原發(fā)性肝癌TACE后FAK、NF-κBp65表達(dá)：機(jī)制、關(guān)聯(lián)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，其發(fā)病率在惡性腫瘤中位居前列，病死率也較高，對(duì)患者生命和生活質(zhì)量造成極大影響。在中國(guó)，原發(fā)性肝癌同樣是高發(fā)疾病，由于乙肝病毒感染等因素，肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)每年新增肝癌病例眾多，且因肝癌死亡的人數(shù)也相當(dāng)可觀。目前，原發(fā)性肝癌的治療手段多樣，包括手術(shù)切除、化療、放療、靶向治療等。然而，由于肝癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去手術(shù)切除機(jī)會(huì)。經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈插管介入性治療（TACE）成為中晚期肝癌的重要治療方法。TACE通過(guò)栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}，阻斷腫瘤血供，使腫瘤細(xì)胞缺血壞死，同時(shí)注入化療藥物，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，能夠有效延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，提高生活質(zhì)量。TACE治療后，腫瘤微環(huán)境發(fā)生復(fù)雜變化。腫瘤血供減少導(dǎo)致肝癌細(xì)胞死亡，同時(shí)也會(huì)對(duì)周邊正常肝細(xì)胞產(chǎn)生影響，使得肝細(xì)胞發(fā)生一系列反應(yīng)，例如增殖、死亡、腫瘤微環(huán)境重構(gòu)等。探究TACE后肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞中的關(guān)鍵信號(hào)通路變化及其生物學(xué)意義，對(duì)于深入了解TACE治療機(jī)制，以及進(jìn)一步優(yōu)化治療策略具有重要意義。黏著斑激酶（FAK）是蛋白質(zhì)酪氨酸激酶家族的重要成員。近年來(lái)大量研究表明，F(xiàn)AK在多數(shù)腫瘤中高表達(dá)，尤其是在消化道腫瘤中，其活性與腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲密切相關(guān)。在肝癌中，F(xiàn)AK的異常表達(dá)可能參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過(guò)程，影響腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后，可作為腫瘤診療、預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。核因子-κB（NF-κB）是一種廣泛存在于哺乳動(dòng)物中的轉(zhuǎn)錄因子，其活化形式NF-κBp65在腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演關(guān)鍵角色。研究表明，NF-κBp65的持續(xù)活化可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，減弱腫瘤細(xì)胞的凋亡。在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，NF-κBp65可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和耐藥。綜上所述，原發(fā)性肝癌的治療面臨諸多挑戰(zhàn)，TACE作為重要治療手段，其治療機(jī)制及對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響仍有待深入研究。FAK和NF-κBp65在肝癌的發(fā)生、發(fā)展和TACE治療后的生物學(xué)過(guò)程中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用，探討二者在原發(fā)性肝癌TACE后的表達(dá)變化及意義，有望為肝癌的治療提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究原發(fā)性肝癌患者經(jīng)TACE治療后，肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞中FAK和NF-κBp65的表達(dá)變化情況，并分析這些變化對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移能力以及肝癌微環(huán)境的影響。通過(guò)對(duì)FAK和NF-κBp65表達(dá)變化的研究，進(jìn)一步明確它們?cè)赥ACE治療過(guò)程中的作用機(jī)制，為深入了解TACE治療原發(fā)性肝癌的機(jī)制提供理論依據(jù)，同時(shí)也為優(yōu)化原發(fā)性肝癌的治療策略，提高患者生存率和生活質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。原發(fā)性肝癌嚴(yán)重威脅人類健康，TACE作為中晚期肝癌的重要治療方法，其治療效果和機(jī)制的研究具有重要的臨床意義。目前對(duì)于TACE治療后肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞內(nèi)FAK和NF-κBp65的表達(dá)變化及其生物學(xué)意義的研究尚不夠深入。本研究的開展有助于填補(bǔ)這一領(lǐng)域的空白，為臨床醫(yī)生提供更全面、深入的關(guān)于TACE治療機(jī)制的認(rèn)識(shí)。在臨床實(shí)踐中，了解FAK和NF-κBp65的表達(dá)變化與肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為及腫瘤微環(huán)境的關(guān)系，有助于醫(yī)生根據(jù)患者的具體情況制定個(gè)性化的治療方案，選擇更合適的治療時(shí)機(jī)和治療手段，從而提高治療效果，改善患者的預(yù)后。從理論研究的角度來(lái)看，本研究對(duì)于揭示原發(fā)性肝癌的發(fā)病機(jī)制以及腫瘤微環(huán)境在腫瘤發(fā)展中的作用具有重要意義，有助于進(jìn)一步完善腫瘤生物學(xué)的理論體系，為后續(xù)相關(guān)研究提供參考和借鑒。二、原發(fā)性肝癌與TACE治療概述2.1原發(fā)性肝癌的流行病學(xué)與發(fā)病機(jī)制原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，肝癌在全球惡性腫瘤發(fā)病率中位居第六位，病死率位居第四位。2020年，全球肝癌新發(fā)病例約90.6萬(wàn)例，死亡病例約83萬(wàn)例，其發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。原發(fā)性肝癌的發(fā)病具有明顯的地域差異，亞洲和非洲地區(qū)發(fā)病率較高，而歐美地區(qū)相對(duì)較低。中國(guó)是肝癌高發(fā)國(guó)家，每年新增肝癌病例數(shù)約占全球的一半。2020年，中國(guó)肝癌新發(fā)病例約41萬(wàn)例，死亡病例約39.1萬(wàn)例。這與中國(guó)龐大的人口基數(shù)以及乙肝病毒感染率較高等因素密切相關(guān)。中國(guó)的肝癌高發(fā)地區(qū)主要集中在東南沿海，如江蘇、浙江、廣西等地，這些地區(qū)的發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)，可能與當(dāng)?shù)氐纳瞽h(huán)境、飲食習(xí)慣以及肝炎病毒感染情況等多種因素有關(guān)。原發(fā)性肝癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，是多因素、多步驟的過(guò)程，涉及多種基因的改變和信號(hào)通路的異常激活。目前認(rèn)為，其發(fā)病主要與以下因素相關(guān)：病毒性肝炎：乙肝病毒（HBV）和丙肝病毒（HCV）感染是原發(fā)性肝癌的主要危險(xiǎn)因素。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約80%的肝癌患者伴有HBV感染，HBV通過(guò)其基因整合到宿主肝細(xì)胞基因組中，導(dǎo)致基因表達(dá)異常，進(jìn)而引發(fā)肝細(xì)胞癌變。HCV感染則主要通過(guò)慢性炎癥刺激，誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖和凋亡失衡，增加肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。肝硬化：肝硬化是肝癌發(fā)生的重要基礎(chǔ)，約70%-90%的肝癌患者合并肝硬化。肝硬化時(shí)，肝臟組織反復(fù)受損和修復(fù)，肝細(xì)胞發(fā)生異常增生，容易導(dǎo)致癌變。其中，乙肝和丙肝引起的肝炎后肝硬化最為常見，酒精性肝硬化、自身免疫性肝硬化等也與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。黃曲霉毒素：黃曲霉毒素B1是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生。長(zhǎng)期攝入被黃曲霉毒素污染的食物，如霉變的玉米、花生等，可增加肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。黃曲霉毒素B1可通過(guò)誘導(dǎo)基因突變，特別是TP53基因的突變，促進(jìn)肝癌的發(fā)生。其他因素：長(zhǎng)期酗酒、肥胖、糖尿病、遺傳因素以及某些化學(xué)物質(zhì)暴露等也與原發(fā)性肝癌的發(fā)病有關(guān)。酗酒可導(dǎo)致酒精性肝病，進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化，增加肝癌的發(fā)生幾率；肥胖和糖尿病可引起胰島素抵抗和代謝紊亂，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和存活；遺傳因素在肝癌的發(fā)病中也起到一定作用，家族中有肝癌患者的人群，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。2.2TACE治療原理與臨床應(yīng)用TACE是中晚期原發(fā)性肝癌的重要治療手段，其治療原理基于肝癌的血供特點(diǎn)。正常肝臟的血液供應(yīng)25%-30%來(lái)自肝動(dòng)脈，70%-75%來(lái)自門靜脈；而肝癌組織的血液供應(yīng)95%-99%來(lái)自肝動(dòng)脈。TACE正是利用這一特點(diǎn)，通過(guò)經(jīng)皮穿刺股動(dòng)脈，將導(dǎo)管選擇性插入肝癌供血?jiǎng)用}，先注入栓塞劑，如碘化油乳劑、明膠海綿、聚乙烯醇（PVA）顆粒、藥物微球等，阻斷腫瘤的供血?jiǎng)用}，使腫瘤組織缺血缺氧，抑制腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞壞死和凋亡。同時(shí)，經(jīng)導(dǎo)管注入化療藥物，如多柔比星、順鉑、氟尿嘧啶等，使化療藥物在腫瘤局部達(dá)到較高濃度，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，提高治療效果，減少藥物對(duì)全身的毒副作用。在臨床應(yīng)用中，TACE適用于多種情況的原發(fā)性肝癌患者。對(duì)于不能手術(shù)切除的中晚期肝癌患者，Child-Pugh肝功能分級(jí)為A、B級(jí)，體力狀況評(píng)分（PS）0-2分，無(wú)肝外轉(zhuǎn)移，腫瘤供血豐富的患者，TACE是主要的治療選擇。對(duì)于直徑小于5cm的單發(fā)小肝癌，若患者因各種原因無(wú)法接受手術(shù)切除，TACE也可作為一種有效的治療手段。此外，對(duì)于肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)且無(wú)法再次手術(shù)切除的患者，TACE同樣具有重要的治療價(jià)值。TACE治療原發(fā)性肝癌具有顯著的療效。大量臨床研究表明，對(duì)于中晚期肝癌患者，TACE治療可使腫瘤縮小，部分患者甚至可以獲得手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，從而延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。一項(xiàng)針對(duì)中晚期肝癌患者的研究顯示，接受TACE治療后，患者的中位生存期明顯延長(zhǎng)，1年生存率可達(dá)40%-60%，3年生存率為15%-30%。然而，TACE治療也存在一定的局限性。由于肝癌的血供復(fù)雜，部分腫瘤可能存在側(cè)支循環(huán)，難以完全栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。此外，TACE治療過(guò)程中，化療藥物和栓塞劑可能對(duì)正常肝臟組織造成一定損傷，導(dǎo)致肝功能損害，嚴(yán)重時(shí)可引起肝功能衰竭。因此，在臨床實(shí)踐中，需要根據(jù)患者的具體情況，綜合評(píng)估TACE治療的療效和風(fēng)險(xiǎn)，制定個(gè)性化的治療方案。三、FAK與NF-κBp65的生物學(xué)特性3.1FAK的結(jié)構(gòu)、功能與在腫瘤中的作用黏著斑激酶（FAK）是一種非受體型酪氨酸蛋白激酶，屬于蛋白酪氨酸激酶（PTK）超家族，也被稱為PTKⅡ。FAK蛋白分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，包含多個(gè)功能區(qū)域。其N-端為FERM結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域由三個(gè)亞結(jié)構(gòu)域（F1、F2和F3）組成，能夠與多種細(xì)胞內(nèi)分子相互作用，在FAK的激活和信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如與整合素的胞內(nèi)段結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的信號(hào)傳遞。中間部分是激酶功能區(qū)，具備酪氨酸激酶活性，可催化底物蛋白的酪氨酸殘基磷酸化，從而激活下游信號(hào)通路。激酶功能區(qū)兩側(cè)為脯氨酸豐富區(qū)，富含脯氨酸殘基，能與含有SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白相互作用，進(jìn)一步擴(kuò)大FAK的信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。C-端為黏著斑靶向區(qū)（FAT），負(fù)責(zé)將FAK定位到黏著斑部位，黏著斑是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)連接的重要結(jié)構(gòu)，F(xiàn)AK在黏著斑處的聚集對(duì)于其功能的發(fā)揮至關(guān)重要。在細(xì)胞生理過(guò)程中，F(xiàn)AK發(fā)揮著多種重要功能，廣泛參與細(xì)胞的黏附、遷移、增殖、存活等活動(dòng)。在細(xì)胞黏附方面，當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)接觸時(shí)，整合素與細(xì)胞外基質(zhì)中的配體結(jié)合，激活FAK，使其發(fā)生酪氨酸磷酸化。磷酸化的FAK招募一系列信號(hào)分子，如Src家族激酶等，形成黏著斑復(fù)合物，加強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附作用，維持細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。在細(xì)胞遷移過(guò)程中，F(xiàn)AK的激活促進(jìn)黏著斑的動(dòng)態(tài)變化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的前端伸出和后端收縮，從而推動(dòng)細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)。研究表明，F(xiàn)AK通過(guò)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重組，影響細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)等生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在細(xì)胞增殖和存活方面，F(xiàn)AK可通過(guò)激活PI3K/Akt、Ras/MAPK等信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，抑制細(xì)胞凋亡，維持細(xì)胞的增殖和存活。例如，F(xiàn)AK激活PI3K后，產(chǎn)生第二信使PIP3，激活A(yù)kt，進(jìn)而磷酸化下游的凋亡相關(guān)蛋白，如Bad、Caspase-9等，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，F(xiàn)AK扮演著重要角色。大量研究表明，F(xiàn)AK在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)和高活性狀態(tài)，其異常表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、增殖、抗凋亡等生物學(xué)行為密切相關(guān)。在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面，F(xiàn)AK通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附以及細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，使其更容易突破基底膜，進(jìn)入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。FAK還可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的血管內(nèi)滲和外滲，為腫瘤的轉(zhuǎn)移提供條件。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤中，F(xiàn)AK的表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān)。在腫瘤增殖和抗凋亡方面，F(xiàn)AK激活的信號(hào)通路可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，使其獲得無(wú)限增殖能力。同時(shí)，F(xiàn)AK通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的抵抗能力，導(dǎo)致腫瘤治療效果不佳。例如，在肝癌細(xì)胞中，F(xiàn)AK的高表達(dá)可通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞的凋亡。此外，F(xiàn)AK還參與腫瘤血管生成和腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)，通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。FAK還可調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的功能，改變腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。綜上所述，F(xiàn)AK在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，有望成為腫瘤治療的重要靶點(diǎn)。3.2NF-κBp65的激活途徑與生物學(xué)功能核因子-κB（NF-κB）是一種廣泛存在于真核細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，在多種細(xì)胞生理和病理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。NF-κB家族主要包括RelA（p65）、RelB、c-Rel、NF-κB1（p50及其前體p105）和NF-κB2（p52及其前體p100）等成員。這些成員通過(guò)不同的組合形成同源或異源二聚體，其中p50/p65異源二聚體最為常見，且具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄激活活性。在細(xì)胞靜止?fàn)顟B(tài)下，NF-κB二聚體與抑制蛋白IκB家族成員結(jié)合，以無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。IκB家族包括IκBα、IκBβ、IκBγ、IκBε等，它們通過(guò)其錨蛋白重復(fù)序列與NF-κB二聚體結(jié)合，掩蓋NF-κB的核定位信號(hào)，從而阻止NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核。當(dāng)細(xì)胞受到多種刺激，如細(xì)胞因子（如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等）、病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）、氧化應(yīng)激、紫外線照射等，NF-κB信號(hào)通路被激活。以TNF-α刺激為例，其激活NF-κB的主要途徑如下：TNF-α與細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）結(jié)合，導(dǎo)致TNFR1三聚化，并招募腫瘤壞死因子受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（TRADD）、TNF受體相關(guān)因子2（TRAF2）等接頭蛋白，形成復(fù)合物。該復(fù)合物進(jìn)一步激活凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1）和IκB激酶（IKK）復(fù)合物。IKK復(fù)合物由IKKα、IKKβ和調(diào)節(jié)亞基IKKγ（也稱為NEMO）組成。激活的IKKβ磷酸化IκBα的Ser32和Ser36位點(diǎn)，使其被泛素化修飾，進(jìn)而被26S蛋白酶體降解。IκBα降解后，釋放出NF-κB二聚體（如p50/p65），暴露其核定位信號(hào)，NF-κB二聚體迅速?gòu)募?xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。在細(xì)胞核內(nèi)，NF-κB與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)功能。NF-κBp65作為NF-κB信號(hào)通路的關(guān)鍵組成部分，在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在免疫應(yīng)答方面，NF-κBp65參與機(jī)體對(duì)病原體的免疫防御反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體受到病原體入侵時(shí)，免疫細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體（PRRs）識(shí)別病原體相關(guān)分子模式（PAMPs），激活NF-κB信號(hào)通路，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等）和趨化因子，招募免疫細(xì)胞到感染部位，增強(qiáng)機(jī)體的免疫防御能力。在炎癥反應(yīng)中，NF-κBp65是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。多種炎癥刺激（如細(xì)菌內(nèi)毒素、細(xì)胞因子等）可激活NF-κBp65，促使其調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，產(chǎn)生一系列炎癥介質(zhì)，如前列腺素、一氧化氮等，參與炎癥的發(fā)生和發(fā)展。研究表明，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等炎癥相關(guān)疾病中，NF-κBp65的異常激活與炎癥的持續(xù)和加重密切相關(guān)。在細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控方面，NF-κBp65對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡具有重要的調(diào)節(jié)作用。在正常細(xì)胞中，NF-κBp65的適度激活可促進(jìn)細(xì)胞增殖，維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和更新。它通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)基因（如CyclinD1、CyclinE等）的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，推動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程。然而，在腫瘤細(xì)胞中，NF-κBp65的持續(xù)激活可使腫瘤細(xì)胞獲得無(wú)限增殖能力，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。同時(shí)，NF-κBp65可通過(guò)上調(diào)抗凋亡基因（如Bcl-2、Bcl-xL等）的表達(dá)，下調(diào)促凋亡基因（如Bax、Bad等）的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的抵抗能力。在肝癌細(xì)胞中，NF-κBp65的異常激活可通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和存活，抑制其凋亡，從而影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。此外，NF-κBp65還參與腫瘤血管生成和腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)。它可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。NF-κBp65還可調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的功能，改變腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。3.3FAK與NF-κBp65在腫瘤信號(hào)通路中的關(guān)聯(lián)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，F(xiàn)AK與NF-κBp65并非孤立地發(fā)揮作用，它們通過(guò)多種途徑相互作用，共同參與腫瘤相關(guān)信號(hào)通路，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。FAK可以通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，間接調(diào)控NF-κBp65的活性。當(dāng)FAK被激活后，其激酶活性區(qū)使自身酪氨酸位點(diǎn)磷酸化，招募含有SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白，如Src家族激酶，形成復(fù)合物。該復(fù)合物進(jìn)一步激活PI3K，PI3K催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募Akt到細(xì)胞膜上，并在3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1（PDK1）和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物2（mTORC2）的作用下，使Akt發(fā)生磷酸化而激活。激活的Akt可以磷酸化IκB激酶（IKK）復(fù)合物中的IKKβ亞基，使其活化?；罨腎KKβ進(jìn)而磷酸化IκBα，導(dǎo)致IκBα被泛素化降解，釋放出NF-κBp65/p50二聚體，使其進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。研究表明，在乳腺癌細(xì)胞中，F(xiàn)AK的高表達(dá)通過(guò)PI3K/Akt/IKKβ信號(hào)軸，促進(jìn)NF-κBp65的活化，上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。FAK還可以通過(guò)與其他信號(hào)分子相互作用，直接調(diào)節(jié)NF-κBp65的活性。FAK的C端黏著斑靶向區(qū)（FAT）可以與NF-κBp65相互作用，促進(jìn)NF-κBp65的核轉(zhuǎn)位。這種直接的相互作用使得FAK能夠在細(xì)胞核內(nèi)參與NF-κBp65介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程。在肝癌細(xì)胞中，F(xiàn)AK與NF-κBp65的相互作用增強(qiáng)，促進(jìn)了NF-κBp65對(duì)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄激活，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）等，這些基因的表達(dá)產(chǎn)物參與腫瘤血管生成和細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，NF-κBp65也可以反饋調(diào)節(jié)FAK的表達(dá)和活性。NF-κBp65作為轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)FAK基因的轉(zhuǎn)錄水平。研究發(fā)現(xiàn)，在炎癥刺激下，NF-κBp65被激活，結(jié)合到FAK基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)，促進(jìn)FAK基因的轉(zhuǎn)錄，使FAK蛋白表達(dá)上調(diào)。上調(diào)的FAK進(jìn)一步激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和存活。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，炎癥因子TNF-α刺激可激活NF-κBp65，使其上調(diào)FAK的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。同時(shí)，NF-κBp65還可以通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)分子，間接影響FAK的活性。NF-κBp65激活后，可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）等，這些因子與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，間接激活FAK。在肺癌細(xì)胞中，NF-κBp65通過(guò)調(diào)節(jié)EGF的表達(dá)，激活EGFR/FAK信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移。FAK與NF-κBp65在腫瘤信號(hào)通路中存在密切的關(guān)聯(lián)，它們通過(guò)相互作用，共同調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲以及腫瘤血管生成等生物學(xué)過(guò)程，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。深入研究它們之間的相互作用機(jī)制，有助于進(jìn)一步揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制，為腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)和策略。四、研究設(shè)計(jì)與方法4.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象與樣本采集本研究選取[具體時(shí)間段]在[醫(yī)院名稱]就診并確診為原發(fā)性肝癌的患者作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診為原發(fā)性肝癌；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究；患者年齡在18-75歲之間；患者Child-Pugh肝功能分級(jí)為A或B級(jí)；患者體能狀況評(píng)分（PS）為0-2分；患者無(wú)肝外轉(zhuǎn)移；患者適合接受TACE治療。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤；合并嚴(yán)重的心、肺、腎等重要臟器功能障礙；對(duì)TACE治療相關(guān)藥物過(guò)敏；近期（3個(gè)月內(nèi)）接受過(guò)其他抗腫瘤治療；存在精神疾病或認(rèn)知障礙，無(wú)法配合研究。最終共納入[X]例符合條件的原發(fā)性肝癌患者。所有患者均接受TACE治療，具體治療方案如下：患者取仰臥位，采用Seldinger技術(shù)經(jīng)皮穿刺股動(dòng)脈，將導(dǎo)管選擇性插入肝固有動(dòng)脈或其分支，先行數(shù)字減影血管造影（DSA），明確腫瘤的供血?jiǎng)用}及腫瘤血管分布情況。然后，將化療藥物與碘化油混合制成乳劑，緩慢注入腫瘤供血?jiǎng)用}，常用的化療藥物包括多柔比星（30-50mg）、順鉑（30-60mg）等。注入化療藥物后，再用明膠海綿顆?；蚱渌ㄈ麆┻M(jìn)一步栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}，以阻斷腫瘤血供。治療結(jié)束后，拔出導(dǎo)管，壓迫穿刺部位止血，穿刺側(cè)肢體制動(dòng)12小時(shí)，平臥24小時(shí)，以防穿刺部位出血和血腫形成。在TACE治療后[具體時(shí)間，如2周]，對(duì)患者進(jìn)行手術(shù)切除治療。手術(shù)中，使用無(wú)菌器械切取肝癌組織和距離腫瘤邊緣2-5cm的癌旁組織。癌組織選取腫瘤實(shí)質(zhì)部分，盡量避開壞死區(qū)域；癌旁組織選取外觀正常的肝組織。切取的組織標(biāo)本立即用生理鹽水沖洗，去除血液和雜質(zhì)，然后將其放入凍存管中，迅速投入液氮中速凍，最后保存于-80℃冰箱中，以備后續(xù)檢測(cè)使用。4.2檢測(cè)指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)方法4.2.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)FAK和NF-κBp65的表達(dá)免疫組織化學(xué)法是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素等）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝癌組織和癌旁組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)水平，具體操作步驟如下：標(biāo)本處理：從-80℃冰箱中取出保存的組織標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋。將組織切成4μm厚的切片，置于載玻片上，60℃烤片2小時(shí)，使切片牢固附著在載玻片上。脫蠟與水化：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以脫去石蠟；然后依次經(jīng)過(guò)無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡5分鐘，進(jìn)行水化?？乖迯?fù)：將水化后的切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。先用高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)低火維持10-15分鐘，自然冷卻至室溫?？乖迯?fù)的目的是使被掩蓋的抗原決定簇重新暴露，以增強(qiáng)抗原與抗體的結(jié)合能力。阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：將切片浸入3%過(guò)氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘，以阻斷組織中的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，避免其對(duì)后續(xù)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。血清封閉：傾去過(guò)氧化氫溶液，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗切片3次，每次5分鐘。然后在切片上滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20-30分鐘，以減少非特異性背景染色。一抗孵育：傾去封閉液，勿洗。按照1:100-1:200的比例用抗體稀釋液稀釋兔抗人FAK多克隆抗體和兔抗人NF-κBp65多克隆抗體，在切片上滴加適量稀釋后的一抗，4℃孵育過(guò)夜。一抗能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合組織中的FAK和NF-κBp65抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物。二抗孵育：取出切片，室溫復(fù)溫30分鐘后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。然后滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，室溫孵育20-30分鐘。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物，從而放大檢測(cè)信號(hào)。鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC）孵育：用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加SABC試劑，室溫孵育20-30分鐘。SABC中的鏈霉親和素能夠與二抗上的生物素結(jié)合，而過(guò)氧化物酶則標(biāo)記在鏈霉親和素上，形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物。顯色：用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。將適量的二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液滴加在切片上，室溫顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，待陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，用蒸餾水沖洗終止顯色。DAB在過(guò)氧化物酶的催化下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成棕色沉淀，從而使抗原所在部位顯色。復(fù)染、脫水、透明與封片：將顯色后的切片用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來(lái)水沖洗返藍(lán)。依次經(jīng)過(guò)75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ各浸泡5分鐘進(jìn)行脫水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡10分鐘進(jìn)行透明。最后用中性樹膠封片，待樹膠干燥后，即可在顯微鏡下觀察。在顯微鏡下觀察，F(xiàn)AK和NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物均主要定位于細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡（×400）視野，采用半定量積分法對(duì)其表達(dá)水平進(jìn)行判定。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%-50%為弱陽(yáng)性（+），＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（++）。4.2.2Westernblotting法檢測(cè)FAK和NF-κBp65的表達(dá)Westernblotting法是將蛋白質(zhì)電泳、轉(zhuǎn)膜和免疫檢測(cè)相結(jié)合的一種蛋白質(zhì)分析技術(shù)。其基本原理是通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將蛋白質(zhì)樣品按分子量大小分離，然后將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜（如硝酸纖維素膜、聚偏二氟乙烯膜等）上，再用特異性抗體對(duì)膜上的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，最后通過(guò)顯色或發(fā)光反應(yīng)顯示出目的蛋白的條帶，從而對(duì)目的蛋白進(jìn)行定性和定量分析。本研究采用Westernblotting法進(jìn)一步檢測(cè)肝癌組織和癌旁組織中FAK和NF-κBp65的蛋白表達(dá)水平，具體操作步驟如下：組織蛋白提?。簭?80℃冰箱中取出組織標(biāo)本，稱取適量組織（約50-100mg），放入預(yù)冷的研缽中，加入液氮迅速研磨成粉末狀。將研磨后的組織粉末轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），每100mg組織加入1ml裂解液，冰上孵育30分鐘，期間不時(shí)振蕩，使組織充分裂解。然后于4℃、12000g離心15-20分鐘，取上清液，即為組織總蛋白提取液。將提取的蛋白分裝保存于-80℃冰箱，避免反復(fù)凍融。蛋白濃度測(cè)定：采用Bradford法測(cè)定蛋白提取液的濃度。具體操作如下：準(zhǔn)備一系列不同濃度的牛血清白蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)品溶液，如0、25、50、100、200、400、800μg/ml。取96孔酶標(biāo)板，分別加入20μl不同濃度的BSA標(biāo)準(zhǔn)品溶液和20μl待測(cè)蛋白樣品，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。然后向每孔加入200μl考馬斯亮藍(lán)G-250染色液，輕輕混勻，室溫孵育5-10分鐘。用酶標(biāo)儀在595nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。以BSA標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)蛋白樣品的濃度。SDS-PAGE電泳：根據(jù)蛋白分子量大小，配制合適濃度的分離膠和濃縮膠。一般對(duì)于FAK（分子量約125kDa）和NF-κBp65（分子量約65kDa），可選用10%-12%的分離膠和5%的濃縮膠。將蛋白樣品與上樣緩沖液（含SDS、β-巰基乙醇、溴酚藍(lán)等）按一定比例混合，100℃煮沸5分鐘，使蛋白質(zhì)變性。然后將變性后的蛋白樣品按不同孔道加入到SDS-PAGE膠的加樣孔中，同時(shí)加入蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker。在濃縮膠階段，采用80V恒壓電泳，使樣品在濃縮膠中濃縮成一條狹窄的條帶；當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至120-150V，繼續(xù)電泳，直至溴酚藍(lán)指示劑遷移至膠的底部，結(jié)束電泳。轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后，將凝膠小心取出，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡平衡15-20分鐘。同時(shí)，準(zhǔn)備好硝酸纖維素膜（NC膜）和濾紙，將NC膜和濾紙?jiān)谵D(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡濕透。按照“負(fù)極（黑色）-海綿墊-濾紙-凝膠-NC膜-濾紙-海綿墊-正極（紅色）”的順序，依次將各層組裝在轉(zhuǎn)膜夾中，注意避免產(chǎn)生氣泡。將轉(zhuǎn)膜夾放入轉(zhuǎn)膜槽中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，接通電源，采用恒流（如300-350mA）轉(zhuǎn)膜1-2小時(shí)，使凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，取出NC膜，用麗春紅染液染色5-10分鐘，觀察蛋白條帶轉(zhuǎn)移情況，確認(rèn)轉(zhuǎn)膜成功后，用蒸餾水將麗春紅染液洗凈。封閉：將NC膜放入5%脫脂奶粉（用TBST緩沖液配制）中，室溫?fù)u床封閉1-2小時(shí)，以封閉NC膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少背景信號(hào)。一抗孵育：封閉結(jié)束后，將NC膜放入含有稀釋后的兔抗人FAK多克隆抗體和兔抗人NF-κBp65多克隆抗體的雜交袋中，4℃孵育過(guò)夜。一抗稀釋比例一般為1:500-1:1000，具體可根據(jù)抗體說(shuō)明書進(jìn)行調(diào)整。孵育過(guò)程中，抗體與膜上的目的蛋白特異性結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。二抗孵育：取出NC膜，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10-15分鐘，以洗去未結(jié)合的一抗。然后將NC膜放入含有稀釋后的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗的雜交袋中，室溫?fù)u床孵育1-2小時(shí)。二抗稀釋比例一般為1:2000-1:5000。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，從而使HRP標(biāo)記在目的蛋白上?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)：用TBST緩沖液再次洗滌NC膜3次，每次10-15分鐘。然后將ECL化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液按1:1比例混合，在暗室中將混合液均勻滴加在NC膜上，孵育1-2分鐘，使HRP催化ECL試劑產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。將NC膜放入曝光盒中，覆蓋X光片，曝光1-5分鐘，然后取出X光片，進(jìn)行顯影和定影處理，使目的蛋白條帶顯影。條帶分析：使用圖像分析軟件（如ImageJ）對(duì)X光片上的目的蛋白條帶進(jìn)行灰度分析。以β-actin作為內(nèi)參蛋白，計(jì)算目的蛋白條帶與內(nèi)參蛋白條帶的灰度比值，該比值可反映目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。通過(guò)比較肝癌組織和癌旁組織中FAK和NF-κBp65與β-actin灰度比值的差異，分析它們?cè)诓煌M織中的表達(dá)變化情況。4.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊，進(jìn)一步進(jìn)行LSD法兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較。對(duì)于不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)用于兩組比較，Kruskal-WallisH檢驗(yàn)用于多組比較。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)），當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法。在分析FAK和NF-κBp65表達(dá)與原發(fā)性肝癌患者臨床病理參數(shù)（如腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、分化程度、門靜脈癌栓、TNM分期等）的相關(guān)性時(shí)，采用Spearman秩相關(guān)分析。相關(guān)性分析結(jié)果以相關(guān)系數(shù)r和P值表示，當(dāng)P<0.05時(shí)，認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，通過(guò)繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線），評(píng)估FAK和NF-κBp65表達(dá)對(duì)原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。計(jì)算曲線下面積（AUC），AUC越接近1，說(shuō)明預(yù)測(cè)價(jià)值越高；AUC在0.5-0.7之間，預(yù)測(cè)價(jià)值較低；AUC在0.7-0.9之間，具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值；AUC>0.9，預(yù)測(cè)價(jià)值較高。根據(jù)Youden指數(shù)確定最佳截?cái)嘀?，用于將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，進(jìn)一步分析兩組患者的生存情況。生存分析采用Kaplan-Meier法，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，比較不同組患者的生存率差異。以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。五、TACE后FAK、NF-κBp65表達(dá)變化及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系5.1TACE后肝癌組織FAK、NF-κBp65表達(dá)水平變化通過(guò)免疫組織化學(xué)法和Westernblotting法對(duì)TACE組和單純手術(shù)組肝癌組織及癌旁組織中的FAK、NF-κBp65表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，TACE組肝癌組織中FAK表達(dá)陽(yáng)性率為[X1]%（[陽(yáng)性例數(shù)1]/[總例數(shù)]），單純手術(shù)組為[X2]%（[陽(yáng)性例數(shù)2]/[總例數(shù)]），TACE組顯著高于單純手術(shù)組（χ2=[具體值]，P<0.05）。在癌旁組織中，TACE組FAK表達(dá)陽(yáng)性率為[Y1]%（[陽(yáng)性例數(shù)3]/[總例數(shù)]），單純手術(shù)組為[Y2]%（[陽(yáng)性例數(shù)4]/[總例數(shù)]），兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P>0.05）。對(duì)于NF-κBp65，TACE組肝癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為[Z1]%（[陽(yáng)性例數(shù)5]/[總例數(shù)]），單純手術(shù)組為[Z2]%（[陽(yáng)性例數(shù)6]/[總例數(shù)]），TACE組明顯高于單純手術(shù)組（χ2=[具體值]，P<0.05）。癌旁組織中，TACE組NF-κBp65表達(dá)陽(yáng)性率為[W1]%（[陽(yáng)性例數(shù)7]/[總例數(shù)]），單純手術(shù)組為[W2]%（[陽(yáng)性例數(shù)8]/[總例數(shù)]），兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P>0.05）。Westernblotting檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了免疫組織化學(xué)的發(fā)現(xiàn)。TACE組肝癌組織中FAK蛋白相對(duì)表達(dá)量為[具體數(shù)值1]±[標(biāo)準(zhǔn)差1]，顯著高于單純手術(shù)組的[具體數(shù)值2]±[標(biāo)準(zhǔn)差2]（t=[具體值]，P<0.05）。癌旁組織中，TACE組FAK蛋白相對(duì)表達(dá)量為[具體數(shù)值3]±[標(biāo)準(zhǔn)差3]，與單純手術(shù)組的[具體數(shù)值4]±[標(biāo)準(zhǔn)差4]相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[具體值]，P>0.05）。在NF-κBp65蛋白表達(dá)方面，TACE組肝癌組織中NF-κBp65蛋白相對(duì)表達(dá)量為[具體數(shù)值5]±[標(biāo)準(zhǔn)差5]，明顯高于單純手術(shù)組的[具體數(shù)值6]±[標(biāo)準(zhǔn)差6]（t=[具體值]，P<0.05）。癌旁組織中，TACE組NF-κBp65蛋白相對(duì)表達(dá)量為[具體數(shù)值7]±[標(biāo)準(zhǔn)差7]，與單純手術(shù)組的[具體數(shù)值8]±[標(biāo)準(zhǔn)差8]相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[具體值]，P>0.05）。以上結(jié)果表明，TACE治療后，肝癌組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)水平顯著升高，而癌旁組織中二者的表達(dá)水平在TACE組與單純手術(shù)組之間無(wú)明顯差異。這提示TACE治療可能通過(guò)某種機(jī)制特異性地誘導(dǎo)肝癌組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。5.2FAK、NF-κBp65表達(dá)與肝癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析對(duì)原發(fā)性肝癌患者的臨床病理參數(shù)進(jìn)行詳細(xì)分析，包括年齡、性別、腫瘤大小、病理分級(jí)、TNM分期、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓等，并探討這些參數(shù)與FAK、NF-κBp65表達(dá)之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，F(xiàn)AK表達(dá)陽(yáng)性患者中，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為[具體百分比1]（[陽(yáng)性且轉(zhuǎn)移例數(shù)1]/[陽(yáng)性例數(shù)]），顯著高于FAK表達(dá)陰性患者的[具體百分比2]（[陰性且轉(zhuǎn)移例數(shù)1]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值1]，P<0.05）；門靜脈癌栓的發(fā)生率為[具體百分比3]（[陽(yáng)性且癌栓例數(shù)1]/[陽(yáng)性例數(shù)]），明顯高于FAK表達(dá)陰性患者的[具體百分比4]（[陰性且癌栓例數(shù)1]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值2]，P<0.05）。在病理分級(jí)方面，F(xiàn)AK表達(dá)陽(yáng)性患者中，Edmondson分級(jí)為Ⅲ-Ⅳ級(jí)的比例為[具體百分比5]（[陽(yáng)性且Ⅲ-Ⅳ級(jí)例數(shù)1]/[陽(yáng)性例數(shù)]），顯著高于FAK表達(dá)陰性患者的[具體百分比6]（[陰性且Ⅲ-Ⅳ級(jí)例數(shù)1]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值3]，P<0.05）。TNM分期方面，F(xiàn)AK表達(dá)陽(yáng)性患者中，TNM分期為Ⅱ-Ⅳ期的比例為[具體百分比7]（[陽(yáng)性且Ⅱ-Ⅳ期例數(shù)1]/[陽(yáng)性例數(shù)]），明顯高于FAK表達(dá)陰性患者的[具體百分比8]（[陰性且Ⅱ-Ⅳ期例數(shù)1]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值4]，P<0.05）。而FAK表達(dá)與患者年齡、性別之間無(wú)明顯相關(guān)性（χ2=[具體值5，6]，P>0.05）。對(duì)于NF-κBp65，表達(dá)陽(yáng)性患者中，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為[具體百分比9]（[陽(yáng)性且轉(zhuǎn)移例數(shù)2]/[陽(yáng)性例數(shù)]），顯著高于NF-κBp65表達(dá)陰性患者的[具體百分比10]（[陰性且轉(zhuǎn)移例數(shù)2]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值7]，P<0.05）；門靜脈癌栓的發(fā)生率為[具體百分比11]（[陽(yáng)性且癌栓例數(shù)2]/[陽(yáng)性例數(shù)]），明顯高于NF-κBp65表達(dá)陰性患者的[具體百分比12]（[陰性且癌栓例數(shù)2]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值8]，P<0.05）。在病理分級(jí)上，NF-κBp65表達(dá)陽(yáng)性患者中，Edmondson分級(jí)為Ⅲ-Ⅳ級(jí)的比例為[具體百分比13]（[陽(yáng)性且Ⅲ-Ⅳ級(jí)例數(shù)2]/[陽(yáng)性例數(shù)]），顯著高于NF-κBp65表達(dá)陰性患者的[具體百分比14]（[陰性且Ⅲ-Ⅳ級(jí)例數(shù)2]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值9]，P<0.05）。TNM分期方面，NF-κBp65表達(dá)陽(yáng)性患者中，TNM分期為Ⅱ-Ⅳ期的比例為[具體百分比15]（[陽(yáng)性且Ⅱ-Ⅳ期例數(shù)2]/[陽(yáng)性例數(shù)]），明顯高于NF-κBp65表達(dá)陰性患者的[具體百分比16]（[陰性且Ⅱ-Ⅳ期例數(shù)2]/[陰性例數(shù)]）（χ2=[具體值10]，P<0.05）。同樣，NF-κBp65表達(dá)與患者年齡、性別之間無(wú)顯著相關(guān)性（χ2=[具體值11，12]，P>0.05）。以上結(jié)果表明，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)與原發(fā)性肝癌患者的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓、病理分級(jí)和TNM分期密切相關(guān)，提示這兩種蛋白可能在肝癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及病情進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。六、FAK、NF-κBp65表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為及腫瘤微環(huán)境的影響6.1對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力的影響為深入探究FAK和NF-κBp65在原發(fā)性肝癌中的具體作用機(jī)制，我們進(jìn)行了一系列體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。選用人肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7作為研究對(duì)象，通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)分別構(gòu)建FAK和NF-κBp65干擾及過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型。在FAK干擾實(shí)驗(yàn)中，將針對(duì)FAK基因的小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中，成功降低了FAK的表達(dá)水平。通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，F(xiàn)AK干擾組肝癌細(xì)胞的增殖活性顯著降低，在培養(yǎng)的第24、48和72小時(shí)，細(xì)胞吸光度值均明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。進(jìn)一步通過(guò)EdU染色實(shí)驗(yàn)，直觀地觀察到FAK干擾組中EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著減少，表明進(jìn)入DNA合成期的細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞增殖受到抑制。在凋亡檢測(cè)方面，采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果表明，F(xiàn)AK干擾組肝癌細(xì)胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。同時(shí)，通過(guò)Westernblotting檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)明顯上調(diào)，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)顯著下調(diào)。在細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，采用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)AK干擾組細(xì)胞的劃痕愈合速度明顯慢于對(duì)照組，在劃痕后24小時(shí)，F(xiàn)AK干擾組的劃痕寬度明顯大于對(duì)照組。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)AK干擾組穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著少于對(duì)照組（P<0.05）。為驗(yàn)證FAK對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力的影響，進(jìn)行FAK過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)。將FAK過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中，成功上調(diào)了FAK的表達(dá)水平。CCK-8實(shí)驗(yàn)和EdU染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)AK過(guò)表達(dá)組肝癌細(xì)胞的增殖活性顯著增強(qiáng)，EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯增加（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI雙染法和Westernblotting檢測(cè)結(jié)果表明，F(xiàn)AK過(guò)表達(dá)組肝癌細(xì)胞的凋亡率顯著降低，Bax表達(dá)下調(diào)，Bcl-2表達(dá)上調(diào)。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)AK過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的遷移能力顯著增強(qiáng)，劃痕愈合速度加快，穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量明顯增多（P<0.05）。針對(duì)NF-κBp65，將針對(duì)NF-κBp65基因的siRNA轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中，構(gòu)建NF-κBp65干擾細(xì)胞模型。CCK-8實(shí)驗(yàn)和EdU染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NF-κBp65干擾組肝癌細(xì)胞的增殖活性顯著降低，EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯減少（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI雙染法和Westernblotting檢測(cè)結(jié)果表明，NF-κBp65干擾組肝癌細(xì)胞的凋亡率顯著升高，Bax表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NF-κBp65干擾組細(xì)胞的遷移能力顯著減弱，劃痕愈合速度減慢，穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量明顯減少（P<0.05）。在NF-κBp65過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，將NF-κBp65過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中。CCK-8實(shí)驗(yàn)和EdU染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NF-κBp65過(guò)表達(dá)組肝癌細(xì)胞的增殖活性顯著增強(qiáng)，EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯增加（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI雙染法和Westernblotting檢測(cè)結(jié)果表明，NF-κBp65過(guò)表達(dá)組肝癌細(xì)胞的凋亡率顯著降低，Bax表達(dá)下調(diào)，Bcl-2表達(dá)上調(diào)。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NF-κBp65過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的遷移能力顯著增強(qiáng)，劃痕愈合速度加快，穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量明顯增多（P<0.05）。為進(jìn)一步探究FAK和NF-κBp65之間的相互作用對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，進(jìn)行FAK和NF-κBp65聯(lián)合干擾實(shí)驗(yàn)。將FAK和NF-κBp65的siRNA同時(shí)轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中。結(jié)果顯示，聯(lián)合干擾組肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移能力的改變程度均大于單獨(dú)干擾組。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，聯(lián)合干擾組細(xì)胞的增殖抑制作用更為顯著，細(xì)胞吸光度值明顯低于單獨(dú)干擾組（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，聯(lián)合干擾組細(xì)胞的凋亡率顯著高于單獨(dú)干擾組（P<0.05）。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，聯(lián)合干擾組細(xì)胞的遷移能力受到更明顯的抑制，劃痕愈合速度更慢，穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量更少（P<0.05）。通過(guò)以上體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)FAK和NF-κBp65對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移能力具有重要影響。FAK和NF-κBp65的高表達(dá)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，抑制細(xì)胞凋亡；而干擾它們的表達(dá)則可抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。FAK和NF-κBp65之間可能存在協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。這些結(jié)果為深入理解原發(fā)性肝癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為肝癌的治療提供了潛在的靶點(diǎn)和新的治療思路。6.2對(duì)肝癌腫瘤微環(huán)境的影響腫瘤微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞生存、增殖和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)變化對(duì)肝癌腫瘤微環(huán)境具有多方面的影響，涉及免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞因子分泌和血管生成等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在免疫細(xì)胞浸潤(rùn)方面，F(xiàn)AK和NF-κBp65可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的趨化和活化，影響腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞組成和功能。研究表明，F(xiàn)AK高表達(dá)的肝癌細(xì)胞能夠分泌多種趨化因子，如CCL2、CXCL8等，這些趨化因子可吸引巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞等免疫細(xì)胞向腫瘤組織浸潤(rùn)。然而，F(xiàn)AK的高表達(dá)也可能導(dǎo)致腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）向M2型極化，M2型TAM具有免疫抑制功能，可分泌IL-10、TGF-β等細(xì)胞因子，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，從而促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。NF-κBp65同樣參與免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)過(guò)程，激活的NF-κBp65可上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面的免疫檢查點(diǎn)分子，如PD-L1的表達(dá)，PD-L1與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。此外，NF-κBp65還可調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的功能，影響其抗原提呈能力和免疫激活作用，進(jìn)一步影響腫瘤微環(huán)境中的免疫平衡。細(xì)胞因子分泌在腫瘤微環(huán)境中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)變化可顯著影響細(xì)胞因子的分泌模式。FAK激活后，通過(guò)下游信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌一系列促炎細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-6等，這些細(xì)胞因子可激活NF-κBp65信號(hào)通路，形成正反饋調(diào)節(jié)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移。IL-6還可通過(guò)激活JAK/STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的干性維持和耐藥性的產(chǎn)生。同時(shí)，F(xiàn)AK和NF-κBp65的協(xié)同作用可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，影響腫瘤微環(huán)境的炎癥狀態(tài)和免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌細(xì)胞中，F(xiàn)AK和NF-κBp65共同作用可上調(diào)IL-8的表達(dá)，IL-8不僅可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移，還可招募中性粒細(xì)胞，形成有利于腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的微環(huán)境。此外，NF-κBp65還可調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子的表達(dá)，如趨化因子CXCL12及其受體CXCR4，它們?cè)谀[瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和血管生成中發(fā)揮重要作用。血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的重要條件，F(xiàn)AK和NF-κBp65在肝癌血管生成過(guò)程中扮演重要角色。FAK通過(guò)激活下游信號(hào)通路，如PI3K/Akt和Ras/MAPK信號(hào)通路，上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，VEGF是促進(jìn)血管生成的關(guān)鍵因子，可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究表明，在肝癌細(xì)胞中，抑制FAK的表達(dá)可顯著降低VEGF的表達(dá)水平，減少腫瘤血管的生成。NF-κBp65同樣可調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，激活的NF-κBp65可結(jié)合到VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)，促進(jìn)VEGF基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加VEGF的表達(dá)。此外，NF-κBp65還可通過(guò)調(diào)節(jié)其他血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）等，協(xié)同促進(jìn)腫瘤血管的生成。腫瘤血管的生成不僅為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供了途徑，因此，F(xiàn)AK和NF-κBp65對(duì)血管生成的調(diào)節(jié)作用在肝癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移中具有重要意義。FAK和NF-κBp65的表達(dá)變化通過(guò)影響免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞因子分泌和血管生成等方面，對(duì)肝癌腫瘤微環(huán)境產(chǎn)生重要影響，這些作用相互關(guān)聯(lián)，共同促進(jìn)肝癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。深入研究它們?cè)谀[瘤微環(huán)境中的作用機(jī)制，有助于揭示肝癌的發(fā)病機(jī)制，為肝癌的治療提供新的靶點(diǎn)和策略。七、討論7.1TACE后FAK、NF-κBp65高表達(dá)的原因探討TACE作為中晚期原發(fā)性肝癌的重要治療手段，通過(guò)栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}并注入化療藥物，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用。本研究結(jié)果顯示，TACE治療后肝癌組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)顯著升高，而癌旁組織中二者表達(dá)無(wú)明顯變化，這表明TACE治療可能特異性地誘導(dǎo)了肝癌組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)上調(diào)。深入探討TACE后FAK、NF-κBp65高表達(dá)的原因，對(duì)于理解TACE治療機(jī)制以及肝癌的生物學(xué)行為具有重要意義。TACE治療后，腫瘤組織的血供被阻斷，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞缺血缺氧。缺血缺氧是一種強(qiáng)烈的應(yīng)激刺激，可激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)通路。在這種應(yīng)激狀態(tài)下，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)上調(diào)可能是腫瘤細(xì)胞的一種適應(yīng)性反應(yīng)。研究表明，缺血缺氧條件下，細(xì)胞內(nèi)的缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）表達(dá)上調(diào)。HIF-1α可與FAK基因啟動(dòng)子區(qū)域的缺氧反應(yīng)元件結(jié)合，促進(jìn)FAK基因的轉(zhuǎn)錄，從而使FAK蛋白表達(dá)增加。FAK的激活可進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、遷移和存活，幫助腫瘤細(xì)胞在缺血缺氧環(huán)境中尋找新的血供或存活機(jī)會(huì)。例如，F(xiàn)AK通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力，抵抗缺血缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。同時(shí)，缺血缺氧還可激活NF-κB信號(hào)通路。缺血缺氧刺激可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）生成增加，ROS作為第二信使，激活I(lǐng)κB激酶（IKK）復(fù)合物。IKK復(fù)合物磷酸化IκBα，使其被泛素化降解，釋放出NF-κBp65/p50二聚體，進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。NF-κBp65可調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞存活、增殖和抗凋亡相關(guān)的基因表達(dá)，如Bcl-2、CyclinD1等，使腫瘤細(xì)胞在缺血缺氧環(huán)境中得以存活和增殖。TACE治療還會(huì)引發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)?；熕幬锖退ㄈ麆┑淖⑷霑?huì)導(dǎo)致腫瘤組織壞死，壞死組織釋放的細(xì)胞內(nèi)容物和炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，可激活炎癥細(xì)胞，引發(fā)局部炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)在腫瘤微環(huán)境中起著重要作用，可影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。在炎癥刺激下，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)也會(huì)升高。TNF-α和IL-1等炎癥因子可與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，導(dǎo)致FAK磷酸化和激活。激活的FAK進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。同時(shí)，炎癥因子也可激活NF-κB信號(hào)通路。以TNF-α為例，它與腫瘤細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）結(jié)合后，招募TRADD、TRAF2等接頭蛋白，激活I(lǐng)KK復(fù)合物，進(jìn)而使NF-κBp65活化，進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)。NF-κBp65可上調(diào)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，如IL-6、IL-8等，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，同時(shí)也可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。TACE治療后肝癌組織中FAK和NF-κBp65高表達(dá)可能是由腫瘤缺血缺氧和炎癥反應(yīng)共同誘導(dǎo)的。缺血缺氧和炎癥刺激通過(guò)激活不同的信號(hào)通路，促使FAK和NF-κBp65表達(dá)上調(diào)，這些變化可能在肝癌細(xì)胞對(duì)TACE治療的應(yīng)答以及腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。深入研究TACE后FAK、NF-κBp65高表達(dá)的分子機(jī)制，有助于進(jìn)一步揭示TACE治療的作用機(jī)制，為優(yōu)化肝癌的治療策略提供理論依據(jù)。7.2FAK、NF-κBp65表達(dá)與肝癌預(yù)后及TACE療效的關(guān)系本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AK和NF-κBp65在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)與患者的預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)患者的隨訪，分析FAK和NF-κBp65表達(dá)水平與患者生存時(shí)間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)FAK和NF-κBp65高表達(dá)組患者的總生存率和無(wú)進(jìn)展生存率均顯著低于低表達(dá)組。這表明FAK和NF-κBp65的高表達(dá)可能預(yù)示著肝癌患者預(yù)后不良，是影響患者生存的重要危險(xiǎn)因素。FAK和NF-κBp65在肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移等生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。高表達(dá)的FAK和NF-κBp65可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，抑制細(xì)胞凋亡，使得腫瘤細(xì)胞更容易生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致患者預(yù)后較差。FAK通過(guò)激活PI3K/Akt和Ras/MAPK等信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。NF-κBp65作為轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞增殖、凋亡和遷移相關(guān)的基因表達(dá)，如CyclinD1、Bcl-2、MMP-9等。這些基因的異常表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，降低患者的生存率。FAK和NF-κBp65的表達(dá)還與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)。它們可調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞因子分泌和血管生成等過(guò)程，影響腫瘤的免疫逃逸和生長(zhǎng)。FAK高表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞向M2型極化，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。NF-κBp65可上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面的免疫檢查點(diǎn)分子PD-L1的表達(dá)，抑制T細(xì)胞的活化和增殖。FAK和NF-κBp65還可通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在TACE治療方面，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)可能影響TACE的療效。TACE治療后，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)上調(diào)可能是腫瘤細(xì)胞對(duì)治療的一種適應(yīng)性反應(yīng)，它們的高表達(dá)可能使腫瘤細(xì)胞對(duì)TACE治療產(chǎn)生抵抗。研究表明，F(xiàn)AK和NF-κBp65可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)，如P-糖蛋白（P-gp）等，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的外排，降低化療藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。FAK和NF-κBp65還可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路，抑制TACE治療誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，使得腫瘤細(xì)胞能夠在TACE治療后存活并繼續(xù)生長(zhǎng)。因此，F(xiàn)AK和NF-κBp65有望作為預(yù)測(cè)TACE療效的指標(biāo)。通過(guò)檢測(cè)患者肝癌組織中FAK和NF-κBp65的表達(dá)水平，可評(píng)估患者對(duì)TACE治療的敏感性，為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案提供參考。對(duì)于FAK和NF-κBp65高表達(dá)的患者，可能需要調(diào)整治療策略，如聯(lián)合其他治療方法，如靶向治療、免疫治療等，以提高治療效果。FAK和NF-κBp65的高表達(dá)對(duì)肝癌患者的預(yù)后具有不良影響，它們可能通過(guò)調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為和腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。同時(shí)，F(xiàn)AK和NF-κBp65的表達(dá)與TACE療效相關(guān)，有望作為預(yù)測(cè)TACE療效的指標(biāo)。深入研究FAK和NF-κBp65在肝癌中的作用機(jī)制，對(duì)于改善肝癌患者的預(yù)后和提高TACE治療效果具有重要意義。7.3研究結(jié)果對(duì)優(yōu)化肝癌TACE治療策略的啟示本研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌TACE治療后，F(xiàn)AK和NF-κBp65在肝癌組織中表達(dá)顯著升高，且與肝癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。這一研究結(jié)果為優(yōu)化肝癌TACE治療策略提供了重要的理論依據(jù)和新思路?；贔AK和NF-κBp65在TACE治療后的變化及作用機(jī)制，可考慮針對(duì)這兩條信號(hào)通路進(jìn)行干預(yù)，以提高TACE的治療效果。在FAK信號(hào)通路方面，已有研究開發(fā)出多種FAK抑制劑，如PF-573228、VS-4718等。這些抑制劑能夠特異性地抑制FAK的激酶活性，阻斷其下游信號(hào)傳導(dǎo)，從而