微生物限度檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制第一頁(yè)，共54頁(yè)。優(yōu)選微生物限度檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制第二頁(yè)，共54頁(yè)。概念培養(yǎng)基具有適合細(xì)菌生長(zhǎng)需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括微生物生長(zhǎng)所需要的水分、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及某些生長(zhǎng)因子（維生素、輔酶）等。除此以外，還具備待培養(yǎng)菌適宜生長(zhǎng)的酸堿度。培養(yǎng)基是人工配制的微生物生活環(huán)境第三頁(yè)，共54頁(yè)。分類(lèi)主要用于增菌用于檢測(cè)動(dòng)力及保存菌種用于分離鑒定細(xì)菌第四頁(yè)，共54頁(yè)。分類(lèi)雙糖鐵培養(yǎng)基SS培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)基血液瓊脂培養(yǎng)基庖肉培養(yǎng)基第五頁(yè)，共54頁(yè)。概念由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性。適宜的培養(yǎng)基制備方法、儲(chǔ)存條件和質(zhì)量控制是提高優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證第六頁(yè)，共54頁(yè)。主要內(nèi)容培養(yǎng)基購(gòu)置、貯存、制備、使用注意事項(xiàng)培養(yǎng)基質(zhì)量控制常用菌株保存方法第七頁(yè)，共54頁(yè)。一、培養(yǎng)基購(gòu)置、貯存、制備、使用注意事項(xiàng)第八頁(yè)，共54頁(yè)。購(gòu)置依據(jù)ISO/IEC17025《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，對(duì)培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評(píng)價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商；應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱(chēng)及產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、使用前的pH、儲(chǔ)藏信息和有效期、性能評(píng)價(jià)和所用測(cè)試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書(shū)以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。第九頁(yè)，共54頁(yè)。驗(yàn)收購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專(zhuān)人做好接受和驗(yàn)收工作，應(yīng)仔細(xì)核對(duì)生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱(chēng)、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，滿(mǎn)足檢測(cè)方法規(guī)定的要求后方可投入使用。

第十頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的儲(chǔ)存干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長(zhǎng)保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開(kāi)封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

第十一頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備

制備培養(yǎng)基用容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長(zhǎng)。所有容器在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過(guò)一定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過(guò)滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過(guò)程中，培養(yǎng)基溢出。

第十二頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基制備用水中不能含有任何抑制或影響微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)。使用蒸餾水或與其同質(zhì)的水。最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。

第十三頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備

每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱(chēng)，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄復(fù)制復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。第十四頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱(chēng)取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱(chēng)完一種成分即在配方面軍做出記號(hào)，并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱(chēng)取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱(chēng)取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的

第十五頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備

在培養(yǎng)基分裝滅菌前，各成分應(yīng)溶解均勻。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。第十六頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的制備因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終PH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。一般滅菌前比最終pH高0.2-0.3。用1mol/LNa0H或lmol/LHCL調(diào)整。第十七頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的滅菌

已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。

第十八頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的滅菌

滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，即棄去。第十九頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的儲(chǔ)存培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱放置時(shí)間一般不宜超過(guò)一周。傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過(guò)3天。如果保存時(shí)間超過(guò)2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。配好的肉湯類(lèi)培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2周，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)第二十頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基的使用平板在接種使用時(shí)，表面必須無(wú)明顯潮濕水珠。對(duì)于冰箱保存的平板，應(yīng)待溫度回復(fù)至室溫后再使用用于沉降菌檢測(cè)的所有平板必須經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)后才可使用固體培養(yǎng)基滅菌后再融化只允許一次。第二十一頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基質(zhì)量控制第二十二頁(yè)，共54頁(yè)。由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性。因此對(duì)購(gòu)入的干培養(yǎng)基開(kāi)展質(zhì)量檢驗(yàn)驗(yàn)收是實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制的重要內(nèi)容之一。第二十三頁(yè)，共54頁(yè)。現(xiàn)有培養(yǎng)基質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)WS/T2322003商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢定規(guī)程衛(wèi)生部衛(wèi)監(jiān)發(fā)（1993）7號(hào)文件食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)控和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)第二十四頁(yè)，共54頁(yè)。質(zhì)控參數(shù)1.外觀：干粉色澤、研細(xì)度。2.溶解后培養(yǎng)基色澤、透明度、雜質(zhì)、沉淀物、硬度（凝膠強(qiáng)度）；3.滅菌后pH值；4.菌落形態(tài)、菌落大小（直徑）；5.生長(zhǎng)率第二十五頁(yè)，共54頁(yè)。計(jì)數(shù)培養(yǎng)基判斷結(jié)果干粉色澤均勻、研細(xì)度好，色澤符合要求制備好的培養(yǎng)基有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。pH值符合、硬度適宜，劃線不破、透明無(wú)沉淀物。菌落大小、形態(tài)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。第二十六頁(yè)，共54頁(yè)。選擇性培養(yǎng)基判斷結(jié)果檢查項(xiàng)目：

促生長(zhǎng)能力抑制能力指示能力第二十七頁(yè)，共54頁(yè)。事例13批4號(hào)培養(yǎng)基質(zhì)量控制第二十八頁(yè)，共54頁(yè)。編號(hào)生產(chǎn)廠家批號(hào)1××市微生物培養(yǎng)基廠0801242×××試劑有限公司0803153×市疾病預(yù)防控制中心20070821生長(zhǎng)率試驗(yàn)對(duì)照瓊脂為：哥倫比亞瓊脂，由法國(guó)生物-梅里埃公司提供，有效期至20100404第二十九頁(yè)，共54頁(yè)。質(zhì)控采用菌株生長(zhǎng)率試驗(yàn)：O1群霍亂弧菌小川型、O1群霍亂弧菌稻葉型、O139群霍亂弧菌雜菌抑制試驗(yàn)：大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌。第三十頁(yè)，共54頁(yè)。

培養(yǎng)基質(zhì)控參數(shù)

PH值

霍亂弧菌生長(zhǎng)率

雜菌抑制能力

菌落典型性第三十一頁(yè)，共54頁(yè)。

結(jié)果（一）PH值：受試培養(yǎng)基均在要求范圍內(nèi)雜菌抑制能力：采用的4株測(cè)試菌株肉湯混和物在四號(hào)平板上均無(wú)生長(zhǎng)。第三十二頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基編號(hào)O139小川稻葉1+/--+2

+-+3+++/-+四號(hào)瓊脂上菌落大于對(duì)照瓊脂-四號(hào)瓊脂上菌落小于對(duì)照瓊脂+/-四號(hào)瓊脂上菌落與對(duì)照瓊脂上相當(dāng)

稀釋菌液推皿后，置于37℃培養(yǎng)24h，作菌落計(jì)數(shù)，并觀察菌落生長(zhǎng)情況。1、所有受試四號(hào)瓊脂平板菌落的亞碲酸鉀還原良好。2、四號(hào)瓊脂上菌落生長(zhǎng)情況結(jié)果(二)第三十三頁(yè)，共54頁(yè)。編號(hào)O139生長(zhǎng)率（%）小川生長(zhǎng)率（%）稻葉生長(zhǎng)率（%）195.286.693.6292.884.195.3394.690.892.5

四號(hào)瓊脂上菌落數(shù)生長(zhǎng)率=------------------------------×100%對(duì)照瓊脂上菌落數(shù)

生長(zhǎng)率計(jì)算結(jié)果:第三十四頁(yè)，共54頁(yè)。結(jié)論3批培養(yǎng)基均為合格產(chǎn)品。第三十五頁(yè)，共54頁(yè)。事例26批SS培養(yǎng)基質(zhì)量控制第三十六頁(yè)，共54頁(yè)。培養(yǎng)基理化指標(biāo)pH值色澤硬度透明度17.10正常（橙紅）適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物26.70偏紅適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物36.90偏紅適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物47.20正常（橙紅）適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物56.80偏紅適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物66.60紫紅適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物對(duì)照7.20正常適宜、劃線不破透明、無(wú)不溶物pH值、色澤、硬度、透明度、沉淀物結(jié)果第三十七頁(yè)，共54頁(yè)。pH值、色澤、硬度、透明度、沉淀物檢測(cè)結(jié)果1、硬度、透明度、沉淀物6批培養(yǎng)基均符合要求2、pH值除1號(hào)、4號(hào)符合要求外，其他培養(yǎng)基均偏低，尤其是6號(hào)更是低至6.603、凝固后的瓊脂色澤符合性與pH值相同。第三十八頁(yè)，共54頁(yè)。24h菌落形態(tài)培養(yǎng)基鴨沙門(mén)菌ATCC50083鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC50013傷寒沙門(mén)菌ATCC50097腸炎沙門(mén)菌分離株大腸埃希菌ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小1無(wú)適中H2S適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中2H2S適中無(wú)較小無(wú)適中無(wú)較小挑紅適中3H2S適中無(wú)較小無(wú)適中H2S較小挑紅適中4H2S較大H2S適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中5無(wú)較大無(wú)適中無(wú)適中無(wú)適中挑紅適中6無(wú)適中無(wú)適中無(wú)較小無(wú)適中挑紅適中對(duì)照正常適中正常適中正常適中正常適中正常適中第三十九頁(yè)，共54頁(yè)。36h菌落形態(tài)

培養(yǎng)基鴨沙門(mén)菌ATCC50083鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC50013傷寒沙門(mén)菌ATCC50097腸炎沙門(mén)菌分離株大腸埃希菌ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小1H2S適中H2S適中H2S適中H2S適中挑紅適中2H2S適中無(wú)較小無(wú)適中H2S較小挑紅適中3H2S適中H2S適中H2S適中H2S較小挑紅適中4H2S較大H2S適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中5H2S較大無(wú)適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中6無(wú)適中無(wú)適中無(wú)較小H2S較小挑紅適中對(duì)照正常適中正常適中正常適中正常適中正常適中第四十頁(yè)，共54頁(yè)。48h菌落形態(tài)培養(yǎng)基鴨沙門(mén)菌ATCC50083鼠傷寒沙菌ATCC50013傷寒沙門(mén)菌ATCC50097腸炎沙門(mén)菌分離株大腸埃希菌ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小1H2S適中H2S適中H2S適中H2S適中挑紅適中2H2S適中無(wú)較小無(wú)較小H2S適中挑紅適中3H2S適中H2S適中H2S較小H2S適中挑紅適中4H2S較大H2S適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中5H2S較大無(wú)適中無(wú)適中H2S適中挑紅適中6H2S適中無(wú)適中H2S較小H2S較小挑紅適中對(duì)照正常適中正常適中正常適中正常適中正常適中第四十一頁(yè)，共54頁(yè)。菌落形態(tài)結(jié)果1號(hào)、4號(hào)培養(yǎng)基菌落形成H2S速度較快,大小也適中。5號(hào)、6號(hào)、3號(hào)培養(yǎng)基菌落大小適中,但形成H2S速度較慢。2號(hào)、3號(hào)培養(yǎng)基部分菌落偏小，形成H2S速度較慢。H2S形成時(shí)間：24h與36h差異明顯。36h與42h差異不明顯。第四十二頁(yè)，共54頁(yè)。菌落直徑和生長(zhǎng)率檢測(cè)結(jié)果培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC25922鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC50013志賀菌ATCC51573傷寒沙門(mén)菌ATCC50097直徑(mm)生長(zhǎng)率(%)直徑(mm)生長(zhǎng)率(%)直徑(mm)生長(zhǎng)率(%)直徑(mm)生長(zhǎng)率(%)12.5048.402..69103.952.4258.331.8871.8622.7011.762.2063.842.2341.671.8098.2032.7013.072.6070.062.3039.581.7073.6542.6031.702.78110.172.4862.501.82104.7052.6213.732.6080.792.4052.081.80111.3862.701.312.6097.742.3233.3331.80100.00對(duì)照2.90100.002.80100.002.60100.002.20100.00

第四十三頁(yè)，共54頁(yè)。項(xiàng)目1號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)外觀符合符合符合符合符合符合pH值符合7.10偏低6.70偏低6.90符合7.20偏低6.80過(guò)低6.60色澤符合偏紅偏紅符合偏紅過(guò)紅硬度、沉淀物符合符合符合符合符合符合菌落形態(tài)典型H2S遲、菌落小H2S遲、菌落小典型H2S偏遲H2S偏遲大腸菌菌落直徑2.50mm2.70mm2.70mm2.60mm2.62mm2.70mm生長(zhǎng)率48.40%11.76%13.07%31.70%13.73%1.31%沙門(mén)菌菌落直徑2.69mm2.20mm2.60mm2.78mm2.60mm2.60mm生長(zhǎng)率103.95%63.84%70.06110.1780.7997.74志賀菌菌落直徑2.42mm2.23mm2.23mm2.48mm2.40mm2.40mm生長(zhǎng)率58.3341.6739.5862.50%52.0833.33%結(jié)論合格不合格不合格合格基本合格基本合格第四十四頁(yè)，共54頁(yè)。常見(jiàn)培養(yǎng)基干粉外觀要求.doc常見(jiàn)培養(yǎng)基典型菌落形態(tài).doc增菌類(lèi)培養(yǎng)基的質(zhì)量要求.doc第四十五頁(yè)，共54頁(yè)。常用菌株保存方法第四十六頁(yè)，共54頁(yè)。質(zhì)控菌株要求標(biāo)準(zhǔn)菌株：來(lái)自國(guó)際/國(guó)家菌種保藏中心(本標(biāo)準(zhǔn)要求為ATCC菌株)或經(jīng)ISO9002認(rèn)證的經(jīng)銷(xiāo)商提供的菌株(有資質(zhì))制備儲(chǔ)備菌株和工作菌株時(shí)一次制備多份，每株菌原則上不能重復(fù)使用通常工作菌株不能再傳代，但處理得當(dāng)可再次使用第四十七頁(yè)，共54頁(yè)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株(Referencestock)標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)一次傳代獲得的一組完全相同的菌株傳代菌株應(yīng)當(dāng)完全具備標(biāo)準(zhǔn)菌株的所有性狀傳代時(shí)要保證一定的量(減少傳代次數(shù))每株菌株盡量避免多次使用采用不同的保存方法保存期限不同如凍干法,液氮法,穿刺法,液體石蠟法,斜面保存法等(見(jiàn)后)第四十八頁(yè)，共54頁(yè)。菌種保藏方法斜面冰箱保藏法液體石蠟封藏法半固體保存法液氮保存法低溫保存法冷凍真空干燥保藏法第四十九頁(yè)，共54頁(yè)。斜面冰箱保藏法：將菌種接在新鮮斜面培養(yǎng)基上，定溫培養(yǎng)長(zhǎng)出豐滿(mǎn)菌苔后，一般形成芽孢的細(xì)菌要形成芽孢，形成孢子的微生物要長(zhǎng)出孢子，貼上標(biāo)簽，放在試管架上，在棉塞部位用尼龍紙或防水紙