實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的制備消毒與滅菌及超凈工作臺(tái)的使用第一頁(yè)，共24頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室安全和衛(wèi)生安全實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器衛(wèi)生每次實(shí)驗(yàn)需留下6位同學(xué)值日，協(xié)助保持實(shí)驗(yàn)室清潔第二頁(yè)，共24頁(yè)。1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。2、學(xué)習(xí)掌握培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方法步驟。實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、培養(yǎng)基的配制第三頁(yè)，共24頁(yè)。

培養(yǎng)基(culturemedium)是指人工配制的、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。自然界中微生物種類繁多，營(yíng)養(yǎng)類型多樣，加之實(shí)驗(yàn)和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水六大營(yíng)養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。為了滿足微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。實(shí)驗(yàn)原理第四頁(yè)，共24頁(yè)。常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。實(shí)驗(yàn)原理常用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)；高氏一號(hào)培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；麥芽汁培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基通常用于酵母菌的培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。第五頁(yè)，共24頁(yè)。實(shí)驗(yàn)分組安排5-6人一組，配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基每組配500mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基斜面1支（每人），其余分裝在兩個(gè)500mL三角瓶。

第六頁(yè)，共24頁(yè)。第七頁(yè)，共24頁(yè)。第八頁(yè)，共24頁(yè)。第九頁(yè)，共24頁(yè)。第十頁(yè)，共24頁(yè)。包扎：

加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報(bào)紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。

以活結(jié)形式扎緊，以便使用時(shí)容易解開。

用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒?yàn)組。滅菌時(shí)包牛皮紙、報(bào)紙第十一頁(yè)，共24頁(yè)。滅菌：

培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌

通常滅菌條件為1.05kg/cm2,121℃滅菌20-30分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，如馬丁氏培養(yǎng)基則為0.56kg/cm2,115℃滅菌30分鐘。第十二頁(yè)，共24頁(yè)。二、消毒與滅菌第十三頁(yè)，共24頁(yè)。第十四頁(yè)，共24頁(yè)。第十五頁(yè)，共24頁(yè)。紫外線滅菌----紫外線波長(zhǎng)在200-300nm,具有殺菌作用，其中以265-266nm殺菌力最強(qiáng)。無(wú)菌室或無(wú)菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。第十六頁(yè)，共24頁(yè)。干熱滅菌電烤箱1、干熱滅菌2、壓力蒸汽滅菌第十七頁(yè)，共24頁(yè)。干熱滅菌1、裝入待滅菌物品2、升溫：接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫：保持160-170℃2小時(shí)。4、降溫：切斷電源，自然降溫。5、開箱取物：待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70℃，切勿自行打開箱門，以免玻璃器皿炸裂。第十八頁(yè)，共24頁(yè)。第十九頁(yè)，共24頁(yè)。第二十頁(yè)，共24頁(yè)。第二十一頁(yè)，共24頁(yè)。三、超凈工作臺(tái)的使用方法工作原理：相對(duì)無(wú)菌的隔離小環(huán)境使用方法和步驟：紫外線的效用和紫外燈的使用方法；照明系統(tǒng)的效用使用方法；酒精燈的效用和使用方法。維護(hù)常識(shí)：酒精擦理第二十二頁(yè)，共24頁(yè)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告與問題討論1、培養(yǎng)基配制的原理、方法、步驟及注意事項(xiàng)。2、干熱滅菌、壓力蒸汽滅菌方法的原理和方法步驟3、思考題1）培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件？為什么？2）在配制培養(yǎng)基過(guò)程中應(yīng)注意哪些問題？為什么？3）培養(yǎng)基配制好后，為什么要立即滅菌？如何檢查滅菌是否徹底？4）壓