高效液相色譜法（HPLC）教學(xué)課件導(dǎo)論第一章：色譜學(xué)基礎(chǔ)與HPLC簡(jiǎn)介色譜法的誕生與發(fā)展11903年俄國植物學(xué)家米哈伊爾·茨維特（MikhailTswett）在研究植物色素時(shí)首次提出色譜法概念，他利用碳酸鈣柱分離葉綠素和類胡蘿卜素。2名稱起源色譜法名稱源自希臘語"chroma"（顏色）和"graphein"（書寫），最初描述植物色素在柱子上形成的彩色帶狀分離現(xiàn)象。3現(xiàn)代發(fā)展色譜法基本原理色譜法的核心原理是基于不同物質(zhì)在兩相間分配系數(shù)的差異實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)混合物通過色譜系統(tǒng)時(shí)，各組分由于與固定相的親和力不同，在流動(dòng)相中的移動(dòng)速度產(chǎn)生差異，最終實(shí)現(xiàn)分離。固定相：色譜柱中的固體顆?；蛲扛苍诠腆w支持物上的液體，能夠選擇性地吸附或分配樣品中的組分流動(dòng)相：攜帶樣品通過色譜柱的液體或氣體，可以是單一組分或混合物色譜分離過程示意圖：不同組分在固定相與流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同，導(dǎo)致通過色譜柱的速度存在差異高效液相色譜法（HPLC）定義高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一種現(xiàn)代色譜分析技術(shù)，通過高壓泵系統(tǒng)驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相，強(qiáng)制其通過填充有微米級(jí)固定相顆粒的色譜柱，實(shí)現(xiàn)快速高效的組分分離。與傳統(tǒng)液相色譜相比，HPLC采用更小粒徑的填料（通常3-5μm）和更高的工作壓力（可達(dá)6000psi或更高），顯著提升了分離效率和分析速度。高分辨率能夠分離結(jié)構(gòu)相似的化合物高靈敏度可檢測(cè)微量組分，達(dá)ppb級(jí)別適用范圍廣適合非揮發(fā)性、熱不穩(wěn)定化合物分析HPLC的優(yōu)勢(shì)高分離效率能夠高效分離復(fù)雜混合物中結(jié)構(gòu)相似的組分，尤其適合分析生物樣本、藥物制劑等復(fù)雜體系樣品友好性樣品消耗少（通常微升級(jí)別），且多為非破壞性檢測(cè)，可以收集分離的組分用于后續(xù)分析定量準(zhǔn)確通過外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法可實(shí)現(xiàn)高精度定量分析，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差通常<1%，重復(fù)性好應(yīng)用廣泛廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境、生物、化工等領(lǐng)域，是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室必備的分析工具技術(shù)詳解第二章：HPLC儀器組成與工作流程了解HPLC系統(tǒng)的組成部件及工作原理，是掌握這一技術(shù)的基礎(chǔ)。每個(gè)組件都有其特定功能，共同協(xié)作完成高效分離與檢測(cè)。HPLC系統(tǒng)主要組成溶劑輸送系統(tǒng)高壓泵提供穩(wěn)定流量（0.1-10ml/min）和壓力（可達(dá)6000psi），確保流動(dòng)相以恒定或程序控制的速率通過系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)手動(dòng)進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器將微量樣品（通常5-100μL）精確注入高壓流動(dòng)相中，不干擾系統(tǒng)壓力分離柱填充有固定相的不銹鋼或聚合物柱，是分離發(fā)生的核心部位，通常長10-25cm，內(nèi)徑2.1-4.6mm檢測(cè)器連續(xù)監(jiān)測(cè)流出物，將化學(xué)信息轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，常用紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等數(shù)據(jù)系統(tǒng)計(jì)算機(jī)軟件采集、處理數(shù)據(jù)，控制儀器參數(shù)，生成色譜圖并進(jìn)行定性定量分析流動(dòng)相與固定相流動(dòng)相流動(dòng)相的選擇直接影響分離效果和選擇性，需根據(jù)樣品性質(zhì)和檢測(cè)方式選擇合適的溶劑組合。常用有機(jī)溶劑：甲醇、乙腈、四氫呋喃等水相：純水、緩沖液（磷酸鹽、醋酸鹽）添加劑：離子對(duì)試劑、pH調(diào)節(jié)劑流動(dòng)相必須高純度、無顆粒物、已脫氣，以保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行。固定相根據(jù)分離機(jī)理和樣品性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)纳V柱：反相色譜柱（C18、C8）：非極性，適合極性化合物正相色譜柱（硅膠、氨基柱）：極性，適合非極性化合物離子交換柱：分離帶電化合物尺寸排阻柱：分離不同分子量的聚合物HPLC工作流程示意圖01樣品制備與注入樣品經(jīng)過預(yù)處理（提取、過濾、濃縮等）后，通過進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器注入高壓流動(dòng)相中02流動(dòng)相攜帶高壓泵產(chǎn)生的穩(wěn)定流動(dòng)相攜帶樣品通過色譜系統(tǒng)，流動(dòng)相的組成可以恒定（等度洗脫）或隨時(shí)間變化（梯度洗脫）03柱內(nèi)分離樣品在色譜柱中各組分與固定相相互作用力不同，導(dǎo)致在流動(dòng)相中移動(dòng)速率差異，實(shí)現(xiàn)分離04檢測(cè)信號(hào)輸出檢測(cè)器連續(xù)監(jiān)測(cè)流出液，將化學(xué)信息（如吸光度、熒光、質(zhì)荷比等）轉(zhuǎn)換為電信號(hào)05數(shù)據(jù)處理與分析計(jì)算機(jī)系統(tǒng)采集數(shù)據(jù)，生成色譜圖，通過峰面積或峰高進(jìn)行定量分析，通過保留時(shí)間進(jìn)行定性分析理論基礎(chǔ)第三章：HPLC分離原理詳解深入了解HPLC的分離機(jī)制和關(guān)鍵理論參數(shù)，是科學(xué)開發(fā)方法和解決分離問題的基礎(chǔ)。分離機(jī)制吸附作用基于樣品分子與固定相表面的吸附力差異實(shí)現(xiàn)分離。分子極性越強(qiáng)，與極性固定相（如硅膠）吸附作用越強(qiáng)，保留時(shí)間越長。典型應(yīng)用：正相色譜，分離極性差異明顯的混合物分配作用基于樣品在固定相液膜與流動(dòng)相之間的溶解度差異。反相色譜中，非極性組分更易溶解在非極性固定相中，保留更強(qiáng)。典型應(yīng)用：反相色譜（C18、C8柱），最常用的HPLC分離模式離子交換基于帶電分子與固定相上離子基團(tuán)的靜電相互作用，離子電荷越高，交換作用越強(qiáng)。典型應(yīng)用：離子交換色譜，分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸等帶電分子大小排阻基于分子大小與固定相孔徑的關(guān)系，大分子無法進(jìn)入孔道而先流出，小分子進(jìn)入孔道而延遲流出。典型應(yīng)用：凝膠滲透色譜，分離具有不同分子量的聚合物或生物大分子理論板與分離效率理論板概念來源于蒸餾塔理論，用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效率。理論上，色譜柱可視為由許多"理論板"串聯(lián)而成，每個(gè)理論板上樣品組分在固定相和流動(dòng)相之間達(dá)到一次分配平衡。理論板數(shù)（N）：表示色譜柱分離能力的參數(shù)，N越大分離效率越高板高（HETP）：每個(gè)理論板所對(duì)應(yīng)的柱長度，HETP越小柱效越高其中，tR為保留時(shí)間，W1/2為峰寬的一半，L為柱長。理論板數(shù)受多種因素影響：固定相顆粒大?。侯w粒越小，理論板數(shù)越高色譜柱長度：柱子越長，理論板數(shù)越多流動(dòng)相流速：存在最佳流速使HETP最小溫度：影響擴(kuò)散速率和分配平衡現(xiàn)代HPLC柱理論板數(shù)通常在5,000-20,000之間，而毛細(xì)管色譜柱可達(dá)數(shù)十萬理論板。保留時(shí)間與保留因子色譜圖中各峰位置和相對(duì)保留情況的示意圖，展示了保留時(shí)間與保留因子的關(guān)系。保留時(shí)間（tR）組分從進(jìn)樣到被檢測(cè)器檢出所需的時(shí)間，是組分定性的基本依據(jù)。死時(shí)間（t0）：不被色譜柱保留的物質(zhì)通過系統(tǒng)的時(shí)間調(diào)整后保留時(shí)間（t'R）：t'R=tR-t0，表示組分在固定相上停留的時(shí)間保留因子（k）表示組分在固定相中停留時(shí)間與流動(dòng)相中停留時(shí)間的比值：理想k值范圍為2-10：k<2：組分保留過弱，可能與死峰重疊k>10：保留過強(qiáng)，分析時(shí)間過長，峰變寬選擇性與分辨率選擇性系數(shù)（α）表示兩相鄰組分保留因子之比：α越大，兩組分峰位置間距越大，分離越容易。通過改變流動(dòng)相組成、pH值或色譜柱類型可調(diào)節(jié)α值。分辨率（Rs）表示兩相鄰峰分離的程度：其中，W為峰寬。Rs≥1.5表示實(shí)現(xiàn)基線分離，Rs=1.0表示兩峰有約2%重疊?；痉直娣匠谭直媛逝c三個(gè)關(guān)鍵參數(shù)的關(guān)系：分別代表柱效（N）、選擇性（α）和保留因子（k）對(duì)分辨率的貢獻(xiàn)。分離優(yōu)化策略提高分辨率的方法：增加理論板數(shù)（更長的柱子或更小的填料）提高選擇性（改變流動(dòng)相或固定相）調(diào)整保留因子（改變流動(dòng)相強(qiáng)度）峰形與峰寬在理想情況下，色譜峰呈高斯分布（鐘形曲線），但實(shí)際分析中常因各種因素產(chǎn)生峰變形，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。影響峰形的因素：柱效與擴(kuò)散效應(yīng)：分子縱向擴(kuò)散與流動(dòng)相質(zhì)量傳遞的平衡樣品負(fù)載：過量樣品導(dǎo)致"峰前沿"現(xiàn)象二級(jí)相互作用：固定相上活性位點(diǎn)導(dǎo)致"拖尾"現(xiàn)象死體積：系統(tǒng)連接管路中的額外體積導(dǎo)致峰展寬峰對(duì)稱性評(píng)價(jià)：其中，a和b分別為峰中心線到峰前沿和峰尾在10%峰高處的距離。理想對(duì)稱峰As=1.0，實(shí)際分析中As=0.9-1.5通?？山邮?。良好的峰形對(duì)于定量分析至關(guān)重要。拖尾峰不僅降低分離度，還會(huì)影響峰面積積分的準(zhǔn)確性，特別是在痕量分析時(shí)。實(shí)驗(yàn)技術(shù)第四章：HPLC操作與方法開發(fā)HPLC方法開發(fā)是一個(gè)系統(tǒng)性工作，需要科學(xué)的設(shè)計(jì)思路和豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，本章介紹HPLC方法開發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和技術(shù)要點(diǎn)。流動(dòng)相的選擇與配制流動(dòng)相選擇原則極性匹配原則：流動(dòng)相極性應(yīng)與樣品極性相近，便于樣品溶解洗脫強(qiáng)度：流動(dòng)相強(qiáng)度應(yīng)適中，過強(qiáng)導(dǎo)致保留不足，過弱導(dǎo)致保留過長溶劑純度：使用色譜純?nèi)軇?，避免雜質(zhì)干擾檢測(cè)兼容性：流動(dòng)相不應(yīng)干擾檢測(cè)，如UV檢測(cè)應(yīng)選擇低截止波長的溶劑乙腈和甲醇是最常用的有機(jī)相，但二者選擇性不同。一般而言，乙腈提供更好的峰形和更低的背壓，但價(jià)格較高；甲醇價(jià)格低廉，但黏度較大，可能導(dǎo)致背壓升高。pH調(diào)節(jié)與緩沖系統(tǒng)對(duì)于含電離基團(tuán)的樣品，pH值會(huì)顯著影響其保留行為：控制樣品電離狀態(tài)，影響其極性和保留時(shí)間常用緩沖系統(tǒng)：磷酸鹽（pH2-8）、醋酸鹽（pH4-6）、碳酸鹽（pH9-11）緩沖容量應(yīng)足夠（通常10-50mM），確保pH穩(wěn)定注意緩沖鹽的溶解度和與有機(jī)相的兼容性流動(dòng)相使用前應(yīng)充分脫氣（超聲或在線脫氣），避免氣泡干擾檢測(cè)或損傷泵系統(tǒng)。柱溫與流速控制柱溫控制溫度是影響色譜分離的重要參數(shù)，適當(dāng)?shù)臏囟瓤刂瓶梢裕禾岣呱V柱效率：溫度升高降低流動(dòng)相黏度，減小質(zhì)量傳遞阻力改善峰形：某些情況下可減少峰拖尾縮短分析時(shí)間：溫度每升高10℃，保留時(shí)間通常減少10-20%提高重現(xiàn)性：避免實(shí)驗(yàn)室溫度波動(dòng)對(duì)結(jié)果的影響常用柱溫范圍為25-60℃，超過60℃可能導(dǎo)致固定相熱降解，尤其是硅膠基質(zhì)柱。流速優(yōu)化流速選擇需平衡分析時(shí)間、柱效和系統(tǒng)壓力：范登特曲線（VanDeemtercurve）表明每種色譜柱都存在最佳流速，使理論板高最小典型分析柱（4.6mm內(nèi)徑）的最佳流速通常在0.8-2.0ml/min流速過高會(huì)導(dǎo)致柱壓過大，降低柱壽命微孔柱（≤2.1mm內(nèi)徑）需使用較低流速，通常0.2-0.5ml/min流速的選擇還需考慮檢測(cè)器的響應(yīng)時(shí)間和檢測(cè)池體積，確保不丟失分離度。范登特曲線：展示了流速與理論板高的關(guān)系，幫助確定最佳流速。在最佳流速點(diǎn)，理論板高最小，分離效率最高。進(jìn)樣技術(shù)1手動(dòng)進(jìn)樣使用微量注射器和進(jìn)樣閥進(jìn)行樣品注入：成本低，適合樣品量少的實(shí)驗(yàn)室操作技巧要求高，精度和重現(xiàn)性較自動(dòng)進(jìn)樣差通常使用定量環(huán)（1-100μL）確保進(jìn)樣體積一致2自動(dòng)進(jìn)樣通過自動(dòng)進(jìn)樣器實(shí)現(xiàn)程序控制的樣品注入：進(jìn)樣精度高，通常RSD<0.5%可實(shí)現(xiàn)無人值守的大批量樣品分析可程序設(shè)置進(jìn)樣體積、清洗次數(shù)等參數(shù)部分自動(dòng)進(jìn)樣器具備樣品預(yù)處理功能（稀釋、衍生化等）進(jìn)樣量對(duì)色譜的影響進(jìn)樣量需根據(jù)樣品濃度、檢測(cè)靈敏度和分離要求合理選擇：過大的進(jìn)樣量會(huì)導(dǎo)致柱負(fù)荷過高，造成峰展寬和分離度下降過小的進(jìn)樣量可能導(dǎo)致靈敏度不足，特別是痕量分析分析柱（4.6mm內(nèi)徑）通常進(jìn)樣10-20μL，微孔柱（≤2.1mm）通常進(jìn)樣1-5μL進(jìn)樣溶劑應(yīng)與流動(dòng)相相似或更弱，避免樣品溶劑效應(yīng)梯度洗脫與等度洗脫梯度洗脫與等度洗脫色譜圖比較：梯度洗脫在復(fù)雜樣品分析中顯示出更好的峰形和分離效果。等度洗脫（IsocraticElution）整個(gè)分析過程中流動(dòng)相組成保持不變：優(yōu)點(diǎn)：系統(tǒng)簡(jiǎn)單，平衡快，重現(xiàn)性好，適合常規(guī)分析缺點(diǎn)：面對(duì)復(fù)雜樣品時(shí)存在"保留困境"——早期峰分離不足，后期峰展寬嚴(yán)重梯度洗脫（GradientElution）分析過程中流動(dòng)相組成按程序變化，通常是有機(jī)相比例逐漸增加：優(yōu)點(diǎn)：可解決"保留困境"，提高復(fù)雜樣品分離度，改善峰形缺點(diǎn)：系統(tǒng)要求高，需梯度泵；柱平衡時(shí)間長，重現(xiàn)性挑戰(zhàn)大梯度設(shè)計(jì)參數(shù)包括：起始和終止組成、梯度斜率、梯度形狀（線性/階梯/凹凸）等。一般而言，梯度洗脫每增加10%有機(jī)相，樣品保留因子減少2-3倍。復(fù)雜樣品通常從低有機(jī)相含量（5-10%）開始，逐漸增至高含量（90-100%）。方法開發(fā)步驟目標(biāo)分析物性質(zhì)研究收集分析物的基本信息：物理化學(xué)性質(zhì)：分子量、溶解度、極性、穩(wěn)定性酸堿性：pKa值，預(yù)測(cè)電離狀態(tài)光譜特性：UV吸收波長，用于確定檢測(cè)條件樣品來源與復(fù)雜度：基質(zhì)成分，潛在干擾物色譜模式與柱型選擇根據(jù)樣品特性選擇合適的分離模式：非極性/弱極性化合物：反相色譜（C18、C8、苯基）極性化合物：正相色譜或HILIC模式帶電化合物：離子對(duì)色譜或離子交換大分子：尺寸排阻色譜流動(dòng)相組成優(yōu)化系統(tǒng)篩選流動(dòng)相組分及比例：有機(jī)相類型（甲醇、乙腈）及比例pH值調(diào)節(jié)及緩沖系統(tǒng)選擇添加劑（離子對(duì)試劑、胺類改性劑）方法參數(shù)優(yōu)化精細(xì)調(diào)節(jié)各項(xiàng)參數(shù)：等度或梯度程序設(shè)計(jì)流速與柱溫優(yōu)化進(jìn)樣量與進(jìn)樣溶劑調(diào)整檢測(cè)器參數(shù)（波長、增益等）方法驗(yàn)證評(píng)估方法的關(guān)鍵性能：精密度：重復(fù)性、中間精密度準(zhǔn)確度：回收率測(cè)定線性范圍與定量限穩(wěn)定性：溶液穩(wěn)定性、方法穩(wěn)健性數(shù)據(jù)分析第五章：HPLC檢測(cè)器與數(shù)據(jù)處理檢測(cè)系統(tǒng)是HPLC的"眼睛"，將分離后的組分轉(zhuǎn)換為可測(cè)量的信號(hào)，而數(shù)據(jù)處理則是提取分析信息的關(guān)鍵步驟。常用檢測(cè)器類型紫外-可見檢測(cè)器（UV-Vis）基于化合物對(duì)特定波長光的吸收，是HPLC最常用的檢測(cè)器。定長波檢測(cè)器：?jiǎn)我还潭úㄩL，成本低可變波長檢測(cè)器：可選擇單一波長，靈活性高二極管陣列檢測(cè)器（DAD/PDA）：可同時(shí)記錄全波段光譜，用于峰純度檢查和定性輔助檢測(cè)范圍：10^-8-10^-9g/mL，適用于含發(fā)色團(tuán)（C=C、C=O、芳香環(huán)等）的化合物熒光檢測(cè)器（FLD）基于化合物吸收特定波長光后發(fā)射熒光的原理。高靈敏度：比UV檢測(cè)靈敏10-1000倍高選擇性：可通過優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射波長提高選擇性檢測(cè)范圍：10^-9-10^-12g/mL適用于天然熒光物質(zhì)（如多環(huán)芳烴）或經(jīng)熒光衍生化的化合物（如氨基酸、胺類）質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）基于化合物電離后質(zhì)荷比（m/z）的檢測(cè)。提供分子量和結(jié)構(gòu)信息，用于化合物鑒定高靈敏度和高選擇性，特別是選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）模式多級(jí)質(zhì)譜（MSn）可獲得更詳細(xì)的結(jié)構(gòu)信息檢測(cè)范圍：10^-9-10^-12g/mL，適用于復(fù)雜樣品分析和未知化合物鑒定其他檢測(cè)器根據(jù)樣品特性可選擇不同檢測(cè)原理的檢測(cè)器。示差折光檢測(cè)器（RID）：測(cè)量樣品與參比流動(dòng)相折光率差異，通用型檢測(cè)器，適合糖類分析電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）：測(cè)量電活性物質(zhì)的氧化還原電流，適合神經(jīng)遞質(zhì)、酚類分析蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）：測(cè)量非揮發(fā)性溶質(zhì)產(chǎn)生的光散射，適合無顯著UV吸收的化合物色譜圖解讀峰的定量分析峰面積或峰高與組分濃度直接相關(guān)，是定量分析的基礎(chǔ)：峰面積法：積分峰下面積，受峰展寬影響小，精度高，適合大多數(shù)場(chǎng)合峰高法：測(cè)量峰頂?shù)交€的高度，受基線漂移影響小，適合窄峰和重疊峰定量方法包括：外標(biāo)法：與已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品比較，簡(jiǎn)單直接內(nèi)標(biāo)法：加入內(nèi)標(biāo)物，消除進(jìn)樣誤差，提高精度標(biāo)準(zhǔn)加入法：處理復(fù)雜基質(zhì)干擾，適合痕量分析峰的定性分析主要依據(jù)包括：保留時(shí)間匹配：與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，初步定性UV光譜比對(duì)：使用DAD檢測(cè)器獲取全波長信息質(zhì)譜確認(rèn)：提供分子量和碎片信息，結(jié)構(gòu)確認(rèn)基線噪聲影響檢測(cè)限和定量精度。信噪比（S/N）≥3為檢測(cè)限，S/N≥10為定量限。降低噪聲可通過優(yōu)化檢測(cè)參數(shù)、使用更高質(zhì)量試劑和減少電氣干擾實(shí)現(xiàn)。系統(tǒng)適用性測(cè)試系統(tǒng)適用性測(cè)試（SystemSuitabilityTest,SST）是HPLC分析前的必要步驟，用于確認(rèn)整個(gè)色譜系統(tǒng)（儀器、色譜柱、流動(dòng)相和樣品）的性能滿足分析要求。0.5%保留時(shí)間重復(fù)性連續(xù)進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)量保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。通常要求RSD≤1%，精密定量分析可能要求更嚴(yán)格（≤0.5%）。保留時(shí)間漂移可能指示色譜柱狀態(tài)變化或流動(dòng)相組成不穩(wěn)定。2000理論板數(shù)測(cè)量色譜柱的分離效率，新柱通常要求≥2000（4.6×150mmC18柱），使用中柱子應(yīng)不低于初始值的70%。理論板數(shù)顯著下降通常表明色譜柱已老化或損壞。1.5分辨率評(píng)估相鄰峰的分離程度，通常要求Rs≥1.5以確保定量準(zhǔn)確性。分辨率不足會(huì)導(dǎo)致峰面積積分誤差，尤其是痕量組分與主峰分離不良時(shí)。1.2峰對(duì)稱因子評(píng)估峰形對(duì)稱性，理想值為1.0，通常要求在0.8-1.5范圍內(nèi)。峰拖尾（>1.5）可能是由于二級(jí)相互作用，峰前沿（<0.8）通常與柱負(fù)荷過大有關(guān)。系統(tǒng)適用性測(cè)試應(yīng)在每次分析前或定期進(jìn)行，結(jié)果應(yīng)記錄并趨勢(shì)分析，及時(shí)發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性能變化。不滿足適用性要求的系統(tǒng)不應(yīng)用于正式分析。實(shí)際應(yīng)用第六章：HPLC應(yīng)用實(shí)例與案例分析HPLC技術(shù)以其卓越的分離能力和靈活性，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境等多個(gè)領(lǐng)域，成為現(xiàn)代分析實(shí)驗(yàn)室的核心工具。醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用藥物純度檢測(cè)與雜質(zhì)分析藥物純度是保證藥效和安全性的關(guān)鍵，HPLC是藥物質(zhì)量控制的核心技術(shù)：原料藥含量測(cè)定：通常采用反相HPLC，DAD檢測(cè)相關(guān)物質(zhì)測(cè)定：檢測(cè)微量雜質(zhì)，要求高靈敏度和分離度手性藥物分析：使用手性柱分離藥物對(duì)映體溶出度測(cè)試：評(píng)價(jià)固體制劑的體外釋藥特性純度檢測(cè)含量測(cè)定生物樣品分析穩(wěn)定性研究其他應(yīng)用生物樣品中藥物代謝物分析生物樣品（血漿、尿液等）中藥物及代謝物分析是藥代動(dòng)力學(xué)研究的基礎(chǔ)：樣品預(yù)處理：蛋白沉淀、液液萃取或固相萃取去除基質(zhì)干擾高靈敏度要求：通常采用LC-MS/MS技術(shù)，可達(dá)ng/mL或pg/mL水平方法驗(yàn)證：按照生物分析方法驗(yàn)證指南進(jìn)行全面驗(yàn)證典型應(yīng)用案例：臨床藥物監(jiān)測(cè)（TDM）：調(diào)整個(gè)體給藥劑量藥動(dòng)學(xué)研究：了解藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄生物等效性評(píng)價(jià)：比較仿制藥與原研藥的體內(nèi)表現(xiàn)法醫(yī)毒理學(xué)分析：檢測(cè)藥物濫用或中毒食品與環(huán)境檢測(cè)食品添加劑與營養(yǎng)成分分析HPLC在食品安全與營