pcr上崗證考試及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術的中文全稱是（）A.聚合酶鏈式反應B.核酸分子雜交技術C.基因測序技術D.蛋白質印跡技術答案：A2.PCR反應體系中不需要的成分是（）A.dNTPB.Taq酶C.引物D.限制性內切酶答案：D3.以下哪種堿基配對是正確的（）A.A-CB.G-TC.A-TD.C-U答案：C4.PCR反應的變性溫度一般為（）A.55℃左右B.72℃左右C.94-95℃D.4℃答案：C5.Taq酶的最適反應溫度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.37℃答案：B6.引物設計時，其長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B7.進行PCR反應的儀器是（）A.離心機B.移液器C.熒光定量儀D.擴增儀答案：D8.核酸的基本組成單位是（）A.氨基酸B.脂肪酸C.核苷酸D.多糖答案：C9.以下不屬于PCR應用領域的是（）A.疾病診斷B.基因克隆C.蛋白質結構分析D.法醫(yī)鑒定答案：C10.一個完整的PCR循環(huán)不包括以下哪個步驟（）A.變性B.退火C.延伸D.轉化答案：D二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應體系包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.Taq酶E.緩沖液答案：ABCDE2.引物設計的原則包括（）A.長度適宜B.GC含量適中C.避免形成引物二聚體D.與模板特異性結合E.3'端不能有明顯的二級結構答案：ABCDE3.以下哪些因素可能影響PCR反應結果（）A.模板質量B.引物濃度C.Taq酶活性D.反應溫度E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE4.PCR技術可應用于（）A.病原體檢測B.腫瘤診斷C.遺傳疾病診斷D.親子鑒定E.基因分型答案：ABCDE5.核酸的種類包括（）A.DNAB.RNAC.tRNAD.mRNAE.rRNA答案：ABCDE6.Taq酶的特點有（）A.耐高溫B.具有5'→3'聚合酶活性C.具有3'→5'外切酶活性D.催化dNTP合成DNAE.不需要鎂離子參與答案：ABD7.在PCR實驗中，常用的核酸提取方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.鹽析法E.離子交換法答案：ABC8.熒光定量PCR的應用有（）A.病原體核酸定量檢測B.基因表達水平分析C.腫瘤標志物定量檢測D.藥物療效評估E.遺傳疾病診斷答案：ABCDE9.PCR實驗中可能出現(xiàn)的問題有（）A.無擴增產(chǎn)物B.擴增產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶C.引物二聚體過多D.擴增效率低E.假陽性結果答案：ABCDE10.以下屬于核酸的理化性質的是（）A.兩性解離B.紫外吸收特性C.變性與復性D.凝膠電泳遷移率E.等電點答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術可以擴增任意長度的DNA片段。（×）2.引物的GC含量越高，其退火溫度越高。（√）3.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，所以PCR產(chǎn)物的錯誤率相對較高。（√）4.核酸在260nm波長處有特征吸收峰。（√）5.熒光定量PCR可以對核酸進行絕對定量和相對定量。（√）6.模板DNA的濃度越高，PCR反應效果越好。（×）7.進行PCR實驗時，移液器可以隨意混用。（×）8.所有的核酸都可以作為PCR的模板。（×）9.引物設計時，引物之間的互補性應盡量低。（√）10.PCR反應的循環(huán)次數(shù)越多，擴增產(chǎn)物的量就一定越多。（×）四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR技術的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復制原理。在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時引物與模板退火結合，適溫下Taq酶以dNTP為原料，從引物3'端延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴增特定DNA片段。2.引物設計的要點有哪些？答案：長度15-30bp為宜；GC含量40%-60%；避免自身互補及引物二聚體；3'端不能有明顯二級結構；與模板特異性結合，且上下游引物Tm值相近。3.核酸提取的一般步驟有哪些？答案：首先破碎細胞釋放核酸，然后去除蛋白質等雜質，可用酚氯仿抽提等方法，接著對核酸進行分離純化，如硅膠膜吸附或磁珠法，最后進行核酸的定量和質量檢測。4.熒光定量PCR的原理是什么？答案：在PCR反應體系中加入熒光基團，隨著PCR擴增，熒光信號強度與PCR產(chǎn)物量成正比。通過熒光信號檢測對起始模板核酸進行定量分析，有絕對定量和相對定量兩種方式。五、討論題（每題5分，共20分）1.分析PCR實驗中出現(xiàn)無擴增產(chǎn)物的可能原因及解決方法。答案：原因可能是模板質量差、引物設計不合理、Taq酶失活、反應條件不當?shù)?。解決方法：重新提取高質量模板，優(yōu)化引物設計，更換活性好的Taq酶，調整反應溫度、時間、循環(huán)次數(shù)等條件。2.討論PCR技術在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢是靈敏度高、特異性強、快速，能檢測微量病原體基因。局限性在于對實驗條件要求高，易出現(xiàn)假陽性或假陰性結果，且只能檢測已知序列，對新病原體檢測有困難。3.如何保證PCR實驗結果的準確性和可靠性？答案：要規(guī)范操作，使用高質量試劑和儀器。準確提取模板，合理設計引物，優(yōu)化反應條件。同時設置陰、陽性對照，重復實驗，對結果進行綜合分