山西pcr上崗證考試題庫及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.體外酶促合成特異DNA片段D.體內(nèi)酶促合成特異DNA片段答案：C2.以下哪種酶是PCR反應所必需的？（）A.限制性內(nèi)切酶B.RNA聚合酶C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C3.PCR反應的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.在PCR反應中，引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.終止反應D.催化反應答案：A5.以下關于PCR循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.一般為20-30次C.循環(huán)次數(shù)越少越好D.循環(huán)次數(shù)由模板量決定，無固定范圍答案：B6.PCR產(chǎn)物的特異性取決于（）A.引物的特異性B.Taq酶的活性C.反應體系的離子強度D.反應溫度答案：A7.以下哪種物質(zhì)可能會抑制PCR反應？（）A.鎂離子B.乙二胺四乙酸（EDTA）C.核苷酸D.引物答案：B8.實時熒光定量PCR主要用于（）A.定性檢測B.定量檢測C.測序D.基因克隆答案：B9.在PCR反應中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.構(gòu)建新的DNA鏈C.穩(wěn)定反應體系D.與引物結(jié)合答案：B10.進行PCR反應時，防止污染的措施不包括（）A.嚴格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.增加循環(huán)次數(shù)D.反應后及時清理答案：C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應體系包括以下哪些成分？（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR反應的因素有（）A.引物濃度B.模板純度C.Taq酶活性D.反應溫度E.鎂離子濃度答案：ABCDE3.以下哪些是PCR技術(shù)的應用？（）A.病原體檢測B.基因分型C.遺傳疾病診斷D.法醫(yī)鑒定E.基因表達研究答案：ABCDE4.引物設計的原則包括（）A.長度合適B.避免二級結(jié)構(gòu)C.特異性高D.GC含量適中E.避免引物自身互補答案：ABCDE5.以下哪些情況可能導致PCR假陽性結(jié)果？（）A.污染B.引物二聚體形成C.非特異性擴增D.模板量過高E.酶活性過高答案：AC6.在實時熒光定量PCR中，常用的熒光標記物有（）A.SYBRGreenIB.TaqMan探針C.分子信標D.熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）探針E.溴化乙錠（EB）答案：ABCD7.PCR產(chǎn)物的純化方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳后切膠回收B.柱層析法C.磁珠法D.乙醇沉淀法E.超濾法答案：ABCDE8.以下關于TaqDNA聚合酶的特性正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.5'-3'聚合酶活性C.有一定的3'-5'外切酶活性D.擴增效率高E.對鎂離子濃度敏感答案：ABDE9.PCR反應中，緩沖液的作用包括（）A.提供穩(wěn)定的pH環(huán)境B.提供離子強度C.激活酶活性D.防止模板降解E.促進引物與模板結(jié)合答案：ABC10.為提高PCR反應的特異性，可以采取的措施有（）A.提高退火溫度B.優(yōu)化引物設計C.減少模板量D.降低Taq酶濃度E.調(diào)整鎂離子濃度答案：ABE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR可以擴增RNA。（）答案：錯誤2.引物越長，特異性越高。（）答案：正確3.TaqDNA聚合酶沒有3'-5'外切酶活性，所以PCR產(chǎn)物可能會有堿基錯配。（）答案：正確4.所有的DNA模板都可以直接用于PCR反應。（）答案：錯誤5.實時熒光定量PCR的結(jié)果可以用Ct值表示。（）答案：正確6.在PCR反應中，鎂離子濃度越高越好。（）答案：錯誤7.引物二聚體的形成會影響PCR反應的特異性。（）答案：正確8.PCR反應的退火溫度越高，特異性越高，但擴增效率可能降低。（）答案：正確9.只要有合適的引物，任何酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤10.基因表達量的高低可以通過普通PCR來準確判斷。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本步驟。答案：PCR技術(shù)的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈DNA解開為單鏈；退火是將溫度降至引物的Tm值左右（一般50-55℃），使引物與模板鏈特異性結(jié)合；延伸是在70-75℃下，TaqDNA聚合酶以dNTP為原料，按照堿基互補配對原則從引物的3'-OH端合成新的DNA鏈。2.說明引物設計時如何避免引物二聚體的形成。答案：避免引物二聚體形成可從以下方面入手：控制引物長度不過長；避免引物自身互補，尤其是3'端避免互補；調(diào)整引物的GC含量；通過軟件分析引物的二級結(jié)構(gòu)，盡量減少可能形成二聚體的結(jié)構(gòu)。3.簡述實時熒光定量PCR的定量原理。答案：實時熒光定量PCR定量原理主要基于Ct值。在PCR反應過程中，熒光信號達到設定閾值時的循環(huán)數(shù)為Ct值。起始模板量與Ct值成反比關系，通過已知起始模板量的標準品建立標準曲線，根據(jù)待測樣本的Ct值可計算出其起始模板量。4.列舉PCR反應中防止污染的三個主要措施。答案：一是嚴格分區(qū)操作，如設置試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)和擴增區(qū)等；二是使用一次性耗材，避免交叉污染；三是反應后及時清理實驗臺面和儀器設備，防止殘留DNA污染后續(xù)實驗。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在病原體檢測中PCR技術(shù)相對于傳統(tǒng)檢測方法的優(yōu)勢。答案：PCR技術(shù)在病原體檢測中的優(yōu)勢包括：靈敏度高，能檢測到微量病原體核酸；特異性強，可通過特異性引物準確檢測目標病原體；檢測速度快，數(shù)小時即可出結(jié)果；可對難以培養(yǎng)的病原體進行檢測，不受病原體生長特性限制。2.闡述影響PCR產(chǎn)物特異性的因素以及如何優(yōu)化。答案：影響因素有引物特異性、反應溫度、模板純度等。優(yōu)化方法為精心設計特異性高的引物；優(yōu)化退火溫度找到合適值；提高模板純度，減少雜質(zhì)干擾等。3.討論如何根據(jù)不同的實驗目的選擇合適的PCR類型（如普通PCR、實時熒光定量PCR等）。答案：若僅需檢測是否存在目的基