毒

就是利用一些細(xì)菌對(duì)超聲波的敏感性，使一些有害微生物失去活性。例如，大腸桿菌、痢疾

桿菌、狂犬病毒、乙型腦炎病毒等?；瘜W(xué)消毒法是指利用化學(xué)藥物殺滅病原微生物的方法叫

化學(xué)消毒法?；瘜W(xué)消毒的機(jī)理是化學(xué)消毒劑作用于病原微生物，使病原體的蛋白質(zhì)產(chǎn)生不可

修復(fù)的損傷，以達(dá)到殺滅病原體的目的。

化學(xué)消毒法分為以下幾類：

1.凝固蛋白消毒劑包括酚類、酸類和醇類。

（1酚類主要有酚、來蘇、六款酚等。具有特殊氣味，殺菌力有限?？墒辜徔椘纷兩?，橡

膠類物品變脆，對(duì)皮膚有一定的刺激，故除來蘇外應(yīng)用者較少。苯酚（石炭酸（carbolic

acid:無色結(jié)晶，有特殊臭味，受潮呈粉紅色，但消毒力不減。為細(xì)胞原漿毒，對(duì)細(xì)菌繁殖型

1:80?1：110溶液，20℃30分鐘可殺死，但不能殺滅芽胞和抵抗力強(qiáng)的病毒。加肥皂可

皂化脂昉，溶解蛋白質(zhì)，促進(jìn)其滲透，加強(qiáng)消毒效應(yīng)，但毒性較大，對(duì)皮膚有刺激性，具有惡

臭，不能用于皮膚消毒。

來蘇（煤酚皂液（lysol:以47.5%甲酚和鉀皂配成。紅褐色，易溶于水，有去污作用，

殺菌力較石炭酚強(qiáng)2?5倍。常用為2~5%水溶液，可用于噴灑、擦試、浸泡容器及洗手等。

細(xì)菌繁殖型10?15分鐘可殺滅，對(duì)芽胞效果較差。六氟酚（hexochlorophane:為雙酚化合

物，微溶于水，易溶于醇、酯、醍，加堿或肥皂可促進(jìn)溶解，毒性和刺激性較少，但殺菌

力較強(qiáng).主要用于皮膚消毒。以2.5~3%六氯酚肥皂洗手可減少皮膚細(xì)菌80~90%,有報(bào)告可

產(chǎn)生神經(jīng)損害，故不宜長期使用。

(2酸類對(duì)細(xì)菌繁殖體及芽胞均有殺滅作用。但易損傷物品，故一般不用于居室消毒。5

%鹽酸可消毒洗滌食具，水果，加15%食鹽于2.5%溶液可消毒皮毛及皮革，101/kg加熱

30匕浸泡40小時(shí)。乳酸常用于空氣消毒，100m3空間用10g乳酸蒸蒸30分鐘，即可殺死葡

萄球菌及流感病毒.

(3醇類乙醇(酒精(ethylalcohol75%濃度可迅速殺滅細(xì)菌繁殖型，對(duì)一般病毒作用

較慢，對(duì)肝炎病毒作用不肯定，對(duì)真菌抱子有一定殺滅作用，對(duì)芽胞無作用。用于皮膚消

毒和體溫計(jì)浸泡消毒。因不能殺滅芽胞，故不能用于手術(shù)器械浸泡消毒。異丙醇

(isopropylalcohol對(duì)細(xì)菌殺滅能力大于乙醉，經(jīng)肺吸收可導(dǎo)致麻醉，但對(duì)皮膚無損害，可代

替乙醇應(yīng)用。

2、消毒劑

化學(xué)消毒劑的分類：

(1根據(jù)化學(xué)消毒劑對(duì)微生物的殺菌能力，可將消毒劑分成高效、中效、低效三個(gè)類別。高

效消毒劑是指可殺滅一切微生物，包括細(xì)菌、真菌、細(xì)菌芽抱、病毒的消毒劑。例如二氧化

氯、戊二酹、雙氧水等，這類消毒劑也被稱為滅菌劑.中效消毒劑是指不能殺死細(xì)菌芽抱，

但能殺死細(xì)菌繁殖體、真菌和大多數(shù)病毒的消毒劑。例如乙醇、氯制劑、煤酚皂溶液等。低

效消毒劑是指可殺滅多數(shù)細(xì)菌繁殖體、部分真菌和病毒，但不能殺滅細(xì)菌芽抱、結(jié)核桿菌

以及某些真菌和病毒的消毒劑，如洗必泰、新潔爾滅、玉潔新等。

(2根據(jù)消毒劑的化學(xué)特性，化學(xué)消毒劑可分為七大類，它們的殺菌機(jī)理和特點(diǎn)如下：

A、氧化類消毒劑：殺菌機(jī)理是釋放出新生態(tài)原子氧、氧化菌體中的活性基

團(tuán)；殺菌特點(diǎn)是作用快而強(qiáng)，能殺死所有微生物，包括細(xì)菌芽施、病毒。以表面消毒為主。

如二氧化氯、雙氧水、臭氧等。該類消毒劑為滅菌劑。

B、醛類消毒劑：殺菌機(jī)理是使蛋白變性或烷基化；殺菌特點(diǎn)是對(duì)細(xì)菌、芽胞、真菌、病

毒均有效.但溫度影響較大。如甲醛、戊二醛等。該類消毒劑可做滅菌劑使用。

C、酚類消毒劑：殺菌機(jī)理是使蛋白變性、沉淀或使酶系統(tǒng)失活；殺菌特點(diǎn)是對(duì)真菌和

部分病毒有效.

D、醇類消毒劑：殺菌機(jī)理是使蛋白變性，干擾代謝；殺菌特點(diǎn)是對(duì)細(xì)菌有效，對(duì)芽花、真

菌、病毒無效，如乙醇、乙丙醇等。該類消毒劑為中效消毒劑，只能用于一般性消毒。

E、堿、鹽類消毒劑：殺菌機(jī)理是使蛋白變性、沉淀或溶解；殺菌特點(diǎn)是能殺死細(xì)菌繁殖

體，但不能殺死細(xì)菌芽施、病毒和一些難殺死的微生物。殺菌作用弱，有強(qiáng)腐蝕性。如硝

酸、火堿、食鹽等。只能作為一般性預(yù)防消毒劑

F、鹵素類消毒劑：殺菌機(jī)理是氧化菌體中的活性基因，與氨基結(jié)合使蛋白變性。特點(diǎn)是

能殺死大部分微生物，以表面消毒為主，性質(zhì)不穩(wěn)定，殺菌效果受環(huán)境條件影響大，如次氯酸

鈉、“84”消毒液、優(yōu)氯凈等.該類消毒劑為中效消毒劑，可以作為一般消毒劑使用。

G、表面活性劑類消毒劑：殺菌機(jī)理是改變細(xì)胞膜透性，使細(xì)胞質(zhì)外漏，防礙呼吸或使蛋

白酶變性.殺菌特點(diǎn)是能殺死細(xì)菌繁殖體，但對(duì)芽抱、真菌、病毒、結(jié)核病菌作用差。堿

性、中性條件下效果好，如新潔爾滅、百毒殺等。該類消毒劑為中低效消毒劑，可以作為一

般消毒劑使用.

使用消毒劑要注意影響消毒劑消毒效果的幾個(gè)因素

1、消毒劑的濃度：殺滅微生物的基本條件，包括消毒強(qiáng)度和時(shí)間兩方面，消毒強(qiáng)度在

化學(xué)消毒時(shí)是指消毒劑使用濃度，消毒效果與消毒劑濃度和時(shí)間成正比。

2、微生物污染的種類和數(shù)量：生物的種類不同，對(duì)其消毒的效果自然不同，另外微生物數(shù)

量的多少也會(huì)影響消毒效果。

3、溫度的影響：一般來說，溫度越高效果越好。

4、相對(duì)濕度：消毒環(huán)境相對(duì)濕度對(duì)氣體消毒和熏蒸消毒的影響十分明顯，濕度過高或過

低都會(huì)影響消毒效果。二氧化氯在相對(duì)濕度50—70%殺菌效果較好。

5、酸堿度（PH值：一方面PH值對(duì)消毒劑本身的影響是會(huì)降低或提高消毒劑的活性；

另一方面PH值對(duì)微生物的影響是二氧化氯在酸性環(huán)境下殺菌效果較好.

6、有機(jī)物質(zhì)：消毒環(huán)境中的有機(jī)物質(zhì)往往能抑制或減弱消毒因子的殺菌能力，一方面有

機(jī)物包圍在微生物周圍，對(duì)微生物起到保護(hù)作用，阻礙消毒因子的穿透；另一方面在化學(xué)消

毒劑中，有機(jī)物本身也能通過化學(xué)反應(yīng)消耗一部分化學(xué)消毒劑。各種消毒劑受有機(jī)物的影

響不盡相同，二氧化氯受有機(jī)物影響較小。7、拮抗物質(zhì)：對(duì)于化學(xué)消毒方法，要注意拮抗物

質(zhì)的中和與干擾。如酸性或堿性的消毒劑會(huì)被堿性或酸性的物質(zhì)所中和，減弱其消毒作用。

而使用消毒劑時(shí)應(yīng)注意以下幾個(gè)問題：

1、選擇消毒劑的種類

2、消毒劑的使用濃度

3、消毒劑的消毒時(shí)間

4、避免消毒液被污染

5、消毒前應(yīng)將物品清洗干凈，然后再進(jìn)行消毒，否則會(huì)降低消毒效果.

6、除有特殊說明之外，不同的消毒劑不能混合使用。

三、微生物的滅菌方法

滅菌，可稱為除去或殺滅物質(zhì)中全部微生物。就一般滅菌方法來說，應(yīng)根據(jù)微生物的種

類、污染狀況、被污染物品的性質(zhì)與狀態(tài)，對(duì)下述滅菌方法可單獨(dú)或合并使用。是否達(dá)到

滅菌的目地，通常情況下要采用無菌試驗(yàn)法進(jìn)行判定。對(duì)滅菌操作時(shí)的溫度、壓力等是否

適合滅菌的條件，必須得到十分的確認(rèn)。在滅菌條件選定后，還要進(jìn)行滅菌效果的確認(rèn)，

以保證使用的各種滅菌條件適合于要?dú)绲哪繕?biāo)菌.

加熱滅菌法

使用加熱滅菌法，在溫義和壓力等規(guī)定的滅菌條件下，要達(dá)到一定的加熱時(shí)間，因滅菌物

品的性質(zhì)、滅菌容器的容積大小各異，所以，滅菌時(shí)間是從容器內(nèi)全部達(dá)到規(guī)定的溫度時(shí)開始

計(jì)算。

1、火焰滅菌法，是利用火焰加熱殺滅微生物的一種方法。本辦法以燃?xì)鉃閄,用于磁制

與金屬制口及在火焰中不會(huì)破損的物品。加熱時(shí)間通常在噴燈或酒精的火焰中加熱秒以上。

2、干熱滅菌法，是利用干熱空氣加熱殺滅微生物的一種方法。本辦法以燃?xì)鉃橹?，用于?/p>

制、金屬制若干物品，纖維制物品，礦物油、脂肪、脂肪油、試驗(yàn)藥物、固態(tài)的醫(yī)藥品等耐

高溫的物品；利用燃?xì)夂碗娔苤苯蛹訜峥諝?，將加熱的空氣進(jìn)行循環(huán)，保持干燥與高溫狀

態(tài)。通常，在以下幾種條件下進(jìn)行滅菌。135℃^145℃3?5小時(shí)；160℃~170℃2~4小時(shí);

180℃^200℃Oo5~1小時(shí)；200℃以上0.5小時(shí)以上。在密封容器中裝入醫(yī)藥品、水容液等,

這些物品屬耐高溫的物品，可用134°C?138℃的熱空氣，加熱3分鐘以上進(jìn)行滅菌。3、

高壓蒸氣滅菌法，是利用適當(dāng)溫度和壓力的飽和水蒸氣m熱殺滅微生物的一種方法。本辦法

以燃?xì)鉃闊嵩矗糜诖胖?、金屬制、橡膠制、紙制、纖維制的物品、水、培養(yǎng)寒、試驗(yàn)藥

品、試臉液體和液態(tài)醫(yī)藥品等的滅菌，總之，用于耐高溫高壓水蒸氣的物品。為確實(shí)達(dá)到滅

菌，滅菌容器中的原有空氣在操作中要從排氣中排除，進(jìn)行滅菌時(shí)，高壓蒸氣必須飽滿.

通?？稍谝韵聴l件下進(jìn)行滅菌.115℃(0.7kg/cm230分鐘；Okg/cm?20分鐘；

126℃(1o4kg/cm215分鐘。

4、流通蒸氣滅菌法，利用直接加熱的流通水蒸氣殺滅微生物的方法。本辦法以燃?xì)庾鳛闊?/p>

源，對(duì)磁制、金屬制、橡膠制、纖維制的物品、水、培養(yǎng)基、試驗(yàn)藥品、試臉液和液狀的醫(yī)

藥品等進(jìn)行滅菌。用干熱滅菌法或高壓蒸氣滅菌法，物品有變質(zhì)的危險(xiǎn)，所以在100℃流通

水蒸氣中滅菌需30~60分鐘。、5、煮沸滅菌法，利用沉沒在沸騰水中加熱殺滅微生物的一

種方法。本辦法以燃?xì)鉃槟茉?，?duì)磁制、金屬制、橡膠制、纖維制的物品、水、培養(yǎng)基、試

驗(yàn)藥品、試驗(yàn)液體、液狀的醫(yī)藥品等進(jìn)行滅菌，用干熱滅菌法和高壓蒸氣滅菌法進(jìn)行滅菌

的物品有變質(zhì)的危險(xiǎn).所以為增加殺菌效果，可以在沸騰水中加入1—2%的碳酸氫鈉。將物

品沉入沸騰水中進(jìn)行滅菌時(shí)，煮沸時(shí)間應(yīng)在15分鐘以上。6、間歇滅菌法，是利用80℃?

100℃水或流通水蒸氣，24小時(shí)為一周期，每隔30?60分鐘反復(fù)加熱3—5回；用來殺滅

微生物的一種主法。用60℃~80℃的水反復(fù)加溫也是一種間歇式低溫滅菌方法。、本辦法

主要用于以橡膠為主

的制品，培養(yǎng)基、試驗(yàn)用藥品、液體和液態(tài)狀的醫(yī)藥等。

過濾滅菌法

即用篩除或?yàn)V材吸附等物理方式除去微生物，是一種常用的滅菌方法。

有些需要滅菌的材料不能受熱，例如許多維生素溶液。因此，許多液體可以用過濾法來滅

菌。過濾法不是將微生物殺死，而是把它們排除出去c目前過濾除菌采用兩類器具，一

類叫深層濾器，例如用燒結(jié)玻璃、不上釉的陶瓷顆?；蚴迚撼傻臑V板等：另一類是濾膜。

深層濾器已經(jīng)使用了100年以上，現(xiàn)在有逐漸被濾膜取代的趨勢(shì)，但因?yàn)榇罅砍恋砦锶菀锥?/p>

塞濾膜，所以一般先用深層濾器除去大的顆粒。

濾膜一般由醋酸纖維素、硝酸纖維素、多聚碳酸酯、聚偏羸乙烯等合成纖維材料制成.濾

膜的孔徑一般為0o2微米，它可以濾除絕大多數(shù)微生物的營養(yǎng)細(xì)胞。過濾法的最大缺點(diǎn)是

不能濾除病毒.全辦法主要用于氣體、水、含有可溶性、不穩(wěn)定物質(zhì)的培養(yǎng)寒、試驗(yàn)液體

和液狀醫(yī)藥品等。通常使用的過濾裝置有膜過濾器，磁