pcr上崗證考試及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸分子雜交技術(shù)C.基因測(cè)序技術(shù)D.蛋白質(zhì)印跡技術(shù)答案：A2.PCR反應(yīng)體系中不需要的成分是（）A.dNTPB.Taq酶C.引物D.限制性內(nèi)切酶答案：D3.以下哪種堿基配對(duì)是正確的（）A.A-CB.G-TC.A-TD.C-U答案：C4.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.55℃左右B.72℃左右C.94-95℃D.4℃答案：C5.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.37℃答案：B6.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B7.進(jìn)行PCR反應(yīng)的儀器是（）A.離心機(jī)B.移液器C.熒光定量?jī)xD.擴(kuò)增儀答案：D8.核酸的基本組成單位是（）A.氨基酸B.脂肪酸C.核苷酸D.多糖答案：C9.以下不屬于PCR應(yīng)用領(lǐng)域的是（）A.疾病診斷B.基因克隆C.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析D.法醫(yī)鑒定答案：C10.一個(gè)完整的PCR循環(huán)不包括以下哪個(gè)步驟（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)化答案：D二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)體系包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.Taq酶E.緩沖液答案：ABCDE2.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.長(zhǎng)度適宜B.GC含量適中C.避免形成引物二聚體D.與模板特異性結(jié)合E.3'端不能有明顯的二級(jí)結(jié)構(gòu)答案：ABCDE3.以下哪些因素可能影響PCR反應(yīng)結(jié)果（）A.模板質(zhì)量B.引物濃度C.Taq酶活性D.反應(yīng)溫度E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE4.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.病原體檢測(cè)B.腫瘤診斷C.遺傳疾病診斷D.親子鑒定E.基因分型答案：ABCDE5.核酸的種類包括（）A.DNAB.RNAC.tRNAD.mRNAE.rRNA答案：ABCDE6.Taq酶的特點(diǎn)有（）A.耐高溫B.具有5'→3'聚合酶活性C.具有3'→5'外切酶活性D.催化dNTP合成DNAE.不需要鎂離子參與答案：ABD7.在PCR實(shí)驗(yàn)中，常用的核酸提取方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.鹽析法E.離子交換法答案：ABC8.熒光定量PCR的應(yīng)用有（）A.病原體核酸定量檢測(cè)B.基因表達(dá)水平分析C.腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)D.藥物療效評(píng)估E.遺傳疾病診斷答案：ABCDE9.PCR實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題有（）A.無擴(kuò)增產(chǎn)物B.擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶C.引物二聚體過多D.擴(kuò)增效率低E.假陽(yáng)性結(jié)果答案：ABCDE10.以下屬于核酸的理化性質(zhì)的是（）A.兩性解離B.紫外吸收特性C.變性與復(fù)性D.凝膠電泳遷移率E.等電點(diǎn)答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增任意長(zhǎng)度的DNA片段。（×）2.引物的GC含量越高，其退火溫度越高。（√）3.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，所以PCR產(chǎn)物的錯(cuò)誤率相對(duì)較高。（√）4.核酸在260nm波長(zhǎng)處有特征吸收峰。（√）5.熒光定量PCR可以對(duì)核酸進(jìn)行絕對(duì)定量和相對(duì)定量。（√）6.模板DNA的濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（×）7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，移液器可以隨意混用。（×）8.所有的核酸都可以作為PCR的模板。（×）9.引物設(shè)計(jì)時(shí)，引物之間的互補(bǔ)性應(yīng)盡量低。（√）10.PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)越多，擴(kuò)增產(chǎn)物的量就一定越多。（×）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理。在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時(shí)引物與模板退火結(jié)合，適溫下Taq酶以dNTP為原料，從引物3'端延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴(kuò)增特定DNA片段。2.引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)有哪些？答案：長(zhǎng)度15-30bp為宜；GC含量40%-60%；避免自身互補(bǔ)及引物二聚體；3'端不能有明顯二級(jí)結(jié)構(gòu)；與模板特異性結(jié)合，且上下游引物Tm值相近。3.核酸提取的一般步驟有哪些？答案：首先破碎細(xì)胞釋放核酸，然后去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，可用酚氯仿抽提等方法，接著對(duì)核酸進(jìn)行分離純化，如硅膠膜吸附或磁珠法，最后進(jìn)行核酸的定量和質(zhì)量檢測(cè)。4.熒光定量PCR的原理是什么？答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比。通過熒光信號(hào)檢測(cè)對(duì)起始模板核酸進(jìn)行定量分析，有絕對(duì)定量和相對(duì)定量?jī)煞N方式。五、討論題（每題5分，共20分）1.分析PCR實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)無擴(kuò)增產(chǎn)物的可能原因及解決方法。答案：原因可能是模板質(zhì)量差、引物設(shè)計(jì)不合理、Taq酶失活、反應(yīng)條件不當(dāng)?shù)?。解決方法：重新提取高質(zhì)量模板，優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，更換活性好的Taq酶，調(diào)整反應(yīng)溫度、時(shí)間、循環(huán)次數(shù)等條件。2.討論P(yáng)CR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢(shì)與局限性。答案：優(yōu)勢(shì)是靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速，能檢測(cè)微量病原體基因。局限性在于對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求高，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，且只能檢測(cè)已知序列，對(duì)新病原體檢測(cè)有困難。3.如何保證PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性？答案：要規(guī)范操作，使用高質(zhì)量試劑和儀器。準(zhǔn)確提取模板，合理設(shè)計(jì)引物，優(yōu)化反應(yīng)條件。同時(shí)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照，重復(fù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分