2022年12月Gallios操作規(guī)程A取5支流式試管，編號(hào)為1、2、3、4、5,分別將100μ1抗凝全血或Immunotrol質(zhì)控血加入B在各管中依次加入20μ1的IgG1-FITC/IgG1-PE、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/CD4-PE、CD3-FITC/CD8-PE、CD3-FITC/CD16+56-PE,渦旋混勻后，室溫避光孵育20分鐘；C取出試管，每管加入500μ1紅細(xì)胞裂解液OptiLyseC,渦旋混勻，室溫避光10分鐘；300g(約1200rpm)離心5min,棄去上清液；D每管加入2ml的PBS,渦旋混勻，300g離心5min,棄去上清液；E每管加入0.5mlPBS混勻，4℃避光1h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)；若不能及時(shí)上機(jī)，加入0.5ml含1-2%多聚甲醛的PBS溶液，置于4℃冰箱保存，24h內(nèi)上擇保存路徑，命名為“2CLymI”FSINTLINSSINTLinC建立該實(shí)驗(yàn)方案所需圖形：本實(shí)驗(yàn)需要二個(gè)圖(請(qǐng)同學(xué)們思考：不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰獛追鶖?shù)據(jù)顯示圖，怎樣組合雙參數(shù)散點(diǎn)圖)①SS/FS雙參數(shù)點(diǎn)圖：?jiǎn)螕艄ぞ邫谥械?ColorDotPlot)l鍵，X軸選擇“SSINTLIN:SSINTStopandSaveEventsResokton工具欄中選擇鍵,在FL1/FL2點(diǎn)圖中第一個(gè)對(duì)StopandSaveEventsResolutionNumeric"下面選擇“Percent”,在“Precision”處RegionNumber‰GatedX-MeanY-Meano0oooo0.000.0000000o0oooo單擊"Save";單擊"Save";輸入組合名稱“2CLym”,在“NoofTest”欄中輸入“5”(表示UseregionsfromprotocolCCarryregionsfrompreviousprotocolUseregionsfromthisprotocolC獲取停止條件設(shè)定：選擇工具欄中的“”在“AcquisitionSetup”選項(xiàng)卡中完成①設(shè)置獲取時(shí)間：“Limits”中點(diǎn)擊“SetTimes”,在彈出的對(duì)話框中的將"AcquisitionTime(s)"-NaAepitl:Evets6000000Sellims②細(xì)胞總數(shù)設(shè)定：在“Limits”中的“MaximumEvents”(總細(xì)胞數(shù))設(shè)定為100000③門內(nèi)細(xì)胞數(shù)設(shè)定：即設(shè)定某一群細(xì)胞獲取一定數(shù)量后停止。如我們?cè)O(shè)定獲取淋巴細(xì)胞2000停止，在方案右鍵點(diǎn)擊中任何一張Gating到淋巴細(xì)胞的圖形上。本實(shí)驗(yàn)在FL?/FL2的散點(diǎn)圖上點(diǎn)擊右鍵，選擇“Format”,彈出對(duì)話框中選擇“StopandSave"選項(xiàng)卡，在"UseStop設(shè)定，最先滿足任一條件即停止獲??；充分混勻，置上樣盤某一位置，在軟件下方“AcquisitionManager”輸入1號(hào)樣本管所在轉(zhuǎn)ccDisar.500100.0以ssampie1SamplelD?空同為100,該參數(shù)可根據(jù)點(diǎn)圖中碎片的多少進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，在保注意：到此處為止，所有的實(shí)驗(yàn)方案、進(jìn)樣工作組都已經(jīng)設(shè)置完畢，如果之后要進(jìn)行類似的實(shí)F單擊,儀器自動(dòng)從第一個(gè)樣品開始檢測(cè)，第一個(gè)樣品為同型對(duì)照(有些是純陰性對(duì)照)。(請(qǐng)同學(xué)們思考：同型對(duì)照或純陰性對(duì)照起什么作用?準(zhǔn)備同型對(duì)照樣品或純陰性對(duì)照要注意哪些事項(xiàng)?需要利用同型對(duì)照調(diào)節(jié)儀器的哪些參數(shù)?)滾動(dòng)條調(diào)節(jié))使SS/FS散點(diǎn)圖分群清晰，分布良好，調(diào)節(jié)A門位置，使其圈定淋巴細(xì)胞(如下圖C和D)。調(diào)節(jié)FL1和FL2電壓，使FL?/FL2點(diǎn)圖中的細(xì)胞群體位于左下象限，Dsa.OSahpModeOFFDo10004CDG1號(hào)樣本管收集結(jié)束，自動(dòng)檢測(cè)2號(hào)管，(請(qǐng)同學(xué)們思考：為什么以CD3-FITC/CD19-PE做第二個(gè)樣品?它起什么作用?用它來(lái)對(duì)儀器調(diào)節(jié)什么?)在“SetupMode”和“QuickComp”內(nèi)細(xì)胞群平均熒光強(qiáng)度Y-Mean一致(差值<0.1)。拉動(dòng)水平滾動(dòng)條，調(diào)節(jié)FL1-FL2%的補(bǔ)細(xì)胞2000,自動(dòng)停止。H2號(hào)樣本管數(shù)據(jù)收集完畢，儀器按照當(dāng)前的參數(shù)條件，自動(dòng)依次收集3、45.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和實(shí)驗(yàn)報(bào)告設(shè)置散點(diǎn)圖。在SS/FS上作多邊形門A,在FL?/Fl2上做十字門并Gating到門A。B創(chuàng)建FLOWPAGE:器淋巴細(xì)胞，沿陰性細(xì)胞群邊緣調(diào)節(jié)十字門位置。單擊,在彈出的對(duì)話框中選擇A用2mlCleanse清洗液做樣品，置于進(jìn)樣盤上1號(hào)位置，用另外3個(gè)潔凈的樣本管每管2ml蒸餾水或鞘液置于進(jìn)樣盤上2-4位置。2.清潔樣本頭(由儀器管理員完成)A取一塊潔凈的紗布，用