靈芝固體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2025-09-07實(shí)施2025-09-07實(shí)施云南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由云南省食用菌標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(YNTC15)提出并歸口。本文件起草單位：云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所、滇西科技師范學(xué)院、云南云之凰健康科技有限公司、中健國林(云南)實(shí)業(yè)有限公司、云南寶之靈生物科技有限公司、武定插甸多福寬核桃種植專業(yè)合作社。本文件主要起草人：李娥賢、李樹紅、何俊、吳曉薬、穆麗丹、羅紅梅、王怡璇、蒲曉輝、張韻璇、葉洋、方曉軍。1僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則垃圾(糞便)場(chǎng)等污染源?？諝赓|(zhì)量達(dá)到GB3095中二類區(qū)的相關(guān)要求，生產(chǎn)用水達(dá)到GB5749的要求。4.2.1合理劃分配料室、攪拌室、裝袋(瓶)室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室等設(shè)施。4.2.2配套粉碎機(jī)、電子秤、攪拌機(jī)、裝袋(瓶)機(jī)、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、離子凈化器、超凈2采用窄口玻璃瓶或耐高溫塑料瓶，或(12～14)cm×(25～27)cm(厚度不低于0.05cm)的聚丙采用(13～15)cm×(25～28)cm(厚度不低于0.05cm)的聚丙烯塑料袋。采用(16～18)cm×(35～37)cm(厚度不低于0.05cm)的聚丙烯塑料袋。蛋白胨2g、酵母粉2g、硫酸鎂0.2g、磷酸二氫鉀0.2g,定容至1000mL,pH值自然。5.2.1.1將剛配制好的培養(yǎng)基裝入300mL～500mL三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅菌。培養(yǎng)皿用報(bào)紙或牛皮紙包好，同時(shí)放入高壓滅菌鍋，121℃~126℃滅菌25min。5.2.1.2滅菌完畢后培養(yǎng)基降溫至65℃~75℃時(shí)，將三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基搖勻后倒入無菌培養(yǎng)皿高度的1/2處，蓋好上蓋，自然降溫凝固后制成平板培養(yǎng)基。5.2.2.1分裝培養(yǎng)基至試管1/3處，用棉塞或硅膠塞封閉試管口，每5支試管為1捆，牛皮紙包好，放入高壓滅菌鍋滅菌，在121℃~126滅菌25min.5.2.2.2滅菌完成后待培養(yǎng)基降溫至65℃75℃時(shí)取出試管，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，斜面長(zhǎng)度不超過試管長(zhǎng)度的2/3,自然降溫凝固后制成試管培養(yǎng)基。抽取3%～5%的培養(yǎng)基，在28℃下培養(yǎng)48h,檢查有無微生物菌落，無菌落的為滅菌合格。5.4.1在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種，接種前用紫外滅菌燈照射30min后打開風(fēng)機(jī)20min,之后用75%酒精進(jìn)5.4.2將長(zhǎng)寬3mm~5mm的菌塊，接種在培養(yǎng)皿或試管的中部。培養(yǎng)皿需用石臘封口膜密封，試管用置于22℃~26℃培養(yǎng)箱中恒溫避光培養(yǎng)。培養(yǎng)7d～15d長(zhǎng)滿。未活、污染和生長(zhǎng)不良的均為不3母種檢查內(nèi)容見表1。表1菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量培養(yǎng)基基本不變色，菌絲整齊濃密、絲狀或絨毛狀，潔白菌落邊緣斜面背面外觀置于1℃~4℃冰箱中避光貯存，貯存期不超過50d。6原種、栽培種、栽培袋生產(chǎn)6.1培養(yǎng)料制作不同靈芝原種、栽培種、栽培袋培養(yǎng)料配方及制作見附錄A。采用裝袋機(jī)或人工進(jìn)行裝袋，原種及栽培種裝濕料量0.5kg/袋～0.6kg/袋，栽培袋裝濕料量1.1kg/袋～1.3kg/袋，松緊適度，人工裝袋需蓋好蓋子。裝袋后在12h內(nèi)盡快完成滅菌。6.3.1高壓滅菌溫度121℃~126℃,原種和栽培種保持2h,栽培袋保持3h。6.3.2常壓滅菌4h內(nèi)快速升溫至90℃以上，原種和栽培種保持10h～14h,栽培袋保持12h～18h。6.3.3質(zhì)量檢查按照NY/T528的方法執(zhí)行。6.4.1在接種室或者接種箱內(nèi)進(jìn)行。料袋搬入接種室或者接種箱后，連同接種工具進(jìn)行二次消毒。待料袋中心溫度冷卻至28℃以下接種。46.4.2接種時(shí)要嚴(yán)格按照無菌操作要求進(jìn)行，每個(gè)原種接入2cm3~3cm3大小母種1塊～2塊，栽培種接入原種10g,栽培袋接入栽培種15g。接種后迅速蓋上蓋子或者在套環(huán)上迅速蓋好海綿蓋體。和噴灑殺蟲劑，關(guān)閉門窗后用消毒劑熏蒸消毒，使用的殺蟲劑和殺菌劑應(yīng)符合NY/T1276和GB/T8321見表2。菌絲整齊濃密、粗壯、潔白，無高溫抑制線無無1℃~4℃的冷庫內(nèi)避光貯存，原種和栽培種貯存期不超過50d,栽培袋不超過30d。57.3.1保持制種室和培養(yǎng)室干凈衛(wèi)生，出入人員需穿工作服戴鞋套。每1個(gè)月～3個(gè)月使用殺蟲劑和殺菌劑定期熏蒸制種室和培養(yǎng)室，使用藥劑應(yīng)符合NY/T1276和GB/T8321的規(guī)定，污染的菌種應(yīng)及時(shí)清理出培養(yǎng)室。7.3.2接種過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，培養(yǎng)基料(瓶)袋應(yīng)滅菌徹底，檢查無微生物。8檔案記錄及留樣8.1檔案記錄應(yīng)建立獨(dú)立完整的生產(chǎn)記錄檔案，建立所有生產(chǎn)投入品和生產(chǎn)過程的臺(tái)賬記錄，見附錄C,檔案和臺(tái)賬保存不少于2年。各級(jí)菌種均應(yīng)留樣，每批次留樣3個(gè)~10個(gè)(支、瓶、袋),貯存在1℃~4℃,貯存至銷售或投入生產(chǎn)后正常生產(chǎn)條件下出第一潮菇。6(資料性)不同靈芝原種、栽培種、栽培袋培養(yǎng)料配方及制作A.1不同靈芝原種培養(yǎng)料配方及制作A.1.1蕎麥粒79%,闊葉樹木屑(8mm~10mm)10%,麩皮8%,石膏粉1%,蔗糖1%,石灰1%。A.1.2棉籽殼79%,闊葉樹木屑(8mm～10mm)10%,麩皮8%,石膏粉1%,蔗糖1%,石灰1%。豆餅粉19%,麩皮8%,石膏粉1%,蔗糖1%,石灰1%。A.2不同靈芝栽培種和栽培袋培養(yǎng)料配方及制作A.2.1木屑78%,麥麩20%,石膏1%,右灰1%。A.2.2木屑68%,麥麩20%,豆粕10%,石膏1%,石灰1%。A.2.3木屑50%,棉籽殼30%,麥妹18%,石1%,石灰1%。7(資料性)不同靈芝菌種培養(yǎng)參數(shù)(固定容器) 白肉靈芝亮蓋靈芝赤芝紫芝溫度(℃)空氣相對(duì)濕度(%)長(zhǎng)滿時(shí)間(d)光照強(qiáng)度B.2不同靈芝原種培養(yǎng)參數(shù)(原種和栽培種合一個(gè)表)容器規(guī)格：袋子14cm×27cm,瓶子 白肉靈芝芝赤